專利名稱:裂褶菌的培養(yǎng)工藝及其利用的制作方法
本發(fā)明屬于擔(dān)子菌類的培育及利用技術(shù)領(lǐng)域：
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在已有技術(shù)中，中國科學(xué)院微生物研究所用做純種保藏的裂褶菌菌株，其母種培養(yǎng)介質(zhì)是馬鈴薯、葡萄糖、瓊脂或麥芽汁瓊脂，最適溫度24°-26℃，尚未應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)。國外日本“The Japanese Journal Antiobics”Vol.23(2)157-160頁中報(bào)導(dǎo)。裂褶菌培養(yǎng)采用合成培養(yǎng)介質(zhì)，即用化學(xué)成份已知的有機(jī)物或無機(jī)物配制培養(yǎng)介質(zhì)，其成本高，菌絲體得率低(培養(yǎng)5天1升發(fā)酵液含1-5g菌絲體，多糖得率亦低。(培養(yǎng)5天1升發(fā)酵液含0.2-1g多糖)。
本發(fā)明的目的是用黃豆粉等做培養(yǎng)介質(zhì)培養(yǎng)裂褶菌，提高菌絲體及裂褶多糖的得率，并從裂褶菌中提取抗腫瘤、抗放升白及調(diào)整機(jī)體免疫功能、生產(chǎn)抗菌素增效劑的裂褶多糖和人體必需的氨基酸。
本發(fā)明的技術(shù)方案是裂褶菌從腐木上經(jīng)組織分離獲得純菌株南大843，將其接種在PDA或麥芽汁固體斜面培養(yǎng)基上，溫度24℃，生長7-10天，然后轉(zhuǎn)管純化，放入0°-2℃的冰箱中保存?zhèn)溆?。液體發(fā)酵培養(yǎng)用天然黃豆粉等配制培養(yǎng)介質(zhì)，其成份和配比是，100ml培養(yǎng)介質(zhì)含天然黃豆粉0.5-1，葡萄糖或蔗糖3-4，酵母膏0.2，硫酸鎂0.05，磷酸二氫鉀0.1。培養(yǎng)介質(zhì)還可用鹽酸硫胺素做添加劑，每100ml培養(yǎng)介質(zhì)可增加0.001-1mg。250ml搖瓶裝75-150ml培養(yǎng)介質(zhì)，500ml搖瓶裝150-250ml培養(yǎng)介質(zhì)，采用往復(fù)式搖床，振蕩速度80-130次/分，或旋轉(zhuǎn)式搖床，振蕩速度100-200轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)溫度24℃-26℃。在菌絲大量生長時(shí)，菌液由深變淺，由混濁逐漸變清。隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長，發(fā)酵液中還原糖、氨態(tài)氮、PH都逐漸降低，菌絲體重量不斷增加，至第6天多糖含量最高，還原糖降到1%以下，氨態(tài)氮降到15%，PH下降到4.6-4.8，菌球的體積占發(fā)酵液總體積70%，此時(shí)可終止發(fā)酵，發(fā)酵周期為五天。
固體發(fā)酵培養(yǎng)用70-78%的甘蔗渣(或木屑、山芋渣、棉子殼)、1%的蔗糖或葡萄糖、20-28%的麩皮或米糠、1%的石膏或碳酸鈣，加水拌勻、PH自然、裝入菇瓶，在1.5kg/m2的壓力下消毒1小時(shí)，冷卻后，在無菌操作下試管斜面母種接種于菇瓶內(nèi)，一管母種接種1瓶，培養(yǎng)溫度18-26℃，20-30天菌絲體布滿全瓶即可采收。
裂褶菌在液體發(fā)酵培養(yǎng)工藝下生長，每升發(fā)酵菌液中含3-5g裂褶多糖(Schizophyllun)(干重)，含200-300g菌絲體(濕重);每100g菌絲體(濕重)含0.8-1g多糖，發(fā)酵液和菌絲體中氨基酸含量如下
