枝頂孢霉菌及其應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明涉及枝頂孢霉菌及其應(yīng)用，該菌株命名為Acremonium sp.Y0997，菌株保藏號(hào)為CCTCC NO:M 2016117，保藏單位是中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏日期是2016年3月14日，可用于實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場(chǎng)修復(fù)石油污染土壤或落地油泥以及酚酸類物質(zhì)積累的經(jīng)濟(jì)作物連作土壤的生物改良，可顯著地提高重度石油污染土壤或油泥的降解效率，大大縮短修復(fù)周期，改良經(jīng)濟(jì)作物連作土壤的連作障礙，降低病蟲害，提高作物產(chǎn)量。CCTCC NO: M 201611720160314
【專利說明】
枝頂孢霉菌及其應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種枝頂孢霉菌及其在重度石油污染土壤 或油泥的生物強(qiáng)化處理方面以及經(jīng)濟(jì)作物連作土壤改良方面的應(yīng)用。 技術(shù)背景
[0002] 石油污染土壤的生物強(qiáng)化(Bioaugmentation)是通過利用生物技術(shù)、工程學(xué)、環(huán)境 學(xué)和生態(tài)學(xué)手段來篩選優(yōu)勢(shì)降解菌種，對(duì)菌種進(jìn)行改造，提高底物和微生物接觸機(jī)會(huì)以促 進(jìn)污染物高效降解。生物強(qiáng)化修復(fù)能否成功，首先取決于能否篩選和獲得具有降解能力的 外源微生物，高效降解菌首先要能克服石油烴的毒性，另外能利用石油烴成為其生長和代 謝的底物。影響生物強(qiáng)化修復(fù)策略成功與否的主要因素有生物強(qiáng)化菌株對(duì)環(huán)境的耐受能 力、對(duì)污染物的代謝潛力及污染物的生物可利用性等，環(huán)境因子如溫度、濕度、PH、透氣性和 營養(yǎng)物質(zhì)含量等都是影響生物強(qiáng)化有效性的重要元素。
[0003] 經(jīng)濟(jì)作物連作土壤的連作障礙主要源于酚類物質(zhì)的積累以及土壤區(qū)系微生物菌 群的惡化，而采取外接微生物的生物強(qiáng)化措施可以降解此類酚酸類物質(zhì)，改善經(jīng)濟(jì)作物根 際區(qū)系菌群結(jié)構(gòu)，從而緩解經(jīng)濟(jì)作物連作土壤的連作障礙，降低病蟲害發(fā)生率，提高產(chǎn)量。
[0004] 基于"生態(tài)選擇"以及微生物生態(tài)學(xué)的考慮，通過分析污染土壤中微生物群落，篩 選污染物的高效降解菌種，為環(huán)境修復(fù)領(lǐng)域微生物的"理性篩選"提供了有效途徑。微生物 的篩選過程中將微生物的生態(tài)相互作用作為重要的篩選原則，將污染體系中時(shí)間和空間穩(wěn) 定存在的且具有污染物降解能力的微生物分離出來，將有助于生物強(qiáng)化修復(fù)技術(shù)的成功實(shí) 施。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是篩選出一種能夠降解重度石油污染土壤或油泥中的難降解組分， 實(shí)現(xiàn)重度石油污染土壤或油泥生物強(qiáng)化修復(fù)并對(duì)連作土壤有較好的生物改良效果，而且在 接種后存活率較高的枝頂孢霉菌。
[0006] 本發(fā)明的目的之二在于提供一種枝頂孢霉菌在重度石油污染土壤或油泥的生物 強(qiáng)化處理中的應(yīng)用。
