本發(fā)明涉及一種核酸提取裝置，特別涉及一種紙基微流控快速核酸提取裝置。

背景技術(shù)：

核酸的提取目前主要采用離心柱法及磁珠法提取，不僅成本高，而且操作復(fù)雜、耗時(shí)，需要離心機(jī)、水浴箱等配套設(shè)施，這使它們無法脫離實(shí)驗(yàn)室環(huán)境，不適合應(yīng)用于條件受限地區(qū)、防疫檢測(cè)及野外現(xiàn)場(chǎng)環(huán)境檢測(cè)。酚-氯仿提取法等傳統(tǒng)的提取方法，提取效率高，對(duì)實(shí)驗(yàn)條件要求低，但是其毒性大，因此目前已很少應(yīng)用。

近年來隨著突發(fā)傳染病的嚴(yán)重威脅以及院外社區(qū)醫(yī)療模式的發(fā)展，基于分子診斷技術(shù)的即時(shí)檢測(cè)(POCT)得到了迅速的發(fā)展。現(xiàn)場(chǎng)PCR、恒溫核酸擴(kuò)增、生物芯片等分子檢測(cè)裝置層出不窮，有通用性的，也有檢測(cè)特定基因的，但是在檢測(cè)前他們往往需要繁瑣的核酸模板提取步驟和大型設(shè)備，阻礙了這些技術(shù)在POCT中真正發(fā)揮作用。因此，建立一種簡(jiǎn)便，快捷，便攜,高效的核酸提取裝置是真正實(shí)現(xiàn)檢測(cè)體系現(xiàn)場(chǎng)應(yīng)用的關(guān)鍵。

傳統(tǒng)的離心柱技術(shù)也應(yīng)用膜進(jìn)行核酸純化，它的膜的原理屬于硅吸附方法，這種膜只對(duì)核酸有較強(qiáng)的親和力和吸附力。操作時(shí)首先應(yīng)用蛋白酶在56℃溫度條件下對(duì)樣本進(jìn)行裂解，然后將裂解液加入柱子中離心，核酸被吸附于膜上，而其他雜質(zhì)被甩出，最后用洗脫液將核酸洗脫下來。此方法提取效果好，但是裂解時(shí)需要加熱，核酸純化時(shí)需要多次離心，整個(gè)提取過程耗時(shí)2個(gè)小時(shí)左右。其成本高、操作復(fù)雜、耗時(shí)長(zhǎng)、依賴實(shí)驗(yàn)室環(huán)境，不能很好的服務(wù)于POCT，也無法應(yīng)用于野外及現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種用于快速、不依賴電力的紙基微流控核酸提取便攜式裝置。

一種紙基微流控快速核酸提取裝置，包括過濾器1和核酸提取膜2；

所述過濾器1由頂蓋3和底蓋4組成，兩者均為帶有弧度的圓盤狀結(jié)構(gòu)，頂蓋3上設(shè)置有外凸的加樣通道5，底蓋4上設(shè)置有外突的廢液排出通道6，頂蓋3和底蓋4扣合形成過濾器腔體，將核酸提取膜2固定于中間；

所述核酸提取膜2由fusion 5膜7，纖維素濾紙8和蠟紙9組成，F(xiàn)usion 5膜7置于纖維素濾紙8上方，蠟紙9覆蓋于纖維素濾紙8上。

所述fusion 5膜7為直徑2cm的圓形膜；所述纖維素濾紙11為直徑6cm的圓形濾紙；所述蠟紙9為中央帶直徑4cm圓孔的蠟紙。

所述過濾器1為PC2805材料。

一種紙基微流控快速核酸提取的方法，采用上述的提取裝置，包括如下步驟：

A,通過加樣通道5依次加入樣品溶液200-300μl，裂解液500μl及清洗液1ml，透過的液體通過廢液排出通道6流出；

B,然后取出fusion 5膜7，置于1.5ml的EP管中，待清洗液蒸發(fā)后加入300μl核酸提取液浸泡兩分鐘，吸取提取液于另一個(gè)新的EP管內(nèi)。

