微生物絮凝劑協(xié)同活性炭固定絮凝沉降油脂酵母的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 隨著石油資源的日益緊缺，多渠道開(kāi)發(fā)可再生油脂資源成為必然。微生物油脂又 稱單細(xì)胞油脂，是由酵母、霉菌、細(xì)菌和藻類等微生物在一定的條件下，利用碳水化合物、 碳?xì)浠衔锖推胀ㄓ椭鳛樘荚?，在菌體內(nèi)產(chǎn)生的大量油脂。利用微生物生產(chǎn)油脂，微生 物細(xì)胞增殖快，生產(chǎn)周期短；微生物生長(zhǎng)所需的原料豐富，價(jià)格便宜；用微生物方法生產(chǎn)油 月旨，不受季節(jié)、氣候變化的限制，能連續(xù)大規(guī)模生產(chǎn)，生產(chǎn)成本低。斯達(dá)氏油脂酵母能在細(xì)胞 內(nèi)合成大量的油脂，是一種高效的產(chǎn)油微生物。工業(yè)上常用斯達(dá)氏油脂酵母進(jìn)行微生物油 脂的制備。
[0003] 然而目前微生物油脂制備上的主要瓶頸就是工業(yè)生產(chǎn)中產(chǎn)油微生物菌體積累油 脂后從發(fā)酵液中分離、獲得的工藝復(fù)雜，成本高。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是對(duì)活性炭進(jìn)行處理后成為載體，用于固定斯達(dá)氏油脂酵母，便于 后續(xù)微生物絮凝劑對(duì)其進(jìn)行絮凝沉降的微生物絮凝劑協(xié)同活性炭固定絮凝沉降油脂酵母 的方法。
[0005] 本發(fā)明的步驟是： (1) 活性炭的處理 取活性炭，在200°C下干燥2h;冷卻至室溫后，按活性炭和水的體積比為1:3稱取活性 炭和水；將活性炭和水?dāng)嚢杈鶆蚝?，加入濃度?8%硫酸；水浴溫度80°C條件下充分?jǐn)嚢? h;之后抽濾，用除鹽水對(duì)活性炭進(jìn)行多次洗滌，至濾液pH值呈中性；將過(guò)濾后的活性炭在 200°C下烘干；取出活性炭置于300°C馬弗爐中烘烤2. 5h后置于干燥器中備用； (2) 醬油曲霉制備微生物絮凝劑 將保存在斜面上的菌株編號(hào)為CGMCCNO:3. 5231的醬油曲霉接入到無(wú)菌的發(fā)酵培養(yǎng) 基中，所述的醬油曲霉發(fā)酵培養(yǎng)基中各組分用量分別為：葡萄糖；NaN03;MgS04 ? 7H20 ;KC1 ; FeS04;KH2P04;pH=6. 0 ;在30°C搖床上以180rpm培養(yǎng)3天，得到高絮凝活性的微生物絮凝 劑；冷卻至室溫后，將微生物絮凝劑存放在4°C冰箱中保存?zhèn)溆茫?(3) 斯達(dá)氏油脂酵母培養(yǎng)液的制備 將保存在斜面上的菌株編號(hào)為CGMCCNO:2. 1560的斯達(dá)氏油脂酵母接入到無(wú)菌的種 子培養(yǎng)基中，所述的斯達(dá)氏油脂酵母種子培養(yǎng)基中各組分用量分別為：葡萄糖；（NH4)2S04; 酵母粉；KH2P04;MgS0 4 ? 7H20 ;pH=6. 0 ;在22°C搖床上以150rpm培養(yǎng)1天，得到培養(yǎng)好的斯 達(dá)氏油脂酵母菌懸液，將得到的菌懸液存放在4°C冰箱中保存?zhèn)溆茫?(4) 活性炭對(duì)菌株編號(hào)為CGMCCNO:2. 1560的斯達(dá)氏油脂酵母的固定化 取步驟（3)得到的斯達(dá)氏油脂酵母菌懸液，投入到無(wú)菌的限氮培養(yǎng)基中，所述的限氮培 養(yǎng)基中各組分用量分別為：葡萄糖；（NH4)2S04j#母粉；KH2P04;MgS0 4 *7H20 ;pH=6. 5 ;取步驟 (1)得到的活性炭，加入到上述已經(jīng)接入斯達(dá)氏油脂酵母的限氮培養(yǎng)基中，在22°C搖床上以 150rpm培養(yǎng)3天，得到活性炭固定化的斯達(dá)氏油脂酵母菌懸液； (5)微生物絮凝劑絮凝沉降活性炭固定化的菌株編號(hào)為CGMCCNO:2. 