[0007] 本發(fā)明的目的之三在于提供一種枝頂孢霉菌在連作土壤生物改良方面的應(yīng)用。
[0008] 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：
[0009] 枝頂孢霉菌Acremonium sp.Y0997,菌株保藏號(hào)為CCTCC N0:M 2016117,保藏單位 是中國典型培養(yǎng)物保藏中心，地址:武漢武漢大學(xué)。保藏日期是2016年3月14日，其ISSrDNA 序列為：
[0011] 該枝頂孢霉菌的菌落呈白色，菌落圓形，背面奶油色至赭黃色，菌絲無色，光滑且 具隔膜，孢子囊梗直接從菌絲上長出，呈錐形多單生，分生孢子無色，光滑，形成簇狀或鏈 狀，長紡錘形，兩頭尖，未見厚垣孢子。
[0012] 該枝頂孢霉菌的菌株分離方法為：
[0013] (1)含油污泥中微生物的富集
[0014] 稱取10g含油污泥土樣于石油富集液體培養(yǎng)基中，在160rpm/min、28°C條件下培養(yǎng) 7d，按10 %的接種量，用移液管吸取上清液轉(zhuǎn)接于新鮮的石油富集液體培養(yǎng)基中，在 160rpm/min、28°C條件下培養(yǎng)7d。重復(fù)上述操作兩次，備用。
[0015]石油富集液體培養(yǎng)基(g/L):K2HP〇4 2.0g/L，KH2P04 〇.2g/L，NaCl 0.04g/L，（NH4) 2SO4 5.0g/L，NaN03 5.0g/L，MgS〇4 〇.4g/L，CaCl2 〇.2g/L，微量元素濃縮液5mL，石油2g/L， 去尚子水1L，pH值7.0。
[0016]其中微量元素濃縮液：FeS〇4 4g/L，MnS〇4 4g/L，ZnS〇4 4g/L，CuS〇4 4g/L，H3B03 4g/L〇
[0017] (2)含油污泥中真菌的分離純化
[0018] 將上述石油富集液體培養(yǎng)基按1:10進(jìn)行梯度稀釋，依次得到HT^HT2、1(T3、10 一4、 1(T5……的稀釋的菌懸液，用移液槍吸取1〇〇此各個(gè)稀釋度的樣品加至制備好的TOA固體培 養(yǎng)基平板上，進(jìn)行涂布，將涂布完成的平板置于恒溫培養(yǎng)箱中，28 °C培養(yǎng)5~7天。
[0019] 用接種環(huán)挑選上述涂布平板中長勢(shì)較好的真菌菌落于新鮮的TOA固體培養(yǎng)基平板 上進(jìn)行劃線分離，重復(fù)操作，反復(fù)地分離培養(yǎng)、馴化，直至得到純化的菌株。根據(jù)純化菌株的 菌落形態(tài)、生長速度、顯微形態(tài)將相同的菌株合并。
[0020] (3)純化真菌菌株的復(fù)篩
[0021] 用接種環(huán)挑取所分離純化出的真菌劃線于石油無機(jī)鹽固體培養(yǎng)基上，于28°C的恒 溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每種真菌三個(gè)重復(fù)。挑選在石油無機(jī)鹽固體培養(yǎng)基上生長良好的真菌保 存。
[0022]石油無機(jī)鹽固體培養(yǎng)基：K2HPO4 lg/L，KH2P04 lg/L，MgS〇4 ? H2O 0.5g/L，NH4N03 1.0g/L，CaCl2 0.02g/L，石油2g/L，瓊脂2g/L，pH 7.0~7.2，去離子水比，115°(：高溫滅菌15 ~20min〇
[0023] (4)真菌的形態(tài)學(xué)鑒定
[0024] 用插片法培養(yǎng)真菌，并在不同的時(shí)間段取樣制片，在顯微鏡下觀察并記錄真菌菌 絲及孢子的形態(tài)。
