專利名稱：2-氨基-6，7-二羥基-4-硫雜庚酸衍生物、其制備及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及2-氨基-6，7-二羥基-4-硫雜庚酸衍生物，所說(shuō)衍生物可用作由于各種原因引起的白細(xì)胞減少癥、由于白細(xì)胞降低引起的疾病，從治療觀點(diǎn)看需要增加骨髓細(xì)胞或白細(xì)胞的疾病的治療劑，及由于各種原因引起的血小板減少癥、由于血小板降低引起的疾病、或從治療觀點(diǎn)看需要增加血小板的疾病的治療劑。
在Hoppe-Seyler的Zeitschrift fur Physiologiche Chemie 364第593-606(1983)頁(yè)中，披露了一種由E.Coli制備的脂蛋白得到的合成肽，其具有如下結(jié)構(gòu)式
在JPA H4(1992)-046194中披露了WS1279A物質(zhì)，其具有如下結(jié)構(gòu)式
Achiwa等人曾經(jīng)合成了作為旋光活性化合物的那些化合物[參見(jiàn)JPA H4(1992)-099796，CHem. Pharm. Bull. 39，第2590(1991)頁(yè)和Peptide Chemistry，第361(1991)頁(yè)]。
然而，本發(fā)明的化合物在這些參考文獻(xiàn)中并沒(méi)有描述。
順便說(shuō)一下，用于本發(fā)明的氨基酸、肽等的縮略語(yǔ)是基于根據(jù)IUPAC-IUB委員會(huì)關(guān)于生物化學(xué)術(shù)語(yǔ)定義的那些縮略語(yǔ)或在相關(guān)領(lǐng)域常用的那些縮略語(yǔ)，并且，除非另有說(shuō)明，氨基酸的可能的旋光異構(gòu)體是L-異構(gòu)體。
癌癥的化學(xué)療法或放射療法引起了嚴(yán)重的白細(xì)胞減少癥或嚴(yán)重的血小板減少癥。前者導(dǎo)致抵抗感染或其它各種疾病能力的降低而沒(méi)有達(dá)到足夠的治療效果。后者造成不充分的止血機(jī)理也沒(méi)有足夠的治療效果。這些在癌癥領(lǐng)域中已引起認(rèn)真的關(guān)注。在這樣的情況下，強(qiáng)烈期望研究那些減輕由于這些治療方法引起的造血功能的抑制的藥物和能夠提高恢復(fù)白細(xì)胞數(shù)量或血小板數(shù)量的藥物。而且，在骨髓移植治療中，迫切期望提高被移植的骨髓細(xì)胞的增殖能力的藥物和迅速恢復(fù)白細(xì)胞數(shù)量的能力的藥物。更進(jìn)一步地，這些藥物可用作在骨髓移植后的血小板減少癥的治療劑或伴隨有血小板減少癥如再生障礙性貧血和陣發(fā)性血小板減少癥紫癜的自體免疫疾病的治療劑。
由于考慮到上述現(xiàn)有的情況，本發(fā)明的發(fā)明者根據(jù)最新觀點(diǎn)，正從事于對(duì)具有增加白細(xì)胞數(shù)量作用的化合物的研究。結(jié)果，本發(fā)明者發(fā)現(xiàn)新的2-氨基-6，7-二羥基-4-硫雜庚酸衍生物提高了小鼠骨髓細(xì)胞的增殖能力和增加了周圍白細(xì)胞的數(shù)量。而且，所說(shuō)化合物也刺激了小鼠骨髓細(xì)胞從而促進(jìn)了巨核細(xì)胞的增殖和分化?；谶@些發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明者進(jìn)行了進(jìn)一步的研究從而完成了本發(fā)明。
本發(fā)明提供了1)結(jié)構(gòu)式(Ⅰ)的化合物或其鹽
