本發(fā)明屬于有機(jī)合成技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種反應(yīng)型巰基化合物探針及其制備方法。

背景技術(shù)：

生物體內(nèi)許多蛋白質(zhì)和小分子中都含有巰基，如谷胱甘肽(gsh)、半胱氨酸(cys)和高半胱氨酸(hcy)。巰基在生物體內(nèi)細(xì)胞的抗氧化系統(tǒng)中具有極其重要的作用，它可以防止生物體內(nèi)細(xì)胞受到氧化傷害。醫(yī)學(xué)研究表明谷胱甘肽及半胱氨酸與很多疾病有關(guān)，比如腎功能衰竭、老年癡呆癥等，它們?cè)谏矬w內(nèi)的含量變化可以作為這些疾病診斷的依據(jù)，因此開發(fā)選擇性地檢測(cè)半胱氨酸的檢測(cè)方法尤其重要。

目前測(cè)定氨基酸含量的方法有很多，如比色法、碘量法、酶循環(huán)法、毛細(xì)管電泳法和hplc法等，這些方法各有優(yōu)點(diǎn)，但也都有不足之處。比色法是以生成有色化合物的顯色反應(yīng)為基礎(chǔ)的，一般包括兩個(gè)步驟：首先是選擇適當(dāng)?shù)娘@色試劑與待測(cè)組分反應(yīng)，形成有色化合物，然后再比較或測(cè)量有色化合物的顏色深度，在此過程中，溶液的酸度、顯色劑的用量、溫度、溶劑等對(duì)顯色反應(yīng)都有影響，測(cè)量的靈敏度和準(zhǔn)確度較差；碘量法是氧化還原滴定法中，應(yīng)用比較廣泛的一種方法，但對(duì)樣品溶液的酸度和溫度反應(yīng)敏感，不易操作；酶循環(huán)法是利用酶的底物特異性來放大被測(cè)物質(zhì)的測(cè)定方法，但使用的工具酶用量大，成本較高；毛細(xì)管電泳法是以彈性石英毛細(xì)管為分離通道，以高壓直流電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力，依據(jù)樣品中各組分之間淌度和分配行為上的差異而實(shí)現(xiàn)分離的電泳分離分析方法，毛細(xì)管直徑小，使光路太短，靈敏度較低，而且電滲會(huì)因樣品組成而變化，進(jìn)而影響分離重現(xiàn)性；hplc法準(zhǔn)確性高，樣品處理簡(jiǎn)單，但受色譜柱局限，且耗費(fèi)時(shí)間很長(zhǎng)。

在這些檢測(cè)方法中，熒光探針法因其探針特殊的光物理特性和光化學(xué)特性，不僅可以有效地提高檢測(cè)的靈敏度，而且具有動(dòng)態(tài)響應(yīng)范圍廣的特點(diǎn)，更重要的是可以檢測(cè)活體甚至單個(gè)活細(xì)胞中的巰基含量，從而成為了目前廣泛應(yīng)用的檢測(cè)生物體內(nèi)巰基的一種重要的手段。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供了一種反應(yīng)型巰基化合物探針，還提供了該反應(yīng)型巰基化合物探針的制備方法。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：

一種反應(yīng)型巰基化合物探針，探針分子式為c39h25no5s2，結(jié)構(gòu)式如下：

上述反應(yīng)型巰基化合物探針的制備方法，包括以下步驟：

(1)間苯二酚與鄰苯二甲酸酐反應(yīng)得到化合物1，化合物1的結(jié)構(gòu)式如下：

(2)化合物1與苊酚反應(yīng)得到化合物2，化合物2的結(jié)構(gòu)式如下：

(3)化合物2與化合物3反應(yīng)得到目標(biāo)產(chǎn)物反應(yīng)型巰基化合物探針，化合物3的化學(xué)式如下：

優(yōu)選地，步驟(2)中苊酚的制備方法包括以下步驟：

1)向苊中依次加入三氯氧磷及n，n-二甲基甲酰胺，攪拌混勻后升溫至90～95℃，繼續(xù)攪拌2.5～3.5小時(shí)，得到反應(yīng)液；將反應(yīng)液加入冰水混合物中，生成粘稠固體，經(jīng)抽濾及真空干燥，得到5-苊醛粗品；其中，苊、三氯氧磷及n，n-二甲基甲酰胺的摩爾比為1：2～2.5：5～6，冰水混合物的體積為反應(yīng)液體積的10～20倍；