[0025] Y0997菌落呈白色，菌落圓形，背面奶油色至赭黃色，菌絲無色，光滑且具隔膜，孢 子囊梗直接從菌絲上長出，呈錐形多單生，分生孢子無色，光滑，形成簇狀或鏈狀，長紡錘 形，兩頭尖，未見厚垣孢子 [0026] (5)真菌的分子生物學(xué)鑒定
[0027] 進(jìn)行真菌基因組提取，并進(jìn)行ITS序列擴(kuò)增，對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳分析 后，切取目的片段凝膠進(jìn)行產(chǎn)物純化回收，將回收的擴(kuò)增產(chǎn)物送生工生物工程(上海)股份 有限公司測(cè)序，并對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行同源性比較與遺傳進(jìn)化分析，對(duì)所獲得的真菌進(jìn)行種屬 鑒定。
[0028] 經(jīng)分子生物學(xué)鑒定:Y0997屬于枝頂孢霉菌(Acremonium sp.)菌株保藏號(hào)為CCTCC NO:M 2016117,保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心。地址:武漢武漢大學(xué)。
[0029]上述的枝頂孢霉菌在重度石油污染土壤或油泥的生物修復(fù)處理中的應(yīng)用，其中一 種使用方法由以下步驟實(shí)現(xiàn)：
[0030] (1)采集重度石油污染土壤或油泥置于處理池中，將其敲碎，混勻；
[0031 ] (2)將培養(yǎng)好的芽孢桿菌和枝頂孢霉菌接入重度石油污染土壤或油泥中，芽孢桿 菌的接種量為15~25g/kg 土壤或油泥，枝頂孢霉菌的接種量為15~25g/kg 土壤或油泥，混 勻，再加入有機(jī)肥料和表面活性劑，加水至土壤或油泥的含水率達(dá)15~30%，混勻，將處理 池的表面用塑料薄膜覆蓋，通氣，維持土壤或油泥的含水率穩(wěn)定，在15~35°C下，現(xiàn)場(chǎng)處理 20~40天；
[0032] (3)將黃孢原毛平革菌序列接入經(jīng)步驟（2)處理的土壤或油泥中，接種量為35~ 50g/kg土壤，混勻，用塑料薄膜將處理池的表面覆蓋，通氣，維持土壤或油泥的含水率穩(wěn)定， 在15~35 °C下，現(xiàn)場(chǎng)處理20~30天，完成處理。
[0033] 上述重度石油污染土壤或油泥的總石油烴起始含量為50000~120000mg/kg 土壤 或油泥。
[0034] 上述黃孢原毛平革菌的名稱為Phanerochaete sp.F0996,菌株保藏號(hào)為CCTCC N0:M 2016116,保藏日期為2016年3月14日，保藏單位為中國典型培養(yǎng)物保藏中心;地址:武 漢武漢大學(xué)。
[0035]所述芽孢桿菌的活菌含量為4.0 X 108~6.0 X 109CFU/g，枝頂孢霉菌的活菌含量是 7 ? 2 X 107~8 ? 5 X 109CFU/g，黃孢原毛平革菌的活菌含量是5 ? 6 X 107~8 ? 0 X 109CFU/g。
[0036]上述的枝頂孢霉菌在重度石油污染土壤或油泥的生物強(qiáng)化處理中的應(yīng)用，其中另 一種使用方法由以下步驟實(shí)現(xiàn)：
[0037] (1)采集重度石油污染土壤或油泥置于處理池中，將其敲碎，混勻；
[0038] (2)將培養(yǎng)好的芽孢桿菌和枝頂孢霉菌接入重度石油污染土壤或油泥中，芽孢桿 菌的接種量為15~25g/kg 土壤或油泥，枝頂孢霉菌的接種量為15~25g/kg 土壤或油泥，混 勻，再加入有機(jī)肥料和表面活性劑，其中有機(jī)肥料的添加量為800~1200mg/kg，表面活性劑 的添加量為1200~1600mg/kg，加水至土壤或油泥的含水率達(dá)15~30%，混勻，將處理池的 表面用塑料薄膜覆蓋，通氣，維持土壤或油泥的含水率穩(wěn)定，在15~35°C下處理20~40天；