其中R1和R2的每一個(gè)是氫或脂肪族?；?，A是可被保護(hù)的氨基，X是由1-10個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成的氨基酸序列，其中至少含有一個(gè)具有增加水溶性基團(tuán)的氨基酸殘基。
2)根據(jù)1)的化合物，其中A是氨基。
3)根據(jù)1)的化合物，其中A是可用取代的氧羰基取代的氨基。
4)根據(jù)1)的化合物，其中具有增加水溶性基團(tuán)的氨基酸殘基是酸性氨基酸殘基。
5)根據(jù)1)的化合物，其中具有增加水溶性基團(tuán)的氨基酸殘基是堿性氨基酸殘基。
6)根據(jù)1)的化合物，其中脂肪族?；荂2-30脂肪族酰基。
7)根據(jù)1)的化合物，其中至少R1和R2中的一個(gè)是脂肪族酰基。
8)根據(jù)1)的化合物，其中R1是脂肪族酰基。
9)根據(jù)1)的化合物，其中R2是脂肪族?；?。
10)根據(jù)1)的化合物，其中所說(shuō)化合物是(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(十六烷酰氧基)-4-硫雜庚酰-甘氨酰-谷氨酰-谷氨酸。
11)根據(jù)1)化合物，其中所說(shuō)化合物是(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(十六烷酰氧基)-4-硫雜庚酰-甘氨酰-甘氨酰-谷氨酸。
12)根據(jù)1)化合物，其中所說(shuō)化合物是(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(十六烷酰氧基)-4-硫雜庚酰-谷氨酰-甘氨酰-谷氨酸。
13)根據(jù)1)的化合物，其中所說(shuō)化合物是(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(十六烷酰氧基)-4-硫雜庚酰-甘氨酰-D-谷氨酸。
14)一種具有增加白細(xì)胞作用的刺激免疫組合物，其含有1)中定義的化合物或其鹽。
15)根據(jù)14)的一種刺激免疫組合物，其中至少R1和R2中的一個(gè)是脂肪族酰基。
16)一種用于治療血小板減少癥的組合物，其中包括1)中所定義的化合物或其鹽。
17)一種制備1)中所定義的化合物或其鹽的方法，其中包括使結(jié)構(gòu)式(Ⅱ)的化合物或其鹽經(jīng)過(guò)脫保護(hù)反應(yīng)
其中R1和R2的每一個(gè)是氫或脂肪族?；?，R3是保護(hù)基，A是可被保護(hù)的氨基，X′是由1-10任意保護(hù)的氨基酸殘基構(gòu)成的氨基酸序列，其至少含有一個(gè)具有增加水溶性基團(tuán)的任意保護(hù)的氨基酸殘基。
關(guān)于結(jié)構(gòu)式(Ⅰ)和(Ⅱ)，用R1和R2所示的脂肪族?；ㄓ芍咀弭人嵫苌玫降闹咀艴；?。所說(shuō)的脂肪族酰基的例子包括飽和的或不飽和具有最多34個(gè)碳原子的脂肪族?；?例如，甲酰、乙酰、丙酰、丁酰、異丁酰、戊酰、異戊酰、己酰、庚酰、辛酰、癸酰、十二酰、十三酰、十四酰、十五酰、十六酰、十七酰、十八酰、十九酰、二十四酰、二十六酰、二十酰、二十一酰、二十二酰、二十四酰、二十六酰、乙基十二酰、甲基十三酰、乙基十三酰、甲基十四酰、乙基十四酰、甲基十五酰、乙基十五酰、乙基十六酰、乙基十六酰、甲基十七酰、乙基十七酰、甲基十八酰、乙基十八酰、二十八酰、三十酰、三十二酰、三十四酰、丙烯酰、丙炔酰、異丁烯酰、丁烯酰、異丁烯酰、十四油酰、油酰、棕櫚油酰、反油酰、順，順-9，12-十八三烯酰、9，12，15-十八三烯酰、9，11，13-十八三烯酰、5，8，11，14-二十烷四烯酰、順-15-二十四烯酰，等等。)