所述裂解液為10mM的NaOH溶液。

所述清洗液為無水乙醇。

所述核酸提取液為雙蒸水。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果：本發(fā)明用于不依賴電力、快速核酸提取的裝置,無需電力及大型儀器支持，實(shí)現(xiàn)快速、高效的核酸提取，將在核酸POCT應(yīng)用中發(fā)揮巨大作用；該裝置先應(yīng)用堿裂解法使細(xì)胞破裂、蛋白變性、核酸釋放，再應(yīng)用fusion 5膜對(duì)核酸進(jìn)行提純，整個(gè)過程無需繁瑣的加熱及離心過程，能夠在10-15分鐘完成整個(gè)提取過程；堿裂解法應(yīng)用的是成本廉價(jià)的NaOH及無水乙醇，核酸提取膜成本也很低，因此整個(gè)提取裝置成本都很低，非常利于在不發(fā)達(dá)地區(qū)的推廣應(yīng)用；該裝備應(yīng)用范圍廣，可以針對(duì)血液、尿液、鼻咽拭子、糞便等各種樣本的基因組提??；該裝置小巧輕便，為直徑6cm的圓盤狀結(jié)構(gòu)，非常便于攜帶，該提取裝置提取效率高，其提取效率與傳統(tǒng)的離心柱及磁珠法相比，經(jīng)qPCR驗(yàn)證無明顯差異；這樣一種核酸提取裝置與適當(dāng)?shù)暮怂釞z測(cè)技術(shù)聯(lián)用，對(duì)于社區(qū)應(yīng)用、疫情篩查及環(huán)境檢測(cè)等都將有重要的應(yīng)用價(jià)值。

附圖說明

圖1為本發(fā)明實(shí)施例的裝置拆分示意圖；

圖2為本發(fā)明實(shí)施例的整體示意圖；

圖3為本發(fā)明實(shí)施例的核酸提取膜示意圖；

圖4為同一腺病毒感染鼻咽拭子標(biāo)本同時(shí)應(yīng)用本裝置及傳統(tǒng)離心柱法提取核酸分別進(jìn)行qPCR檢測(cè)的結(jié)果；

圖中，1-過濾器，2-核酸提取膜，3-頂蓋，4-底蓋，5-加樣通道，6-廢液排出通道，7-fusion 5膜，8-纖維素濾紙，9-蠟紙。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合附圖，對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式進(jìn)行詳細(xì)描述，但應(yīng)當(dāng)理解本發(fā)明的保護(hù)范圍并不受具體實(shí)施方式的限制。

本實(shí)施例提供了一種用于堿裂解結(jié)合紙基微流控核酸純化的裝置，如圖1所示，包括過濾器1和核酸提取膜2；

如圖2所示，所述過濾器1由頂蓋3和底蓋4組成，兩者均為帶有弧度的圓盤狀結(jié)構(gòu)，頂蓋3上設(shè)置有外凸的加樣通道5，底蓋4上設(shè)置有外突的廢液排出通道6，頂蓋3和底蓋4扣合形成過濾器腔體，將核酸提取膜牢牢固定于中間；

如圖3所示，所述核酸提取膜2由fusion 5膜7、纖維素濾紙8和蠟紙9組成，直徑2cm的圓形Fusion 5紙膜7被置于直徑6cm的圓形纖維素濾紙8上方，然后用中央帶直徑4cm圓孔的蠟紙9覆蓋，并應(yīng)用外力壓緊使他們彼此緊密貼合；

通過加樣通道5依次加入樣品溶液200-300μl，10mM的NaOH溶液1000μl及無水乙醇1ml，透過的液體通過廢液排出通道6流出。然后取出fusion 5膜7，置于一個(gè)新的1.5ml的EP管中，待無水乙醇蒸發(fā)后加入300μl雙蒸水浸泡兩分鐘，吸取提取液于另一個(gè)新的EP管內(nèi)。

對(duì)腺病毒感染鼻咽拭子標(biāo)本同時(shí)應(yīng)用本裝置及傳統(tǒng)離心柱法提取核酸，并進(jìn)行qPCR檢測(cè)，從圖4結(jié)果中可得出，兩種方法沒有明顯差別。

以上公開的僅為本發(fā)明的具體實(shí)施例，但是，本發(fā)明并非局限于此，任何本領(lǐng)域的技術(shù)人員能思之的變化都應(yīng)落入本發(fā)明的保護(hù)范圍。