[0039] (3)取與步驟(2)等量的芽孢桿菌和枝頂孢霉菌，重復(fù)接入步驟(2)處理后的土壤 或油泥中，混勻，在用塑料薄膜將處理池的表面覆蓋，通氣，補(bǔ)水?dāng)嚢杈S持土壤或油泥的含 水率穩(wěn)定，在15~35 °C下處理20~30天，完成處理。
[0040] 上述的枝頂孢霉菌在重度石油污染土壤或油泥的生物強(qiáng)化處理中的應(yīng)用，其使用 方法還可以由以下步驟實(shí)現(xiàn)：
[0041 ] (1)采集重度石油污染土壤或油泥置于處理池中，將其敲碎，混勻；
[0042] (2)將培養(yǎng)好枝頂孢霉菌接入重度石油污染土壤或油泥中，枝頂孢霉菌的接種量 為75g/kg土壤，活菌含量為8.0 X 109CFU/g，加入有機(jī)肥料與表面活性劑，混勻，維持土壤或 油泥的含水率為15~30 %，將處理池的表面用塑料薄膜覆蓋，通氣，維持土壤或油泥的含水 率穩(wěn)定，在15~35 °C下，現(xiàn)場(chǎng)處理60~70天，完成處理。
[0043]上述的枝頂孢霉菌在連作土壤的生物改良方面的應(yīng)用，其中連作土壤中酚酸類物 質(zhì)的起始含量為0.5~50mg/kg 土壤，具體的使用方法與在重度石油污染土壤或油泥的修復(fù) 方法相同。
[0044]采用本發(fā)明的枝頂孢霉菌可有效降解重度石油污染土壤或油泥中的TPH及PAHs成 分，提高土壤或油泥的修復(fù)能力，特別是與芽孢桿菌、黃孢原毛平革菌組成真菌-細(xì)菌菌群 對(duì)重度石油污染土壤或油泥進(jìn)行序列強(qiáng)化處理，可大大縮短了修復(fù)周期，對(duì)土壤或油泥中 難降解的多環(huán)芳香經(jīng)：萘(Naphthalene，NAP)、荷(Fluorene，F(xiàn)L0)、菲(Phenanthrene，PHE)、 蒽(Anthracene，ANT)及焚蒽(Fluoranthene，F(xiàn)LA)的降解效果也比較顯著，降解率均達(dá)到了 90 %以上，也可以用于生物改良連作土壤中，對(duì)連作土壤中的根皮苷、鄰苯二甲酸、鄰苯二 甲酸丁酯、焦性沒食子酸等酚酸類物質(zhì)有較好的降解效果，改良經(jīng)濟(jì)作物連作土壤的連作 障礙，降低病蟲害，提高作物產(chǎn)量;此外該枝頂孢霉菌在現(xiàn)場(chǎng)對(duì)室外自然環(huán)境的耐受能力較 好，存活率較高。
【附圖說明】
[0045] 圖1為枝頂抱霉菌(Acremonium sp.Y0997)菌落圖片；
[0046] 圖2為枝頂孢霉菌(Acremonium sp.Y0997)處理污染土壤過程中生長情況。
【具體實(shí)施方式】
[0047] 下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步說明，但是本發(fā)明不僅限于下述的實(shí)施情 形。
[0048] 枝頂孢霉菌Acremonium sp.Y0997,菌株保藏號(hào)為CCTCC N0:M 2016117,保藏單位 是中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏日期是2016年3月14日。
[0049] 該枝頂孢霉菌的菌落呈白色，菌落圓形，背面奶油色至赭黃色，菌絲無色，光滑且 具隔膜，孢子囊梗直接從菌絲上長出，呈錐形多單生，分生孢子無色，光滑，形成簇狀或鏈 狀，長紡錘形，兩頭尖，未見厚垣孢子，參見圖1。
[0050] 實(shí)施例1
[0051] 枝頂孢霉菌在重度石油污染土壤中應(yīng)用時(shí)，具體的使用方法為：
