用于檢測阿奇霉素的分子印跡整體微柱及其制備方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于材料化學技術領域，特別設及一種用于檢測阿奇霉素的分子印跡整體 微柱及其制備方法。
【背景技術】
[0002] 阿奇霉素（Azit虹omycin)，化學名為；（2R，3S，4R，5R，8R，10R，11R，12S，13S， 14R)-13-[(2,6-二脫氧-3-C-甲基-3-0-甲基-0斗-核-已化喃糖基）氧]-2-己 基-3,4，10- ^哲基-3,5,6,8，10，12，14- 甲基-ll-[[3,4,6- ^脫氧-3-(二甲氨 基）-0 -D-木-已化喃糖基]氧]-1-氧雜-6-氮雜環(huán)十五燒-15-酬，是具有氮雜環(huán)的 十五元環(huán)大環(huán)內(nèi)醋類抗生素，對肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌W及肺炎支原體所致的肺炎、化 脈性鏈球菌等具有良好的療效。由于該藥尚未列入獸醫(yī)臨床用藥，國內(nèi)還未制定阿奇霉素 在動物可食性組織中的最高殘留限量（MRLs)和檢測標準，但有不少畜牧養(yǎng)殖者違規(guī)使用 阿奇霉素。最新研究表明，阿奇霉素不僅可能導致急性肝損傷，還可能引發(fā)屯、臟活動異常 變化，長期食用阿奇霉素殘留的動物源性食品，不僅會導致耐藥性的產(chǎn)生，而且可能對敏感 個體造成致命的傷害。動物源性食品中阿奇霉素殘留越來越受到人們的關注，阿奇霉素在 畜禽、水產(chǎn)品體內(nèi)的代謝和殘留消除規(guī)律已有研究報道，主要采用高效液相色譜、高效液相 色譜-串聯(lián)質譜等方法分析測定阿奇霉素殘留。因阿奇霉素本身的大環(huán)內(nèi)醋結構，無特征 紫外吸收基團，高效液相色譜紫外檢測不靈敏；目前，一般都采用高效液相色譜-串聯(lián)質譜 分析阿奇霉素殘留，雖然靈敏度大大提高，但前處理一般都是采用蛋白沉淀法或采用傳統(tǒng) 的固相萃取小柱（如Ci8、HLB)，缺乏選擇性，特異性不強，凈化不理想，分析測定中基質效應 強，從而影響整個檢測方法的靈敏度和準確定量。
[0003] 基于類似抗原-抗體作用的分子印跡固相萃取技術具有高選擇性和特異性，是一 種具有廣泛應用前景的固相萃取材料。如果能像抗體一樣，合成某些類似抗體的對阿奇霉 素具有高選擇性的高分子吸附材料，可大大提高阿奇霉素檢測的靈敏度和準確性。
[0004] 分子印跡（molecularimprinting)是基于分子識別理論而迅速發(fā)展起來的一個 新的研究領域，分子印跡技術（MIT)也被稱為制造"塑料抗體"的技術。分子印跡整體微柱 (molecularlyimprintedpolymermonolithicmicro-column,MIPMMC) ^一類集成了分子 印跡的立體選擇性和整體柱制備簡單、柱壓低W及傳質速率快等優(yōu)點，因此它具有特殊的 分子結構和官能團，能選擇性地識別印跡分子或其結構類似物。
[0005] 有機聚合物基質分子印跡整體柱的制備較簡單，通常是將一定比例的模板分子、 功能單體、交聯(lián)劑、致孔劑和引發(fā)劑的混合溶液注入空的管柱（通常為不誘鋼管或石英毛 細管）中，密封，通過熱引發(fā)或光引發(fā)進行原位聚合反應，再用有機溶劑洗凈模板分子、殘 余單體和致孔劑。分子印跡整體柱內(nèi)的印跡位點完整，非特異性結合位點比本體聚合的少， 具有較高的選擇識別能力和較好的色譜性能。其制備方法及后處理操作簡單，克服了填充 柱分子印跡聚合物（molecularlyimprintedpolymers,MIPs)材料制備的諸多不足。可作 為色譜的固定相、固相萃取材料、生物傳感器和化學反應催化劑等，已被廣泛用于環(huán)境、生 物、藥物分析、食品分析等領域。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 為了克服現(xiàn)有技術的不足，本發(fā)明的首要目的是提供一種用于檢測阿奇霉素的分 子印跡整體微柱的制備方法。該制備方法成本低廉，操作簡單。
[0007] 本發(fā)明的另一個目的是提供通過上述制備方法制備得到的用于檢測阿奇霉素的 分子印跡整體微柱。該分子印跡整體微柱對阿奇霉素有高選擇性和親和性，對阿奇霉素的 回收率達90 %W上。
[000引本發(fā)明的目的是通過W下技術方案實現(xiàn)的：
[0009] 一種用于檢測阿奇霉素的分子印跡整體微柱的制備方法，包括W下步驟：將模板、 混合致孔劑、功能單體、交聯(lián)劑和引發(fā)劑在50~80°C聚合12~4她，除去模板后，即得用于 檢測阿奇霉素的分子印跡整體微柱。
