一種卷曲乳桿菌及其在婦女保健產(chǎn)品中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種乳桿菌屬的新菌株及其應(yīng)用，具體涉及一種卷曲乳桿菌，其在調(diào) 節(jié)陰道微環(huán)境、抑制陰道加德納菌（BV致病菌)的同時(shí)，具有明顯的抑制白色念珠菌、病原菌 作用，對(duì)于在日常婦女保健的應(yīng)用具有巨大的優(yōu)勢和潛力。
【背景技術(shù)】
[0002] 醫(yī)療器械作為近代科學(xué)技術(shù)的產(chǎn)品已廣泛應(yīng)用于疾病的預(yù)防、診斷、治療、保健和 康復(fù)過程中，成為現(xiàn)代醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的重要診療手段。但是，與藥品一樣，使用醫(yī)療器械也具 有一定的風(fēng)險(xiǎn)。與風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)的因素包括：（1)設(shè)計(jì)因素。受科學(xué)技術(shù)條件、認(rèn)知水平、工藝 等因素的限制，醫(yī)療器械在研發(fā)過程中不同程度地存在目的單純、考慮單一、設(shè)計(jì)與臨床實(shí) 際不匹配、應(yīng)用定位模糊等問題，造成難W回避的設(shè)計(jì)缺陷。（2)材料因素。醫(yī)療器械許多 材料的選擇源自于工業(yè)，不可避免地要面臨生物相容性、微生物污染，化學(xué)物質(zhì)殘留等實(shí)際 問題，并且醫(yī)療器械無論是材料的選擇，還是臨床應(yīng)用，跨度都非常大，而人體還受著內(nèi)、外 環(huán)境復(fù)雜因素的影響，一種對(duì)于醫(yī)療器械本身非常好的材料，不一定就能完全適用于臨床 使用。而更多的化學(xué)材料對(duì)人體安全性的評(píng)價(jià)，往往不是在短時(shí)間內(nèi)能夠完成的。（3)臨床 應(yīng)用因素。主要是風(fēng)險(xiǎn)比較大的醫(yī)療器械在預(yù)期設(shè)計(jì)、使用過程中與其他醫(yī)療器械協(xié)同、應(yīng) 用人群特性、醫(yī)師對(duì)新醫(yī)療器械的熟練程度等。所有該些都決定了醫(yī)療器械自身及其使用 中固有的潛在風(fēng)險(xiǎn)。在婦科疾病的檢查和診治過程中，如果檢查的器械材料成分欠合理、器 械不干凈或應(yīng)用人群過于敏感，則會(huì)引發(fā)感染。因此改善婦科醫(yī)療器械的材料、成分、與人 體接觸面成分從而增強(qiáng)器械的生物相容性、降低引發(fā)感染的概率、保證檢查的安全性顯得 尤為重要。
[0003] 女性陰道是非常易感染的地方，如果不注意衛(wèi)生常會(huì)導(dǎo)致許多婦科炎癥產(chǎn)生。健 康婦女陰道內(nèi)存在多種微生物，它們與宿主、環(huán)境之間構(gòu)成了相互制約、相互協(xié)調(diào)、動(dòng)態(tài)平 衡的陰道微生態(tài)系統(tǒng)。健康婦女的陰道菌群主要由乳桿菌構(gòu)成，包括卷曲乳桿菌、詹氏乳桿 菌和格氏乳桿菌等。正常情況下乳桿菌對(duì)陰道可W起到保護(hù)作用，而W乳桿菌占優(yōu)勢的陰 道微生態(tài)的奈亂可W導(dǎo)致陰道炎。生活中很多女性使用婦科消毒產(chǎn)品、護(hù)理產(chǎn)品及保養(yǎng)產(chǎn) 品來保持衛(wèi)生和保養(yǎng)，然而也經(jīng)常出現(xiàn)各種各樣的問題。
