一種黑牛肝菌母種低溫保藏方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及食用真菌栽培技術(shù)菌種保藏領(lǐng)域，具體而言，涉及一種黑牛肝菌母種 低溫保藏方法。
【背景技術(shù)】
[0002]黑牛肝菌（Phlebopus portentosu)，是熱帶地區(qū)珍貴的、最受消費(fèi)者喜愛(ài)的食用 菌，分布于斯里蘭卡、越南、印度尼西亞、泰國(guó)、巴西、墨西哥、澳大利亞、新西蘭及我國(guó)云南、 廣西和海南等地。黑牛肝菌品質(zhì)鮮嫩、味道鮮美、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值豐富、高蛋白、低脂肪，富含17種 人體必需氨基酸及豐富的磷、鉀、鈣、鎂、鐵、鋅等人體必須的礦質(zhì)元素，是較好的健康食品 并具有很好的藥用價(jià)值，深受消費(fèi)者喜愛(ài)。目前已可用栽培腐生菌的方式進(jìn)行人工栽培，以 及接種鳳凰木、咖啡、柚子、芒果寄主樹(shù)等寄主樹(shù)進(jìn)行仿生栽培。
[0003] -般食用菌及微生物母種常將菌種轉(zhuǎn)接于斜面培養(yǎng)，菌絲長(zhǎng)滿后于低溫4°C條件 保藏，或?qū)⒕N塊放于試管裝的無(wú)菌水中，然后保藏于低溫4°C條件下的方法進(jìn)行母種的中 短期保藏。此方法的主要優(yōu)點(diǎn)是方法簡(jiǎn)便、成本低，中短期可以很好的保持保藏母種的優(yōu)良 性狀，是一般食用菌及微生物母種常用且較為有效的方法。但黑牛肝菌是一種高溫食用菌， 適宜菌絲生長(zhǎng)的最適溫度28°C~30°C。采用一般微生物及食用菌常用4°C低溫保藏方法保 藏黑牛肝菌母種，在保藏5天后菌絲即死亡。因此，迫切需要一種簡(jiǎn)便、有效、可利用常用設(shè) 備進(jìn)行保藏黑牛肝菌母種的方法。
[0004] 申請(qǐng)?zhí)枮?01310546293. 9的發(fā)，發(fā)明專利公開(kāi)了一種黑牛肝菌母種保藏方法，該 保藏方法包括在特定固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)菌絲以及取菌絲塊將其放入裝有滅菌蒸餾水的容 器中，密封容器，在10°c~15°C恒溫保藏。但是，直接在10°C~15°C恒溫保藏，菌體自身營(yíng) 養(yǎng)物質(zhì)消耗嚴(yán)重，菌體保藏一年后活化，菌體活力顯著降低，菌絲不夠濃密和粗壯，生長(zhǎng)緩 慢，栽培得到的子實(shí)體重量輕，品質(zhì)降低；并且該固體培養(yǎng)基成分較多，特別涉及到紅壤土， 而紅壤土的成分變化較大，并且不易取得。
[0005]有鑒于此，特提出本發(fā)明。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的在于提供一種黑牛肝菌母種低溫保藏方法，該保藏方法簡(jiǎn)便、有效， 并可利用常規(guī)設(shè)施低溫保藏黑牛肝菌（Phlebopus portentosus)母種，得到的黑牛肝菌母 種活力及優(yōu)良性狀保持時(shí)間長(zhǎng)久。
[0007] 為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，特采用以下技術(shù)方案：
[0008] 本發(fā)明還提供了一種黑牛肝菌母種低溫保藏方法，包括以下步驟：
[0009] (a)、將黑牛肝菌子實(shí)體在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)菌絲，制得菌絲塊；
[0010] (b)、將所述菌絲塊浸泡在含有無(wú)菌蒸餾水的無(wú)菌容器中，密封容器，在10-15°c條 件下，放置10-30d ;然后放置于3. 5-4. 5°C進(jìn)行低溫保藏。
[0011] 本發(fā)明提供的黑牛肝菌母種低溫保藏方法，將黑牛肝菌子實(shí)體在固體培養(yǎng)基上培 養(yǎng)后，制成菌絲塊；將菌絲塊浸泡在無(wú)菌的蒸餾水中，先放置于10-15°C條件下預(yù)冷處理， 放置l〇-3〇d ;然后再放置于3. 5-4. 5°C進(jìn)行低溫保藏，通過(guò)逐步冷卻的方式保藏黑牛肝菌 母種。經(jīng)測(cè)試，使用本發(fā)明提供的黑牛肝菌母種低溫保藏方法保藏黑牛肝菌母種，其菌絲活 力及菌種栽培性狀與一代母種相同，保存黑牛肝菌母種活力及優(yōu)良性狀達(dá)3年，解決了黑 牛肝菌母種中短期簡(jiǎn)便種保藏的問(wèn)題，為規(guī)模化栽培提供了有力保障。
[0012] 為了保持菌絲活力及菌種栽培性狀，且易于保藏，優(yōu)選地，所述菌絲塊的大小為 0? 5 cm~1 cm X0. 5 cm~1 cm。即菌絲塊的長(zhǎng)寬為0? 5 cm~1 cm X0. 5 cm~1 cm。
[0013] 為了便于黑牛肝菌子實(shí)體培養(yǎng)，得到更多的菌絲，優(yōu)選地，在步驟（a)中，所述黑 牛肝菌子實(shí)體培養(yǎng)前切塊，得到組織塊；
[0014] 將所述組織塊培養(yǎng)，至菌絲長(zhǎng)滿培養(yǎng)基，即得所述菌絲塊。