[0010] 所述的模板為螺旋霉素或替米考星。
[0011] 所述的混合致孔劑為良性溶劑與非良性溶劑的混合體系。
[0012] 所述的模板、功能單體、交聯(lián)劑、良性溶劑、非良性溶劑和引發(fā)劑的比例為 0. 04mmol:0. 04 ~0. 32mmol:0. 04 ~1. 6mmol: 50 ~200yL:300 ~450yL:1 ~lOmg;分 子印跡整體微柱的體積為20~60yL。
[0013] 所述的功能單體為甲基丙締酸、丙締酸、2-己締基化晚、4-己締基化晚、甲基丙締 酸哲己醋、對己締苯甲酸或丙締酷胺中的一種或多種。
[0014] 所述的交聯(lián)劑為己二醇二甲基丙締酸醋、S哲甲基丙烷S甲基丙締酸醋或二己締 苯中的一種或多種。
[001引所述的良性溶劑與非良性溶劑的混合體系中，良性溶劑/非良性溶劑為甲苯/ 十二醇，甲苯/庚燒，環(huán)己醇/十二醇，二甲基甲酯胺/十二燒，四氨快喃/異辛燒中的一種 W上；優(yōu)選的混合致孔劑的混合體系為體積比為1:4的甲苯與十二醇的混合液?；旌现驴?劑一方面要保證模板的充分溶解，另一方面混合致孔劑的比例對制備的分子印跡整體微柱 透液性、表面特性具有重要影響，同時致孔劑對印跡聚合物在使用介質體系中阿奇霉素的 識別也非常關鍵，當致孔劑選擇甲苯-十二醇（l:4，v/v)時，能夠制備出對阿奇霉素具有高 度特異性識別的分子印跡整體微柱。
[0016] 所述的引發(fā)劑為水溶性引發(fā)劑或油溶性引發(fā)劑；所述的油溶性引發(fā)劑為偶氮二異 了膳；所述的水溶性引發(fā)劑為過硫酸錠。
[0017] 一種用于檢測阿奇霉素的分子印跡整體微柱的制備方法，其優(yōu)選的具體步驟為：
[001引 （1)預聚物的制備：向模板中加入混合致孔劑，禍旋至模板溶解，加入功能單體， 超聲，靜置，得到預聚物；
[0019] 似聚合固化；向預聚物中加入交聯(lián)劑和引發(fā)劑，超聲，通氮氣，用移液槍精確移 取一定混合體系至一端封口的小槍頭里，密封，真空干燥箱中聚合，得到聚合物；
[0020] (3)用于檢測阿奇霉素的分子印跡整體微柱的制備；槍頭連接注射器，結合可調 流速注射累，溶劑A洗漆去模板，溶劑B洗漆后，即得用于檢測阿奇霉素的分子印跡整體微 柱。
[002U步驟（1)中所述的超聲時間為2min;靜置時間為比；
[002引步驟似中所述的超聲時間為5min;所述的通氮氣時間為5min;所述體積為20~ 60yL;所述的真空干燥箱中聚合的溫度為50~80°C，時間為12~4她。
[002引步驟做中所述注射器規(guī)格為2~10血。
[0024] 步驟（3)中所述的溶劑A為己酸與甲醇的混合溶液，混合溶液中己酸與甲醇的體 積比為1:9 (v/v);所述的溶劑A洗漆的流速為0. 2mL/min;
[002引步驟做中所述的溶劑B為甲醇，體積為6血。
[0026] 一種用于檢測阿奇霉素的分子印跡整體微柱由上述制備方法獲得，所述的的分子 印跡整體微柱對阿奇霉素的回收率為90%W上。
[0027] 根據(jù)上述所述的制備方法制備得到的用于檢測阿奇霉素的分子印跡整體微柱，該 分子印跡整體微柱對阿奇霉素的回收率達90%W上。對阿奇霉素顯示高的交叉反應，具有 高的選擇性和特異性，作為分析動物組織、飼料及環(huán)境水等基質中阿奇霉素的樣品凈化前 處理材料有著廣泛的應用前景。
[002引本發(fā)明的分子印跡整體微柱，經(jīng)試驗檢測發(fā)現(xiàn)；將該MIPMMC用于固相萃取凈化 (15mg/槍頭），聚合物結合阿奇霉素的吸附量約為30yg/mg聚合物；在豬肉中添加阿奇霉 素回收率試驗表明，在0.5~lOng/g濃度添加水平范圍內(nèi)，阿奇霉素回收率大于86% ;本 發(fā)明MIPMMC通過注射器與注射累連接工作，重復使用10次后，阿奇霉素的回收率仍然大于 80%。
[0029] 本發(fā)明相對于現(xiàn)有技術具有如下的優(yōu)點及效果：
[0030] (1)本發(fā)明制備MIPMMC時，采用的致孔劑為甲苯-十二醇（l:4，v/v)，既有利于模 板的溶解，而且制備的整體微柱的透液性能良好，使制備的印跡聚合物特異性識別能力強， 使用方便。
[0031] (2)本發(fā)明的制備方法后處理簡單，無需研磨過篩，有效的克服了傳統(tǒng)聚合方式的 繁瑣前處理，同時避免了對有效印跡孔穴的破壞，具有較高的吸附容量。
[003引 做本發(fā)明的MIPMMC在己膳、己酸己醋、水加8)中對阿奇霉素呈現(xiàn)高的親和性 和選擇性，回收率大于90%。
[0033] (4)本發(fā)明W對螺旋霉