高純度低分子量肝素鈉的制備方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥原料制備領域，具體涉及一種高純度低分子量肝素鈉的制備方法。
【背景技術】
[0002]肝素鈉是粘多糖硫酸酯類抗凝血藥，屬粘多糖類物質。其藥物功能主要體現(xiàn)在:治療各種疾病并發(fā)的播散性血管內早期凝血；預防動、靜脈血栓和肺栓塞；治療動、靜脈血栓和肺栓塞，缺血性腦卒中，不穩(wěn)定型心絞痛，急性心肌梗塞；人工心肺、腹膜透析或血液透析時作為抗凝血藥物；作為溶血栓療法的維持治療，用于輸血時預防血液凝固及血庫保存鮮血等體外抗凝劑。
[0003]純化的肝素鈉過程主要是對粗品肝素鈉進行除雜和脫色，現(xiàn)有技術中，肝素鈉的純化主要有兩種:①在不同pH條件下采用高錳酸鉀和過氧化氫兩步氧化法，②過氧化氫分次加入的二次氧化法，經(jīng)這兩種方法處理后再以有機溶劑進行分級沉淀獲得純化的肝素鈉。但第一種方法的缺點是產品的活性損失大、色澤差，產生的二氧化錳較難濾除，且二氧化錳對肝素鈉有部分吸附作用，同時得到肝素外用級或類肝素等副產品，使產品回收率較低；第二種方法所得產品色澤較好，目前應用比較廣泛，但可能是二次氧化對肝素鈉結構造成破壞，難以得到較高純度的低分子量肝素鈉。
[0004]低分子肝素是從普通肝素通過降解得到的小分子肝素制品，具有生物利用率高、血漿半衰期長等優(yōu)點，特別是其引起的出血副作用大幅降低。目前高純度低分子量肝素鈉的制備方法生產周期長、得率低，工藝復雜而且制得的產品質量不穩(wěn)定。

【發(fā)明內容】

[0005]針對現(xiàn)有技術不足，本發(fā)明提供了一種高純度的低分子量肝素鈉的制備方法。
[0006]本發(fā)明解決上述技術問題采用的技術方案為:高純度低分子量肝素鈉的制備方法，包括以下步驟:
[0007]①粗品低分子量肝素鈉的制備
[0008]a.將粗品肝素鈉溶于生理鹽水中，充分攪拌溶解后，向溶液中邊攪拌邊滴加堿液至沉淀產生，靜置后濾去不溶物得肝素鈉溶液；
[0009]b.調節(jié)a步驟所得的肝素鈉溶液pH為5?6，并將肝素鈉溶液降溫至I?8°C，分3次加入總重量為粗品肝素鈉1.2%的亞硝酸鈉，每次加入1/3的亞硝酸鈉，并充分攪拌2?3h后再行加入，最終得粗品低分子量肝素鈉溶液；
[0010]②粗品低分子量肝素鈉的純化
[0011]C.將b步驟所得粗品低分子量肝素鈉溶液用堿液調節(jié)pH為8?9，并加入為溶液質量4?5%的氯化鈉，充分攪拌后采用陰離子交換柱吸附；
[0012]d.采用濃度為3?5%的氯化鈉溶液洗滌，并采用濃度為15?25%的氯化鈉溶液洗脫，將洗脫液經(jīng)超濾膜過濾，所得濾液加入2倍的乙醇并充分攪拌，用于沉淀肝素鈉，得沉淀物；
[0013]e.將沉淀物脫鹽及脫水后，于30?50°C下抽真空干燥得純化肝素鈉；
[0014]f.將所得純化肝素鈉采用凝膠過濾，經(jīng)殺菌消毒處理后得高純度低分子量肝素鈉。
[0015]進一步地，所述陰離子交換柱為弱堿性離子交換柱D315。
[0016]進一步地，所述堿液為NaOH溶液。
[0017]進一步地，所述超濾膜為5000D的超濾膜。
[0018]按照本制備方法制得的低分子肝素鈉抗FXa效價在120?180IU/mg，平均分子量在 2200 ?3000Da，抗 FIIa 效價在 I ?8IU/mg。
[0019]按照本制備方法制得的低分子肝素鈉抗FXa效價在140?150IU/mg，平均分子量在 2400 ?2600Da，抗 FIIa 效價在 1.5 ?2IU/mg。