[0052] (1)采集油井附近的重度石油污染土壤置于處理池中，將其敲碎，混勻；
[0053] (2)將培養(yǎng)好枝頂孢霉菌(Acremonium SP.Y0997)的固體菌劑接入總石油經(jīng)起始 含為80000mg/kg的重度石油污染土壤中，枝頂抱霉囷的接種s；為75g/kg土壤，活囷含s；: 8.0 X 109CFU/g，菌劑的生長情況參見圖2，加入適量有機(jī)肥料與表面活性劑，有機(jī)肥料與表 面活性劑的添加量分別為l〇〇〇mg/kg土壤，混勻，維持土壤的含水率為25%，將處理池的表 面用塑料薄膜覆蓋，通氣，維持土壤的含水率穩(wěn)定，在15~35°C下，現(xiàn)場(chǎng)處理60天，完成處 理，總石油烴TPH降解率達(dá)42.29%。
[0054] 實(shí)施例2
[0055]枝頂孢霉菌在重度石油污染土壤中應(yīng)用時(shí)，具體的使用方法為：
[0056] (1)將油井附近采集的重度石油污染土壤置于處理池中，敲粹、混勻，粒徑為30~ 40mm左右；
[0057] (2)將培養(yǎng)好的芽孢桿菌及枝頂孢霉菌菌劑混合接入污染土壤中，混勻，再加入有 機(jī)肥料和表面活性劑，加水調(diào)節(jié)土壤含水率，將處理池表面覆蓋塑料薄膜，并適量通氣，每 周補(bǔ)水維持土壤或油泥含水量穩(wěn)定，在15~35°C下，現(xiàn)場(chǎng)處理20~40天。
[0058] (3)將黃孢原毛平革菌序列接入污染的土壤中，混勻，用塑料薄膜將處理池的表面 覆蓋，通氣，補(bǔ)水維持土壤含水量穩(wěn)定，在15~35°C下，現(xiàn)場(chǎng)處理20~30天，完成重度石油污 染土壤或油泥的序列生物強(qiáng)化。
[0059] 芽抱桿菌Bacillus sp.，菌株保藏號(hào)CCTCC N0:AB 2014248,屬于已知固體菌劑， 該菌菌落呈乳白色，菌落圓形，表面光滑、凸起，邊緣整齊，背面顏色與正面一致，無色素分 布。
[0060] 黃抱原毛平革菌Phanerochaete sp.F0996,菌株保藏號(hào)為CCTCC N0:M2016116,保 藏單位是中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏日期是2016年3月14日，該菌菌落白色，圓形，背面 無色，菌落僅有少量凸起;菌絲為無色，蓬松棉絮狀，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長，絨毛狀凸起逐漸 變平，菌絲消失，形成粉末孢子，其株菌分離方法與枝頂孢霉菌的分離方法相同。該黃孢原 毛平革菌的DNA序列為：
[0062] 按照該方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，具體的工藝條件和降解效率參見表1。
[0063] 表1為各實(shí)驗(yàn)的工藝條件及降解效率
[0066] 實(shí)施例3
[0067] 枝頂孢霉菌在重度石油污染土壤中應(yīng)用時(shí)，具體的使用方法為：
[0068] (1)采集重度石油污染土壤置于處理池中，將其敲碎，混勻；
[0069] (2)將培養(yǎng)好的芽孢桿菌和枝頂孢霉菌接入重度石油污染土壤中，混勻，再加入有 機(jī)肥料和表面活性劑、磷酸二氫鉀、尿素，加水至土壤或油泥的含水率達(dá)15~30%，混勻，將 處理池的表面用塑料薄膜覆蓋，通氣，維持土壤或油泥的含水率穩(wěn)定，在15~35°C下處理20 ~40天；
[0070] (3)取與步驟(2)等量的芽孢桿菌和枝頂孢霉菌，重復(fù)接入步驟(2)處理后的土壤 中，混勻，在用塑料薄膜將處理池的表面覆蓋，通氣，補(bǔ)水?dāng)嚢杈S持土壤的含水率穩(wěn)定，在15 ~35 °C下處理20~30天，完成重度石油污染土壤的序列生物強(qiáng)化處理。
