一種淡水針桿藻培養(yǎng)液及培養(yǎng)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及藻類培養(yǎng)領(lǐng)域，具體設(shè)及一種淡水針桿藻培養(yǎng)液及培養(yǎng)方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 針桿藻屬娃藻口無殼縫目脆桿藻科，是淡水養(yǎng)殖中的常見娃藻種，其脂肪含量高， 脂肪種類豐富，是濾食性水產(chǎn)動物的天然巧料，而且不含纖維素等成分，能夠很好地被水產(chǎn) 動物所攝食和消化，且營養(yǎng)豐富，富含巧、儀、鐵等無機(jī)鹽及多種維生素。同時，W針桿藻為 代表的許多娃藻對凈化水質(zhì)、維護(hù)水體生態(tài)平衡也有很好的效果。因此，在淡水養(yǎng)殖中，W 娃藻為優(yōu)勢種群（如針桿藻、舟形藻、菱形藻、星桿藻、圓篩藻等）的水體（多呈茶色或茶褐 色），一直被認(rèn)為是水產(chǎn)養(yǎng)殖的最佳水環(huán)境之一。
[0003] 但在天然水體中，針桿藻與其他藻類混雜生長，種群密度很低，很難滿足水產(chǎn)養(yǎng)殖 的需要。目前，淡水針桿藻的培養(yǎng)多采用CSI培養(yǎng)基，在該培養(yǎng)基中，針桿藻生長速度較緩 慢，不利于針桿藻的大規(guī)模培養(yǎng)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種淡水針桿藻培養(yǎng)液，該培養(yǎng)液適用于淡水針桿藻的生 長。
[0005] 本發(fā)明的另一個目的是提供一種針桿藻的培養(yǎng)方法，該方法可提高淡水針桿藻生 長速率，有利于淡水針桿藻的規(guī)?；囵B(yǎng)。
[0006] 為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采取W下技術(shù)措施：
[0007] -種淡水針桿藻培養(yǎng)液（本發(fā)明或稱LXS培養(yǎng)液），包括：
[0008] 4求硝酸濟(jì):濃禱3》'化納 巧於1洗釀 確酸鐘（KN03) 90~i00mg/L 7 氷硫酸鎊（MgS〇4.7H2〇) 35~40mg/L 5漲.p-巧綱磯灣頓.（.良-?姑2.g如腳曲任巧免洶的坂貸25~滋如碁化:： 4-哲乙基脈嗦乙橫酸CHEPES) 斯:0~如;0mg化 9水偏畦酸鋼lNa2SiO;-9打2〇) 1就…就0紅晦化. 6 水扣化鐵（Fe(J,.6H:0) 3.5~4mg,L 乙二胺四己酸二軸CNa2EDTA) 4~4.5mg/L 4 水合氯化猛（MnCV4H2〇) 0.25~0.35mg/L 7 水氯化粹（Ζηα2·7Η2〇) 25~30ug/L 2 水合巧酸鋼lNa2M0〇4-2H2〇) 20~24ug/L
[0009] 6 水氯化鉆（CoCk6H20) 7~12ug/L 維?.東B|:?Vi趾TiinB|:) 0.05-0.lug/L 維生素H化iotin生物素） 0.05~(Uug/L 鄰'1萬B1 {Thii'iinineHC) 5~IOug,.L
[0010] 其余為雙蒸水，培養(yǎng)液的pH范圍是7. 5~8。
[0011] 所述的針桿藻是生長在淡水中的針桿藻。
[0012] 一種針桿藻的培養(yǎng)方法，包括下述步驟：
[0013] 1)將培養(yǎng)至對數(shù)期的針桿藻進(jìn)行饑餓培養(yǎng)1~2d(培養(yǎng)液為不含氮、憐、娃、鐵的 CSI培養(yǎng)基），備用。
[0014] 2)將經(jīng)過饑餓培養(yǎng)的針桿藻3000~4000;r/min離屯、5~lOmin，棄上清后接種至 LXS培養(yǎng)液中，接種量為1~10Xl〇4cells/mL。25~30°C，光照強(qiáng)度為3000~50001X，光 暗比為12h~1地：lOh~12h，每隔化振搖錐形瓶一次。
[0015] 本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有W下優(yōu)點：
[0016] 本發(fā)明所公開的培養(yǎng)液和培養(yǎng)方法，根據(jù)淡水針桿藻生長的營養(yǎng)鹽、溫度、抑值等 的需求特性，達(dá)到促進(jìn)純種淡水針桿藻快速生長的目的。本發(fā)明中培養(yǎng)液搭配合理，可W有 效地促進(jìn)針桿藻的快速分裂增殖，促進(jìn)其更好地吸收利用各種營養(yǎng)物質(zhì)，加快針桿藻細(xì)胞 的新陳代謝，提高其生產(chǎn)量。本發(fā)明中培養(yǎng)方法操作簡單，針對性強(qiáng)，適應(yīng)淡水針桿藻的快 速生長，因此本發(fā)明具備了廣泛的市場前景，特別適合于在水產(chǎn)養(yǎng)殖領(lǐng)域推廣應(yīng)用。