脂肪族?；膬?yōu)選例子包括C2-30飽和的或不飽和的脂肪族?；?例如乙酰、丙酰、丁酰、異丁酰、戊酰、異戊酰、己酰、庚酰、辛酰、癸酰、十二酰、十三酰、十四酰、十五酰、十六酰、十七酰、十八酰、十九酰、二十酰、二十一酰、二十二酰、乙基十二酰、甲基十三酰、乙基十三酰、甲基十四酰、乙基十四酰、甲基十五酰、乙基十五酰、甲基十六酰、乙基十六酰、甲基十七酰、乙基十七酰、甲基十八酰、乙基十八酰、二十四酰、二十六酰、二十八酰、三十酰、十四油酰、油酰、棕櫚油酰、反油酰、順，順-9，12-十八三烯酰、9，12，15-十八三烯酰、9，11，13-十八三烯酰、5，8，11，14-二十烷四烯酰、順-15-二十四烯酰，等等。)用R1和R2所示的脂肪族?；奶貏e優(yōu)選的例子包括C2-16飽和的或不飽和的脂肪族?；?。
優(yōu)選地，至少R1和R2中的一個(gè)是脂肪族?；?。
最好R1和R2都是脂肪族?；?。
在上述結(jié)構(gòu)(Ⅰ)和(Ⅱ)中，用A所示的任意保護(hù)的氨基中的保護(hù)基的例子包括甲?；?、C7-10芳羰基(例如苯基羰基)，取代的氧羰基[例如C1-6烷氧基羰基(例如甲氧基羰基，乙氧基羰基，等)，C7-10芳氧基羰基(例如苯氧基羰基，等)，9-芴基甲氧基羰基，C7-10芳烷氧基羰基(例如芐氧基羰基，等)，金剛烷基氧羰基等]，C7-10芳烷基羰基(例如芐基羰基，等)，三苯甲基和鄰苯二甲?；?。這些保護(hù)基中除甲?；舛伎杀蝗〈Ｋf(shuō)取代基的例子包括鹵原子(例如氟代、氯代、溴代和碘代)，C1-5烷基羰基(例如乙酰，乙基羰基，丁基羰基，等)和硝基。取代基的數(shù)量可在1-3范圍內(nèi)變化。
當(dāng)R1和R2都是脂肪族酰基時(shí)，A優(yōu)選具有上述意義。
優(yōu)選地，A是可被取代的氧羰基保護(hù)的氨基。A最好是氨基。
在結(jié)構(gòu)式(Ⅰ)中，在由X所示的氨基酸序列中的氨基酸意義為在其分子中具有氨基和酸基(例如羧基、磺酸基)的化合物。氨基酸的優(yōu)選的例子包括那些在Dr.Munio Kotake管理下編輯的，由日本Asakura Shoten 1960年出版的Dai Yuhki Kagaku(Encyclopedia of Organic Chemistry)第21卷“天然聚合物Ⅲ”中和由J.S.Davies編輯1985年美國(guó)出版，Chapman和Hall的“氨基酸和肽”中所述的氨基酸。
為了進(jìn)一步具體闡明，例如，可以提及組成蛋白質(zhì)的氨基酸[例如，脂肪一元氨基一元羧酸如甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸等，脂肪羥基氨基酸如絲氨酸、蘇氨酸等，酸性氨基酸如門冬氨酸、谷氨酸等;酸性氨基酸酰胺如天冬酰胺、谷氨酰胺等，芳香氨基酸如苯基丙氨酸、酪氨酸、色氨酸等，亞氨基羧酸如脯氨酸、羥基脯氨酸等，堿性氨基酸如精氨酸、賴氨酸、組氨酸等，和含硫氨基酸如蛋氨酸、胱氨酸、半胱氨酸等]，由天然物質(zhì)得到的氨基酸，例如微生物的代謝物或動(dòng)物和植物成分[例如脂肪一元氨基一元羧酸如L-α-氨基丁酸、γ-氨酸丁酸、β-氨基異丁酸、β-丙氨酸、高絲氨酸、α-甲基-D-絲氨酸、O-氨基甲酰-D-絲氨酸、δ-羥基-γ-氧代正纈氨酸等，一元氨基二羧酸如L-α-氨基己二酸、L-β-氨基己二酸、L-茶氨酸、L-γ-亞甲基谷氨酸、L-γ-甲基谷氨酸等，二氨基-羧酸如L-鳥(niǎo)氨酸、β-賴氨酸、α，β-二氨基丙酸、L-α，γ-二氨基丁酸，等，二氨基二羧酸如二氨基庚二酸等，含磺酸一元氨基一元羧酸如磺基丙氨酸等，含磺酸氨基酸如?