[0004] 婦科消毒產(chǎn)品用于皮膚粘膜、婦科粘膜清洗抗菌，其主要有效成分大部分為楓、高 猛酸鐘，對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和真菌有抗菌作用，對(duì)皮膚粘膜無刺激，一部分女性 頻繁使用外洗劑、消毒劑來沖洗陰道及外陰W達(dá)到預(yù)防婦科病發(fā)生的目的，但實(shí)際上，該種 做法反而可能產(chǎn)生不良后果，由于在正常情況下，陰道內(nèi)生存著大量對(duì)人有益的桿菌，它們 將陰道表皮細(xì)胞中膽存的糖元分解成乳酸，W維持陰道的酸度，構(gòu)成一道防御致病菌在陰 道內(nèi)繁殖的天然防線。使用消毒劑沖洗或坐浴浸泡，可能破壞陰道的防御功能，各種致病菌 乘虛而入，在陰道內(nèi)大量繁殖而引起多種婦科疾病。對(duì)于陰部用的化妝品，同樣存在上述問 題，如果護(hù)理不當(dāng)，很容易變成細(xì)菌滋生的溫床，導(dǎo)致發(fā)癢、發(fā)炎甚至婦科炎癥的發(fā)生，因此 專家建議不要經(jīng)常、長期濫用消毒劑、化妝品，W防菌群失調(diào)，患上婦科疾病等。
[0005] 進(jìn)一步的，健康婦女陰道內(nèi)存在多種乳桿菌，具有個(gè)體差異性，且乳桿菌各株間抗 致病菌能力差異明顯。選擇乳桿菌益生菌時(shí)，需要綜合考慮乳桿菌的種類，其產(chǎn)酸、產(chǎn)化 能力，及與陰道上皮細(xì)胞粘附的能力，其中乳酸桿菌能否在陰道成功定殖，是乳桿菌及其W 乳桿菌為活性成分的菌劑持續(xù)作用的基礎(chǔ)，也是乳桿菌發(fā)揮療效的關(guān)鍵因素。
[0006] 研究表明：產(chǎn)&〇2乳桿菌是健康婦女陰道內(nèi)的優(yōu)勢菌，是保護(hù)女性陰道免受病原 體感染的重要因素。另外乳桿菌代謝產(chǎn)生的酸和一些抗微生物因子也可有效地抑制其他細(xì) 菌的生長繁殖。
[0007] 在陰部衛(wèi)生及其護(hù)理已經(jīng)廣泛受到大家重視的今天，開發(fā)既能保證衛(wèi)生、又對(duì)女 性健康有益的產(chǎn)品成為研究熱點(diǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種篩選于健康人體、具有活躍穩(wěn)定的生物學(xué)特 性、在每劑量中活菌數(shù)CFU〉1〇9、抑菌能力強(qiáng)的卷曲乳桿菌、菌劑及其在婦女保健相關(guān)產(chǎn)品 方面的應(yīng)用。
[0009] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案1是： 一種卷曲乳桿菌，其特征在于所述卷曲乳桿菌命名為卷曲乳桿菌化actobacillus crispa化S) Lc262-1，在中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中也的保藏編號(hào)為 CGMCC No. 6469。
[0010] 上述卷曲乳桿菌1x262-1從中國健康育齡婦女陰道分泌物中篩選得來，已于2012 年8月22日保藏于在中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中也(簡稱CGMCC)，保 藏地址為：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院，中國科學(xué)院微生物研究所，保藏登記號(hào)為CGMCC No. 6469。
[0011] 本發(fā)明的技術(shù)方案2是： 一種利用權(quán)利要求1所述的卷曲乳桿菌1x262-1 CGMCC No. 6469制成的菌劑，所述菌 劑活性成分為卷曲乳桿菌1x262-1 CGMCC No. 6469。
[0012] W卷曲乳桿菌Lc262-1 CGMCC No. 6469為活性成分制成菌劑，所述菌劑形態(tài)為液 態(tài)或固態(tài)或凝膠態(tài)，其中固態(tài)菌劑的劑型如膠囊或片劑或粉劑，相應(yīng)的，該菌劑同樣具有與 卷曲乳桿菌化actobacillus crispa1:us)Lc262-l CGMCC No. 6469相同或相近的各類用 途，本發(fā)明的技術(shù)方案3是： 如權(quán)利要求1所述的卷曲乳桿菌1x262-1 CGMCC No. 6469在婦科醫(yī)療器械中的應(yīng)用。
[0013] 本發(fā)明的技術(shù)方案4是： 如權(quán)利要求1所述的卷曲乳桿菌1x262-1 CGMCC No. 6469在婦科消毒產(chǎn)品中的應(yīng)用。