【附圖說明】
[0017]圖1為實施例1中的針桿藻在LXS培養(yǎng)液和CSI培養(yǎng)液中的生長曲線示意圖。
【具體實施方式】
[0018]本發(fā)明所述技術(shù)方案，如未特別說明，均為常規(guī)技術(shù)，所述試劑或原料，如未特別 說明，均來源于商業(yè)渠道。
[001引實施例1 :
[0020] -種淡水針桿藻培養(yǎng)液（本發(fā)明實施例或稱LXS培養(yǎng)液），包括：
[0021] 4 水確酸巧（Ca(N〇3) .4&0) 1 洗mg/'L 硝酸巧（KN03) lOOmg/L 7 水硫酸鎊（Μ拱O4.7H2O) 40mg/L 5 水P-甘油磯酸鋼φ-Ν32glycerophosphate-5H2〇) 30mg/L 4-経己基脈嗦乙礎(chǔ)酸（IffiPES) 500mg/L
[0022] 9米媽疆藤執(zhí)（N;i:SiO;.9H]〇J 15.血巧匯 6 水k化巧（Fe0.v6H:0) 4mg/L 乙二胺四之酸二鋼CNa^EDTA) 4.5mg/L 4 水含氯化猛（Μηα2.4Η2〇) 0.25mg/L 7 水氯化粹（ZnCV7H2〇) 30ug/L 2 水合巧酸納（Ν32Μο04·2Η2〇) 24ug/L 6 水氯化鉆（CoCk6H_，0) 12ug/L 維'Τ.禹BI:; (yi扣miηBI:) 0.1ug;L 維生素H(Biotin生物素） O.lug/L 維'1...南Bl(ThiiimineHC) lOiig-L
[0023] 其余為雙蒸水。
[0024] 實施例2:
[00巧]一種淡水針桿藻培養(yǎng)方法，包括：
[0026] (1)按照實施例1所述配方配制LXS培養(yǎng)液，調(diào)節(jié)抑值為7. 5。放入滅菌鍋中， 120°C，滅菌20min。滅菌結(jié)束后，放入4°C冰箱中備用。
[0027] (2)將針桿藻在CSI培養(yǎng)基（《HandbookofMicroalgalQilture》）中培養(yǎng)至 對數(shù)期，備用。
[0028] (3)將（2)中的針桿藻進(jìn)行饑餓培養(yǎng)Id(培養(yǎng)液為不含氮、憐、娃、鐵的CSI培養(yǎng) 基），備用。
[0029] (4)將經(jīng)過饑餓培養(yǎng)的針桿藻4000r/min離屯、lOmin，棄上清后分別接種到裝有 LXS培養(yǎng)液（試驗組）和CSI培養(yǎng)液（對照組）的錐形瓶中，接種量為0.29X105cellsAiL， 然后用封口膜封口。
[0030] (5)將錐形瓶移入光照培養(yǎng)箱中，設(shè)定溫度為25°C，光照強(qiáng)度為30001X，光暗比為 12h:12h〇
[0031] (6)每隔化振搖錐形瓶一次，W上所有器皿均需滅菌，操作均在超凈工作臺中進(jìn) 行。
[0032] (7)每2d取樣于顯微鏡下觀察計數(shù)。
[0033] 所述的針桿藻購自中科院水生生物研究所藻種庫，編號為Syne化aFACHB-1131。
[0034] 細(xì)胞生長情況如表1和圖1所示，試驗組針桿藻在接種的第2d藻細(xì)胞開始 分裂，第4d進(jìn)入對數(shù)期。生長速率一直遞增到接種后的第lld，最大藻細(xì)胞密度達(dá)到 9. 15X10?cells/ml〇
[003引表1針桿藻細(xì)胞密度隨時間的變化（Xl05cells/mU[0036]
[0037]對照組CSI培養(yǎng)基中的細(xì)胞生長趨勢與試驗組中基本一致，但細(xì)胞生長速率顯著 低于試驗組，在第lid達(dá)到最大細(xì)胞密度，僅有6. 16X105cells/ml。
[003引實施例3 :
[0039] -種淡水針桿藻培養(yǎng)方法，包括：
[0040] (1)按照實施例1所述配方配置好LXS培養(yǎng)液，調(diào)節(jié)抑值為8,放入滅菌鍋中， 120°C，滅菌20min，滅菌結(jié)束后。放入4°C冰箱中備用。
[00川 似將針桿藻在CSI培養(yǎng)基中培養(yǎng)至對數(shù)期，備用。
[0042] (3)將（2)中的針桿藻進(jìn)行饑餓培養(yǎng)Id(培養(yǎng)液為不含氮、憐、娃、鐵的CSI培養(yǎng) 基），備用。
[0043] (4)將經(jīng)過饑餓培養(yǎng)的針桿藻4000r/min離屯、lOmin，棄上清后分別接種到裝有 LXS培養(yǎng)液（試驗組）和CSI培養(yǎng)液（對照組）的錐形瓶中，接種量為0.33X105cellsAiL， 然后用封口膜封口。