氨基酸名稱 100ml發(fā)酵液中氨基 100g菌絲體中酸含量(mg/ml) 氨基酸含量(g)天門冬氨酸 8.99 2.33蘇氨酸 3.94 1.22絲氨酸 2.62 1.29谷氨酸 11.0 3.82甘氨酸 2.72 1.13丙氨酸 2.07 1.65胱氨酸 1.26 0.238纈氨酸 4.59 1.37蛋氨酸 0.22 0.396異亮氨酸 4.02 2.35亮氨酸 6.01 1.98酪氨酸 2.40 0.886苯氨酸 2.50 1.01賴氨酸 2.56 1.70組氨酸 1.19 0.628精氨酸 2.08 2.08脯氨酸 2.45 2.45
從上述工藝培養(yǎng)出的裂褶菌提取的裂褶多糖，可用于臨床抗腫瘤、抗放升白、抗炎、降低抗菌素付作用，生產(chǎn)抗菌素增效劑，提高抗菌素效價(jià)，提取的氨基酸可用作調(diào)味品和兒童食品強(qiáng)化劑。
本發(fā)明所述裂褶菌生于闊葉樹或針葉樹腐木上，散生或群生，呈覆瓦狀，菌蓋寬6-42mm質(zhì)韌，白色至灰白色，上有絨毛或粗毛，扇形或腎形，邊緣內(nèi)卷，具多數(shù)裂瓣，菌褶窄，從基部輻射而出，白色或灰白色，有時(shí)淡紫色沿邊緣縱裂而反卷;孢子無色，棍狀，5-5.5×2μm。從腐木上經(jīng)組織分離得到的南大843純菌株，在人工培養(yǎng)基-木屑麩皮上培養(yǎng)，于25天后長出子實(shí)體，其形狀與天然子實(shí)體相同，軟革質(zhì)，菌蓋表面有粗絨毛，呈灰白色，邊緣內(nèi)卷，菌褶至菌蓋邊緣縱裂而反卷;孢子無色，園柱形，5-5.5×2μm。南大843菌株與中國科學(xué)院北京微生物所保藏的裂褶菌菌株相比，其形態(tài)相同，但培養(yǎng)介質(zhì)、應(yīng)用范圍不同。北京微生物所的培養(yǎng)介質(zhì)是馬鈴薯、葡萄糖、瓊脂，最適溫度26℃，僅用做純種保藏用。
本發(fā)明所述裂褶菌南大843菌株的培養(yǎng)性狀是1.接種在馬鈴薯、葡萄糖、瓊脂培養(yǎng)基上，溫度24°-26℃，生長旺盛，菌落純白色、絨狀、平坦，接種十天菌體直徑達(dá)15-20mm。2.接種在木屑培養(yǎng)基上，溫度26℃，生長十五天，菌絲柱高12cm，子實(shí)體原基和子實(shí)體分化時(shí)間分別為15天、20天。3.在搖瓶振蕩培養(yǎng)時(shí)，振蕩速度往復(fù)式搖床80-130轉(zhuǎn)/分，形成菌球，當(dāng)菌球大量形成時(shí)，菌液由深變淺，由混濁變清，粘度逐漸增加。4.在黃豆粉培養(yǎng)介質(zhì)中，當(dāng)還原糖降到1%，氨基氮降到15%PH降到5以下，菌球體積占發(fā)酵液體積70%時(shí)，可終止發(fā)酵，發(fā)酵周期為6天。
本發(fā)明所述裂褶菌南大843菌株的生理特性是①黃豆粉培養(yǎng)介質(zhì)比其它培養(yǎng)介質(zhì)長勢(shì)好，菌絲體得率高，培養(yǎng)6天，菌絲體得率20-30g/1000ml。②最適培養(yǎng)溫度24°-26℃。③最適PH5-6。④碳、氮消耗比例為100∶1，對(duì)碳源需求量較大。
從本發(fā)明所述裂褶菌南大843菌株發(fā)酵液中提取的多糖為裂褶多糖。其依據(jù)是①紅外吸收光譜峰位與已知裂褶多糖紅外吸收光譜峰位相似。已知日本裂褶多糖的峰位是885cm-1，本裂褶多糖峰位其發(fā)酵液裂褶多糖是845.104cm-1，菌絲體裂褶多糖峰位是848.278cm-1。②都是中性多糖。③都是白色、纖維狀，有粘性。④主要成份都是葡萄糖。已知裂褶多糖的特性見“日本農(nóng)藝化學(xué)會(huì)志”Vol.45 NO4.1971.P162～168。
本發(fā)明所述裂褶菌南大843的裂褶多糖提取工藝是裂褶菌發(fā)酵液用沙芯漏斗抽濾(工廠用板框機(jī)分離發(fā)酵液與菌絲體)分離發(fā)酵液和菌絲體，①將發(fā)酵液濃縮至粘稠狀(原體積的一半)加等量至3倍或5倍的95%酒精沉淀，然后用95%酒精洗滌數(shù)次至流出液無糖反應(yīng)，抽干得粗多糖。②將菌絲體加50倍水浸泡過夜，用沸水浴煮提24小時(shí)過濾，將濾液濃縮后加等量至3-5倍的95%酒精沉淀，然后用95%的酒精洗滌數(shù)次至流出液無還原糖反應(yīng)，抽干得粗多糖。最后將粗多糖用熱水溶解過濾，去不溶物，凍干得多糖凍干粉。
