一株金黃色葡萄球菌小菌落突變株及其在小白鼠皮下膿腫動物模型中的應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明提供一株生長表型穩(wěn)定的黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)小菌落突變株YN151116，菌株保藏號是：CCTCC NO：M 2016115，該菌株生長表型穩(wěn)定：在培養(yǎng)基中補充硫胺素或胸腺嘧啶或在二氧化碳培養(yǎng)條件下均不能促進其生長，菌落大小不增加；在培養(yǎng)基中補充甲萘醌則抑制其生長；小菌落生長表型特征穩(wěn)定，其16S rDNA核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。該金黃色葡萄球菌小菌落突變株可以為研究人和哺乳動物持續(xù)性及復(fù)發(fā)性感染提供生長表型穩(wěn)定的菌株材料。本發(fā)明還利用該金黃色葡萄球菌小菌落突變株建立小白鼠皮下膿腫動物模型，該模型重復(fù)性高、穩(wěn)定性好，為皮下膿腫的發(fā)病機理研究、治療方法、和藥物篩選提供動物模型，具有廣闊的應(yīng)用前景。CCTCC NO: M 201611520160314
【專利說明】
一株金黃色葡萄球菌小菌落突變株及其在小白鼠皮下膿腫動物模型中的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明屬微生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一株生長表型穩(wěn)定的金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)小菌落突變株YN151116，及一種應(yīng)用該菌株建立穩(wěn)定的小白鼠皮下膿腫動物模型的方法。該菌株保藏號是CCTCC Ν0:Μ 2016115，該菌種于2016年3月14日在武漢中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，菌種保藏編號為CCTCC Ν0:Μ 2016115。
【背景技術(shù)】
[0002]金黃色葡萄球菌是一種引起人和多種哺乳動物感染的重要病原體，其新亞群一一金黃色葡萄球菌小菌落突變株(Small colony variants，簡稱SCVs)具有獨特生長和生化表型及致病特征，較野生株更易在哺乳動物細胞內(nèi)存活，可能引起持續(xù)性及復(fù)發(fā)性感染，甚至可能導(dǎo)致嚴重感染，嚴重威脅人和多種哺乳動物的健康。
[0003]由于目前現(xiàn)有金黃色葡萄球菌小菌落突變株生長表型不穩(wěn)定，表現(xiàn)為在培養(yǎng)基中補充甲萘醌、硫胺素、胸腺嘧啶、血紅素或在二氧化碳培養(yǎng)條件下，其菌落直徑均增大，均能恢復(fù)野生型生長表型，缺乏穩(wěn)定的生長表型菌株。因此，提供生長表型穩(wěn)定的金黃色葡萄球菌小菌落突變株對研究其持續(xù)感染的致病機理提供菌株材料。
