一種體外創(chuàng)面模型及其使用方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種體外創(chuàng)面模型及其使用方法，適用于評價(jià)含抗菌成分的創(chuàng)面敷料 的抗菌活性。
【背景技術(shù)】
[0002] 創(chuàng)面是微生物生長繁殖的理想環(huán)境，為微生物提供了生長表面以及充足的營養(yǎng)供 給。在臨床上，創(chuàng)面感染控制一直是醫(yī)院感染控制的主要內(nèi)容?？咕鷦?chuàng)面敷料中的抗菌成 分具有接觸殺菌或抑制微生物繁殖的功能，可明顯減少臨床創(chuàng)面感染的機(jī)會(huì)，從而達(dá)到安 全有效的治療目的。目前，抗菌創(chuàng)面敷料已經(jīng)在臨床上得到了廣泛應(yīng)用，其在創(chuàng)面感染控制 方面，尤其是慢性創(chuàng)面感染控制方面的表現(xiàn)也得到了廣泛認(rèn)可。
[0003]抗菌活性是指含抗菌成分的接觸性創(chuàng)面敷料對微生物的抑制或殺滅能力，抗菌創(chuàng) 面敷料中的抗菌成分，如Ag離子，其本身的抗菌功能已經(jīng)得到了一致認(rèn)同。但是，含抗菌成 分創(chuàng)面敷料的抗菌活性尚沒有公認(rèn)的評價(jià)方法。雖然目前國內(nèi)外已經(jīng)有一些抗菌創(chuàng)面敷料 抗菌活性的相關(guān)研究報(bào)導(dǎo)，但是這些研究基本都沒有考慮創(chuàng)面微生物的動(dòng)態(tài)生長狀態(tài)。
[0004] 在臨床上，不同的創(chuàng)面類型以及創(chuàng)面愈合的不同時(shí)期，其創(chuàng)面滲出液的成分及滲 出量的多少、創(chuàng)面溫度、創(chuàng)面感染的微生物類型及感染程度等都是不同的。相應(yīng)地，用于創(chuàng) 面治療的抗菌敷料的抗菌成分類型及其釋放動(dòng)力學(xué)等也會(huì)存在較大差異。顯然，如果用相 同評價(jià)方法（包括試驗(yàn)方法和試驗(yàn)參數(shù)）對不同敷料的抗菌活性進(jìn)行評價(jià)存在一定不合理 性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 針對上述問題，本發(fā)明的目的之一在于提供一種體外創(chuàng)面模型，該模型可以對微 生物持續(xù)供給新鮮的營養(yǎng)物，從而模擬臨床創(chuàng)面微生物的實(shí)際生長狀態(tài)，為抗菌敷料的抗 菌活性評價(jià)提供了試驗(yàn)平臺(tái)；本發(fā)明的目的之二在于提供一種體外創(chuàng)面模型的使用方法， 該使用方法為適合于上述模型的抗菌活性評價(jià)試驗(yàn)方法，充分模擬創(chuàng)面微生物的實(shí)際存在 狀態(tài)，以得出科學(xué)的評價(jià)結(jié)果。
[0006] 本發(fā)明的目的之一是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：一種體外創(chuàng)面模型，包括滲出液 存放瓶、栗、反應(yīng)器和廢液瓶，所述栗用于將模擬創(chuàng)面滲出液輸送至反應(yīng)器，所述反應(yīng)器用 于承載檢查片、吸收墊、載菌濾膜和樣片以進(jìn)行抗菌活性評價(jià)試驗(yàn)。