2)將步驟1)所得5-苊醛粗品采用柱色譜分離，真空干燥，得到5-苊醛純品；其中，柱色譜分離時(shí)洗脫劑為石油醚：乙酸乙酯＝38～42：1；

3)向二氯甲烷中加入5-苊醛純品、二氧化硒、過氧化氫及冰乙酸，于20～30℃攪拌35～40小時(shí)，過濾取濾液、靜置分層后，取有機(jī)層蒸發(fā)掉溶劑，并于冰浴環(huán)境溶于氫氧化鉀的甲醇溶液中，再置于室溫下水解2.5～3.5小時(shí)后，加入鹽酸酸化，再用乙酸乙酯萃取，水洗乙酸乙酯萃取相、干燥，得到苊酚粗品；其中，二氯甲烷中5-苊醛純品的投加量為80～100g/l、二氧化硒的投加量為2～3g/l、過氧化氫的投加量為1.6～2mol/l、冰乙酸的投加量為0.29～0.35mol/l，所述氫氧化鉀的甲醇溶液中氫氧化鉀的濃度為0.13～0.16g/ml，氫氧化鉀與氯化氫的摩爾比為1：1～1.1；

4)將步驟3)所得苊酚粗品采用柱色譜分離，真空干燥，即得苊酚純品；其中，洗脫劑為石油醚：乙酸乙酯＝28～32：1。

優(yōu)選地，步驟(1)中化合物1的制備方法具體為：將間苯二酚及鄰苯二甲酸酐溶解于甲苯中，攪拌回流至生成固體，抽濾取固體，用甲醇重結(jié)晶，即得；其中，甲苯中間苯二酚的投加量為2～3mol/l，間苯二酚與鄰苯二甲酸酐的摩爾比為1：1。

進(jìn)一步，步驟(2)中化合物2的制備方法具體為：向甲苯中加入化合物1、苊酚及甲磺酸，于60～70℃攪拌25～35分鐘，將反應(yīng)液用乙酸乙酯萃取，再水洗乙酸乙酯萃取相、干燥，得到化合物2粗品；將化合物2粗品進(jìn)一步用柱色譜分離，真空干燥，得到化合物2純品；其中，甲苯中化合物1的投加量為0.09～1.0mol/l，化合物1、苊酚及甲磺酸的摩爾比為1：1：26～27，柱色譜洗脫時(shí)洗脫劑為二氯甲烷：甲醇＝48～52：1。

優(yōu)選地，步驟(3)中化合物3的制備方法包括以下步驟：

1)向苯并噻吩-2-硼酸的乙醇溶液中加入過氧化氫，攪拌反應(yīng)6～10小時(shí)后，蒸出乙醇后的產(chǎn)物溶于水中，并與用氯仿萃取，干燥氯仿萃取相，并在真空濃縮，進(jìn)一步采用硅膠分離提純，得到中間體3-1；其中，苯并噻吩-2-硼酸與過氧化氫的摩爾比為1：3～3.5，硅膠分離提純時(shí)洗脫劑采用石油醚：乙酸乙酯＝9：1；

2)將步驟1)中所得中間體3-1溶于四氫呋喃中，升溫至55～65℃，加入單水氫氧化鋰的水溶液，攪拌15～18小時(shí)后，冷卻至室溫，加入水和乙醚的混合溶液至反應(yīng)停止，再加入濃鹽酸調(diào)節(jié)ph值為1.8～2.2，分離有機(jī)層，經(jīng)洗滌、干燥、蒸除有機(jī)溶劑后，用層析柱分離純化，得到中間體3-2；其中，中間體3-1與單水氫氧化鋰的摩爾比為1：1.2～2，層析柱分離純化時(shí)洗脫劑采用石油醚：乙酸乙酯＝9：1。

3)將步驟2)所得中間體3-2加入至2,2’-二硫二吡啶的二氯甲烷溶液中，于±1℃反應(yīng)8～15分鐘后，再升至室溫反應(yīng)5～8小時(shí)，蒸除有機(jī)溶劑，采用硅膠分離提純，即得化合物3；其中，中間體3-2與2,2’-二硫二吡啶的質(zhì)量比為1：1.2～1.4，硅膠分離提純時(shí)洗脫劑采用石油醚：丙酮＝3：1。