[0020]本發(fā)明所具備的優(yōu)點:
[0021]1、本發(fā)明的原料-粗品肝素鈉來源豐富，得率可達85%以上，所得產品純度高、質量穩(wěn)定，成本低，無毒副作用，可進一步制備成注射劑、膠囊劑等。
[0022]2、工藝簡單，無廢液排放，工藝條件環(huán)保。
[0023]3、本發(fā)明制得的產品抗FXa效價在120?180IU/mg，平均分子量在2200?3000Da JjtFIIa效價在I?8IU/mg，綜合質量較高。
【具體實施方式】
[0024]下面結合具體實施例對本發(fā)明做進一步的闡述。
[0025]實施例1:高純度低分子量肝素鈉的制備方法，包括以下步驟:
[0026]①粗品低分子量肝素鈉的制備
[0027]a.將粗品肝素鈉溶于生理鹽水中，充分攪拌溶解后，向溶液中邊攪拌邊滴加堿液至沉淀產生，靜置后濾去不溶物得肝素鈉溶液；
[0028]b.調節(jié)a步驟所得的肝素鈉溶液pH為5?6，并將肝素鈉溶液降溫至4°C，分3次加入總重量為粗品肝素鈉1.2%的亞硝酸鈉，每次加入1/3的亞硝酸鈉，每次加入時要緩慢加入并充分攪拌2h后再次加入，最終得粗品低分子量肝素鈉溶液；
[0029]②粗品低分子量肝素鈉的純化
[0030]c.將b步驟所得粗品低分子量肝素鈉溶液用堿液調節(jié)pH為8?9，并加入為溶液質量5%的氯化鈉，充分攪拌后采用陰離子交換柱吸附；
[0031]d.采用濃度為5%的氯化鈉溶液洗滌，并采用濃度為20%的氯化鈉溶液洗脫，將洗脫液經(jīng)超濾膜過濾，所得濾液加入2倍的乙醇并充分攪拌，用于沉淀肝素鈉，得沉淀物；
[0032]e.將沉淀物脫鹽及脫水后，于40°C下抽真空干燥得純化肝素鈉；
[0033]f.將所得純化肝素鈉采用凝膠過濾，經(jīng)殺菌消毒處理后得高純度低分子量肝素鈉。
[0034]進一步地，所述陰尚子交換柱為弱堿性尚子交換柱D315 ;所述堿液為NaOH溶液；所述超濾膜為5000D的超濾膜，可以濾去絕大部分分子量大于6000Da的肝素鈉。
[0035]經(jīng)測試按照本制備方法制得的低分子肝素鈉抗FXa效價在147IU/mg，平均分子量在2200?3000Da J^FIIa效價在2.0IU/mg，吸光度及各項藥檢、理化指標軍達到中國藥典標準。
[0036]實施例2:高純度低分子量肝素鈉的制備方法，包括以下步驟:
[0037]①粗品低分子量肝素鈉的制備
[0038]a.將粗品肝素鈉溶于生理鹽水中，充分攪拌溶解后，向溶液中邊攪拌邊滴加堿液至沉淀產生，靜置后濾去不溶物得肝素鈉溶液；
[0039]b.調節(jié)a步驟所得的肝素鈉溶液pH為5?6，并將肝素鈉溶液降溫至I°C，分3次加入總重量為粗品肝素鈉1.2%的亞硝酸鈉，每次加入1/3的亞硝酸鈉，并充分攪拌3h后再行加入，最終得粗品低分子量肝素鈉溶液；
[0040]②粗品低分子量肝素鈉的純化
[0041]c.將b步驟所得粗品低分子量肝素鈉溶液用堿液調節(jié)pH為8?9，并加入為溶液質量4%的氯化鈉，充分攪拌后采用陰離子交換柱吸附；
[0042]d.采用濃度為4%的氯化鈉溶液洗滌，并采用濃度為25 %的氯化鈉溶液洗脫，將洗脫液經(jīng)超濾膜過濾，所得濾液加入2倍的乙醇并充分攪拌，用于沉淀肝素鈉，得沉淀物；
[0043]e.將沉淀物脫鹽及脫水后，于35°C下抽真空干燥得純化肝素鈉；
[0044]f.將所得純化肝素鈉采用凝膠過濾，經(jīng)殺菌消毒處理后得高純度低分子量肝素鈉。