下面是本發(fā)明的實(shí)施例從野外腐木上采集裂褶菌子實(shí)體經(jīng)組織分離，獲得純種，將純種進(jìn)行搖瓶振蕩培養(yǎng)，培養(yǎng)介質(zhì)的成份和配方為黃豆粉0.5%、葡萄糖或蔗糖3%、酵母膏0.2%、磷酸二氫鉀0.1%、硫酸鎂0.05%、培養(yǎng)溫度24-26℃，用80-120/分往復(fù)式或180轉(zhuǎn)/分的旋轉(zhuǎn)式搖瓶機(jī)振蕩，培養(yǎng)第二天出現(xiàn)小菌球鏡檢菌絲生長繁茂、多分枝、具橫隔、無色、透明，具鎖狀聯(lián)合，發(fā)酵至第6天菌液色變清，菌球體積占發(fā)酵液體積70%，多糖含量最高，此時(shí)可終止發(fā)酵。
權(quán)利要求
1.擔(dān)子菌類中的一種裂褶菌Schizophyllum commune南大843菌株(保藏號(hào)CGMCC NO.0012)的培養(yǎng)工藝，其特征是液體發(fā)酵培養(yǎng)用天然黃豆粉、葡萄糖或蔗糖、酵母膏、硫酸鎂、磷酸二氫鉀組成培養(yǎng)介質(zhì)。
2.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的培養(yǎng)工藝，其特征是100ml的培養(yǎng)介質(zhì)的配比是天然黃豆粉0.5-1g、葡萄糖或蔗糖3-4g、酵母膏0.2g、硫酸鎂0.05g、磷酸二氫鉀0.1g。
3.根據(jù)權(quán)利要求
1或2所述的培養(yǎng)工藝，其特征是培養(yǎng)介質(zhì)中可增加添加劑-鹽酸硫胺素。
4.根據(jù)權(quán)利要求
3所述的培養(yǎng)工藝，其特征是100ml培養(yǎng)介質(zhì)中可增加0.001-1mg鹽酸硫胺素。
5.根據(jù)權(quán)利要求
1或2所述的培養(yǎng)工藝，其特征是培養(yǎng)溫度為24℃-26℃。
6.根據(jù)權(quán)利要求
1或2所述的培養(yǎng)工藝，其特征是培養(yǎng)介質(zhì)的振蕩速度為往復(fù)式搖床80-130次/分，或旋轉(zhuǎn)式搖床100-200轉(zhuǎn)/分。
7.擔(dān)子菌類中的一種裂褶菌Schizophyllum commune南大843菌株的培養(yǎng)工藝，其特征是固體發(fā)酵培養(yǎng)用甘蔗渣(或木屑、山芋渣、棉子殼)、蔗糖或葡萄糖、麩皮或米糠、石膏或碳酸鈣組成培養(yǎng)介質(zhì)。
8.根據(jù)權(quán)利要求
7所述的培養(yǎng)工藝，其特征是培養(yǎng)介質(zhì)的百分含量是甘蔗渣(或木屑、山芋渣、棉子殼)70-80、蔗糖或葡萄糖1、麩皮或米糠20-28、石膏或碳酸鈣1。
9.根據(jù)權(quán)利要求
1或7所述的裂褶菌，其特征是用于提取裂褶多糖和氨基酸。
專利摘要
本發(fā)明屬于擔(dān)子菌類的培育及利用技術(shù)領(lǐng)域：
。本發(fā)明的目的是提高裂褶菌菌絲體及裂褶多糖的得率。本發(fā)明的技術(shù)特征是將從腐木上經(jīng)組織分離的裂褶菌南大843菌株經(jīng)純化后，用天然黃豆粉、葡萄糖或蔗糖、酵母膏、硫酸鎂、磷酸二氫鉀、鹽酸硫胺素作培養(yǎng)介質(zhì)，進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，得到含菌絲體及多糖較高的裂褶菌發(fā)酵液，并從發(fā)酵液中提取抗腫瘤、抗放升白、抗菌素增效劑、抗炎的裂褶多糖及用作調(diào)味品和食品強(qiáng)化劑的氨基酸。
文檔編號(hào)C12P19/04GK85103492SQ85103492
公開日1987年4月15日 申請(qǐng)日期1985年5月22日
發(fā)明者李兆蘭 申請(qǐng)人:南京大學(xué)導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan