多酚黃酮類化合物及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種多酚黃酮類化合物及其制備方法和應(yīng) 用。
【背景技術(shù)】
[0002] 板栗（Castanea mollissima Blume)又名栗子、栗、風(fēng)錯(cuò)，是殼斗科（Fagceae)栗 屬（Castanea)植物，板栗種仁素有"干果之王"的美譽(yù)，是我國(guó)特產(chǎn)，在國(guó)外它還被稱為"人 參果"。中醫(yī)認(rèn)為，板栗性溫，昧甘平，入脾、胃、腎經(jīng)。關(guān)于板栗的藥用價(jià)值，中醫(yī)認(rèn)為，栗果 有養(yǎng)胃健脾，補(bǔ)腎強(qiáng)筋，活血止血之功能，并有益于高血壓、冠心病的防治。在臨床上，板栗 還可用于治療反胃、泄瀉、腰腿軟弱、吐血、便血、金瘡等癥。同時(shí)，板栗加上其他中藥或食品 原材料可以制成藥膳，治療氣管炎、腎虛，消化不良、腹瀉、中風(fēng)等疾病。板栗的藥理作用涉 及抗凝血、升高白細(xì)胞、治療菌痢、治療慢性支氣管炎等各個(gè)方面。
[0003] 栗屬植物中富含酚酸類化合物，板栗總苞、花絮、外殼中主要的化學(xué)成分皆為多 酸。我們前期從板栗仁、板栗花、板栗總苞、板栗殼中分離得到數(shù)種多酚黃酮類化合物，結(jié)構(gòu) 含有桂皮?；?、香豆?；?、阿魏?；?、沒食子酸?；狞S酮苷類化合物結(jié)構(gòu)新穎，在抗腫瘤 活性評(píng)價(jià)中，均有抑制活性，該類成分和化合物可作為一種或多種可作為治療或輔助性治 療癌癥的藥物。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 為解決上述問題，本發(fā)明提供了一種多酚黃酮類化合物及其制備方法和應(yīng)用，制 備過程簡(jiǎn)便易行，所制備的組分、單體化合物有廣譜的抗腫瘤活性。
[0005] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為：
[0006] 一種式（I)所示的多酚黃酮類化合物，
[0007]
[0008] 其中R1、私可同時(shí)為H或OH或其中的1個(gè)；R2、心和R5其中至少有1個(gè)為糖基，其 余為H或OH ;糖基種類有葡萄糖（Glc)、半乳糖（Gala)、甘露糖（Man)、鼠李糖（Rham);糖之 間還可連接形成二糖苷或三糖苷，連接方式有1-2連接，1-3連接，1-4連接和1-6連接。所 述糖的C-2位、C-3位、C-4位和C-6位還可連接式（II)或式（III)，
[0009]
[0010] 式（II)和式（III)中的Rf^M5PR8具有相同意義，可同時(shí)為h、oh、och 3，Sh、oh、 OCH3中的一個(gè)或兩個(gè)。
[0011] 本發(fā)明還提供了上述化合物的三種制備方法：
[0012] 方法一，包括如下步驟：
[0013] S11、取藥材粗粉利用超聲或溶劑加熱提取法，采用3-15倍量水煎煮或 30% -100%乙醇回流提取或30% -100%甲醇回流提取，減壓回收水或醇溶劑，殘?jiān)鼡]至無 醇味或醇度低于10%后，以水溶解后離心取上清液。
[0014] S12將所得上清液用聚酰胺或大孔樹脂處理，用水-醇溶液梯度洗脫，富集 30% -80%醇洗脫部分，得到粗黃酮；
[0015] S13、將所得粗黃酮經(jīng)硅膠柱色譜進(jìn)行分離，采用不同溶劑系統(tǒng)進(jìn)行梯度洗脫，結(jié) 合中低壓制備分離色譜、高效液相色譜進(jìn)行制備分離，以乙腈-水系統(tǒng)、甲醇-水系統(tǒng)進(jìn)行 分離，得多酚黃酮類化合物。
