抗腫瘤肽的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及抗腫瘤肽，具體涉及一種具有16個氨基酸的抗腫瘤肽。
【背景技術(shù)】
[0002] 在全球范圍內(nèi)，癌癥都有著較高的發(fā)病率和致死率。近幾十年來，人類為治療癌癥 付出了不懈的努力，對癌癥的研究主要集中在開發(fā)新的治療方法和減輕治療方法對病人的 副作用。現(xiàn)在常用的治療癌癥的方法主要是手術(shù)或者化療，但是很多情況下不僅不能高效 地治療病人，并且還具有很高的并發(fā)癥的風(fēng)險，一些治療癌癥的藥物不僅有多種副作用，而 且還可能會引起多重耐藥。而抗腫瘤多肽作為一種新型的治療癌癥的藥物，因?yàn)樗哂袑?腫瘤細(xì)胞有選擇性、不易引起耐藥性等特點(diǎn)，正越來越受到人們的關(guān)注。
[0003] 許多抗腫瘤肽是從自然界生物內(nèi)中獲得的。這種直接來源于生物體內(nèi)的抗腫瘤肽 一般肽鏈較長，很難用化學(xué)法合成，且具有結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，易失活等缺點(diǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明提供了一種抗腫瘤肽，其來源于一種名為Scorpion Androctonus的蝎子所 分泌的毒性蛋白Mauriporin，該毒性蛋白質(zhì)含有48個氨基酸。我們選擇性地縮短了該毒性 蛋白的肽鏈長度并進(jìn)一步優(yōu)化了序列，最終得到了本發(fā)明的抗腫瘤肽。本發(fā)明抗腫瘤肽具 有廣譜性，對多種癌細(xì)胞具有抑制和殺傷作用，肽鏈長度短，抗腫瘤活性高，而且穩(wěn)定不易 失活。
[0005] 根據(jù)本發(fā)明的一個方面，本發(fā)明涉及一種抗腫瘤肽，所述抗腫瘤肽的序列為：Phe-Lys-XfGly-Gly-Phe-Xz-Lys-Lys-Xij-Trp-Arg-Ser-XfXs-Ala，其中，X 1' X2、X3、X4和 X 5各自 獨(dú)立地為1^11、116或￥&1;優(yōu)選4 1%各自獨(dú)立地為116 43;和乂5各自獨(dú)立地為1^11。在 優(yōu)選的技術(shù)方案中，所述抗腫瘤肽的序列為Phe-Lys-ne-Gly-Gly-Phe-Ile-Lys-Lys-Leu-Trp-Arg-Ser-Leu-Leu-Ala ;Phe_Lys-Val-Gly-Gly-Phe-IIe-Lys-Lys-Val-Trp-Arg-Ser-I Ie-Val-Ala ;Phe_Lys-Ile-Gly-Gly-Phe-Val-Lys_Lys-Leu-Trp-Arg-Ser-Val-Leu-Ala ;或 Phe-Lys-Leu-Gly-Gly-Phe-Leu-Lys_Lys-Ile-Trp-Arg-Ser-Leu-IIe-Ala 0
[0006] 根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，本發(fā)明涉及一種用于治療腫瘤的藥物組合物，含有本 發(fā)明的抗腫瘤肽或其任意混合物和藥學(xué)上可接受的載體。優(yōu)選，所述腫瘤包括但不限于宮 頸癌、乳腺癌、前列腺癌、甲狀腺癌、肝癌、胃癌、肺癌、腎癌、膀胱癌、鼻咽癌、喉癌、食道癌、 腺樣囊性癌、白血病、黑色素瘤、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤等。
[0007] 根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，本發(fā)明涉及本發(fā)明的抗腫瘤肽或其任意混合物在制備 用于治療腫瘤的藥物中的應(yīng)用。優(yōu)選，所述腫瘤包括但不限于宮頸癌、乳腺癌、前列腺癌、甲 狀腺癌、肝癌、胃癌、肺癌、腎癌、膀胱癌、鼻咽癌、喉癌、腺樣囊性癌、食道癌、白血病、黑色素 瘤、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤等。
[0008] 本發(fā)明的藥物組合物可以制成本領(lǐng)域公知的各種常規(guī)劑型，包括但不限于，適于 口服的片劑（包括各種包衣片劑、緩釋或控釋片劑）、錠劑、膠囊劑（包括軟膠囊和硬膠 囊）、顆粒劑、可分散粉末、水性或油性混懸劑、乳劑、酏劑或糖漿劑等等；適于局部使用的 霜劑、軟膏劑、凝膠、水性或油性溶液或混懸劑等等；適于吸入使用的粉末或液體氣霧劑、適 于經(jīng)胃腸外給藥的無菌水性或油性的靜脈內(nèi)、皮下或肌內(nèi)注射劑、栓劑等等。