；撬岬?，芳香氨基酸如犬尿氨酸、3，4-二氧代苯基-L-丙氨酸等，雜環(huán)氨基酸如2，3-二羧酸氮丙啶，[S]-2-氨基-3-(異噁唑啉基-5-酮-4-基)丙酸，抗羊膜菌素等，堿性氨基酸如L-4-噁溶菌素、L-4-oxolysine、[3R，5R]-3，6-二氨基-5-羥基己酸，等，含硫氨基酸如羊毛硫氨酸、S-甲基-L-半胱氨酸等，環(huán)狀氨基酸如哌啶酸、氮雜環(huán)丁烷-2-羧酸，[1R，2S]-2-氨基環(huán)戊烷-1-羧酸等，用特殊官能團(tuán)取代的氨基酸如瓜氨酸、亞硝基羥基丙氨酸、L-重氮絲氨酸等]，和由有機(jī)合成得到的氨基酸[例如6-氨基己酸、8-氨基辛酸、12-氨基十二酸、4-氨基苯甲酸、4-(氨基甲基)苯甲酸、4-(N-羧基甲基)氨基甲基苯甲酸等]。
氨基酸殘基的意義為由氨基酸得到的二價(jià)基并具有與氨基和酸基分別相連的鍵。
順便說(shuō)說(shuō)，即使該基團(tuán)作為氨基酸是不穩(wěn)定的，在氨基被?；蛩峄哂絮０锋I的情況下，該基團(tuán)仍可用作氨基殘基。這樣的氨基的例子包括(6-氨基己基)氨基甲酸。
關(guān)于結(jié)構(gòu)式(Ⅰ)，在用X表示的氨基酸序列中的具有水溶性增強(qiáng)基的氨基酸的例子包括上述酸性氨基酸和堿性氨基酸，優(yōu)選酸性氨基酸。
酸性氨基酸的例子包括除羧基和氨基外還具有一個(gè)或多個(gè)酸性官能團(tuán)(例如羧基，磺酸基等)的化合物。優(yōu)選的酸性氨基酸的例子包括具有一個(gè)氨基和兩個(gè)或多個(gè)羧基的化合物。為了更具體地闡述，例如，可以提及氨基二羧酸(例如，門冬氨酸、谷氨酸、L-α-氨基己二酸、L-β-氨基己二酸、2，3-二羧酸氮丙啶，等)，較優(yōu)選α-氨基二羧酸(如門冬氨酸、谷氨酸、L-α-氨基己二酸等)，在這些當(dāng)中，最優(yōu)選門冬氨酸和谷氨酸。
堿性氨基酸的例子包括具有一個(gè)或多個(gè)堿性官能團(tuán)(例如氨基、含堿性氮的雜環(huán)基如咪唑基、吲哚基等，胍基，等等)的化合物。堿性氨基酸的優(yōu)選的例子包括具有一個(gè)氨基，一個(gè)羧基和一個(gè)或多個(gè)所說(shuō)堿性官能團(tuán)的化合物。
為了進(jìn)一步具體闡明，例如，可以提及組成蛋白質(zhì)的堿性氨基酸(如精氨酸、賴氨酸、組氨酸等)和由天然物質(zhì)如微生物的代謝物或動(dòng)物和植物成分得到的堿性氨基酸[例如二氨基羧酸如L-鳥(niǎo)氨酸、β-賴氨酸、α，β-二氨基丙酸、L-α，γ-二氨基丁酸，等，L-4-噁溶菌素、L-4-oxolysine、[3R、5R]-3，6-二氨基-5-羥基己酸，等)，較優(yōu)選組成蛋白質(zhì)的堿性氨基酸(如精氨酸、賴氨酸、組氨酸等)和由天然物質(zhì)如微生物的代謝物或動(dòng)物和植物成分得到的堿性α-氨基酸(例如L-鳥(niǎo)氨酸、β-賴氨酸、α，β-二氨基丙酸、L-α，γ-二氨基丁酸，L-4-噁溶菌素、L-4-oxolysine，等)，在這些當(dāng)中最優(yōu)選賴氨酸、精氨酸、組氨酸。
在結(jié)構(gòu)式(Ⅱ)中，由R3表示的保護(hù)基優(yōu)選利用如下所述的羧基保護(hù)基。
在結(jié)構(gòu)式(Ⅱ)中，在由Ⅹ′表示的氨基酸序列中的任意保護(hù)的氨基酸殘基中的氨基酸與在上述由Ⅹ表示的氨基酸序列中的氨基酸殘基中的氨基酸具有相同的意義。