[0016] 方法二，包括如下步驟：
[0017] S21、取藥材粗粉利用超聲或溶劑加熱回流提取法，采用3-10倍量的30% -100% 乙醇或甲醇回流提取，減壓回收醇溶劑，殘?jiān)鼡]至無醇味或醇度低于10%后，以水溶解，得 混懸液；
[0018] S22、將所得混懸液依次用乙酸乙酯、正丁醇進(jìn)行萃取，萃取次數(shù)1-5次，萃取體積 (1 : 1-1 : 8)獲得各萃取部位，分別回收溶劑，得浸膏，其中乙酸乙酯層浸膏為粗總黃酮苷 元組分；正丁醇層為總多酚黃酮苷類；
[0019] S23、將所得浸膏經(jīng)硅膠柱色譜進(jìn)行分離，采用不同溶劑系統(tǒng)進(jìn)行梯度洗脫，結(jié)合 中低壓制備分離色譜、高效液相色譜進(jìn)行制備分離，以乙腈/水系統(tǒng)、甲醇/水系統(tǒng)進(jìn)行分 離，得多酚黃酮類化合物。
[0020] 方法三，包括如下步驟：
[0021] S31、取藥材粗粉利用超聲或溶劑加熱回流提取法，采用3-10倍量乙酸乙酯或丙 酮回流提取，減壓回收溶劑得浸膏，為粗總黃酮；
[0022] S32、將所得的粗總黃酮經(jīng)硅膠柱色譜進(jìn)行分離，采用石油醚、乙酸乙酯、二氯甲 烷、三氯甲烷、丙酮、甲醇等組成的不同溶劑系統(tǒng)進(jìn)行梯度洗脫，結(jié)合中低壓制備分離色譜、 高效液相色譜進(jìn)行制備分離，以乙腈-水系統(tǒng)、甲醇-水系統(tǒng)進(jìn)行分離，得多酚黃酮類化合 物。
[0023] 其中，所述甲醇的濃度為10% -100%，所述乙醇的濃度為10% -100%。
[0024] 其中，所述的聚酰胺為 PA6、PA66、PA 11、PA 12、PA46、PA610、PA612、PA 1010 中的一 種或幾種的混合物，所述的大孔樹脂包括但不限于極性、非極性大孔樹脂D-10UDM-301、 HPD-100、AB-8。
[0025] 其中，所述不同溶劑系統(tǒng)包括但不限于石油醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、三氯甲烷、丙 酮、甲醇。
[0026] 其中，所述藥材粗粉采用栗屬等中藥或植物，為板栗總苞、板栗花、板栗殼、板栗枝 條、板栗仁中的一種。
[0027] 其中，備分離色譜、高效液相色譜中流動(dòng)相為甲醇/水、或乙腈/水、或乙醇/水， 混合比例為1 : 10-90 : 10,或甲醇/乙腈/水，混合比例為I : 1 : 10-40 : 40 : 20。
[0028] 上的化合物和粗總黃酮可用來制備抗腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的藥物，所述腫瘤為人肺癌、 人肝癌、人胰腺癌、人胃癌及人結(jié)腸癌中的一種，同時(shí)還可以配制一種藥物組合物用于治療 癌癥，該組合物包含治療有效劑量的化合物、粗總黃酮和藥學(xué)上可接受的載體。
[0029] 本發(fā)明具有以下有益效果：
[0030] 制備過程簡(jiǎn)便易行，所制備的組分、單體化合物有廣譜的抗腫瘤活性。
【具體實(shí)施方式】
[0031] 為了使本發(fā)明的目的及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步 詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā) 明。
[0032] 實(shí)施例1
[0033] 從板栗中分離粗多酚黃酮1
