一種富硒蜜環(huán)菌粉的制備方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及蜜環(huán)菌粉的制備方法，更具體而言，涉及一種富硒蜜環(huán)菌粉的制備方法；該方法是以蜜環(huán)菌作為富硒元素載體，采用液體深層培養(yǎng)技術(shù)在較短時(shí)間內(nèi)通過(guò)蜜環(huán)菌培養(yǎng)代謝而得到富硒產(chǎn)品；斜面蜜環(huán)菌種培養(yǎng)：將麩皮煮汁加入亞硒酸鈉，使培養(yǎng)基中硒含量達(dá)到30μg/ml?50μg/ml；搖瓶培養(yǎng)：將麩皮煮汁、蔗糖、蠶蛹粉、磷酸二氫鉀、硫酸鎂加入到亞硒酸鈉的培養(yǎng)基中，使硒含量達(dá)到30μg/ml?50μg/ml；發(fā)酵培養(yǎng)：將葡萄糖、豆粉、蔗糖、蛋白胨、蠶蛹粉、硫酸鎂、磷酸二氫鉀加入亞硒酸鈉的培養(yǎng)基中，使硒含量達(dá)到40μg/ml；發(fā)酵液分離：菌絲干燥粉碎，菌液減壓濃縮浸膏，然后將兩部分混合干燥，得到富硒蜜環(huán)菌粉。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
一種富砸蜜環(huán)菌粉的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及蜜環(huán)菌粉的制備方法，更具體而言，涉及一種富硒蜜環(huán)菌粉的制備方 法。
【背景技術(shù)】
[0002] 蜜環(huán)菌(Armillaria mellea(vane exfr)Quel)屬真菌門(mén)，擔(dān)子菌綱、傘菌目，白蘑 科，蜜環(huán)菌屬。蜜環(huán)菌是一種珍貴的食藥用菌，在上世紀(jì)七十年代已由中國(guó)科學(xué)院藥物研究 所純種分離成功并工業(yè)化發(fā)酵培養(yǎng)生產(chǎn)。它具有定驚、息風(fēng)的功能，對(duì)眩暈、頭痛、驚風(fēng)、癲 癇、肢體麻木、腰膝酸痛具有很高療效。特別是它能夠與中藥天麻共生和自生的特性，人們 發(fā)現(xiàn)野生天麻的生長(zhǎng)環(huán)境中必須有蜜環(huán)菌的存在，否則天麻就不會(huì)生長(zhǎng)，因而現(xiàn)在人工栽 培天麻首先培養(yǎng)蜜環(huán)菌然后再將箭麻進(jìn)行種植才能成功。硒是一種人體必須的微量元素， 廣泛地存在于人體除了脂肪的所有器官中，人體內(nèi)硒元素的缺乏，將會(huì)導(dǎo)致心血管疾病、肝 病、糖尿病、腫瘤呼吸系統(tǒng)、骨關(guān)節(jié)、胃腸道等各種疾病的發(fā)生，而補(bǔ)硒可以預(yù)防甚至治療這 些疾病。目前硒對(duì)人體六大功效的研究已明確，資料表明硒對(duì)癌細(xì)胞有抑制作用，能降低 放、化療的毒副作用，能清除肝炎病毒，保護(hù)肝臟，能增強(qiáng)血紅蛋白的攜氧能力，保障大腦、 心肌及全身各內(nèi)腑臟器中氧的供應(yīng)，穩(wěn)定血脂、血壓、預(yù)防心肌缺氧造成的突發(fā)性心肌梗 死。能夠在血管中形成硒蛋白溶栓系統(tǒng)，降低血液粘稠度，減少心梗、腦梗、中風(fēng)、腦溢血的 發(fā)生。營(yíng)養(yǎng)心肌能有效降低糖尿病人并發(fā)癥，保護(hù)胰島不受損傷。目前市場(chǎng)上硒產(chǎn)品大部分 為在食品藥品中直接加入無(wú)機(jī)硒鹽，其生物活性不但難以吸收，而且還有毒性，使用效果也 不理想。