[0015] 優(yōu)選地，所述培養(yǎng)的溫度為26-30°C，優(yōu)選為28°C。該溫度條件下，培養(yǎng)22-28天 菌絲即長(zhǎng)滿培養(yǎng)基。黑牛肝菌培養(yǎng)得到的菌絲健壯，保藏后，能很好的保持母種的活力及優(yōu) 良性狀。
[0016] 具體地，所述培養(yǎng)采用平板培養(yǎng)基或斜面培養(yǎng)基進(jìn)行。即將黑牛肝菌的組織塊接 種于平板培養(yǎng)基或斜面培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，得到菌絲塊。
[0017] 進(jìn)一步地，所述培養(yǎng)選用的容器包括玻璃試管、培養(yǎng)皿和塑料試管。
[0018] 為了使菌絲體保持更久的活力。優(yōu)選地，在步驟（b)中，容器中無(wú)菌蒸餾水的體積 占所述容器體積的1/5-1/3。
[0019] 為了便于操作，得到無(wú)菌水的同時(shí)得到無(wú)菌的容器，優(yōu)選地，在步驟（b)中，所述 容器加入蒸餾水，于121°c滅菌20min，冷卻待用。
[0020] 具體地，在步驟（b)中，所述容器為18mmX 180mm規(guī)格的試管，每支試管裝蒸餾水 10ml~15ml，每支試管放置3塊~5塊黑牛肝菌母種，用硅膠塞塞緊試管口。
[0021] 優(yōu)選地，所述固體培養(yǎng)基，包括以下成分：
[0022]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種黑牛肝菌母種低溫保藏方法，其特征在于，包括以下步驟： (a) 、將黑牛肝菌子實(shí)體在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)菌絲，制得菌絲塊； (b) 、將所述菌絲塊浸泡在含有無(wú)菌蒸餾水的無(wú)菌容器中，密封容器，在10-15 °C條件 下，放置10-30d ;然后放置于3. 5-4. 5°C進(jìn)行低溫保藏。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述菌絲塊的大小為0. 5 cm~I cm X0. 5 cm ~I cm0
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟（a)中，所述黑牛肝菌子實(shí)體培養(yǎng) 前切塊，得到組織塊； 將所述組織塊培養(yǎng)，至菌絲長(zhǎng)滿培養(yǎng)基，即得所述菌絲塊。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述培養(yǎng)的溫度為26-30°C，優(yōu)選為28°C。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述培養(yǎng)采用平板培養(yǎng)基或斜面培養(yǎng)基 進(jìn)行。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述培養(yǎng)選用的容器包括玻璃試管、培養(yǎng) 皿和塑料試管。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟（b)中，容器中無(wú)菌蒸餾水的體積 占所述容器體積的1/5-1/3。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟（b)中，所述容器加入蒸餾水，于 121°C滅菌20min，冷卻待用。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟（b)中，所述容器為18mmX 180mm 規(guī)格的試管，每支試管裝蒸餾水IOml~15ml，每支試管放置3塊~5塊黑牛肝菌母種，用娃 膠塞塞緊試管口。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述固體培養(yǎng)基，包括以下成 分：
【專利摘要】本發(fā)明涉及食用真菌栽培技術(shù)菌種保藏領(lǐng)域，特別涉及一種黑牛肝菌母種低溫保藏方法，包括以下步驟：將黑牛肝菌子實(shí)體在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)菌絲，制得菌絲塊；將菌絲塊浸泡在含有無(wú)菌蒸餾水的無(wú)菌容器中，密封容器，在10-15℃條件下，放置10-30d；然后放置于3.5-4.5℃進(jìn)行低溫保藏。本發(fā)明提供的黑牛肝菌母種低溫保藏方法，通過(guò)逐步冷卻的方式保藏黑牛肝菌母種，經(jīng)測(cè)試該方法保藏的黑牛肝菌母種，其菌絲活力及菌種栽培性狀與一代母種相同，保存黑牛肝菌母種活力及優(yōu)良性狀達(dá)3年，解決了黑牛肝菌母種中短期簡(jiǎn)便種保藏的問(wèn)題，為規(guī)?；耘嗵峁┝擞辛ΡＵ?。
【IPC分類】C12N1-04
【公開(kāi)號(hào)】CN104762208
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510119416
【發(fā)明人】紀(jì)光燕, 周茂, 紀(jì)光玉, 楊太茂, 楊君巧, 謝飛
【申請(qǐng)人】景洪宏臻農(nóng)業(yè)科技有限公司
【公開(kāi)日】2015年7月8日
【申請(qǐng)日】2015年3月18日