[0004]另外，皮下膿腫是一種人類和多種哺乳動物金黃色葡萄球菌感染引起的主要疾病。近年來，其發(fā)病率和嚴重程度逐漸增加，因此，亟待深入開展皮下膿腫的預(yù)防和控制研究。目前雖有小白鼠皮下膿腫動物模型用于該病的研究，但這些建立動物模型的方法成功率低下，并且建立的動物模型不穩(wěn)定，膿腫僅能持續(xù)數(shù)天就自然消失，缺乏一種穩(wěn)定的皮下膿腫動物模型，在一定程度上阻礙了該疾病的深入研究。因此，提供一種重復(fù)性、穩(wěn)定性好的小白鼠皮下膿腫動物模型為該病的發(fā)病機理研究、治療方法和藥物篩選奠定基礎(chǔ)。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0005]針對目前葡萄球菌引起的人和多種哺乳動物續(xù)性及復(fù)發(fā)性感染，甚至嚴重感染疾病，急需生長表型穩(wěn)定的金黃色葡萄球菌小菌落突變株用于其致病機理研究的問題，以及針對人和多種哺乳動物皮下膿腫疾病預(yù)防和控制研究急需一種重復(fù)性、穩(wěn)定性好的動物模型的問題，本發(fā)明旨在提供一株具有穩(wěn)定生長表型的金黃色葡萄球菌小菌落突變株以及一種重復(fù)性、穩(wěn)定性好、易操作、成本低的小白鼠皮下膿腫動物模型的構(gòu)建方法。
[0006]本發(fā)明提供的金黃色葡萄球菌小菌落突變株YN151116，于2016年3月14日，保藏于武漢中國典型培養(yǎng)物保藏中心，其保藏號為CCTCC Ν0:Μ 2016115。
[0007]本發(fā)明提供的金黃色葡萄球菌小菌落突變株YN151116具有以下特征:
[0008](I)菌落特征:在普通營養(yǎng)瓊脂平板上形成乳黃色、表明光滑凸起，邊緣整齊的細小菌落，其直徑約為0.1mm，連續(xù)傳代培養(yǎng)8次后菌落特征不改變。
[0009](2)細菌形態(tài)特征:細菌革蘭氏染色呈陽性，球形，多個菌體聚集在一起呈典型的葡萄串狀。
[0010](3)生理生化特征:該菌株分解葡萄糖和甘露糖，不分解乳糖、半乳糖、麥芽糖、蔗糖、木糖、棉籽糖、山梨糖、鼠李糖、阿拉伯糖、肌醇、甘露醇、衛(wèi)矛醇；枸櫞酸鹽利用試驗陰性;鳥氨酸脫羧酶、賴氨酸脫羧酶試驗陰性;精氨酸脫羧酶試驗陽性;VP試驗(維培試驗)、MR試驗(甲基紅試驗)、靛基質(zhì)試驗、硝酸鹽還原試驗陰性;氧化酶試驗、過氧化氫酶試驗陰性。
[0011](4)培養(yǎng)特性:普通營養(yǎng)瓊脂平板上培養(yǎng)24小時，生長貧瘠，菌落細小，直徑為0.1mm;連續(xù)傳代培養(yǎng)8次后菌落大小穩(wěn)定。在培養(yǎng)基中補充硫胺素或胸腺嘧啶不能促進其生長，菌落大小不增加;在培養(yǎng)基中補充甲萘醌則抑制其生長;在二氧化碳培養(yǎng)條件下也不能促進其生長，菌落大小也不增加，是一株生長表型穩(wěn)定的金黃色葡萄球菌小菌落突變株。而以前發(fā)現(xiàn)的金黃色葡萄球菌小菌落突變株生長表型不穩(wěn)定，在培養(yǎng)基中補充硫胺素、胸腺嘧啶、甲萘醌等營養(yǎng)物質(zhì)或在二氧化碳培養(yǎng)條件下，菌落大小增加，能恢復(fù)其野生型菌株生長表型。
[0012](5)16S rDNA序列特征如SEQ ID N0.1，其與GenBank數(shù)據(jù)庫中的100株金黃色葡萄球菌16S rDNA核苷酸序列同源性高達99%。
[0013]金黃色葡萄球菌小菌落突變株YN151116的革蘭氏染色菌體形態(tài)特征以及其16SrDNA核苷酸序列特征與金黃色葡萄球菌相符合，鑒定為金黃色葡萄球菌，又由于其在普通瓊脂平板上菌落細小，連續(xù)傳代培養(yǎng)8次后菌落大小穩(wěn)定，鑒定為金黃色葡萄球菌小菌落突變株。
[0014]本發(fā)明的另一個目的是提供一種利用該金黃色葡萄球菌小菌落突變株YN151116建立小白鼠皮下膿腫動物模型的方法。