優(yōu)選地，步驟(3)中反應(yīng)型巰基化合物探針的制備方法具體為：向二氯甲烷中加入化合物2、化合物3及4-二甲氨基吡啶，于±2℃攪拌8～15分鐘，得到反應(yīng)液；將n,n'-二環(huán)己基碳酰亞胺的二氯甲烷溶液加入反應(yīng)液中，升至室溫并攪拌20～30小時(shí)，經(jīng)柱色譜分離，洗脫劑為石油醚：乙酸乙酯＝4.5～5.5：1，真空干燥，即得；其中，二氯甲烷中化合物2的投加量為0.025～0.027mol/l，化合物2、化合物3及4-二甲氨基吡啶的摩爾比為1：1.0～1.1：0.75～0.80，所述n,n'-二環(huán)己基碳酰亞胺的二氯甲烷溶液中n,n'-二環(huán)己基碳酰亞胺的濃度為0.65～0.67mol/l。

上述苊酚的合成路線如下：

上述化合物3的合成路線如下：

上述反應(yīng)型巰基化合物探針的合成路線如下：

上述反應(yīng)型巰基化合物探針在巰基化合物熒光檢測(cè)中的應(yīng)用。

本發(fā)明中所使用的各種原料均為普通市售產(chǎn)品，或者通過本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法或現(xiàn)有技術(shù)中公開的方法獲得。

本發(fā)明基于硫醇參與的二硫鍵斷裂反應(yīng)，傳感分子釋放出羅丹明染料分子單體，熒光強(qiáng)度顯著性增強(qiáng)并伴隨明顯的顏色變化，選取的干擾離等對(duì)檢測(cè)效果幾乎無影響，因而實(shí)現(xiàn)了對(duì)巰基化合物(尤其是谷胱甘肽及半胱氨酸)的特異性識(shí)別響應(yīng)，檢測(cè)限達(dá)0.124μm。

附圖說明

圖1是反應(yīng)型巰基化合物探針(10μm)的溶液隨谷胱甘肽加入當(dāng)量的增大而呈現(xiàn)的熒光光譜及顏色變化；

圖2是反應(yīng)型巰基化合物探針(10μm)的溶液隨半胱氨酸加入當(dāng)量的增大而呈現(xiàn)的熒光光譜及顏色變化；

圖3是反應(yīng)型巰基化合物探針(10μm)溶液在分別加入10當(dāng)量的不同氨基酸及離子后紫外-可見吸收光譜的變化；

圖4是反應(yīng)型巰基化合物探針(10μm)隨半胱氨酸加入當(dāng)量增大的紫外-可見光譜及顏色變化；

圖5是反應(yīng)型巰基化合物探針(10μm)隨谷胱甘肽加入當(dāng)量增大的紫外-可見光譜及顏色變化；

圖6是反應(yīng)型巰基化合物探針核磁氫譜；

圖7是反應(yīng)型巰基化合物探針核磁氫譜。

具體實(shí)施方式

以下通過優(yōu)選實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步詳細(xì)說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此。

實(shí)施例1

(1)化合物1的制備

向150ml圓底燒瓶中加入40ml甲苯，再加入間苯二酚11.0g(0.1mol)及鄰苯二甲酸酐14.8g(0.1mol)，攪拌溶解，攪拌回流5小時(shí)，逐漸生成固體，抽濾去固體，用甲醇重結(jié)晶，得橙色固體。

合成路線如下：

(2)苊酚的制備

向100ml的三口燒瓶中加入5.0g(32mmol)苊，然后將6.5ml三氯氧磷(pocl3)用恒壓漏斗緩慢加入三口燒瓶中(15分鐘內(nèi)滴加完畢)，再加入13.5mln，n-二甲基甲酰胺(dmf)，攪拌5分鐘后緩慢升溫至90～95℃，繼續(xù)攪拌3小時(shí)，得到反應(yīng)液；將反應(yīng)液加入270ml冰水混合物中，攪拌出現(xiàn)大量粘稠固體，經(jīng)減壓抽濾及真空干燥，得到苊醛粗品；然后采用柱色譜分離，洗脫劑為石油醚：乙酸乙酯＝40：1，真空干燥，得到2.759g淺黃色針狀固體，即5-苊醛純品，收率為46.74％。

