一種制備抗氧化活性板藍(lán)根多糖的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種制備抗氧化活性板藍(lán)根多糖的方法，將板藍(lán)根單味制劑(板藍(lán)根茶、板藍(lán)根顆粒)生產(chǎn)中得到的醇沉物復(fù)溶，離心去除不溶物，收集上清液，酶法去除蛋白，透析去除小分子，再加乙醇二次沉淀，沉淀物依次用無(wú)水乙醇、丙酮洗滌后真空干燥，得到具有抗氧化活性的板藍(lán)根多糖。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提高了板藍(lán)根藥材的綜合利用率，制備得到的板藍(lán)根多糖具有較好的清除DPPH自由基的活性，因此抗氧化活性較高，有良好的應(yīng)用前景。
【專利說(shuō)明】一種制備抗氧化活性板藍(lán)根多糖的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種板藍(lán)根多糖的制備方法，尤其是涉及一種以板藍(lán)根單味制劑(板藍(lán)根茶、板藍(lán)根顆粒)生產(chǎn)過(guò)程中醇沉產(chǎn)物為原料制備具有抗氧化活性的板藍(lán)根多糖的方法，可有效利用現(xiàn)行生產(chǎn)工藝中直接棄去的醇沉濾渣，提高板藍(lán)根藥材的綜合利用率。
【背景技術(shù)】
[0002]板藍(lán)根(Isatidis Radix)，別名靛青根、藍(lán)靛根、靛根，是十字花科植物菘藍(lán)(Isatisin digotica Fort.)的干燥根,具有清熱解毒、涼血利咽之功效,在臨床上用于溫疫時(shí)毒、發(fā)熱咽痛、溫毒發(fā)斑、痄腮、爛喉丹痧、大頭瘟疫、丹毒、癰腫等。作為我國(guó)抗病毒中藥的典型代表，板藍(lán)根是首個(gè)獲美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院資助的中藥研究項(xiàng)目。
[0003]多糖是由多個(gè)單糖分子通過(guò)苷鍵連接而成的一類結(jié)構(gòu)復(fù)雜的生物大分子，在天然藥物中分布非常廣泛。多糖在生物合成以及細(xì)胞間的識(shí)別、受精、胚胎形成、神經(jīng)細(xì)胞發(fā)育、激素激活、細(xì)胞增殖、病毒和細(xì)菌的感染、腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移等許多基本生命過(guò)程中發(fā)揮著重要作用，因此已成為醫(yī)學(xué)、營(yíng)養(yǎng)學(xué)和食品科學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。據(jù)報(bào)道，板藍(lán)根多糖對(duì)特異性免疫和非特異性免疫均具有一定的促進(jìn)作用，是一種比較理想的天然免疫增強(qiáng)劑，作為保健食品和藥品有廣泛的開發(fā)前景。
[0004]現(xiàn)行藥典(2010年版)中板藍(lán)根的單味制劑主要有板藍(lán)根茶和板藍(lán)根顆粒兩種，在目前的工業(yè)化生產(chǎn)中，醇沉產(chǎn)物均被作為副產(chǎn)物棄去，造成了板藍(lán)根中具有免疫增強(qiáng)作用的主要活性物質(zhì)——板藍(lán)根多糖的大量損失。目前，尚未見有關(guān)利用板藍(lán)根單味制劑生產(chǎn)中的副產(chǎn)物制備板藍(lán)根多糖的專利。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的就是為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷而提供一種具有抗氧化活性的板藍(lán)根多糖的制備方法，尤其`是一種利用板藍(lán)根單味制劑(板藍(lán)根茶、板藍(lán)根顆粒)現(xiàn)行生產(chǎn)工藝中普遍被舍棄的醇沉物為原料制備抗氧化活性板藍(lán)根多糖的方法，提高了板藍(lán)根藥材的綜合利用率。