[0015]利用金黃色葡萄球菌小菌落突變株建立小白鼠皮下膿腫動物模型的方法，包括以下步驟:(I)菌種復(fù)蘇:取凍存菌種劃線接種于普通營養(yǎng)瓊脂平板培養(yǎng)基，置普通恒溫培養(yǎng)箱，37°C培養(yǎng)24h;
[0016](2)菌懸液制備:挑取上述營養(yǎng)瓊脂平板上的單菌落劃線接種于新的營養(yǎng)瓊脂平板培養(yǎng)基，置普通恒溫培養(yǎng)箱，37 °C培養(yǎng)24h;然后用滅菌生理鹽水將菌落洗脫下來，用稀釋平板計數(shù)法計算菌液濃度，再用滅菌生理鹽水調(diào)整其菌濃度為1.0?2.0X107CFU/mL，4°C保藏備用。
[0017](3)接種動物:選取18?22g昆明小白鼠，用酒精棉球消毒后大腿內(nèi)側(cè)皮膚，用注射器將0.2mL上述菌懸液注入一只后大腿內(nèi)側(cè)皮下，另一只后大腿內(nèi)側(cè)皮下注射等量滅菌生理鹽水作對照，注射完成后將小白鼠放回籠中繼續(xù)飼養(yǎng)。
[0018](4)動物模型:接種后第12天觀察小白鼠，菌懸液接種的一只大腿內(nèi)側(cè)出現(xiàn)乳白色黃豆大小腫塊，觸摸可游動，有波動感;而對照一側(cè)無異常變化，即為皮下膿腫動物模型。用該方法可使100%小白鼠出現(xiàn)皮下膿腫，且該膿腫可持續(xù)存在2個月以上。
[0019]根據(jù)以上方法構(gòu)建的小白鼠皮下膿腫動物模型在人和哺乳動物皮下膿腫的發(fā)病機理研究、治療方法和藥物篩選方面的應(yīng)用。
[0020]本發(fā)明的有益效果:
[0021](I)本發(fā)明提供一株分離自山羊皮下膿腫的濃汁中的生長表型穩(wěn)定的金黃色葡萄球菌小菌落突變株，其生長表型穩(wěn)定表現(xiàn)在:在培養(yǎng)基中補充硫胺素或胸腺嘧啶不能促進其生長，菌落直徑為0.1_，大小不增加;在培養(yǎng)基中補充甲萘醌則抑制其生長;在二氧化碳培養(yǎng)條件下也不能促進其生長，菌落直徑為0.1mm，大小也不增加。該金黃色葡萄球菌小菌落突變株YN151116，為金黃色葡萄球菌小菌落突變株的致病機理研究提供生長表型穩(wěn)定的菌株材料。
[0022](2)本發(fā)明還提供一種建立小白鼠皮下膿腫動物模型的方法:應(yīng)用該菌株對昆明小白鼠后大腿內(nèi)側(cè)皮下注射，可使小白鼠100%出現(xiàn)皮下膿腫動物模型，該動物模型重復(fù)性、穩(wěn)定性好、易操作、成本低。
[0023](3)該動物模型對研究皮下膿腫的發(fā)病機理研究、治療方法和藥物篩選提供動物模型，具有廣闊的應(yīng)用前景。
[0024]微生物保藏情況說明
[0025]名稱:金黃色葡萄球菌小菌落突變株(Staphylococcus aureus) ,YN151116；
[0026]菌種保藏編號為CCTCCΝ0:Μ 2016115。
[0027]保藏單位:武漢中國典型培養(yǎng)物保藏中心；
[0028]保藏時間:2016年3月14日。
【附圖說明】
[0029]圖1為金黃色葡萄球菌小菌落突變株YN151116菌落特征;其中左半部分為金黃色葡萄球菌小菌落突變株YN151116菌落圖，右半部分為野生型金黃色葡萄球菌菌落圖；
[0030]圖2為二氧化碳培養(yǎng)對YN151116菌落大小的影響比較圖，其中左圖二氧化碳培養(yǎng)條件下的菌落圖，右圖為普通條件培養(yǎng)下的菌落圖；
[0031]圖3為硫胺素對YN151116菌落大小的影響比較圖，其中左圖為含0.1mg/mL硫胺素的營養(yǎng)瓊脂平板上的菌落圖，右圖為營養(yǎng)瓊脂平板上的菌落圖；
