新型巴弗洛霉素、其提取微生物和提取方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及巴弗洛霉素類抗生素技術領域，具體而言，涉及一種新型巴弗洛霉素、 其提取微生物和提取方法。
【背景技術】
[0002] 巴弗洛霉素類抗生素的發(fā)現(xiàn)始于20世紀80年代初期，該類抗生素是一類含有16 元環(huán)骨架的多烯大環(huán)內(nèi)酯類抗生素。同時巴弗洛霉素又是一類在化學結(jié)構上極為特殊的大 環(huán)內(nèi)酯抗生素，其大部分衍生物的側(cè)鏈結(jié)構中都含有一個六元環(huán)的半縮醛結(jié)構。
[0003] 目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)并報道了 14種該類抗生素，其中，巴弗洛霉素A1、A2、B1、B2、C1、C2、 D、E、F、G、H、I、J，均由國外科學家首先報道，巴弗洛霉素K則由我國科學家首次報道。其 中，巴弗洛霉素D和E的側(cè)鏈半縮醛環(huán)呈開環(huán)狀態(tài)，從而有別于其它12種巴弗洛霉素。
[0004] 巴弗洛霉素具有抗細菌、抗真菌、抗腫瘤以及免疫抑制劑功能。某些巴弗洛霉素可 專一性抑制空泡型ATP酶。其中，巴弗洛霉素A1應用最廣泛，此外巴弗洛霉素A1還具有抗 瘧疾活性。巴弗洛霉素B1和C1是潛在的抗腫瘤藥物，可用來治療骨溶性疾病。巴弗洛霉 素D和E具有很強殺蟲活性。巴弗洛霉素K則具有廣譜抗真菌活性。
[0005] 巴弗洛霉素類抗生素具有共同的16元環(huán)骨架結(jié)構，各衍生物間的差別主要在于 其側(cè)鏈結(jié)構和主體骨架結(jié)構上取代基的不同。鑒于巴弗洛霉素所具備的對常見植物病原真 菌及格蘭仕陽性病原細菌的抗性，尋找新型結(jié)構的巴弗洛霉素并將其應用到農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的植 物病害防控中是人們亟待解決的一個技術問題。
[0006] 有鑒于此，特提出本發(fā)明。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的第一目的在于提供一種新型的新型巴弗洛霉素，該化合物的分子式為 C4(lH65N3On，其分子量為763. 97 ;該化合物具有廣譜抑菌活性，可以很好的應用到植物病害 防治中。
[0008] 本發(fā)明的第二目的在于提供一種所述的新型巴弗洛霉素的生產(chǎn)菌株，該菌株的分 類命名為卡伍爾鏈霉菌（Streptomycescavourensis)。
[0009] 本發(fā)明的第三目的在于提供一種利用所述的生產(chǎn)菌株制取新型巴弗洛霉素的方 法。
[0010] 為了實現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，特采用以下技術方案：
[0011] 本發(fā)明提供了一種新型巴弗洛霉素，其結(jié)構式為：
[0012]
【主權項】
1. 一種新型巴弗洛霉素，其特征在于，其結(jié)構式為：
2. -種用于提取權利要求1所述的新型巴弗洛霉素的微生物，其特征在于，所述微生 物的分類命名為卡伍爾鏈霉菌（Streptomyces cavourensis);其保藏單位為：中國微生物 菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址為：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中 國科學院微生物研宄所，保藏日期為：2014年11月06日；保藏編號為：CGMCC No. 9946。
3. -種根據(jù)權利要求2所述的微生物提取新型巴弗洛霉素的方法，其特征在于，包括 以下步驟： 1) 、將篩選分離得到的卡伍爾鏈霉菌以劃線的方式接種于菌種斜面培養(yǎng)基于26-30°C 避光培養(yǎng)至長出成熟孢子，得到斜面種子； 2) 、將所述斜面種子接種到一級液體種子培養(yǎng)基中，于26-30°C搖床培養(yǎng)22-26小時， 得到一級液體種子； 3) 、將所述一級液體種子接種到二級液體種子培養(yǎng)基中，于26-30°C搖床培養(yǎng)22-26小 時，得到二級液體種子； 4) 、將所述二級液體種子接種到發(fā)酵液體培養(yǎng)基中，于26-30°C搖床培養(yǎng)92-100小時， 得到發(fā)酵液； 5) 、收集所述發(fā)酵液，在攪拌條件下加入酸，并調(diào)節(jié)至pH為2. 0-3. 