在結(jié)構(gòu)式(Ⅱ)中，在由Ⅹ′表示的具有增強(qiáng)氨基酸序列的水溶性的基團(tuán)的任意保護(hù)的氨基酸殘基中的氨基酸與在上述由Ⅹ表示的具有增強(qiáng)氨基酸序列的水溶性的基團(tuán)的氨基酸殘基中的氨基酸具有相同的意義。
在肽合成中使用的保護(hù)氨基、羧基或羥基的已知的保護(hù)基可提及用作保護(hù)基。這些是可被除去的保護(hù)基，例如，通過(guò)水解、氫解、還原、氨解、或肼解。
氨基保護(hù)基的例子包括尿烷-型保護(hù)基(例如，芐氧基羰基、叔丁氧基羰基、烯丙氧基羰基、叔戊氧基羰基、異冰片基氧基羰基、4-甲氧基芐氧基羰基、2-氯代芐氧基羰基、金剛烷基氧基羰基、9-芴基甲氧基羰基、2，2，2-三氯代乙氧基羰基)，?；捅Ｗo(hù)基(例如，任意地具有象鹵素那樣的取代基的C1-6低級(jí)脂肪酸殘基，例如甲?；?、乙酰基、丙?；⑷却阴；?、氯代乙?；?，等，鄰苯二甲酰、甲苯磺酰、2-硝基亞氧硫酰、4-甲氧基-2-硝基亞氧硫酰、苯甲酰，等)和烷基型保護(hù)基(例如三苯甲基、芐基等)。
在這些當(dāng)中，最優(yōu)選尿烷型保護(hù)基。
羧基可通過(guò)將它們轉(zhuǎn)化成，例如，酰氨基、酰肼基或酯來(lái)保護(hù)。優(yōu)選的酰氨基或酰肼基是用適當(dāng)取代基取代的那些。優(yōu)選的酰氨基是用C7-19芳烷基取代的那些，該芳烷基任意地用，例如，烷氧基取代(例如3，4-二甲氧基芐基或雙-(對(duì)-甲氧基苯基)-甲基)。優(yōu)選的酰肼基是用，例如，C1-6烷氧基羰基取代的那些。該烷氧基羰基任意地用鹵素(例如，氟、氯、溴，等)，C6-12芳基(例如，苯基、對(duì)聯(lián)苯基，等)取代(例如，芐氧基羰基、三氯代乙氧基羰基、叔丁氧基羰基、2-(對(duì)-聯(lián)苯基)-異丙氧基羰基，等)。鹵代C2-6鏈烷?；?例如三氟乙?；?，等)和C7-19芳烷基(例如三苯甲基，等)也在其中。此外，羧基可作為酯用任意取代的低級(jí)醇(例如，甲醇、乙醇、氰基甲基醇、苯甲酰甲基醇、叔丁醇，等)，芳烷醇[例如，任意地用，例如，低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基或鹵原子取代的芐基醇或二苯基甲醇(如，二苯基甲醇、對(duì)硝基芐基醇、對(duì)甲氧基芐基醇、2，4，6-三甲基芐基醇，等)]，任意用吸電子基團(tuán)取代的酚和苯硫酚(例如，苯硫酚、甲苯硫酚、對(duì)硝基苯硫酚，2，4，5-和2，4，6-三氯代苯酚，對(duì)氰基苯酚、對(duì)甲磺酰苯酚，等)來(lái)保護(hù)，此外，還可用N-羥基亞胺(例如，N-羥基琥珀酰亞胺、N-羥基苯鄰二甲酰亞胺，等)，N-羥基哌啶、8-羥基喹啉等來(lái)保護(hù)。
作為特殊的羧基保護(hù)基，其可在中性反應(yīng)條件下被除去，可以提及的有烴基-甲硅烷基-乙基，例如，2-(三甲基甲硅烷基)-乙基(在公開(kāi)的德國(guó)專利號(hào)2，706，490中已描述)。
羥基可通過(guò)，例如，?；蛎鸦瘉?lái)保護(hù)。
在酰基化中特別優(yōu)選的?；怯锰妓嵫苌玫降幕?例如，芐氧基羰基或乙氧基羰基)。對(duì)于醚化，例如，優(yōu)選芐基。四氫呋喃或叔丁基。對(duì)于羥基的保護(hù)，優(yōu)選使用2，2，2-三氟-1-叔丁氧基羰基氨基乙基或2，2，2-三氟-1-芐氧基羰基氨基乙基[Chem.Ber.，第100(1967)卷，第3838-3849頁(yè)]。
在結(jié)構(gòu)式(Ⅰ)中，在氨基殘基可能是光學(xué)活性異構(gòu)體的情況下，其可以是任意的L-，D-和DL-形式。