[0006]本發(fā)明的目的可以通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn):
[0007]—種制備抗氧化活性板藍(lán)根多糖的方法，包括以下步驟:
[0008](I)將板藍(lán)根單味制劑生產(chǎn)中棄去的醇沉物用水溶解，離心去除不溶物，收集上清液；
[0009](2)將步驟(1)得到的上清液減壓濃縮至原體積的1/5~1/10，加入濃縮后體積I~5倍量無(wú)水乙醇，靜置，離心去除母液，收集一次醇沉產(chǎn)物；
[0010](3)在步驟(2)得到的一次醇沉產(chǎn)物中加入與步驟(2)母液相同濃度的乙醇洗滌并過(guò)濾，逐步提高乙醇濃度，最后用無(wú)水乙醇、丙酮洗滌，抽濾近干時(shí)復(fù)蓋以防沉淀物表面溶劑蒸發(fā)帶入水分；
[0011](4)將步驟(3)得到的沉淀物迅速減壓干燥，得到含有抗氧化活性板藍(lán)根多糖的粗多糖粉末。
[0012]所述的板藍(lán)根單味制劑包括板藍(lán)根茶或板藍(lán)根顆粒。
[0013]所述的含有抗氧化活性板藍(lán)根多糖的粗多糖粉末可進(jìn)一步復(fù)溶后，酶解法去除蛋白，透析去除小分子，再以乙醇沉淀，得到抗氧化活性板藍(lán)根多糖。
[0014]獲取抗氧化活性板藍(lán)根多糖包括以下步驟:
[0015](I)將粗多糖粉末以30~100倍質(zhì)量的蒸餾水溶解，控制轉(zhuǎn)速為3500~4500rpm離心10~15min,取上清液；
[0016](2)在上清液中按照I~5X103U/g粗多糖的添加量加入胃蛋白酶，37°C下酶解4~6h,煮沸IOmin,控制轉(zhuǎn)速為3500~4500rpm離心10~15min除去變性蛋白，收集上清液；
[0017](3)將上清液轉(zhuǎn)入12000~14000Da的透析袋，于蒸餾水中透析24~48h，取透析袋內(nèi)溶液減壓濃縮至原體積的1/5~1/10，加入濃縮后體積I~5倍量無(wú)水乙醇進(jìn)行二次沉淀，靜置，離心取沉淀物，減壓干燥，得到抗氧化活性板藍(lán)根多糖。
[0018]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明制備抗氧化活性板藍(lán)根多糖的原料為板藍(lán)根單味制劑生產(chǎn)中被舍棄的醇沉物，可提高板藍(lán)根藥材的綜合利用率，增加經(jīng)濟(jì)效益。制備得到的多糖粉末可直接應(yīng)用于保健食品、藥品和化妝品領(lǐng)域，也可按照常規(guī)方法進(jìn)一步純化后應(yīng)用于上述領(lǐng)域。為提高板藍(lán)根多糖的品質(zhì)，含有抗氧化活性的板藍(lán)根粗多糖的粉末可進(jìn)一步復(fù)溶后，酶解法去除蛋白，透析去除小分子雜質(zhì)，再以乙醇沉淀，制備得到的板藍(lán)根多糖具有較好的清除DPPH自由基的活性，因此抗氧化活性較高，有良好的應(yīng)用前景。
【具體實(shí)施方式】
[0019]下面結(jié)合具體 實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。
[0020]實(shí)施例1
[0021 ] 板藍(lán)根單味制劑生產(chǎn)中醇沉物的獲得
[0022]取板藍(lán)根1400g，加水煎煮兩次，第一次2h，第二次lh，煎液濾過(guò)，濾液合并，濃縮至相對(duì)密度為1.20 (500C )，加乙醇使含醇量達(dá)到60%，靜置使沉淀，離心取沉淀，50°C真空干燥，得褐色醇沉物197.Sg。
[0023]實(shí)施例2
[0024]板藍(lán)根多糖的制備
[0025]取按照實(shí)施例1方法得到的沉淀物IOg,以50倍蒸懼水溶解，4500rpm離心15min去除不溶物，取上清液。將上清液減壓濃縮至50mL，加入4倍量無(wú)水乙醇，靜置24h，4500rpm/min離心15min，收集沉淀，將沉淀物依次用80%乙醇10mL，無(wú)水乙醇10mL，丙酮IOmL洗滌，然后于50°C真空干燥，得到含有抗氧化活性板藍(lán)根多糖的粗多糖粉末7.Sg ；