據(jù)權(quán)威機(jī)構(gòu)調(diào)查發(fā)現(xiàn)我國(guó)三分之二的地區(qū)屬于缺硒地區(qū)，膳食結(jié)構(gòu)中硒含量偏低。 鑒于此，有必要對(duì)其進(jìn)行改進(jìn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 為了克服現(xiàn)有技術(shù)中所存在的不足，提供一種富硒蜜環(huán)菌粉的制備方法，該方法 是以蜜環(huán)菌作為富硒元素載體，采用液體深層培養(yǎng)技術(shù)在較短時(shí)間內(nèi)通過(guò)蜜環(huán)菌培養(yǎng)代謝 而得到富硒產(chǎn)品。
[0004] 為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為：
[0005] -種富硒蜜環(huán)菌粉的制備方法，按照以下步驟進(jìn)行：
[0006] 斜面蜜環(huán)菌種培養(yǎng):將麩皮煮汁加入亞硒酸鈉，使培養(yǎng)基中硒含量達(dá)到30μg/ml- 50μg/ml；
[0007] 搖瓶培養(yǎng):將麩皮煮汁、蔗糖、蠶蛹粉、磷酸二氫鉀、硫酸鎂加入到亞硒酸鈉的培養(yǎng) 基中，使硒含量達(dá)到30μg/ml-50μg/ml;
[0008] 發(fā)酵培養(yǎng):將葡萄糖、豆粉、鹿糖、蛋白胨、蠶蛹粉、硫酸鎂、磷酸二氫鉀加入亞硒酸 鈉的培養(yǎng)基中，使硒含量達(dá)到40μg/ml;
[0009] 發(fā)酵液分離：菌絲干燥粉碎，菌液減壓濃縮浸膏，然后將兩部分混合干燥，得到富 硒蜜環(huán)菌粉。
[0010] 所述斜面蜜環(huán)菌種培養(yǎng)步驟中，將5%麩皮煮汁加入到3-5mg/100ml的亞硒酸鈉， 培養(yǎng)條件為26 ± 1°C恒溫條件培養(yǎng)13-15天，斜面長(zhǎng)滿(mǎn)菌絲。
[0011] 所述搖瓶培養(yǎng)步驟中，將5 %麩皮煮汁、2 %蔗糖、0.5 %蠶蛹粉、0.15 %磷酸二氫 鉀、0.075%硫酸鎂加入到3-511^/1001111亞硒酸鈉的培養(yǎng)基中，硒含量達(dá)到3(^8/1111-5(^8/ ml，培養(yǎng)條件為750ml搖瓶裝料200ml，轉(zhuǎn)速120轉(zhuǎn)/分，溫度26±1°C在旋轉(zhuǎn)搖床上培養(yǎng)至菌 絲濃度90 %以上，停止培養(yǎng)。
[0012] 所述發(fā)酵培養(yǎng)步驟中，將1 %葡萄糖、2 %豆粉、2 %蔗糖、0.5 %蛋白胨、0.5 %蠶蛹 粉、0.075 %硫酸鎂、0.15%磷酸二氫鉀加入到4mg/100ml亞硒酸鈉的培養(yǎng)基中，硒含量達(dá)到 40μg/ml，培養(yǎng)條件為750ml搖瓶裝料200ml，轉(zhuǎn)速120轉(zhuǎn)/分，溫度26± 1°C在旋轉(zhuǎn)搖床上培養(yǎng) 至菌絲濃度95%以上，停止培養(yǎng)。
[0013] 所述發(fā)酵液分離步驟中，菌絲在80°C以下干燥，菌液減壓濃縮至比重1.30,兩部分 混合后在80 °C以下干燥。
[0014] 與現(xiàn)有技術(shù)相比本發(fā)明所具有的有益效果為：
