一種提取橙皮苷、新橙皮苷和辛弗林的方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及植物提取領域，尤其是一種從柑橘皮、枳實小果中提取黃酮的方法。
【背景技術】
[0002]柑橘是蕓香科柑橘屬重要的植物，主要是利用其果肉而很少對效果和果皮進行綜合利用，大多數(shù)被當作廢物填埋處理。由于柑橘果、皮含有較多生物活性物質，因此對其的利用已經(jīng)越來越廣泛。橙皮苷(Hesperidin)是柑橘果皮中的天然黃酮類化合物，采用堿浸酸析法從臍橙中提取出的橙皮苷純度為80.3%，得率為1.55%。新橙皮苷(Neohesperidin)是由橙皮素與新橙皮糖形成的糖苷，目前提取新橙皮苷的方法包括超聲輔助提取法、索氏提取法、和水浴回流提取法。辛弗林(Synephrine)是枳實生物堿類物質的主要成分，辛弗林的含量隨著柑橘果實的成熟而減少，因此一般選取未成熟的果實即落果來作為提取原料;辛弗林的提取方法有加熱回流法、超聲提取法和微波提取法。

【發(fā)明內容】

[0003]本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一種高效從柑橘皮、枳實小果中同時提取分離橙皮苷、新橙皮苷和辛弗林的方法，將柑橘皮、枳實小果干燥、粉碎，按1:2的比例進行滲漉提取;然后取藥渣進行橙皮苷提取，橙皮苷含量可達98%，收率為8.8%以上;取滲漉液進行新橙皮苷和辛弗林提取，得到新橙皮苷提取物含量可達95%，收率為5.3%以上，辛弗林提取物含量可達98%，收率為2.1%以上。為了解決該技術問題，本專利具體實施步驟如下:
一、苦橙枳實小果前處理
收集柑橘皮、干燥、粉碎、過篩，備用;枳實小果干燥、粉碎，過篩，備用。
[0004]按照質量比1:2的比例，稱取柑橘皮粉碎物和枳實小果粉碎物，置于提取罐中，在40-45°C，用0-20%乙醇水溶液，按照料液質量比為1:(10-30 )的比例進行滲漉提取10_12h;然后添加料液0.01-0.1%的果膠酶，50°C下攪拌30min，然后將溫度調到70°C，處理15-30min，將果膠酶殺滅;然后過濾，將藥渣和濾液分離;藥渣用于橙皮苷提取，濾液用于新橙皮苷和辛弗林的提取。
[0005]所述過篩的篩網(wǎng)為10目、或者60目、或者100目；
所述滲漉提取可以進行3次。
[0006]二、橙皮苷提取、分離、純化
將上述藥渣按料液比為1: (5-10)，用pH值為10.0-11.0堿液浸泡，進行提取;所得提取液用HCl調至pH值為2.0-3.0，在15°C以下放置，沉淀;將沉淀用水洗滌，洗至中性，再用65%低碳醇溶解，在15°C以下放置，重結晶后洗滌、干燥即為橙皮苷產(chǎn)品。該產(chǎn)品中橙皮苷含量可達98.0%，橙皮苷收率為8.8%以上。
[0007]所述堿液為Ca (OH) 2或者NaOH;
所述低碳醇為甲醇或者乙醇。
[0008]三、新橙皮苷提取、分離、純化取步驟一所述的濾液過強酸性苯乙烯型陽離子柱，收集離子柱流出液，然后用水洗。將離子柱流出液和水洗液混合，進大孔吸附樹脂柱，經(jīng)水洗后，先用20%低碳醇洗滌，再用65%低碳醇洗脫，取65%低碳醇洗脫液濃縮，在15°C以下放置，用濃縮液5.0%的(NH4)2S04/NaCl助析，結晶，得新橙皮苷粗品；將粗品再用65%低碳醇溶解，濃縮、冷卻，在15°C以下放置、重結晶，所得晶體即為新橙皮苷產(chǎn)品。該產(chǎn)品中橙皮苷含量可達98.0%，橙皮苷收率為5.3%以上。
[0009]所述強酸性苯乙烯型陽離子柱優(yōu)選001X7陽離子柱；
所述大孔吸附樹脂優(yōu)選DlOl;
所述低碳醇優(yōu)選甲醇或者乙醇。
[0010]四、辛弗林的提取、分離、純化
取步驟一所述的濾液，用HCl調至pH值為1.0-2.0，先過DlOl大孔樹脂柱，水洗，收集流出液和水洗液，進行濃縮;然后添加硅藻土進行抽濾，將抽濾得到的濾液加入到強酸性苯乙烯型陽離子柱，進柱量為2BV，以流速2BV/h放出流出液;再用2BV去離子水洗樹脂柱，放出水洗液，往樹脂中加入1.5BV 1.5mol/L氨水洗脫，流速為lBV/h，收集氨水洗脫液，濃縮，用HCl調至PH值為2.0-3.0，再過DlOl大孔樹脂柱，用1.5mol/L氨水洗脫，取洗脫液濃縮后，在15°C以下放置，結晶，得粗晶體;將粗晶體用pH為2.0-3.0的HCI溶解，再用1.5mo I/L氨水調pH為