1560的斯達(dá)氏 油脂酵母，取步驟（2)得到的微生物絮凝劑，投入到步驟（4)得到的活性炭固定化的斯達(dá)氏 油脂酵母菌懸液中，用混凝攪拌器以300rpm快速攪拌1min，然后以30rpm慢速攪拌3 min，然后靜置5min，靜置時(shí)每隔1min取上清液，用分光光度計(jì)在600nm處測(cè)定其吸光 度，計(jì)算絮凝沉降率，實(shí)現(xiàn)微生物絮凝劑絮凝沉降活性炭固定化的斯達(dá)氏油脂酵母。
[0006] 本發(fā)明對(duì)活性炭進(jìn)行處理，使其成為固定化油脂酵母的優(yōu)良載體，進(jìn)而用于固定 斯達(dá)氏油脂酵母，增大斯達(dá)氏油脂酵母的粒徑，便于后續(xù)微生物絮凝劑對(duì)其進(jìn)行絮凝沉降； 然后利用醬油曲霉制備微生物絮凝劑；最后利用醬油曲霉制備的微生物絮凝劑對(duì)活性炭固 定化的斯達(dá)氏油脂酵母進(jìn)行絮凝沉降，使斯達(dá)氏油脂酵母從發(fā)酵液中分離出來(lái)。其積極效 果是： 1、 微生物絮凝劑和活性炭無(wú)毒無(wú)害，對(duì)微生物油脂的后續(xù)利用不產(chǎn)生影響； 2、 活性炭固定化斯達(dá)氏油脂酵母，能有效增大斯達(dá)氏油脂酵母的粒徑，利于后續(xù)微生 物絮凝劑對(duì)其進(jìn)行絮凝沉降； 3、 微生物絮凝劑能高效絮凝沉降活性炭固定化的斯達(dá)氏油脂酵母，操作簡(jiǎn)單，絮凝沉 降時(shí)間短，斯達(dá)氏油脂酵母的絮凝沉降率高； 4、 斯達(dá)氏油脂酵母的絮凝沉降率保持在93. 90%~99. 62%。
【具體實(shí)施方式】
[0007] 本發(fā)明的步驟是： (1) 活性炭的處理 取活性炭，在200°C下干燥2h;冷卻至室溫后，按活性炭和水的體積比為1:3稱取活性 炭和水；將活性炭和水?dāng)嚢杈鶆蚝?，加入濃度?8%硫酸；水浴溫度80°C條件下充分?jǐn)嚢? h;之后抽濾，用除鹽水對(duì)活性炭進(jìn)行多次洗滌，至濾液pH值呈中性；將過(guò)濾后的活性炭在 200°C下烘干；取出活性炭置于300°C馬弗爐中烘烤2. 5h后置于干燥器中備用； (2) 醬油曲霉制備微生物絮凝劑 將保存在斜面上的菌株編號(hào)為CGMCCNO:3. 5231的醬油曲霉接入到無(wú)菌的發(fā)酵培養(yǎng) 基中，所述的醬油曲霉發(fā)酵培養(yǎng)基中各組分用量分別為：葡萄糖；NaN03;MgS04 ? 7H20 ;KC1 ; FeS04;KH2P04;pH=6. 0 ;在30°C搖床上以180rpm培養(yǎng)3天，得到高絮凝活性的微生物絮凝 劑；冷卻至室溫后，將微生物絮凝劑存放在4°C冰箱中保存?zhèn)溆茫?(3) 斯達(dá)氏油脂酵母培養(yǎng)液的制備 將保存在斜面上的菌株編號(hào)為CGMCCNO:2. 1560的斯達(dá)氏油脂酵母接入到無(wú)菌的種 子培養(yǎng)基中，所述的斯達(dá)氏油脂酵母種子培養(yǎng)基中各組分用量分別為：葡萄糖；（NH4)2S04; 酵母粉；KH2P04;MgS0 4 ? 7H20 ;pH=6. 0 ;在22°C搖床上以150rpm培養(yǎng)1天，得到培養(yǎng)好的斯 達(dá)氏油脂酵母菌懸液，將得到的菌懸液存放在4°C冰箱中保存?zhèn)溆茫?(4) 活性炭對(duì)菌株編號(hào)為CGMCCNO:2. 1560的斯達(dá)氏油脂酵母的固定化 取步驟（3)得到的斯達(dá)氏油脂酵母菌懸液，投入到無(wú)菌的限氮培養(yǎng)基中，所述的限氮培 養(yǎng)基中各組分用量分別為：葡萄糖；（NH4)2S04j#母粉；KH 2P04;MgS0 4 *7H20 ;pH=6.5 ;取步驟 (1)得到的活性炭，加入到上述已經(jīng)接入斯達(dá)氏油脂酵母的限氮培養(yǎng)基中，在22°C搖床上以 150rpm培養(yǎng)3天，得到活性炭固定化的斯達(dá)氏油脂酵母菌懸液； (5)微生物絮凝劑絮凝沉降活性炭固定化的菌株編號(hào)為CGMCCNO:2. 