[0026]取5.0g粗多糖粉末，加250mL蒸餾水溶解，4500rpm離心，取上清液，按照1000U/g粗多糖的添加量加入胃蛋白酶，37?下酶解4h,煮沸l(wèi)Omin, 4500rpm離心15min除去變性蛋白，上清液轉(zhuǎn)入HOOODa的透析袋，于蒸餾水中透析24h，取透析袋內(nèi)溶液減壓濃縮至原體積的1/10，加入4倍量無(wú)水乙醇，靜置24h，4500rpm離心15min，收集沉淀，依次用80%乙醇10mL，無(wú)水乙醇10mL，丙酮IOmL洗滌，然后于50°C真空干燥，得到淺黃色多糖1.63g。
[0027]實(shí)施例3-6[0028]板藍(lán)根多糖的體外抗氧化活性實(shí)驗(yàn)
[0029]用實(shí)施例1和實(shí)施例2得到的板藍(lán)根多糖進(jìn)行DPPH自由基清除效果實(shí)驗(yàn)。
[0030]準(zhǔn)確稱取一定量板藍(lán)根多糖溶于蒸餾水中，得到0.05、0.25、1.25和2.5mg/mL的樣品溶液。取上述溶液各2mL，分別加入0.lmmol/L的DPPH溶液2mL，搖勻后室溫靜置30min，于517nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度。根據(jù)公式計(jì)算對(duì)DPPH自由基的清除率，結(jié)果見表2。
[0031]
【權(quán)利要求】
1.一種制備抗氧化活性板藍(lán)根多糖的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟: (1)將板藍(lán)根單味制劑生產(chǎn)中棄去的醇沉物用水溶解，離心去除不溶物，收集上清液； (2)將步驟(1)得到的上清液減壓濃縮至原體積的1/5~1/10，加入濃縮后體積I~5倍量無(wú)水乙醇,靜置,離心去除母液,收集一次醇沉產(chǎn)物； (3)在步驟(2)得到的一次醇沉產(chǎn)物中加入與步驟(2)母液相同濃度的乙醇洗滌并過(guò)濾，逐步提高乙醇濃度，最后用無(wú)水乙醇、丙酮洗滌，抽濾近干時(shí)復(fù)蓋以防沉淀物表面溶劑蒸發(fā)帶入水分； (4)將步驟(3)得到的沉淀物迅速減壓干燥，得到含有抗氧化活性板藍(lán)根多糖的粗多糖粉末。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種制備抗氧化活性板藍(lán)根多糖的方法，其特征在于，所述的板藍(lán)根單味制劑包括板藍(lán)根茶或板藍(lán)根顆粒。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種制備抗氧化活性板藍(lán)根多糖的方法，其特征在于，所述的含有抗氧化活性板藍(lán)根多糖的粗多糖粉末可進(jìn)一步復(fù)溶后，酶解法去除蛋白，透析去除小分子，再以乙醇沉淀，得到抗氧化活性板藍(lán)根多糖。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種制備抗氧化活性板藍(lán)根多糖的方法，其特征在于，獲取抗氧化活性板藍(lán)根多糖包括以下步驟: (1)將粗多糖粉末以30~100倍質(zhì)量的蒸餾水溶解，控制轉(zhuǎn)速為3500~4500rpm離心10~15min,取上清液； (2)在上清液中按照I~5X103U/g粗多糖的添加量加入胃蛋白酶，37°C下酶解4~6h，煮沸l(wèi)Omin，控制轉(zhuǎn)速為3500~4500rpm離心10~15min除去變性蛋白，收集上清液； (3)將上清液轉(zhuǎn)入12000~14000Da的透析袋，于蒸餾水中透析24~48h，取透析袋內(nèi)溶液減壓濃縮至原體積的1/5~1/10，加入濃縮后體積I~5倍量無(wú)水乙醇進(jìn)行二次沉淀，靜置，離心取沉淀物，減壓干燥，得到抗氧化活性板藍(lán)根多糖。
【文檔編號(hào)】C08B37/00GK103848919SQ201210509446
【公開日】2014年6月11日 申請(qǐng)日期:2012年12月3日 優(yōu)先權(quán)日:2012年12月3日
【發(fā)明者】趙琳靜, 李洪森, 燕方龍, 陳雪琴, 吳曉英 申請(qǐng)人:上海工程技術(shù)大學(xué)