化合物(Ⅰ)或其鹽的優(yōu)選的實(shí)例包括(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(十六烷酰基氧基)-4-硫雜庚酰-Gly-Glu-Glu-OH(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(十六烷酰基氧基)-4-硫雜庚酰-Gly-Gly-Glu-OH(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(十六烷?；趸?-4-硫雜庚酰-Glu-Gly-Glu-OH(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(十六烷酰基氧基)-4-硫雜庚酰-Gly-D-Glu-OH，或其鹽。
下面，描述制備上述化合物的方法。
常常使用的保護(hù)基和反應(yīng)劑在后面的敘述中被縮寫(xiě)為如下的形式
Fmoc9-芴基甲氧基羰基Z芐氧基羰基tBu叔丁基OtBu叔丁氧基TFA三氟乙酸TEA三乙胺DMFN，N-二甲基甲酰胺DCCN，N′-二環(huán)己基碳化二亞胺BOP苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)磷鎓·六氟磷酸鹽DICN，N′-二異丙基碳化二亞胺HONBN-羥基-5-降冰片烯-2，3-二羧酸酰亞胺DEPC二乙基偶磷氰酸鹽HOBT1-羥基苯并三唑DCM二氯甲烷MeOH甲醇THF四氫呋喃WSC水溶性碳化二亞胺·鹽酸鹽DMAP4-二甲基氨基吡啶Boc叔丁氧基羰基R-R-構(gòu)型S-S-構(gòu)型作為本說(shuō)明書(shū)基本骨架的化合物是2-氨基-6，7-二羥基-4-硫雜庚酸
在本說(shuō)明書(shū)中，硫雜庚酰被縮寫(xiě)成TFT，硫雜庚酸被縮寫(xiě)成TFT-OH。十八?；豢s寫(xiě)成Ste，十六酰被縮寫(xiě)成Pam，十四酰被縮寫(xiě)成Myr，和十八酰氧基被縮寫(xiě)成SteO，十六酰氧基被縮寫(xiě)成PamO，十四酰氧基被縮寫(xiě)成MyrO。
用結(jié)構(gòu)式(Ⅰ)表示的化合物或其鹽可通過(guò)使用結(jié)構(gòu)式(Ⅱ)表示的化合物或其鹽進(jìn)行脫保護(hù)基反應(yīng)來(lái)制備。
實(shí)際上，脫保護(hù)基反應(yīng)可通過(guò)用已知的方法來(lái)進(jìn)行，例如，通常用在肽化學(xué)領(lǐng)域常用的方法。[參見(jiàn)合成化學(xué)叢書(shū)，肽合成，作者IZUMIYA Nobuo，UNO Motonori，KATO Tetsuo & AOYAGI Haruhiko;由Maruzen有限公司出版，1975，日本]。
用尿烷型保護(hù)基保護(hù)的氨基上的脫保護(hù)反應(yīng)通過(guò)在無(wú)溶劑或在溶劑中使氨基與酸接觸來(lái)進(jìn)行，所說(shuō)溶劑對(duì)反應(yīng)不起副作用。對(duì)于所說(shuō)的溶劑，可使用鹵化烴(例如，二氯甲烷、氯仿、1，2-二氯乙烷，等)，醇(例如，甲醇;乙醇，等)，水和這些溶劑的適當(dāng)比例的混合物。該反應(yīng)通過(guò)使化合物(Ⅱ)或其鹽與一種酸接觸來(lái)進(jìn)行。所說(shuō)的酸，例如，可使用鹵代乙酸(例如三氟乙酸，等)，氫鹵酸(例如，氫氯酸、氫溴酸，等)也在其中。N-芐氧基羰基和N-4-甲氧基芐氧基羰基通過(guò)催化劑進(jìn)行催化氫代除去是有利的，所說(shuō)催化劑，例如，有鈀催化劑(例如，鈀-碳、鈀-硫酸鋇、鈀黑等)或銠催化劑。在這種情況下，可使用已知的溶劑，例如，環(huán)狀醚(例如，四氫呋喃，等)，醇(例如，甲醇、乙醇，等)，或者，根據(jù)情況，一種環(huán)狀醚和其它惰性溶劑[例如，低級(jí)脂肪酸酰胺(例如，二甲基甲酰胺，等)等]的混合物。