5,離心收集下層沉 淀物，得到粗提物； 6) 、利用丙酮抽提所述粗提物2-3次，得到丙酮抽提液，并依次在40-45°C水浴條件下 進行減壓蒸發(fā)除去丙酮，鼓風干燥，得到水相烘干物； 7) 、將所述水相烘干物利用丙酮復溶后抽濾，得到丙酮抽濾液，并將所述丙酮抽濾液于 40-45°C的水浴條件下濃縮至無沉淀析出，得到丙酮濃縮液； 8) 、在所述丙酮濃縮液中按照所含丙酮體積的10-15倍、1/6-1/5分別加入蒸餾水以及 非極性大孔樹脂，并調(diào)PH為8-8. 5后吸附3-5小時，過濾收集吸附后大孔樹脂； 9) 、按照體積倍數(shù)計，向所述吸附后大孔樹脂加入5-10倍的80-90%的丙酮水溶液后 調(diào)pH為8-9后解析2-4小時，收集解析液并于40°C _45°C水浴條件下減壓蒸發(fā)掉所述解吸 液中的丙酮，得到剩余水相； 10) 、將所述剩余水相用等體積的乙酸乙酯萃取后靜置分層，取上層乙酸乙酯；并將所 述上層乙酸乙酯于40°C -45°C水浴條件下蒸干，得到蒸干提取物； 11) 、向所述蒸干提取物中滴加乙酸乙酯，直至蒸干提取物全部溶解，再加入體積為滴 加所用乙酸乙酯20-30倍的正己烷，于-KTC-0°C重結(jié)晶8-15小時后進行抽濾，收集重結(jié) 晶后抽濾液； 12)、將所述重結(jié)晶后抽濾液于40°C-45°C水浴條件下減壓蒸干，再次滴加乙酸乙酯進 行溶解后，繼續(xù)加入體積為所滴加乙酸乙酯50-60倍的正己烷，于-KTC_0°C重結(jié)晶8-15 小時，待析出沉淀后進行抽濾，得到粉末狀新型巴弗洛霉素。
4. 根據(jù)權利要求3所述的方法，其特征在于，在步驟1)中，所述菌種斜面培養(yǎng)基按照重 量份數(shù)計，其原料組分包括：葡萄糖1. 6-2. 0份、蛋白胨0. 3-0. 6份、黃豆餅粉0. 2-0. 4份、 酵母膏0. 1份、碳酸鈣0. 025份，瓊脂粉1. 8-2. 2份。
5.根據(jù)權利要求3所述的方法，其特征在于，在步驟2)中，所述一級液體種子培養(yǎng)基按 照重量份數(shù)計，其原料組份包括：葡萄糖1. 6-2. 0份、蛋白胨0. 3-0. 6份、黃豆餅粉0. 2-0. 4 份、酵母膏〇.1份、碳酸鈣〇.025份。
6. 根據(jù)權利要求3所述的方法，其特征在于，在步驟3)中，所述二級液體種子培養(yǎng)基按 照重量份數(shù)計，其原料組份包括：葡萄糖1. 6-2. 0份、蛋白胨0. 3-0. 6份、黃豆餅粉0. 2-0. 4 份、酵母膏〇. 1份、碳酸鈣〇. 025份。
7. 根據(jù)權利要求3所述的方法，其特征在于，在步驟4)中，所述發(fā)酵液體培養(yǎng)基按照重 量份數(shù)計，其原料組份包括：葡萄糖1. 8-2. 2份、蛋白胨0. 5-0. 7份、黃豆餅粉0. 2-0. 4份、 磷酸氫二鉀（K2HPO4) 0. 02-0. 04份、硫酸鎂（MgSO4) 0. 008-0. 012份、酵母膏0. 15份、碳酸鈣 0.02 份。
8. 根據(jù)權利要求3-7任一項所述的方法，其特征在于，在步驟6)中，每次抽提的時間為 3-4小時，且鼓風干燥的溫度為40-50°C。
9. 根據(jù)權利要求8所述的方法，其特征在于，在步驟9)中，所述蒸發(fā)采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進 行。
10. 根據(jù)權利要求9所述的方法，其特征在于，在步驟10)中，所述萃取的次數(shù)為2-3 次。
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種新型巴弗洛霉素、其提取微生物和提取方法。屬于巴弗洛霉素類抗生素技術領域。該新型巴弗洛霉素化合物的分子式為C40H65N3O11，其分子量為763.97，是一種新型結(jié)構的巴弗洛霉素，該抗生素對多種農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上的常見植物病原真菌及格蘭仕陽性病原菌(如辣椒炭疽、稻瘟、水稻白葉枯、番茄灰霉、番茄早疫以及甜瓜枯萎等病原菌)具有強烈的抗性，尤其對農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上極難防治的馬鈴薯晚疫病具有較強抗性，抑菌譜廣，可作為一種新型農(nóng)用抗生素使用。CGMCC No.994620141106
【IPC分類】C12R1-465, C07D407-06, C12P17-16, C12N1-20
【公開號】CN104817547
【申請?zhí)枴緾N201510117541
【發(fā)明人】黃永春
【申請人】農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護科研監(jiān)測所
【公開日】2015年8月5日
【申請日】2015年3月17日