[0034] 分別取栗總苞、板栗花、板栗殼、或板栗仁粗粉各2kg，均以8倍量70%乙醇回流提 取3次，每次2h，減壓回收乙醇，殘?jiān)鼡]至無醇味，以水溶解后離心取上清液。
[0035] 上清液用2Kg大孔吸附樹脂（AB-8)開放柱色譜處理，用水-醇溶液梯度洗脫，富 集30%-80%醇洗脫部分，分別得到粗黃酮18(^、1678、11(^、109 8。
[0036] 實(shí)施例2
[0037] 從板栗中分離粗黃酮2
[0038] 取藥材粗粉即栗總苞、板栗花、板栗殼、板栗仁各0. 5kg，均以6倍量70%乙醇超聲 提取lhr，減壓回收醇溶劑，殘?jiān)鼡]至無醇味或醇度低于5%，以水溶解后離心取上清液。上 清液用開發(fā)聚酰胺（PA66)柱色譜處理，用水-乙醇溶液梯度洗脫，富集30% -70%醇洗脫 部分，分別得到粗黃酮27g，23g，18g，16g。
[0039] 實(shí)施例3
[0040] 從板栗中分離粗黃酮3
[0041] 分別取栗總苞、板栗花、板栗殼、或板栗仁粗粉各2kg，均以8倍量70%乙醇回流提 取3次，每次2h，減壓回收乙醇，殘?jiān)鼡]至無醇味，以水溶解得各懸浮液2L。混懸液依此用 等體積的乙酸乙酯和正丁醇進(jìn)行萃取，各萃取3次，各萃取部位分別回收溶劑得浸膏，其中 乙酸乙酯層浸膏為粗總黃酮苷元組分，分別為45-67g。正丁醇層浸膏為總多酚黃酮苷類，分 別為61-102g，將乙酸乙酯及正丁醇層組分合并，即得粗黃酮。
[0042] 實(shí)施例4
[0043] 從板栗中分離粗黃酮4
[0044] 分別取栗總苞、板栗花、板栗殼、或板栗仁粗粉各2Kg，以8倍量丙酮加熱回流提 取，每次2h，減壓回收溶劑，可得粗黃酮210-320g。
[0045] 實(shí)施例5
[0046] 從板栗粗黃酮中分離多酚黃酮類化合物
[0047] 取上述實(shí)施例1中粗總黃酮100g，經(jīng)硅膠（100-300目）開放柱色譜進(jìn)行分離， 以氯仿：甲醇（100 : 0-1 : 100)進(jìn)行梯度洗脫，所得流份經(jīng)薄層色譜分析，合并相同組 分，得到10個(gè)流份。流份1-10分別經(jīng)中低壓柱色譜分離處理，依此以甲醇：水（1 : 9; 2 : 8;3 : 7;6 : 4;5 : 5)進(jìn)行洗脫，佐以薄層色譜分析合并相同流份，除去溶劑后 得各洗脫物，洗脫物經(jīng)HPLC分析后進(jìn)制備型HPLC制備，色譜條件為甲醇-水-甲酸 (10 : 90 : 0.02-65 : 35 : 0.02)，得如下15個(gè)結(jié)構(gòu)的化合物。
[0048] 化合物1-15結(jié)構(gòu)如下
[0051] 化合物1-15結(jié)構(gòu)鑒定的碳?xì)渥V數(shù)據(jù)如下：
[0052] 化合物1:黃色粉末（甲醇）。鹽酸-鎂粉、MoIisch反應(yīng)為陽性。1H-Nmr^oomhz, DMS0-d6)SH:6.70(lH，br s，H-6)，6.70(lH，br s，H-8)，8.45(2H，d，J = 8.4Hz，H-2，， 6，），7.16(2H，d，J = 8.4Hz，H-3，，5，），5.27(lH，d，J = 7.6Hz，H-l" )，7.51(2H，d，J = 8·4Ηζ，Η-2"，，6"，），7.16(2H，d，J = 8.4Hz，H-3"，，5"，），7.84(lH，d，J=16.2Hz， H-7"，），6.51(lH，d，J=16.2Hz，H-8"，）.13C-NMR(150MHz，DMS0-d 6)Sc:157.8(C-2)， 133. 4 (C-3)，178. 4 (C-4)，162. 8 (C-5)，99. 