[0032]圖4為胸腺嘧啶對YN151116菌落大小的影響比較圖，其中左圖為含0.001mg/mL胸腺嘧啶的營養(yǎng)瓊脂平板上的菌落圖，右圖為營養(yǎng)瓊脂平板上的菌落圖；
[0033]圖5為甲萘醌對YNl51116菌落大小的影響比較圖，其中左圖為含0.00 lmg/mL甲萘醌的營養(yǎng)瓊脂平板上的菌落，右圖為營養(yǎng)瓊脂平板上的菌落；
[0034]圖6為小白鼠皮下膿腫動物模型，其中左后大腿內(nèi)側(cè)皮下有黃豆大小膿腫，右后大腿內(nèi)側(cè)皮下無異常變化。
【具體實施方式】
[0035]為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點更加清楚明白，以下結(jié)合附圖及實施例，對本發(fā)明進行進一步詳細說明。應(yīng)當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0036]實驗所用主要試劑:
[0037]營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基和格蘭死細菌染色液購自北京奧博星生物技術(shù)有限公司；細菌微量生化鑒定管購自杭州濱和微生物試劑有限公司；胸腺嘧啶、硫胺素、甲萘醌均購自Sigma公司。
[0038]實施例1:金黃色小菌落突變株的培養(yǎng)及表型特征
[0039]金黃色葡萄球菌小菌落突變株YN151116分離自山羊皮下膿腫的濃汁，將濃汁接種普通營養(yǎng)瓊脂平板培養(yǎng)基，37 V需氧培養(yǎng)24h;再挑取上述營養(yǎng)瓊脂平板上的單個細小菌落劃線接種于一個新的營養(yǎng)瓊脂平板培養(yǎng)基，37°C需氧培養(yǎng)24h，肉眼觀察可見菌落特征如下:菌落呈乳黃色細小菌落，直徑為0.1mm，表面光滑凸起，邊緣整齊。按上述方法將YN151116在普通營養(yǎng)瓊脂平板上連續(xù)傳代培養(yǎng)7代，每次傳代培養(yǎng)菌落直徑0.1mm保持不變。取第七代培養(yǎng)物涂布接種于一個營養(yǎng)瓊脂平板培養(yǎng)基的左半部分，再取普通野生型金黃色葡萄球菌涂布接種于該營養(yǎng)瓊脂平板的右半部分，置普通恒溫培養(yǎng)箱，37°C需氧培養(yǎng)24h，菌落直徑0.1mm，其直徑約為普通野生型金黃色葡萄球菌的1/20(見圖1)。
[0040]取上述營養(yǎng)瓊脂平板上的菌落，涂布于載玻片，進行革蘭氏染色，用普通光學(xué)顯微鏡觀察細菌形態(tài)特征如下:細菌革蘭氏染色呈陽性，球形，多個菌體聚集在一起呈典型的葡萄串狀。
[0041]將上述營養(yǎng)瓊脂平板上的菌落用滅菌生理鹽水洗脫下來制成菌懸液，用接種棒將菌懸液接種細菌微量生化鑒定管，置普通恒溫培養(yǎng)箱37°C培養(yǎng)72h，可觀察得到細菌生理生化特征如下:該菌株分解葡萄糖和甘露糖，不分解乳糖、半乳糖、麥芽糖、蔗糖、木糖、棉籽糖、山梨糖、鼠李糖、阿拉伯糖、肌醇、甘露醇、衛(wèi)矛醇；枸櫞酸鹽利用試驗陰性;鳥氨酸脫羧酶、賴氨酸脫羧酶試驗陰性;精氨酸脫羧酶試驗陽性;VP試驗(維培試驗)、MR試驗(甲基紅試驗)、靛基質(zhì)試驗、硝酸鹽還原試驗陰性;將菌落蘸于氧化酶試紙上可見氧化酶試驗陰性、將雙氧水滴加在菌落上可見過氧化氫酶試驗陰性。