10.0-11.0，然后濃縮、冷卻，在15°C以下放置，重結晶，所得晶體即為辛弗林產(chǎn)品，該產(chǎn)品中辛弗林含量達98.0%以上，辛弗林收率可達2.1%以上。
[0011]所述強酸性苯乙烯型陽離子柱優(yōu)選001 X 7陽離子柱；
所述大孔樹脂優(yōu)選DlOl;
所有結晶、重結晶都在15°C以下進行。
[0012]所述的滲漉、提取、過濾、吸附、分離、洗脫、結晶、重結晶都為已知技術。
[0013]本發(fā)明具有下列優(yōu)點和特性:
1、綜合利用柑橘皮、枳實小果資源
從枳實小果滲漉提取后的藥渣中提取橙皮苷，濾液中提取新橙皮苷、辛弗林，實現(xiàn)了橙皮苷、新橙皮苷、辛弗林同步綜合提取，枳實小果資源得到綜合利用。
[0014]2、組合技術新穎通過本技術方案，將柑橘皮和枳實小果按質量比為1:2混合進行滲漉提取，從藥渣中提取橙皮苷，從濾液中提取新橙皮苷、辛弗林，得到橙皮苷含量達98%，收率可達8.8%;得到新橙皮苷含量可達95%，收率可達5.3%，辛弗林含量可達98%以上，收率可達2.1%。尤其是新橙皮苷提取和辛弗林的高效提取，是利用滲漉提取濾液，新橙皮苷采用先陽離子層析柱，再DlOl大孔樹脂柱，然后采用20%低碳醇洗滌，再用65%低碳醇洗脫，取洗脫液濃縮，用5%的(NH4)2S04/NaCl助析，結晶；將粗晶再用65%低碳醇溶解，經(jīng)重結晶得到產(chǎn)品。辛弗林是將滲漉提取濾液先過DlOl大孔樹脂柱，然后過001X7陽離子柱，用氨水洗脫；用HCl調pH值，再過DlOl大孔樹脂柱，用氨水洗脫，洗脫液濃縮、結晶、重結晶，得到辛弗林產(chǎn)品。所有結晶、重結晶步驟都是在15°C以下進行。這些技術特征組合在一起，橙皮苷、新橙皮苷和辛弗林3各成分同時在含量和收率2個指標上產(chǎn)生了意想不到的效果。這些結果是組合技術方案種各技術特點互相支持、共同作用才實現(xiàn)的，已知技術沒有該組合報道，也沒有該組合技術方案的技術啟示，不是簡單的疊加，具有突出的實質性特點和顯著的進步。
【具體實施方式】
[0015]以下所述實例詳細地說明了本發(fā)明。
[0016]實施例1
苦橙枳實小果前處理
收集柑橘皮、干燥、粉碎、過10目篩，備用;枳實小果干燥、粉碎，過10目篩，備用。
[0017]按照質量比1:2的比例，稱取柑橘皮粉碎物8.33g和枳實小果粉碎物16.67g，共25.0g粉末置于燒杯中，以料液比1:10g/mL加入250mL水溶液，放入水浴鍋中43°C下浸泡水浴提取12h，過濾。以0.05%的比例往提取液中加入0.125g果膠酶處理，50°C下攪拌30min，然后將水浴鍋調至70°C，處理15min，將果膠酶充分滅活。待其冷卻后在紗布輔助下，用雙層濾紙抽濾，得濾液和濾渣，濾渣用于提取橙皮苷，濾液用于提取新橙皮苷及辛弗林。
[0018]橙皮苷提取
取上述濾渣，用堿提酸沉法提取;料液比I: 30加水，30°C下邊攪拌邊加入Ca(OH)2，調節(jié)pH為10.6，攪拌0.5h后過濾;取濾液加適量稀鹽酸，調體系pH為3.0，在15°C以下靜置12h;析出晶體，抽濾，烘干得橙皮苷粗品。以料液比I: 60g/mL加入甲醇，用稀NaOH溶液調體系pH為
11.0，30°C下反應30min，常壓過濾，再用稀鹽酸調濾液pH為4.0，在15°C以下靜置12h重結晶；重結晶后，過濾，烘干，稱重，得橙皮苷晶體，橙皮苷含量為98.10%，收率為8.86%。
[0019]新橙皮苷提取
取濾液過001X7強酸性苯乙烯型陽離子柱，收集離子柱流出液，然后用水洗。將離子柱流出液和水洗液混合，過DlOl大孔吸附樹脂柱，水洗，依次用20%乙醇和65%乙醇梯度洗脫。收集65%醇洗脫液，濃縮成浸膏。往浸膏中加5%質量分數(shù)的硫酸銨固體，邊加熱邊攪拌，沸騰后停止加熱，冷卻;在15°C以下析晶