[0045]進一步地，所述陰尚子交換柱為弱堿性尚子交換柱D315 ;所述堿液為NaOH溶液；所述超濾膜為5000D的超濾膜，可以濾去絕大部分分子量大于6000Da的肝素鈉。
[0046]經(jīng)測試按照本制備方法制得的低分子肝素鈉抗FXa效價在142IU/mg，平均分子量在2200?3000Da J^FIIa效價在1.7IU/mg，吸光度及各項藥檢、理化指標軍達到中國藥典標準。
【主權項】
1.高純度低分子量肝素鈉的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: ①粗品低分子量肝素鈉的制備 a.將粗品肝素鈉溶于生理鹽水中，充分攪拌溶解后，向溶液中邊攪拌邊滴加堿液至沉淀產生，靜置后濾去不溶物得肝素鈉溶液； b.調節(jié)a步驟所得的肝素鈉溶液pH為5~6，并將肝素鈉溶液降溫至1~8°C，分3次加入總重量為粗品肝素鈉1.2%的亞硝酸鈉，每次加入1/3的亞硝酸鈉，并充分攪拌2~3h后再行加入，最終得粗品低分子量肝素鈉溶液； ②粗品低分子量肝素鈉的純化 c.將b步驟所得粗品低分子量肝素鈉溶液用堿液調節(jié)pH為8~9，并加入為溶液質量4-5%的氯化鈉，充分攪拌后采用陰離子交換柱吸附； d.采用濃度為3~5%的氯化鈉溶液洗滌，并采用濃度為15~25%的氯化鈉溶液洗脫，將洗脫液經(jīng)超濾膜過濾，所得濾液加入2倍的乙醇并充分攪拌，用于沉淀肝素鈉，得沉淀物； e.將沉淀物脫鹽及脫水后，于30~50°C下抽真空干燥得純化肝素鈉； f.將所得純化肝素鈉采用凝膠過濾，經(jīng)殺菌消毒處理后得高純度低分子量肝素鈉。
2.根據(jù)權利要求1所述的高純度低分子量肝素鈉的制備方法，其特征在于:步驟c中，所述陰1?子交換柱為弱堿性1?子交換柱D315。
3.根據(jù)權利要求1所述的高純度低分子量肝素鈉的制備方法，其特征在于:步驟a和c中，所述堿液為NaOH溶液。
4.根據(jù)權利要求1所述的高純度低分子量肝素鈉的制備方法，其特征在于:步驟d中，所述超濾膜為5000D的超濾膜。
5.根據(jù)權利要求1所述的高純度低分子量肝素鈉的制備方法，其特征在于:按照本制備方法制得的低分子肝素鈉抗FXa效價在120?180IU/mg，平均分子量在2200?3000Da，抗FIIa效價在I?8IU/mgo
6.根據(jù)權利要求1所述的高純度低分子量肝素鈉的制備方法，其特征在于:按照本制備方法制得的低分子肝素鈉抗FXa效價在140?150IU/mg，平均分子量在2400?2600Da，抗FIIa效價在1.5?2IU/mgo
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種高純度低分子量肝素鈉的制備方法，在一定條件下，通過粗品低分子量肝素鈉的制備以及粗品低分子量肝素鈉的純化制得高純度低分子量肝素鈉。與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的工藝簡單，無廢液排放，工藝條件環(huán)保；原料來源豐富，產品得率高，所得產品純度高、質量穩(wěn)定，成本低，無毒副作用，可進一步制備成注射劑、膠囊劑等。
【IPC分類】C08B37-10
【公開號】CN104829752
【申請?zhí)枴緾N201510271813
【發(fā)明人】王芃
【申請人】蘇州鴻洋醫(yī)藥科技有限公司
【公開日】2015年8月12日
【申請日】2015年5月26日