9 (C-6)，166. O (C-7)，94. 7 (C-8)，157. 7 (C-9)， 105.2(010),121.9(01' )，131.9 (C-2'，6' )，116.1 (C-3'，5' )，161.8 (C-4')， 104.1(C-1" )，76.0(C-2" )，78.4(C-3" )，71.3(C-4" )，76.0(C-5" )，64.2(C-6")， 126.1(C-1" ' )，130.8(C-2" '，6" ' )，116.8(C-3" '，5" ' )，161.4(C-4"')， 145.2(C-7"' )，114.9(C-8"' )，167.3(C-9"' )·
[0053] 化合物2 :黃色粉末（甲醇）。鹽酸-鎂粉、Molisch反應(yīng)為陽性。1H NMR(600MHz，DMS0-d6) δΗ:6· 11(1H，d，J = 2. 1Hz，H-6)，6.27(1H，d，J = 2. 1Hz，H-8)， 7. 60(1H，d，J = 2. 1Hz，H-2， ），6. 79 (1H，m，J = 8. 4Hz，H_5， ），7. 57 (1H，dd，J1 = 8.4,2.1Hz，H-6' )，5.25(lH，d，J = 7.2Hz，H-l" )，7.29(2H，d，J = 8.7Hz，H-2"'， 6" ' )，6.79(2H，H-3" '，5" ' )，6.06(lH，d，J=15.9Hz，H-7" ' )，7.39(1H， d，J = 15. 9Hz ;H-8 " ' ) · 13C-NMR (150MHz，DMS0_d6) δ c: 157. 8 (C_2)，133. 4 (C_3)， 178. I (C-4)，162. 9 (C-5)，100. 0 (C-6)，165. 9 (C-7)，94. 8 (C-8)，159. I (C-9)，105. 6 (C-IO)， 123. 1(C-1 r )，117.4(C-2 ' )，145.9(C-3 ' )，149. 7 (C_4 ' )，115.9 (C_5 ')， 123.4(C-6' )，103.9(C-1" )，75.7(C-2" )，78.1(C-3" )，71.8(C-4" )，75.9(C-5")， 64.4(C-6" )，127.1(C-1" ' )，131.2(C-2" ' )，116.8(C-3" ' )，161.1(C-4"')， 13L3(C-5'h )，116.8(C-6"' )，146.5(C-7"' )，114.8(C-8"' )，168.9(C-9"' )·
[0054] 化合物3:黃色粉末（甲醇）。鹽酸-鎂粉、Moiisch反應(yīng)為陽性。1H-Nmrgoomhz, CD3OD) δ h:6. 09(1H，br s H-6)，6. 27(1H，br s，H-8)，7. 99(2H，d，J = 9· OHz，H-2 '， 6' )，6.87(2H，d，J = 8.5Hz，H-3'，5' )，5.67(lH，d，J = 7.5Hz，H-l" )，5·24(1Η， br s，H-l"，），7.27(2H，d，J = 8.0Hz，H-2"，，6"，），6.81(2H，d，J = 8.0Hz， H-3 " ，，5 " ，），7. 38(1H，d，J = 16. 0Hz，H-7 " r ) ,6. 03 (1H, d, J = 16. 0Hz, H-8" ' )· 13C-NMR(100MHz，CD3OD) δ c:161. 6(C-2)，134. 4(C-3)，178. 7(C-4)，164. 3(C-5)， 100. 4 (C-6)，166. 5 (C-7)，95. I (C-8)，158. 7 (C-9)，106