[0071]按照該方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，具體的工藝條件和降解效率參見表2所示。
[0072]表2為各實(shí)施例的工藝條件及降解效率
[0075]上述實(shí)施例中所用的表面活性劑是生物可兼容性表面活性重油清洗劑KD-L315， 屬于市售產(chǎn)品。實(shí)施例中的磷酸二氫鉀和尿素可以根據(jù)實(shí)際情況選擇添加。
[0076] 對(duì)于總石油烴起始含量為50000~120000mg/kg的重度石油污染土壤或油泥均可 以用上述的方法進(jìn)行修復(fù)，枝頂孢霉菌對(duì)其均有較好的降解效果。
[0077]從上述實(shí)施例1~3的降解率對(duì)比表明，本發(fā)明的枝頂孢霉菌在重度石油污染土壤 或油泥中對(duì)TPH的降解率明顯提高，但是將其與芽孢桿菌、黃孢原毛平革菌組合形成真菌-細(xì)菌菌群，再結(jié)合序列生物強(qiáng)化手段，對(duì)重度石油污染土壤或油泥的降解效率顯著提高，特 別是對(duì)難降解的石油烴組分和多環(huán)芳香烴組分均有較好的降解效果。
[0078]上述各實(shí)施例中的處理對(duì)象重度石油污染土壤可以用重度石油污染油泥或連作 土壤來替換，連作土壤中酸酸類物質(zhì)的起始含量為〇. 5~50mg/kg 土壤，其具體的修復(fù)或改 良方法與對(duì)重度石油污染土壤的修復(fù)方法相同，并且處理效果相近，特別是將枝頂孢霉菌 與芽孢桿菌、黃孢原毛平革菌組合形成真菌-細(xì)菌菌群，再結(jié)合序列生物強(qiáng)化手段，對(duì)連作 土壤進(jìn)行生物改良時(shí)，對(duì)根皮苷、鄰苯二甲酸、鄰苯二甲酸丁酯、焦性沒食子酸等酚酸類物 質(zhì)的降解率可達(dá)80%以上。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種枝頂孢霉菌，其特征在于，命名為Acremonium sp. Y0997，菌株保藏號(hào)為CCTCC N0:M 2016117〇2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的枝頂孢霉菌，其特征在于枝頂孢霉菌的ISSrDNA序列為：3. 權(quán)利要求1所述的枝頂孢霉菌在重度石油污染土壤或油泥的生物修復(fù)處理中的應(yīng) 用。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的枝頂孢霉菌在重度石油污染土壤或油泥的生物強(qiáng)化處理中的 應(yīng)用，其特征在于具體的使用方法由以下步驟組成： (1) 采集重度石油污染土壤或油泥置于處理池中，將其敲碎，混勻； (2) 將培養(yǎng)好的芽孢桿菌和枝頂孢霉菌接入重度石油污染土壤或油泥中，芽孢桿菌的 接種量為15~25g/kg 土壤或油泥，枝頂孢霉菌的接種量為15~25g/kg 土壤或油泥，混勾，再 加入有機(jī)肥料和表面活性劑，加水至土壤或油泥的含水率達(dá)15~30%，混勻，將處理池的表 面用塑料薄膜覆蓋，通氣，維持土壤或油泥的含水率穩(wěn)定，在15~35°C下，現(xiàn)場(chǎng)處理20~40 天； (3) 將黃孢原毛平革菌序列接入經(jīng)步驟(2)處理的土壤或油泥中，接種量為35~50g/kg 土壤，混勻，用塑料薄膜將處理池的表面覆蓋，通氣，維持土壤或油泥的含水率穩(wěn)定，在15~ 35 °C下，現(xiàn)場(chǎng)處理20~30天，完成處理。