[0009] 本發(fā)明的藥學(xué)上可接受的載體包括但不限于常規(guī)的各種有機(jī)或無機(jī)藥物載體，例 如賦形劑、潤滑劑、粘合劑、崩解劑、水溶性聚合物、無機(jī)鹽、溶劑、溶解助劑、懸浮劑、等滲 劑、緩沖液、防腐劑、抗氧劑、著色劑、甜味劑、酸味劑、起泡劑和調(diào)味劑等等。
[0010] 本領(lǐng)域技術(shù)人員知曉在本發(fā)明的藥物組合物中，作為活性成分的抗腫瘤肽和藥學(xué) 上可接受的載體的合適用量，能夠根據(jù)本領(lǐng)域的常規(guī)方法確定。本領(lǐng)域技術(shù)人員同樣知曉 如何制備含有本發(fā)明的抗腫瘤肽的藥物組合物。
[0011] 本發(fā)明的抗腫瘤肽可以采用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法合成，例如固相合成，并 采用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法進(jìn)行純化，例如高效液相色譜法。
[0012] 本發(fā)明的抗腫瘤肽具有譜性，對多種癌細(xì)胞具有抑制和殺傷作用，不僅抗腫瘤活 性更高，而且穩(wěn)定不易失活。
【附圖說明】
[0013] 圖1為本發(fā)明抗腫瘤肽（多肽1)的高效液相色譜圖。
[0014] 圖2為本發(fā)明抗腫瘤肽（多肽1)的質(zhì)譜圖。 具體實(shí)施方案
[0015] 為了更好地理解本發(fā)明，下面結(jié)合實(shí)施例和附圖對本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說明， 但本領(lǐng)域技術(shù)人員了解，下述實(shí)施例不是對本發(fā)明保護(hù)范圍的限制，任何在本發(fā)明基礎(chǔ)上 做出的改變和變化，都在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
[0016] 實(shí)施例1抗腫瘤肽的固相合成、切割、純化及鑒定
[0017] 1. 1抗腫瘤肽的固相合成
[0018] 本發(fā)明利用多肽合成儀采用固相合成法合成抗腫瘤肽：
[0019] 1)以DMF為溶劑，各種α -氨基被Fmoc保護(hù)的氨基酸溶液的濃度為0. 25M，HBTU 溶液、HOBt溶液的濃度為0. 33Μ，哌啶溶液的濃度為200ml/L，DIEA溶液的濃度為174. 2ml/ L0
[0020] 2)稱取0· 05mmol Fmoc-Ala-Wang樹脂（官能團(tuán)含量0· 33mmol/g)置于固相反 應(yīng)器中，加8ml DCM溶脹過夜，減壓抽去溶劑。加入濃度為200ml/L的哌啶溶液8ml，室溫 下反應(yīng)5min，抽干；再加入濃度為200ml/L的哌啶溶液8ml，室溫下反應(yīng)20min，抽干；依次 用8ml的DMF洗滌3次，每次lmin。準(zhǔn)確量取0. 2mmol的α -氨基被Fmoc保護(hù)的氨基酸 溶液、0. 2mmol的HBTU溶液、0. 195mmol的HOBt溶液加入固相反應(yīng)器中，反應(yīng)5min后加入 0. 4mmol的DIEA，室溫下氮?dú)鈿馀菡袷幏磻?yīng)2h。依次用8ml的DMF洗滌3次，每次lmin。加 入濃度為200ml/L的哌啶溶液8ml，室溫下反應(yīng)5min，抽干；再加入濃度為200ml/L的哌啶 溶液8ml，室溫下反應(yīng)20min，抽干；依次以8ml的DMF洗滌3次，每次lmin。按照如上步驟 從肽鏈的碳端到氮端逐一連續(xù)合成了本發(fā)明的抗腫瘤肽Phe-Lys-Ile-Gly-Gly-Phe-Ile-L ys-Lys-Leu-Trp-Arg-Ser-Leu-Leu-Ala (多肽 1) 〇
[0021] 3)待合成完畢后，分別用DMF和DCM先后清洗連有多肽鏈的樹脂，后將樹脂至于真 空干燥箱內(nèi)干燥備用。
[0022] L 2抗腫瘤肽的切割
[0023] 1)待樹脂干燥后，用刮刀將樹脂盡量打散，轉(zhuǎn)移至雞心瓶中，加入磁子，在冰水浴 下緩慢加入用于脫除樹脂的切割液IO