[0007] 所述的反應(yīng)器上并列設(shè)置有多個(gè)隔室，每一個(gè)隔室上均設(shè)有流出孔，栗的出口的 數(shù)量與所述隔室的數(shù)量相等，栗的進(jìn)口與栗的出口--對應(yīng)；栗的進(jìn)口與滲出液存放瓶之 間通過滲出液輸送管路相連通，栗的出口分別通過栗管與反應(yīng)器的隔室一一對應(yīng)的相連 通，反應(yīng)器上的流出孔通過廢液流出管路與廢液瓶相連通。
[0008] 進(jìn)一步的技術(shù)方案為：所述的滲出液輸送管路上設(shè)置有一個(gè)玻璃滴斗，玻璃滴斗 的頂端和底端均與滲出液輸送管路相連通。玻璃滴斗連接模擬創(chuàng)面滲出液輸送管路，用于 觀察模擬創(chuàng)面滲出液的流動(dòng)情況，玻璃滴斗能耐受壓力蒸汽滅菌過程。為保證玻璃滴斗的 穩(wěn)妥，玻璃滴斗的下方應(yīng)設(shè)置一個(gè)支撐架對其進(jìn)行支撐。
[0009] 進(jìn)一步的技術(shù)方案為：所述的反應(yīng)器包括基座，所述的隔室設(shè)置在基座上，隔室呈 凹槽狀，隔室內(nèi)設(shè)置有用于放置檢查片的支架，所述流出孔設(shè)置在隔室的一端；每一個(gè)隔室 的上方設(shè)置有一個(gè)頂蓋，頂蓋與基座之間通過螺紋連接件相連接，頂蓋上設(shè)置有第一通孔 并在第一通孔處安裝有Mininert閥，每一根所述栗管與反應(yīng)器的連接端均設(shè)置有一個(gè)無 菌針，無菌針插入所述Mininert閥中。所述的支架是隔室底面上的突起物，用來擋住檢查 片，使檢查片處于隔室的特定位置，由于進(jìn)行抗菌活性評價(jià)試驗(yàn)時(shí)隔室是傾斜的，支架可防 止檢查片滑落到隔室底部。
[0010] 基座的材質(zhì)為聚砜（一種熱塑性樹脂），基座上隔室的數(shù)量為六個(gè)，每個(gè)隔室長 10. 16cm、寬3. 05cm;頂蓋的材質(zhì)為聚碳酸酯，每個(gè)頂蓋兩端對稱的設(shè)有兩個(gè)螺紋孔，頂蓋 通過尼龍螺絲釘扣緊到反應(yīng)器基座上。
[0011] 進(jìn)一步的技術(shù)方案為：所述頂蓋上還設(shè)置有第二通孔并在第二通孔處安裝有細(xì)菌 過濾器。
[0012] 進(jìn)一步的技術(shù)方案為：所述頂蓋與基座的配合面上裝有密封圈。所述的密封圈采 用0型密封圈。
[0013] 進(jìn)一步的技術(shù)方案為：在所述基座的底面上設(shè)置有高度可調(diào)的支撐腳。通過調(diào)節(jié) 一側(cè)支撐腳的高度，可以調(diào)整反應(yīng)器的基座與水平面的傾角，使流出孔所處的一端低于另 一端，從而使廢液能夠順利從流出孔流出。
[0014] 進(jìn)一步的技術(shù)方案為：所述的滲出液存放瓶和廢液瓶均為細(xì)口試劑瓶，滲出液存 放瓶和廢液瓶的瓶蓋上均設(shè)有安裝細(xì)菌過濾器的接口；滲出液存放瓶上設(shè)有進(jìn)氣口，進(jìn)氣 口處設(shè)有空氣過濾器，廢液瓶上設(shè)有出氣口，出氣口處設(shè)有空氣過濾器。因?yàn)闈B出液存放瓶 是要流出模擬創(chuàng)面滲出液的，所以必須有進(jìn)氣口以保持瓶內(nèi)壓力的平衡，進(jìn)氣口處的空氣 過濾器是保證滲出液存放瓶進(jìn)氣無菌的；因?yàn)閺U液瓶是要流進(jìn)廢液的，所以需要有出氣口 以保持瓶內(nèi)壓力的平衡，出氣口處的空氣過濾器是保證廢液瓶出氣無菌的。試劑瓶能耐受 壓力蒸汽滅菌過程，細(xì)菌過濾器也能耐受壓力蒸汽滅菌過程。
[0015] 進(jìn)一步的技術(shù)方案為：所述的滲出液輸送管路和廢液流出管路均為硅橡膠管路。
[0016] 進(jìn)一步的技術(shù)方案為：所述的栗為蠕動(dòng)栗。蠕動(dòng)栗能使反應(yīng)器上的多個(gè)隔室構(gòu)成 的通道以擬定流量同時(shí)運(yùn)行，栗管能夠耐受壓力蒸汽滅菌過程。
[0017] 本發(fā)明的目的之二是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：一種體外創(chuàng)面模型的使用方法， 包括以下步驟：
[0018] 步驟（1):將吸收墊粘附到檢查片上，向反應(yīng)器的每一個(gè)隔室中分別插入一個(gè)檢 查片，然后將反應(yīng)器的各部件組裝完成，具體操作為將隔室的頂蓋安裝到基座上，向每一個(gè) 頂蓋上安裝一個(gè)細(xì)菌過濾器和一個(gè)Mininert閥。
[0019] 步驟（2):將滲出液輸送管路、栗管、廢液流出管路和反應(yīng)器組裝到一起；將玻璃 滴斗連接到滲出液輸送管路，將栗管連接到滲出液輸送管路，將廢液流出管路連接到反應(yīng) 器的流出孔上。
[0020] 步驟（3):用鋁箱包裹所有暴露的管路末端和開口，將步驟（2)組裝好的反應(yīng)器放 置于一個(gè)滅菌托盤，用鋁箱覆蓋整個(gè)滅菌托盤，對步驟（2)組裝好的反應(yīng)器進(jìn)行滅菌處理。 滅菌處理的方法可以采用121°C滅菌20min。
[0021] 步驟⑷：將接種懸液接種到濾膜上，并靜置接種物使其干燥，每一種試驗(yàn)菌株制 作的載菌濾膜的數(shù)量，等于試驗(yàn)樣片和對照樣片數(shù)量的總和；若是反應(yīng)器上設(shè)置六個(gè)隔室， 反應(yīng)器上放置三個(gè)無菌試驗(yàn)樣片和三個(gè)對照樣片，則共制作六個(gè)載菌濾膜。
[0022] 步驟（5):將冷卻后的反應(yīng)器放置于水平位置，以無菌操作的方式打開各隔室的 頂蓋，先用模擬創(chuàng)面滲出液使吸收墊濕化，然后將載菌濾膜接種面朝上放置到吸收墊上，然 后，將無菌試驗(yàn)樣片和對照樣片分別放置在載菌濾膜的上面，將頂蓋安裝到基座上。
[0023] 步驟（6):調(diào)整反應(yīng)器的基座與水平面的傾角，使流出孔所處的一端低于另一端， 一般將反應(yīng)器基座的傾斜角度調(diào)整至10°即可。
[0024] 步驟（7):以無菌操作的方式將模擬創(chuàng)面滲出液倒入滲出液存放瓶中，將滲出液 輸送管路連接到滲出液存放瓶上；將栗管通過栗頭，栗管末端分別連接隔室，具體操作為將 栗管通過蠕動(dòng)栗的栗頭，栗管末端分別連接一個(gè)無菌針，以無菌操作的方式將無菌針插入 隔室頂蓋上的Mininert閥中，將廢液流出管路的末端連接到廢液瓶。
[0025] 步驟（8):打開栗（蠕動(dòng)栗）并設(shè)定擬定流速，讓模擬創(chuàng)面滲出液緩慢滴到檢查片 上，模擬創(chuàng)面滲出液被吸收墊吸收，從而對載菌濾膜上面的接種微生物供應(yīng)營養(yǎng)，在擬定溫 度條件下，讓試驗(yàn)樣片或者對照樣片對接種微生物作用至擬定時(shí)間。
[0026] 步驟（9):打開頂蓋，以無菌操作的方式用無菌鑷子取下載菌濾膜和與其組合在 一起的試驗(yàn)樣片或者對照樣片，放入無菌磷酸鹽緩沖液中，對微生物進(jìn)行洗脫、培養(yǎng)和計(jì) 數(shù)，計(jì)算每個(gè)試驗(yàn)樣片或者對照樣片與載菌濾膜組合中的微生物數(shù)量。
[0027] 步驟（10):結(jié)果表征：用Log降低值（LRV)表示試驗(yàn)樣品的抗菌活性，用下式計(jì)算 LRV：
[0028] LRV=Iogi0N1-Iog10N2
[0029] 式中：
[0030] N1-對照樣片上的平均微生物數(shù)量，單位為CFU;
[0031] N2-試驗(yàn)樣片上的平均微生物數(shù)量，單位為C