一種穩(wěn)定、抗干擾能力強(qiáng)的血清鉀檢測試劑及檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及血清鉀檢測技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種血清鉀檢測試劑，還涉及使用此 檢測試劑的檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 鉀（potassium，K)是人體內(nèi)維持細(xì)胞生理活動的主要陽離子，在保持機(jī)體的正 常滲透壓及酸堿平衡、參與糖及蛋白代謝、保證神經(jīng)肌肉的正常功能等方面具有重要作用。 鉀離子大部分（98%)存在于細(xì)胞內(nèi)，少量存在于細(xì)胞外液，且濃度恒定。正常人血清中含K+ 約4~5mmol/L。體內(nèi)的鉀離子經(jīng)常不斷地在細(xì)胞內(nèi)與體液之間相互交換，以保持動態(tài)平 衡。血清鉀、鈉、氯測定是臨床常見的組合檢測項目之一，有助于水、電解質(zhì)平衡和酸堿平衡 紊亂的判斷。
[0003] 目前，鉀離子檢測方法主要有離子選擇電極法（ISE)、火焰光度法和酶法。其中 離子選擇電極法（ISE)和酶法在臨床上最為常用。ISE法具有標(biāo)本用量少，可與自動生化 分析儀組合，快速準(zhǔn)確，重復(fù)性好等優(yōu)點。但該法電極具有一定壽命，需要定期更換，費用較 高。而酶法的精密度和準(zhǔn)確度可以與火焰光度法接近，且具有簡便、精確、重復(fù)性好、特異性 強(qiáng)、血清用量少等優(yōu)點，但存在穩(wěn)定性較差，易受干擾等缺點。
[0004] 鑒于此，本發(fā)明在酶法的基礎(chǔ)上優(yōu)化反應(yīng)體系，添加穩(wěn)定劑聚乙二醇6000、甘露 醇、海藻糖、BSA、乙二醇等可有效提高試劑的穩(wěn)定性；并且通過引入輔酶NADH再生系統(tǒng)，可 以有效降低NADH的氧化，大大增強(qiáng)試劑穩(wěn)定性。優(yōu)選的新型非離子表面活性劑烷基糖苷 (APG)的加入可防止反應(yīng)體系渾濁，增強(qiáng)底物的穩(wěn)定性，提高試劑的抗干擾能力。該試劑操 作簡便快速，適用于自動化分析，是一種更加穩(wěn)定、抗干擾能力強(qiáng)的血清鉀（K)試劑。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種用于檢測血清鉀（K)的試劑及使用該試劑檢測血清鉀 含量的方法。該試劑盒采用酶法，可以有效檢測血清鉀的含量，抗干擾能力強(qiáng)，穩(wěn)定性好等 優(yōu)點。
[0006] 基本原理： 通過鉀依賴性丙酮酸激酶催化底物磷酸烯醇式丙酮酸（PEP)的酶動力學(xué)反應(yīng)檢測鉀， 其產(chǎn)物丙酮酸鹽在乳酸脫氫酶（LDH)作用下與NADH反應(yīng)生成NAD+，其在340nm的吸光值 下降與鉀濃度呈比例。
[0007]
并且，本試劑引入輔酶NADH再生系統(tǒng)，通過添加少量的的甲酸脫氫酶，可以在不干擾 主體反應(yīng)的前提下，將氧化態(tài)NAD+轉(zhuǎn)化還原態(tài)NADH，使反應(yīng)底物NADH在試劑存儲過程中可 以始終保持穩(wěn)定，顯著提高了試劑的穩(wěn)定性。
[0008]
本發(fā)明是通過以下步驟得到的： 一種血清鉀檢測試劑，包括試劑R1和試劑R2,所述試劑R1和試劑R2的組成如下： 試劑R1中含有 緩沖液........................................200mmol/L, 穴合齊U........................................14mmol/L, PEP...........................................4mmol/L, ADP...........................................3. 5mmol/L, 甲酉愛..........................................0. 2mmol/L, 甲酸脫氫酶.....................................100U/L， α-酮戊二酸....................................3mmol/L， NADH..........................................0· 35mmol/L， GLDH(谷氨酸脫氫酶）..............................12KU/L， 聚乙二醇 6000...................................10g/L， 乙二醇.........................................5ml/L， 甘露醇.........................................20g/L， 海藻糖.........................................l〇g/L, BSA............................................3g/L， PK(丙酮酸激酶）..................................2KU/L， 烷基糖苷（APG)...................................lg/L， 防腐齊U.........................................lml/L； 2)試劑R2的組分為： 緩沖液.........................................20mmol/L， 聚乙二醇 6000...................................10g/L， 乙二醇.........................................5ml/L， 甘露醇.........................................20g/L， 海藻糖.........................................l〇g/L, BSA.............................................3g/L， LDH(乳酸脫氫酶）..................................65KU/L， 烷基糖苷（APG)....................................lg/L， 防腐齊U..........................................lml/L。
[0009] 所述的血清鉀檢測試劑，試劑R1中緩沖液為25°C，pH為8. 2的Tris緩沖液。
[0010] 所述的血清鉀檢測試劑，試劑R2中緩沖液為25°C，pH為9. 0的Tris緩沖液。
[0011] 所述的血清鉀檢測試劑，所述防腐劑為Proclin300。
[0012] 所述的血清鉀檢測試劑來檢測血清鉀含量的檢測方法，使用全自動生化分析儀利 用固定時間法進(jìn)行測定，檢測主波長為340nm。
[0013] 所述的檢測方法，R1試劑和R2試劑的比例為3:1。
[0014] 本發(fā)明的有益效果： 1) 優(yōu)化反應(yīng)體系并添加聚乙二醇6000、甘露醇、海藻糖、BSA、乙二醇等多種穩(wěn)定劑，可 以顯著改善了試劑的穩(wěn)定性和抗干擾能力； 2) 采用新型非離子表面活性劑烷基糖苷（APG)的加入可防止反應(yīng)體系渾濁，增強(qiáng)底物 的穩(wěn)定性，提高試劑的抗干擾能力。
[0015] 3)引入輔酶NADH再生系統(tǒng)，通過添加少量的的甲酸脫氫酶，可以在不干擾主體反 應(yīng)的前提下，將氧化態(tài)NAD+轉(zhuǎn)化還原態(tài)NADH，使反應(yīng)底物NADH在試劑存儲過程中可以始終 保持穩(wěn)定，顯著提高了試劑的穩(wěn)定性。
[0016] 4)試劑的準(zhǔn)確度和穩(wěn)定性良好，價格便宜，使用方便，完全可以滿足臨床需要。
【附圖說明】
[0017] 圖1為兩種試劑的相關(guān)性曲線圖， 圖2為兩種試劑效期穩(wěn)定性曲線圖。
【具體實施方式】
[0018] 下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步說明： 實施例1 血清鉀的檢測試劑，包試劑R1和試劑R2 : 1)其R1的組成為： Tris(三羥甲基氨基甲烷）緩沖液（pH=8. 2,25°C) ............200mmol/L 穴合齊U............................................14mmol/L, PEP...............................................4mmol/L, ADP...............................................3. 5mmol/L, 甲酉愛..............................................0. 2mmol/L, 甲酸脫氫酶.........................................100U/L， α_ 酮戊二酸.......................................3mmol/L， NADH..............................................0· 35mmol/L， GLDH(谷氨酸脫氫酶）..................................12KU/L， 聚乙二醇6000.........................................10g/L， 乙二醇...............................................5ml/L， 甘露醇..............................................20g/L， 海藻糖............................................l〇g/L, BSA...........................