向50ml的圓底燒瓶中加入11ml二氯甲烷和1.0g5-苊醛，再加入30mg二氧化硒(seo2)及2ml30％過氧化氫(h2o2)，然后滴加4滴冰乙酸(約0.2ml)，于25℃水浴攪拌38小時(shí)，過濾取濾液、靜置分層后，取有機(jī)層旋蒸掉溶劑，并于冰浴環(huán)境溶于氫氧化鉀的甲醇溶液(由0.85g氫氧化鉀溶于6ml甲醇制得)中，再置于室溫下水解3小時(shí)后，加入5ml質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10％的稀鹽酸酸化，再用乙酸乙酯萃取，用去離子水洗滌乙酸乙酯萃取相2次，然后用適量無水硫酸鈉干燥30分鐘，得到苊酚粗品；將苊酚粗品采用柱色譜分離，洗脫劑為石油醚：乙酸乙酯＝30：1，真空干燥，得到573mg淺黃色針狀固體，即苊酚純品，收率為61.3％。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.72(d,j＝8.3hz,1h),7.46–7.40(m,1h),7.28(d,j＝6.8hz,1h),7.08(d,j＝7.3hz,1h),6.79(d,j＝7.3hz,1h),5.08(s,1h),3.43–3.38(m,2h),3.31(dd,j＝8.2,5.0hz,2h)。

合成路線如下：

(3)化合物2的制備

向50ml圓底燒瓶中加入3ml甲苯，再中加入75mg(0.29mol)化合物1、50mg(0.29mol)苊酚純品及0.5ml甲磺酸，于65℃油浴加熱，攪拌30分鐘，將反應(yīng)液用乙酸乙酯萃取，再水洗乙酸乙酯萃取相2次、用無水na2so4干燥，得到染料1粗品；將染料1粗品進(jìn)一步用柱色譜分離，洗脫劑為二氯甲烷：甲醇(dcm：meoh)＝50：1，旋蒸出溶劑，真空干燥，得到暗紅色固體85mg(yield,74％)。¹hnmrδh(400mhz,cdcl3)8.11(1h,d,j8.2),8.07(1h,dd,j6.3,1.8),7.68–7.62(2h,m),7.62–7.56(1h,m),7.41(1h,d,j6.8),7.14(1h,dd,j6.2,1.5),6.92(1h,d,j2.5),6.73(1h,d,j8.6),6.58(1h,dd,j8.6,2.5),6.51(1h,s),3.38(2h,dd,j11.7,5.3),3.24–3.17(2h,m).δc(101mhz,cdcl3)169.79,157.27,154.22,152.10,145.66,140.92,135.10,129.65,128.46,126.48,125.04,124.02,121.60,117.89,116.49,113.98,112.31,111.36,103.14,30.84,29.62。

合成路線如下：

(4)化合物3的合成

將苯并噻吩-2-硼酸(3.09g，17mmol)加入100ml的圓底燒瓶中，然后加入30ml的乙醇，在機(jī)械攪拌的條件下逐滴滴加過氧化氫(5.6ml，30％)，反應(yīng)8h后，溶液的顏色由粉紅變?yōu)樯罴t，減壓蒸出乙醇后的產(chǎn)物溶于100ml水中，用氯仿萃取3次(每次60ml氯仿)，將氯仿萃取相用mgso4干燥，并且在真空的條件下濃縮，再用200～300目硅膠分離化合物17，洗脫劑為石油醚：乙酸乙酯＝9：1，得到中間體3-1(2.04g)。1hnmr(300mhz,cdcl3)δ7.41-7.14(m,1h),3.95(s,1h).

在100ml的圓底燒瓶中，將200mg中間體3-1溶解在10ml四氫呋喃中，加熱到60℃，然后加入溶解在10ml水中的單水氫氧化鋰(84mg，2mmol)，攪拌16h后，冷卻至室溫，加入2ml的水和10ml的乙醚至反應(yīng)停止進(jìn)行，加入濃鹽酸調(diào)節(jié)ph＝2，分離有機(jī)層，用飽和的食鹽水洗滌，用na2so4干燥，減壓蒸除有機(jī)溶劑，然后用層析柱分離，洗脫劑為石油醚：乙酸乙酯＝9：1，得桔色晶體，即中間體3-2(168mg)。1hnmr(300mhz,cdcl3)δ7.45-7.36(m,1h),7.23(t,j＝4.8hz,1h),7.19(dd,j＝5.6,3.6hz,2h),3.82(s,2h),3.49(s,1h).ms(m/z):166.9[m-h]-。