[0042]生長表型穩(wěn)定性檢測:檢測前先準備菌懸液，其具體步驟如下，先取50yL保藏的菌種涂布接種I個營養(yǎng)瓊脂平板培養(yǎng)基，置普通恒溫培養(yǎng)箱37°C培養(yǎng)24h，用ImL滅菌生理鹽水將菌落洗脫下來，取1yL加入到ImL滅菌生理鹽水中制成稀釋的菌懸液用于以下試驗。(I)取上述稀釋的菌懸液涂布接種兩塊營養(yǎng)瓊脂平板培養(yǎng)基，每塊平板接種lOOyL，一塊置普通恒溫培養(yǎng)箱，另一塊置二氧化碳培養(yǎng)箱(5 % 二氧化碳)，37 °C培養(yǎng)24h，兩者菌落直徑均約0.1mm，無顯著差異(見圖2)。(2)取上述稀釋的菌懸液涂布接種一塊含0.lmg/mL硫胺素的營養(yǎng)瓊脂平板培養(yǎng)基和普通營養(yǎng)瓊脂平板，每塊平板接種lOOyL，置普通恒溫培養(yǎng)箱，37°C培養(yǎng)24h，兩者菌落直徑均約0.1mm，無顯著差異(見圖3)。所述的0.lmg/mL硫胺素的營養(yǎng)瓊脂平板培養(yǎng)基的制備方法是10mL普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基121°C高壓滅菌15分鐘，待溫度降至約55°C時加入1mg硫胺素，充分混勻后傾注于培養(yǎng)皿即得。(3)取上述稀釋的菌懸液涂布接種一塊含0.001mg/mL胸腺嘧啶的營養(yǎng)瓊脂平板和普通營養(yǎng)瓊脂平板，每塊平板接種100yL，置普通恒溫培養(yǎng)箱，37°C培養(yǎng)24h，兩者菌落直徑均約0.1mm，無顯著差異(見圖4)。所述的
0.001mg/mL胸腺嘧啶的營養(yǎng)瓊脂平板的制備方法是在10mL普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中加入
0.1mg胸腺嘧啶，121°C高壓滅菌15分鐘，充分混勻后傾注于培養(yǎng)皿即得。(4)取上述稀釋的菌懸液涂布接種一塊含0.001mg/mL甲萘醌的營養(yǎng)瓊脂平板和普通營養(yǎng)瓊脂平板，每塊平板接種lOOyL，置普通恒溫培養(yǎng)箱，37°C培養(yǎng)24h，含甲萘醌的營養(yǎng)瓊脂平板無菌生長，普通營養(yǎng)瓊脂平板呈細小菌落，其直徑為0.1mm(見圖5)。所述的0.001mg/mL甲萘醌的營養(yǎng)瓊脂平板的制備方法是10mL普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基121°C高壓滅菌15分鐘，待溫度降至約55 V時加A0.1mg甲萘醌，充分混勻后傾注于培養(yǎng)皿即得。
[0043]實施例2:金黃色葡萄球菌小菌落突變株的基因型特征
[0044]將保存的菌種接種于普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，37°C需氧培養(yǎng)24h;用滅菌生理鹽水將菌落洗脫下來裝入離心管，5000轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘，棄上清，沉淀用TE緩沖液重懸，水浴煮沸10分鐘，12000轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘，取上清作為PCR反應(yīng)模板。用上游引物16S-27F(A):5。AGAGTTTGATCATGGCTCAG-37 和下游引物 16S_1492R(T):5' -GGTTACCTTGTTACGACTT-3作為PCR反應(yīng)引物。反應(yīng)體系(50yL):ddH20 38yL、10XTaq buffer 5yL、10mM dNTPs 2yL、25mM上下游引物各lyL、5U/yL Taq DNA polymerase lyL、模板2yL。反應(yīng)條件為94°C3min;94°C30S，57°C30S，72°C90S，35個循環(huán);72°C5min，4°C保存。PCR反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)生工生物工程(上海)股份有限公司測序，可得16S rDNA核苷酸序列長度為1513bp，其核苷酸序列特征如SEQ ID N0.1所示。