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的枝頂孢霉菌在重度石油污染土壤或油泥的生物強(qiáng)化處理中的 應(yīng)用，其特征在于所述重度石油污染土壤或油泥的總石油烴起始含量為50000~120000mg/ kg 土壤或油泥。6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的枝頂孢霉菌在重度石油污染土壤或油泥的生物強(qiáng)化處理中的 應(yīng)用，其特征在于所述黃孢原毛平革菌的名稱為Phanerochaete sp.F0996，菌株保藏號(hào)為 CCTCC Ν0:Μ 2016116,保藏日期為2016年3月14日，保藏單位為中國典型培養(yǎng)物保藏中心； 所述芽孢桿菌的活菌含量為4.0 X 108~6.0 X 109CFU/g，枝頂孢霉菌的活菌含量是7.2 X 107~8 · 5 X 109CFU/g，黃孢原毛平革菌的活菌含量是5 · 6 X 107~8 · 0 X 109CFU/g。7. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的枝頂孢霉菌在重度石油污染土壤或油泥的生物強(qiáng)化處理中的 應(yīng)用，其特征在于具體的使用方法由以下步驟組成： (1) 采集重度石油污染土壤或油泥置于處理池中，將其敲碎，混勻； (2) 將培養(yǎng)好的芽孢桿菌和枝頂孢霉菌接入重度石油污染土壤或油泥中，芽孢桿菌的 接種量為15~25g/kg 土壤或油泥，枝頂孢霉菌的接種量為15~25g/kg 土壤或油泥，混勾，再 加入有機(jī)肥料和表面活性劑，其中有機(jī)肥料的添加量為800~1200mg/kg，表面活性劑的添 加量為1200~1600mg/kg，加水至土壤或油泥的含水率達(dá)15~30%，混勻，將處理池的表面 用塑料薄膜覆蓋，通氣，維持土壤或油泥的含水率穩(wěn)定，在15~35°C下處理20~40天； (3)取與步驟(2)等量的芽孢桿菌和枝頂孢霉菌，重復(fù)接入步驟(2)處理后的土壤或油 泥中，混勻，在用塑料薄膜將處理池的表面覆蓋，通氣，補(bǔ)水?dāng)嚢杈S持土壤或油泥的含水率 穩(wěn)定，在15~35 °C下處理20~30天，完成處理。8. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的枝頂孢霉菌在重度石油污染土壤或油泥的生物強(qiáng)化處理中的 應(yīng)用，其特征在于具體的使用方法由以下步驟組成： (1) 采集重度石油污染土壤或油泥置于處理池中，將其敲碎，混勻； (2) 將培養(yǎng)好枝頂孢霉菌接入重度石油污染土壤或油泥中，枝頂孢霉菌的接種量為 75g/kg 土壤，活菌含量為8.0 X 109CFU/g，加入有機(jī)肥料與表面活性劑，混勻，維持土壤或油 泥的含水率為15~30%，將處理池的表面用塑料薄膜覆蓋，通氣，維持土壤或油泥的含水率 穩(wěn)定，在15~35 °C下，現(xiàn)場(chǎng)處理60~70天，完成處理。9. 權(quán)利要求1所述的枝頂孢霉菌在連作土壤的生物改良方面的應(yīng)用。10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的枝頂孢霉菌在連作土壤的生物改良方面的應(yīng)用，其特征在于 所述連作土壤中酸酸類物質(zhì)的起始含量為0.5~50mg/kg 土壤。
【文檔編號(hào)】C12N1/14GK105820962SQ201610307545
【公開日】2016年8月3日
【申請(qǐng)日】2016年5月11日
【發(fā)明人】馬小魁, 毛東霞, 吳玲玲, 李郁, 李亭亭, 劉陶
【申請(qǐng)人】陜西師范大學(xué)