[0044] (5)將錐形瓶移入光照培養(yǎng)箱中，設(shè)定溫度為將25°C，光照強(qiáng)度為30001X，光暗比 為1化：1化。
[0045] (6)每隔化振搖錐形瓶一次。W上所有器皿均需滅菌，操作均在超凈工作臺中進(jìn) 行。
[0046] (7)每2d取樣于顯微鏡下觀察計數(shù)。
[0047] 所述的針桿藻為Syne化a FACHB-1131，購自中科院水生生物研究所藻種庫。
[004引 經(jīng)過lid培養(yǎng)，試驗組細(xì)胞密度可達(dá)9. 01X105cells/ml。
[004引 實施例4:
[0050] -種淡水針桿藻培養(yǎng)方法，包括：
[0051] (1)按照實施例1所述培養(yǎng)液配方配置好LXS培養(yǎng)液，調(diào)節(jié)抑值為8,放入滅菌鍋 中，120°C，滅菌20min。滅菌結(jié)束后，放入4°C冰箱中備用。
[0052] (2)將針桿藻在CSI培養(yǎng)基中培養(yǎng)至對數(shù)期，備用。
[0053] (3)將（2)中的針桿藻進(jìn)行饑餓培養(yǎng)Id(培養(yǎng)液為不含氮、憐、娃、鐵的CSI培養(yǎng) 基），備用。
[0054] (4)將經(jīng)過饑餓培養(yǎng)的針桿藻4000r/min離屯、lOmin，棄上清后分別接種到裝有 LXS培養(yǎng)液（試驗組）和CSI培養(yǎng)液（對照組）的錐形瓶中，接種量為0. 33X105cells/mL， 然后用封口膜封口。
[00巧](5)將錐形瓶移入光照培養(yǎng)箱中，設(shè)定溫度為將30°C，光照強(qiáng)度為30001X，光暗比 為1化：1化；
[0056] (6)每隔化振搖錐形瓶一次。W上所有器皿均需滅菌，操作均在超凈工作臺中進(jìn) 行。
[0057] (7)每2d取樣于顯微鏡下觀察計數(shù)。
[005引所述的針桿藻為Syne化aFACHB-l131，購自中科院水生生物研究所藻種庫。
[0059]經(jīng)過lid培養(yǎng)，試驗組細(xì)胞密度可達(dá)8. 52X105cells/ml。
【主權(quán)項】
1. 一種淡水針桿藻培養(yǎng)液，包括： 4水硝酸鈣 135~150mg/L 硝酸鉀 90~100mg/L 7水硫酸鎂 35~40mg/L 5水β-甘油磷酸鈉 25~30mg/L 4-羥乙基哌嗪乙磺酸 400~500mg/L 9水偏硅酸鈉 150~200mg/L 6水氯化鐵 3. 5~4mg/L 乙二胺四乙酸二鈉 4~4.5mg/L 4水合氯化錳 0· 25~0· 35mg/L 7水氯化鋅 25~30ug/L 2水合鉬酸鈉 20~24ug/L 6水氯化鈷 7~12ug/L 維生素B12 0. 05~0.lug/L 維生素Η 0. 05~0.lug/L 維生素B1 5~10ug/L 其余為雙蒸水，培養(yǎng)液的pH范圍是7. 5~8。2. 利用權(quán)利要求1所述培養(yǎng)液培養(yǎng)針桿藻的方法，包括： 將經(jīng)過饑餓培養(yǎng)的針桿藻3000~4000r/min離心5~10min，棄上清后接種至權(quán)利要求1 所述培養(yǎng)液中，25~30°C，光照強(qiáng)度為3000~50001x，光暗比為12h~14h: 10h~12h，每隔3h振 搖錐形瓶一次。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種淡水針桿藻培養(yǎng)液及培養(yǎng)方法，本發(fā)明所公開的培養(yǎng)液，配方組分簡單易得，根據(jù)淡水針桿藻生長的營養(yǎng)鹽、溫度、pH值等的需求特性，可以有效地促進(jìn)針桿藻的快速分裂增殖，促進(jìn)其更好地吸收利用各種營養(yǎng)物質(zhì)，加快針桿藻細(xì)胞的新陳代謝，提高其生產(chǎn)量，達(dá)到促進(jìn)純種淡水針桿藻快速生長的目的。將該培養(yǎng)液結(jié)合本發(fā)明提供的培養(yǎng)方法，培養(yǎng)方法操作簡單，針對性強(qiáng)，適應(yīng)淡水針桿藻的快速生長，具備廣泛的市場前景，特別適合于在水產(chǎn)養(yǎng)殖領(lǐng)域推廣應(yīng)用。
【IPC分類】C12N1/12, C12R1/89
【公開號】CN105368714
【申請?zhí)枴緾N201510975086
【發(fā)明人】李曉莉, 李谷, 陶玲
【申請人】中國水產(chǎn)科學(xué)研究院長江水產(chǎn)研究所
【公開日】2016年3月2日
【申請日】2015年12月22日