[0045]用GenBank中的BLAST工具對上述16S rDNA核苷酸序列進行同源性比對分析，結(jié)果顯示，其與GenBank數(shù)據(jù)庫中的100株金黃色葡萄球菌16S rDNA核苷酸序列同源性高達99 %，再根據(jù)其上述革蘭氏染色菌體形態(tài)特征，將分離株YN151116鑒定為金黃色葡萄球菌，又由于其在普通瓊脂平板上菌落細小，直徑為0.1mm，生長表型穩(wěn)定，鑒定為金黃色葡萄球菌小菌落突變株。
[0046]實施例3:小白鼠皮下膿腫動物模型的建立
[0047](I)菌種復(fù)蘇:取以上凍存菌種劃線接種I個普通營養(yǎng)瓊脂平板培養(yǎng)基，置普通恒溫培養(yǎng)箱，37°C培養(yǎng)24h;
[0048](2)菌懸液制備:①挑取上述營養(yǎng)瓊脂平板上的單菌落劃線接種于I個營養(yǎng)瓊脂平板培養(yǎng)基，置普通恒溫培養(yǎng)箱，37 °C培養(yǎng)24h;然后用ImL滅菌生理鹽水將菌落洗脫下來，裝于I個2mL滅菌離心管制成菌懸液保存液。②稀釋平板計數(shù)法測定菌懸液保存液濃度:取5支離心管，分別編號為I?5號離心管，各裝入900yL滅菌生理鹽水。取10yL上述菌液保存液加入到第I支離心管，混勻后取10yL加入到第2支離心管，混勻后取10yL加入到第3支離心管，依次將菌懸液保存液作10倍序列稀釋至第5支離心管即得菌懸液稀釋液;取第5支離心管中的菌懸液稀釋液涂布營養(yǎng)瓊脂平板，每個平板涂布lOOyL，共涂布3個營養(yǎng)瓊脂平板。置普通恒溫培養(yǎng)箱，37°C培養(yǎng)24h，計算3個平板上菌落平均數(shù)為800，計算可得原菌懸液保存液的濃度為8 X 107CFU/mL;取菌液保存液500yL于小三角燒瓶，加入3500yL滅菌生理鹽水即得I X I O7CFUAiL的菌懸液工作液。
[0049](3)接種動物:選取18?22g昆明小白鼠10只，用酒精棉球消毒后大腿內(nèi)側(cè)皮膚，每只小白鼠左后大腿內(nèi)側(cè)注射0.2mL菌懸液工作液，右后大腿內(nèi)側(cè)皮下注射0.2mL滅菌生理鹽水作對照，接種完成后將小白鼠放回籠中繼續(xù)飼養(yǎng)。
[0050](4)實驗動物觀察:接種后第12天觀察小白鼠，10只小白鼠均在左后腿內(nèi)側(cè)皮下均出現(xiàn)乳白色黃豆大小腫塊，觸摸腫塊可游動，有波動感;右側(cè)則無腫塊出現(xiàn);繼續(xù)觀察60天，左后腿內(nèi)側(cè)腫塊不消退。剖解可見左后腿內(nèi)測皮下有黃豆大小腫塊，切開有乳白色膏狀濃汁，右后腿內(nèi)測皮下無異常變，10只鼠均成功建立皮下膿腫動物模型(見圖6)，模型成功率為100%，該方法重復(fù)性高、穩(wěn)定性好。
[0051]用上述方法構(gòu)建的小白鼠皮下膿腫動物模型在人和哺乳動物皮下膿腫的發(fā)病機制研究、治療方法和藥物篩選方面有較大的應(yīng)用。
【主權(quán)項】