[0015] 本發(fā)明利用蜜環(huán)菌的特性，在蜜環(huán)菌深層培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)基中加入無(wú)機(jī)硒鹽，通過(guò)蜜 環(huán)菌生長(zhǎng)過(guò)程中吸收代謝后得到生物源有機(jī)硒產(chǎn)品。本發(fā)明富硒蜜環(huán)菌粉生產(chǎn)投入成本 少、產(chǎn)量不受影響，質(zhì)量方面增加有益人體所需的硒產(chǎn)品，給人們健康帶來(lái)不可預(yù)計(jì)的社會(huì) 效應(yīng)。
【具體實(shí)施方式】
[0016] 下面通過(guò)具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述。
[0017] 菌種：選擇蜜環(huán)菌(Armillaria mellea(vane exfr)Quel) 〇
[0018] 斜面培養(yǎng)：
[0019] 5%麩皮煮汁加入3~5mg/100ml的亞硒酸鈉 (NaSe02 · 5H20)的培養(yǎng)基中，硒含量達(dá) 到30~50μg/ml (硒含量大于50μg/ml蜜環(huán)菌生長(zhǎng)受影響，生長(zhǎng)緩慢）。
[0020] 培養(yǎng)條件:26 ± 1°C恒溫條件下培養(yǎng)13~15天。斜面長(zhǎng)滿(mǎn)菌絲。
[0021] 上述的5%是指本批配料時(shí)，所配體積(在操作中比重視為1)的5%，如:本次需配 2000毫升，操作如下:先稱(chēng)量100克麩皮放入有刻度的配料容器中，加水至刻度，攪拌均勻后 煮沸30分鐘，用藥用精制紗布兩層過(guò)濾，濾液補(bǔ)水至刻度得到5%的麩皮液。下述的百分比 均此相同，均是先稱(chēng)量固形物然后再加入經(jīng)煮沸后的濾液至刻度，攪拌均勻后分裝于搖瓶 中。
[0022]搖瓶培養(yǎng)基：
[0023] 5%麩皮煮汁、2%蔗糖、0.5%蠶蛹粉、0.15%磷酸二氫鉀、0.075%硫酸鎂加入 3mg/100ml~5mg/100ml的亞硒酸鈉 (NaSe〇2 · 5H2〇)的培養(yǎng)基中，硒含量達(dá)到30~50μg/ml。 [0024]培養(yǎng)條件:750ml搖瓶裝料200ml，轉(zhuǎn)速120轉(zhuǎn)/分，溫度26±1°C在旋轉(zhuǎn)搖床上培養(yǎng)6 ~8天。
[0025]發(fā)酵培養(yǎng)基：
[0026]葡萄糖1 %、豆粉2 %、蔗糖2 %、蛋白胨0.5 %、蠶蛹粉0.5 %、硫酸鎂0.075 %、磷酸 二氫鉀0.15%、加入4mg/100ml的亞硒酸鈉(NaSe〇2 · 5H20)的培養(yǎng)基中，硒含量達(dá)到40yg/ ml〇
[0027]培養(yǎng)條件：750ml搖瓶裝料200ml，26 ±1°C轉(zhuǎn)速120轉(zhuǎn)/分在旋轉(zhuǎn)搖床上培養(yǎng)5~7 天。
[0028]發(fā)酵液分離:菌絲體干燥，菌液減壓濃縮至比重1.30，為浸膏，在60°C測(cè)定浸膏，測(cè) 定硒含量，菌絲與浸膏混合、干燥、粉碎，最后混合得到富硒蜜環(huán)菌粉。
[0029]實(shí)施過(guò)程：
[0030] 菌種的確認(rèn)：
[0031 ]菌種來(lái)源:天麻蜜環(huán)菌原料生產(chǎn)菌，經(jīng)國(guó)家批準(zhǔn)的生產(chǎn)蜜環(huán)菌原料的菌種，蜜環(huán)菌 批準(zhǔn)文號(hào)為：國(guó)藥準(zhǔn)字H14023100,執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)為化學(xué)藥品地方標(biāo)準(zhǔn)上升國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)第十三冊(cè) WS-10001-(HD-1224)-2002〇