在100ml的圓底燒瓶中，將220mg2,2’-二硫二吡啶溶于30ml二氯甲烷中，冷卻至0℃，在此條件下，加入中間體3-2(168mg)，反應(yīng)10分鐘后，升至室溫繼續(xù)反應(yīng)6小時(shí)，減壓蒸除有機(jī)溶劑，用200～300目硅膠分離，洗脫劑為石油醚：丙酮＝3：1，得到白色固體，即化合物3。1hnmr(400mhz,methanol-d4)δ8.43(d,j＝5.0hz,1h),7.84–7.61(m,3h),7.27(tdd,j＝10.5,5.7,2.5hz,3h),5.51(s,2h).13cnmr(101mhz,meod)δ173.17,159.02,149.02,137.85,135.68,134.68,130.95,129.07,127.98,121.32,120.29.

合成路線如下：

(5)反應(yīng)型巰基化合物探針的制備

向50ml圓底燒瓶中加入5ml無水二氯甲烷，再加入52mg(0.13mol)化合物2、38.2mg(0.138mmol)化合物3，12.3mg4-二甲氨基吡啶(dmap)，0℃攪拌10分鐘，得到反應(yīng)液；將n,n'-二環(huán)己基碳酰亞胺的二氯甲烷溶液緩慢滴加入反應(yīng)液中，升至室溫并攪拌24小時(shí)，采用柱色譜分離，洗脫劑為石油醚：乙酸乙酯(pe：ea)＝5：1，旋蒸出溶劑，真空干燥，即得淡黃色反應(yīng)型巰基化合物探針；所述n,n'-二環(huán)己基碳酰亞胺的二氯甲烷溶液中n,n'-二環(huán)己基碳酰亞胺的濃度為0.66mol/l。

合成路線如下：

對(duì)反應(yīng)型巰基化合物探針進(jìn)行核磁氫譜分析，結(jié)果圖6所示；對(duì)反應(yīng)型巰基化合物探針進(jìn)行核磁碳譜分析，結(jié)果圖7所示。

(6)應(yīng)用試驗(yàn)

1)檢測(cè)用儲(chǔ)備液的配置

a.反應(yīng)型巰基化合物探針樣品溶液(1.00×10^-3mol·l^-1)的配制：取0.0022g(m＝446)反應(yīng)型巰基化合物探針溶于5ml乙腈中，配成濃度為1.00×10^-3mol·l^-1的溶液。

b.各種氨基酸及陰離子(1)半胱氨酸cys；(2)hcy；(3)谷胱甘肽gsh；(4)cn^-；(5)hs^-；(6)ch3coo^-；(7)hco3^-；(8)hso3^-；(9)so4^2-；(10)co3^2-；(11)scn^-；(12)no2^-；(13)f^-；(14)cl^-；(15)br^-；(16)i^-均用去離子水配置成為濃度為1.00×10^-3mol·l^-1或1.00×10^-2mol·l^-1的溶液。

c.pbs緩沖溶液(0.01mol·l^-1，ph＝7.4)的配制：

母液配置：0.2mol·l^-1k2hpo4：稱取78gk2hpo4·12h2o溶于1000ml水中；0.2mol·l^-1k2hpo4：稱取27.2gk2hpo4·2h2o，溶于1000ml水中。

0.2mol·l^-1pbs母液(ph＝7.4)：取19ml的0.2mol·l^-1k2hpo4，81ml0.2mol·l^-1k2hpo4，即可。然后取50ml0.2mol·l^-1pbs溶液，加水稀釋至1000ml即可。