1.一株金黃色葡萄球菌小菌落突變株，其特征在于:所述的金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)小菌落突變株命名為YN151116，該菌種于2016年3月14日在武漢中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，菌種保藏編號為CCTCC NO = M 2016115。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的金黃色葡萄球菌小菌落突變株，其特征在于:所述的金黃色葡萄球菌小菌落突變株YN151116的生長表型特征為:普通營養(yǎng)瓊脂平板上生長貧瘠，菌落細小，直徑為0.1mm，具有小菌落突變株的基本特征;在培養(yǎng)基中加入硫胺素或胸腺嘧啶不能促進其生長，菌落大小不改變;在培養(yǎng)基中加入甲萘醌則抑制其生長;在二氧化碳培養(yǎng)條件下其菌落大小也不改變。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的金黃色葡萄球菌小菌落突變株，其特征在于:所述的金黃色葡萄球菌小菌落突變株YN151116的生化表型特征為:該菌株分解葡萄糖和甘露糖;不分解乳糖、半乳糖、麥芽糖、蔗糖、木糖、棉籽糖、山梨糖、鼠李糖、阿拉伯糖、肌醇、甘露醇、衛(wèi)矛醇；枸櫞酸鹽利用試驗陰性;鳥氨酸脫羧酶、賴氨酸脫羧酶試驗陰性;精氨酸脫羧酶試驗陽性；VP試驗(維培試驗)、MR試驗(甲基紅試驗)、靛基質(zhì)試驗、硝酸鹽還原試驗陰性;氧化酶試驗、過氧化氫酶試驗陰性。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的金黃色葡萄球菌小菌落突變株，其特征在于:所述的金黃色葡萄球菌小菌落突變株YN151116的16S rDNA核苷酸序列如SEQ ID N0.1所示。5.一種利用金黃色葡萄球菌小菌落突變株建立小白鼠皮下膿腫動物模型的方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)菌種復(fù)蘇:取權(quán)利要求1-4任一權(quán)利要求所述的凍存菌種劃線接種于普通營養(yǎng)瓊脂平板培養(yǎng)基，置普通恒溫培養(yǎng)箱，37 °C培養(yǎng)24h; (2)菌懸液制備:挑取上述營養(yǎng)瓊脂平板上的單菌落劃線接種于瓊脂平板培養(yǎng)基，置普通恒溫培養(yǎng)箱，37 °C培養(yǎng)24h;然后用滅菌生理鹽水將菌落洗脫下來，用稀釋平板計數(shù)法計算菌液濃度，再用滅菌生理鹽水調(diào)整其菌液濃度為1.0?2.0 X 107CFU/mL，用ImL注射器吸取備用； (3)接種動物:選取18?22g昆明小白鼠，用酒精棉球消毒后大腿內(nèi)側(cè)皮膚，用注射器將.0.2mL菌懸液注入一只后大腿內(nèi)側(cè)皮下，另一只后大腿內(nèi)側(cè)皮下注射等量滅菌生理鹽水作對照，注射完成后將小白鼠放回籠中繼續(xù)飼養(yǎng)； (4)實驗動物觀察:接種后第12天觀察小白鼠，菌懸液接種的那只大腿內(nèi)側(cè)出現(xiàn)乳白色黃豆大小腫塊，觸摸可游動，有波動感，對照一側(cè)無異常變化，即得到小白鼠皮下膿腫動物模型。
【文檔編號】A61K35/74GK105861360SQ201610227106
【公開日】2016年8月17日
【申請日】2016年4月13日
【發(fā)明人】李富祥, 楊仕標, 李華春, 洪瓊花, 邵慶勇, 朱建波, 趙文華, 廖德芳
【申請人】云南省畜牧獸醫(yī)科學(xué)院