[0032] 斜面培養(yǎng)：5 % 麩皮煮汁每 100ml 加入 lmg、2mg、3mg、4mg、5mg、6mg、7mg、8mg 的亞硒 酸鈉。每個(gè)加入量做5支，觀察生長(zhǎng)及記錄，結(jié)果：
[0033]
[0035] 生長(zhǎng)速度測(cè)量方法：以斜面接種點(diǎn)為中心向培養(yǎng)基邊緣長(zhǎng)出新菌絲的外緣直徑， 當(dāng)斜面橫向長(zhǎng)滿(mǎn)后，以縱向邊緣為測(cè)量點(diǎn)。
[0036] 結(jié)論:經(jīng)測(cè)量生長(zhǎng)速度1、2、3、4基本無(wú)大的差異，5稍有影響，6、7、8抑制菌絲生長(zhǎng)。 選擇3mg~5mg/100ml對(duì)斜面生長(zhǎng)速度較為合理。特別是每100ml加8mg后菌絲不生長(zhǎng)。
[0037]搖瓶培養(yǎng)：
[0038] 5 %麩皮煮汁、2 %蔗糖、0 · 5 %蠶蛹粉、0 · 15 %磷酸二氫鉀、0 · 075 %硫酸鎂加入 4mg/100ml的亞硒酸鈉（NaSe〇2 · 5H2〇)使培養(yǎng)基中硒含量達(dá)到搖瓶裝料 200ml，轉(zhuǎn)速120轉(zhuǎn)/分，溫度26 ± 1°C在旋轉(zhuǎn)搖床上培養(yǎng)至菌絲濃度90 %以上，停止培養(yǎng)。 [0039]發(fā)酵培養(yǎng)：
[0040] 葡萄糖1 %、豆粉2 %、蔗糖2 %、蛋白胨0.5 %、蠶蛹粉0.5 %、硫酸鎂0.075 %、磷酸 二氫鉀0.15%、亞硒酸鈉 (恥36〇2.5!12〇)411^/10〇1111。75〇1111搖瓶裝料20〇1111，轉(zhuǎn)速120轉(zhuǎn)/分， 溫度26± 1°C，在旋轉(zhuǎn)搖床上培養(yǎng)至菌絲濃度95%以上，時(shí)間146小時(shí)停止培養(yǎng)。
[0041] -配料表：
[0042]

[0043] 操作:按配料表依次準(zhǔn)確稱(chēng)取(稱(chēng)量時(shí)一人稱(chēng)、一人復(fù)核)加飲用水至刻度，攪拌加 熱至60°C分裝于10個(gè)搖瓶中。120°C30分鐘高壓滅菌，冷卻后移至菌種室。百級(jí)環(huán)境下接種 15~20ml，旋轉(zhuǎn)搖床培養(yǎng)轉(zhuǎn)速120轉(zhuǎn)/分，溫度26±1°C，培養(yǎng)126小時(shí)，菌絲濃度已長(zhǎng)95%以 上，停止培養(yǎng)。連續(xù)三個(gè)批次，每個(gè)批次10個(gè)。用90目篩過(guò)濾分離，菌絲干燥粉碎，菌液濃縮 至比重1.30(溫度60°C)與菌絲粉混合干燥，得到富硒蜜環(huán)菌粉，進(jìn)行檢驗(yàn)。
[0044] 檢驗(yàn)結(jié)果：
[0045]