下述檢測(cè)中使用的緩沖溶液均為pbs(0.01mol·l^-1，ph＝7.4，30％乙醇)，實(shí)驗(yàn)用水均為去離子水。

2)檢測(cè)分析

取3ml緩沖溶液，加入30μl反應(yīng)型巰基化合物探針樣品溶液(1.00×10^-3mol·l^-1)，再分別加入谷胱甘肽儲(chǔ)備液(1.00×10^-3mol·l^-1)0～3當(dāng)量，于25℃反應(yīng)30分鐘，然后進(jìn)行熒光檢測(cè)，激發(fā)波長(zhǎng)為525nm，狹縫：2.5/5nm，結(jié)果如圖1所示，隨著谷胱甘肽加入當(dāng)量的增大，探針與谷胱甘肽反應(yīng)釋放出熒光，使熒光強(qiáng)度逐漸增大。圖1中右上角插圖為反應(yīng)前后的熒光照片，右上角插圖中為僅反應(yīng)型巰基化合物探針(左)和反應(yīng)型巰基化合物探針+谷胱甘肽(右)，通過兩者的對(duì)比，可以明顯看出，反應(yīng)型巰基化合物探針與谷胱甘肽共存時(shí)存在熒光響應(yīng)，在待測(cè)樣品溶液中，加入反應(yīng)型巰基化合物探針后，即可判定谷胱甘肽的存在。

取3ml緩沖溶液，加入30μl反應(yīng)型巰基化合物探針樣品溶液(1.00×10^-3mol·l^-1)，再分別加入半胱氨酸儲(chǔ)備液(1.00×10^-3mol·l^-1)0～3當(dāng)量，于25℃反應(yīng)30分鐘，然后進(jìn)行熒光檢測(cè)，激發(fā)波長(zhǎng)為525nm，狹縫：2.5/5nm，結(jié)果如圖2所示，隨著半胱氨酸加入當(dāng)量的增大，探針與半胱氨酸反應(yīng)釋放出熒光，使熒光強(qiáng)度逐漸增大。圖2中右上角插圖為反應(yīng)前后的熒光照片，右上角插圖中為僅反應(yīng)型巰基化合物探針(左)和反應(yīng)型巰基化合物探針+半胱氨酸(右)，通過兩者的對(duì)比，可以明顯看出，反應(yīng)型巰基化合物探針與半胱氨酸共存時(shí)存在熒光響應(yīng)，在待測(cè)樣品溶液中，加入反應(yīng)型巰基化合物探針后，即可判定半胱氨酸的存在。

取3ml緩沖溶液，加入30μl反應(yīng)型巰基化合物探針樣品溶液(1.00×10^-3mol·l^-1)，再加入(0)probe；(1)100μmcys；(2)100μmhcy；(3)100μmgsh；(4)100μmcn^-；(5)100μmhs^-；(6)100μmch3coo^-；(7)100μmhco3^-；(8)100μmhso3^-；(9)100μmso4^2-；(10)100μmco3^2-；(11)100μmscn^-；(12)100μmno2^-；(13)100μmf^-；(14)100μmcl^-；(15)100μmbr^-；(16)100μmi^-，反應(yīng)30min后進(jìn)行紫外可見光譜檢測(cè)，結(jié)果如圖3所示，探針與谷胱甘肽或半胱氨酸反應(yīng)后在520nm處吸光度由0.025增強(qiáng)至0.15，而其他氨基酸和陰離子與探針反應(yīng)后在此處沒有明顯的吸光度變化。

取3ml緩沖溶液，加入30μl反應(yīng)型巰基化合物探針樣品溶液(1.00×10^-3mol·l^-1)，再分別加入半胱氨酸儲(chǔ)備液(1.00×10^-3mol·l^-1)0～3當(dāng)量，于25℃反應(yīng)30分鐘，然后進(jìn)行紫外-可見光譜掃描，結(jié)果如圖4所示，隨著半胱氨酸加入當(dāng)量的增大，探針與半胱氨酸反應(yīng)，使吸光度逐漸增大。圖4中插圖為反應(yīng)前后可見光下的照片，肉眼可見，半胱氨酸可以使反應(yīng)型巰基化合物探針樣品溶液發(fā)生明顯的顏色變化。

取3ml緩沖溶液，加入30μl反應(yīng)型巰基化合物探針樣品溶液(1.00×10^-3mol·l^-1)，再分別加入谷胱甘肽儲(chǔ)備液(1.00×10^-3mol·l^-1)0～3當(dāng)量，于25℃反應(yīng)30分鐘，然后進(jìn)行紫外-可見光譜掃描，結(jié)果如圖5所示，隨著谷胱甘肽加入當(dāng)量的增大，探針與谷胱甘肽反應(yīng)，使吸光度逐漸增大。圖5中插圖為反應(yīng)前后可見光下的照片，肉眼可見，谷胱甘肽可以使反應(yīng)型巰基化合物探針樣品溶液發(fā)生明顯的顏色變化。