1560的斯達(dá)氏 油脂酵母，取步驟（2)得到的微生物絮凝劑，投入到步驟（4)得到的活性炭固定化的斯達(dá)氏 油脂酵母菌懸液中，用混凝攪拌器以300rpm快速攪拌1min，然后以30rpm慢速攪拌3 min，然后靜置5min，靜置時(shí)每隔1min取上清液，用分光光度計(jì)在600nm處測(cè)定其吸光 度，計(jì)算絮凝沉降率，實(shí)現(xiàn)微生物絮凝劑絮凝沉降活性炭固定化的斯達(dá)氏油脂酵母。
[0008] 實(shí)施例1: (1) 活性炭的處理 取20g規(guī)格為300目的活性炭，在200°C下干燥2h;冷卻至室溫后，按活性炭和水的 體積比為1:3稱取活性炭和水；將活性炭和水?dāng)嚢杈鶆蚝?，加入濃度?8%硫酸；水浴溫度 80°C條件下充分?jǐn)嚢?h;之后抽濾，用除鹽水對(duì)活性炭進(jìn)行多次洗滌，至濾液pH值呈中 性；將過(guò)濾后的活性炭在200°C下烘干；取出活性炭置于300°C馬弗爐中烘烤2. 5h后置于 干燥器中備用； (2) 醬油曲霉制備微生物絮凝劑 將保存在斜面上的菌株編號(hào)為CGMCCNO:3. 5231的醬油曲霉（Aspergillussojae)接 入到100mL無(wú)菌的發(fā)酵培養(yǎng)基中，所述的醬油曲霉發(fā)酵培養(yǎng)基中各組分用量分別為：葡萄 糖 25. 0g/L;NaN03 2. 0g/L;MgS04 ? 7H20 0? 2g/L;KC1 0? 3g/L;FeS04 0? 01g/L;KH2P04 0. 8g/L;pH=6. 0 ;在30°C搖床上以180rpm培養(yǎng)3天，得到高絮凝活性的微生物絮凝劑；7令 卻至室溫后，將微生物絮凝劑存放在4°C冰箱中保存?zhèn)溆茫?(3) 斯達(dá)氏油脂酵母培養(yǎng)液的制備 將保存在斜面上的菌株編號(hào)為CGMCCN0:2. 1560的斯達(dá)氏油脂酵母（Lipomyces starkeyi)接入到100mL無(wú)菌的種子培養(yǎng)基中，所述的斯達(dá)氏油脂酵母種子培養(yǎng)基中各 組分用量分別為：葡萄糖 15. 0g/L ;(NH4)2S047 . 0g/L ;酵母粉 0.8 g/L;KH2P04 0 .8 g/L ; MgS04*7H20 0.8 g/L;pH=6. 0;在22°C搖床上以150rpm培養(yǎng)1天，得到培養(yǎng)好的斯達(dá)氏油 脂酵母菌懸液，將得到的菌懸液存放在4°C冰箱中保存?zhèn)溆茫?(4) 活性炭對(duì)菌株編號(hào)為CGMCCNO:2. 1560的斯達(dá)氏油脂酵母的固定化 取10 mL步驟（3)得到的斯達(dá)氏油脂酵母菌懸液，投入到100 mL無(wú)菌的限氮培養(yǎng)基中， 所述的限氮培養(yǎng)基中各組分用量分別為：葡萄糖80. 0 g/L ; (NH4)2S04 1. 0 g/L ;酵母粉0.8 g/L;KH2P04 1.0 g/L;MgS04.7H20 1.0 g/L;pH=6.5;取 2g步驟（1)得到的活性炭，加入 到上述100 mL已經(jīng)接入斯達(dá)氏油脂酵母的限氮培養(yǎng)基中，在22°C搖床上以150 rpm培養(yǎng)3 天，得到活性炭固定化的斯達(dá)氏油脂酵母菌懸液； (5) 微生物絮凝劑絮凝沉降活性炭固定化的菌株編號(hào)為CGMCCNO:2. 1560的斯達(dá)氏 油脂酵母 取0.5mL步驟（2)得到的微生物絮凝劑，投入到100mL步驟（4)得到的活性炭固定化 的斯達(dá)氏油脂酵母菌懸液中，用混凝攪拌