[0014] 本發(fā)明的技術(shù)方案5是： 如權(quán)利要求1所述的卷曲乳桿菌1x262-1 CGMCC No. 6469在女性陰部用化妝品中的 應(yīng)用。
[0015] 采用上述技術(shù)方案產(chǎn)生的有益效果在于；（〇本發(fā)明的卷曲乳桿菌株可W長期保 存，并抵抗細(xì)菌性陰道病和各種陰道感染，包括白色念珠菌性陰道炎、淋病、病毒性陰道炎、 W及泌尿道感染等。（2)本發(fā)明的菌株直接采集于健康人體，具有活躍穩(wěn)定的生物學(xué)特性， 無需馴化和復(fù)壯工藝，直接進(jìn)入制劑工藝即可，制劑凍干粉4C條件下保存6個(gè)月活菌率 高。（3)本發(fā)明的菌株及菌劑的活性成分具有抑制加德納菌、抑制白色念珠菌的作用，與市 售對(duì)照菌相比較，具有優(yōu)勢的陰道上皮細(xì)胞黏附力，具有靈長類陰道定殖的優(yōu)勢能力。
【附圖說明】
[0016] 圖1AUB分別是本發(fā)明的卷曲乳桿菌1x262-1菌落形態(tài)的正面、反面照片； 圖2是本發(fā)明的卷曲乳桿菌LC262-1的革蘭氏染色鏡檢照片； 圖3是本發(fā)明的卷曲乳桿菌LC262-1放大不同倍數(shù)的電鏡照片； 圖4是本發(fā)明的卷曲乳桿菌1x262-1 T0、T30、T50的leSrDNA基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳 圖； 圖5是本發(fā)明的卷曲乳桿菌Lc262-1過氧化氨產(chǎn)生反應(yīng)0 min、5 min、10 min結(jié)果圖 片； 圖6是本發(fā)明的卷曲乳桿菌Lc262-1T0、T30、T50的菌落形態(tài)的正面、反面照片； 圖7是本發(fā)明的卷曲乳桿菌1x262-1 TO、T30、T50的革蘭氏染色鏡檢照片； 圖8是本發(fā)明的卷曲乳桿菌LC262-1T0、T30、T50的過氧化氨產(chǎn)生反應(yīng)0 min、5 min、 10 min結(jié)果圖片； 圖9是本發(fā)明的卷曲乳桿菌LC262-1化）和德氏乳桿菌祐）對(duì)陰道加德納菌的抑菌 效果； 圖10是本發(fā)明的卷曲乳桿菌LC262-1祐列2個(gè))和德氏乳桿菌化列1個(gè))對(duì)阿巧波 菌的抑菌效果； 圖11是本發(fā)明的卷曲乳桿菌1x262-1 (左)和德氏乳桿菌(右）對(duì)白色念珠菌的抑菌效 果； 圖12是本發(fā)明的卷曲乳桿菌LC262-1定植中華恒河猴陰道后中華恒河猴陰道微生物 區(qū)部分菌株leSrDNA片段PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳圖； 圖13是本發(fā)明的卷曲乳桿菌在受試動(dòng)物定植后檢出卷曲乳桿菌LC262-1數(shù)量，其中縱 軸為卷曲乳桿菌1x262-1的CFU值，橫軸為各個(gè)動(dòng)物的5個(gè)取樣時(shí)間點(diǎn)；dayl代表定植后 第1天，W此類推。
【具體實(shí)施方式】
[0017] 下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法；所用的材料、試劑 等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0018] 細(xì)菌培養(yǎng)基配制： 1.卷曲乳桿菌Lc262-1選擇性培養(yǎng)基（Rogosa SL)配制： (1) 將瓊脂粉配成溶液，1. 5 g/lOOml去離子水，密封； (2) 放入高壓鍋，1. 0 Ml^a蒸20分鐘；打開超凈臺(tái)，紫外線照射20分鐘W上； (3) 待高壓鍋無壓力后取出瓊脂溶液，加入乳桿菌選擇性培養(yǎng)基（Rogosa化Broth) 5. 97 g/lOOml瓊脂溶液； (4) 加入冰醋酸0. 132ml/100ml瓊脂溶液，密封后于微波爐煮沸2. 3分鐘； (5) 待培養(yǎng)基溫度降至室溫后倒入培養(yǎng)皿，根據(jù)培養(yǎng)皿大小約10ml/個(gè)或2