[0046] 結(jié)論:在整個(gè)實(shí)施過(guò)程中按照蜜環(huán)菌生產(chǎn)工藝執(zhí)行與對(duì)照未發(fā)現(xiàn)差異，經(jīng)檢測(cè)數(shù) 據(jù)分析，符合蜜環(huán)菌粉標(biāo)準(zhǔn)要求，硒測(cè)定結(jié)果表明硒含量在預(yù)定范圍中，在原產(chǎn)品基礎(chǔ)上增 加硒含量及功能為一新功能產(chǎn)品，即富硒蜜環(huán)菌粉。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種富硒蜜環(huán)菌粉的制備方法，其特征在于，按照以下步驟進(jìn)行： 斜面蜜環(huán)菌種培養(yǎng):將麩皮煮汁加入亞硒酸鈉，使培養(yǎng)基中硒含量達(dá)到30μg/ml-50yg/ ml; 搖瓶培養(yǎng)：將麩皮煮汁、蔗糖、蠶蛹粉、磷酸二氫鉀、硫酸鎂加入到亞硒酸鈉的培養(yǎng)基 中，使硒含量達(dá)到30μg/ml-50μg/ml; 發(fā)酵培養(yǎng):將葡萄糖、豆粉、蔗糖、蛋白胨、蠶蛹粉、硫酸鎂、磷酸二氫鉀加入亞硒酸鈉的 培養(yǎng)基中，使硒含量達(dá)到40μg/ml; 發(fā)酵液分離:菌絲干燥粉碎，菌液減壓濃縮浸膏，然后將兩部分混合干燥，得到富硒蜜 環(huán)菌粉。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種富硒蜜環(huán)菌粉的制備方法，其特征在于:所述斜面蜜環(huán)菌 種培養(yǎng)步驟中，將5 %麩皮煮汁加入到3-5mg/100ml的亞硒酸鈉，培養(yǎng)條件為26 ± 1°C恒溫條 件培養(yǎng)13-15天，斜面長(zhǎng)滿(mǎn)菌絲。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種富硒蜜環(huán)菌粉的制備方法，其特征在于:所述搖瓶培養(yǎng)步 驟中，將5%麩皮煮汁、2%蔗糖、0 · 5 %蠶蛹粉、0 · 15%磷酸二氫鉀、0 · 075%硫酸鎂加入到3-5mg/100ml亞硒酸鈉的培養(yǎng)基中，硒含量達(dá)到30μg/ml-50μg/ml，培養(yǎng)條件為750ml搖瓶裝料 200ml，轉(zhuǎn)速120轉(zhuǎn)/分，溫度26 ± 1°C在旋轉(zhuǎn)搖床上培養(yǎng)至菌絲濃度90 %以上，停止培養(yǎng)。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種富硒蜜環(huán)菌粉的制備方法，其特征在于:所述發(fā)酵培養(yǎng)步 驟中，將1 %葡萄糖、2%豆粉、2%蔗糖、0.5%蛋白胨、0.5%蠶蛹粉、0.075%硫酸鎂、0.15% 磷酸二氫鉀加入到4mg/100ml亞硒酸鈉的培養(yǎng)基中，硒含量達(dá)到40μg/ml，培養(yǎng)條件為750ml 搖瓶裝料200ml，轉(zhuǎn)速120轉(zhuǎn)/分，溫度26± 1°C在旋轉(zhuǎn)搖床上培養(yǎng)至菌絲濃度95%以上，停止 培養(yǎng)。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種富硒蜜環(huán)菌粉的制備方法，其特征在于:所述發(fā)酵液分離 步驟中，菌絲在80°C以下干燥，菌液減壓濃縮至比重1.30，兩部分混合后在80°C以下干燥。
【文檔編號(hào)】C12R1/645GK105838623SQ201610237063
【公開(kāi)日】2016年8月10日
【申請(qǐng)日】2016年4月15日
【發(fā)明人】郭戰(zhàn)平, 郭秉其, 張經(jīng)國(guó), 韓麗敏
【申請(qǐng)人】山西康欣藥業(yè)有限公司