N-9-芴基甲氧基羰基可使用有機(jī)胺有利地除去，有機(jī)胺的例子有二乙胺、哌啶、嗎啉、4-二甲基氨基吡啶或二環(huán)己基胺。該反應(yīng)在對(duì)反應(yīng)不引起副使用的溶劑中進(jìn)行。作為溶劑，例如，可以使用酰胺(例如，二甲基甲酰胺、乙酰胺等)，醇(例如，甲醇、乙醇，等)，鹵代烴(例如氯仿、二氯甲烷、1，2-二氯乙烷，等)，等，或這些溶劑以適當(dāng)比例的混合物。
有利的是，N-2，2，2-三氯代乙氧基羰基通過(guò)使用金屬(如鋅，等)與有機(jī)羧酸(例如，乙酸、丙酸，等)一起來(lái)除去。該反應(yīng)在對(duì)反應(yīng)不引起副作用的溶劑中進(jìn)行。作為溶劑，例如，可以使用上述羧酸，醇(例如，甲醇、乙醇，等)，水或這些溶劑以適當(dāng)比例的混合物。
酰化羥基的脫保護(hù)基反應(yīng)(脫?；磻?yīng))可通過(guò)在溶劑中將其與酸接觸來(lái)進(jìn)行，所說(shuō)溶劑不在反應(yīng)中起副作用。對(duì)于所說(shuō)的溶劑，可使用鹵代烴(例如，二氯甲烷、氯仿、1，2-二氯乙烷，等)，醇(例如，甲醇、乙醇，等)，水和這些溶劑以適當(dāng)比例的混合物。該反應(yīng)通過(guò)使化合物(Ⅱ)或其鹽與一種酸接觸來(lái)進(jìn)行。所說(shuō)的酸，例如，使用鹵代乙酸(例如三氟乙酸，等)，氫鹵酸(例如，氫氯酸、氫溴酸，等)等。
O-芐基的消去優(yōu)選通過(guò)使用催化劑進(jìn)行催化氫化反應(yīng)來(lái)完成，所說(shuō)催化劑，例如，有鈀催化劑，例如，鈀-碳、鈀/硫酸鋇和鈀黑等，或銠催化劑，在這種情況下，可使用已知的溶劑，例如，環(huán)狀醚(例如，四氫呋喃，等)和其它惰性溶劑[例如，低級(jí)脂肪酸酰胺(例如，二甲基甲酰胺，等)等]的混合物。
O-四氫呋喃基或O-叔丁基的消去可通過(guò)用酸水解(象上述脫?；粯?來(lái)完成。
羧酸保護(hù)基的消去可通過(guò)用酸水解(象上述脫酸化一樣)來(lái)完成。芐基酯，例如，可用在象上述O-芐基消去保護(hù)基中的情況一樣通過(guò)催化氫化反應(yīng)來(lái)脫保護(hù)。上述2-(三甲基甲硅烷基)-乙基的消去可在中性條件下和適當(dāng)溶劑中，例如，通過(guò)氫氟酸的一種鹽，如，尤其是季氮堿與氫氟酸的鹽(例如，四乙胺氟化物，等)的作用來(lái)進(jìn)行。
用于制備上述通式(Ⅰ)或其鹽的起始化合物即用通式(Ⅱ)表示的化合物或其鹽可通過(guò)使用在肽合成中常用的方法，使相應(yīng)于在肽鍵任意位置上斷開(kāi)的兩個(gè)碎片中的一個(gè)具有一個(gè)活性羧基的物質(zhì)和相應(yīng)于另一碎片的具有一個(gè)活性氨基的物質(zhì)進(jìn)行縮合來(lái)制備。
上述作為在肽合成中常用的方法，例如，可使用液相合成方法和固相合成方法中的任意一個(gè)。這樣的上述肽合成方法包括，例如，在“肽合成”[由M.Bondosky和M.Ondetti所著，邊緣科學(xué)(Interscience)，New York 1966)];“蛋白質(zhì)”第二卷(由F.M.Finn和K.Hoffmann所著，H.Nenrath和R.L.Hill編輯，Academic Press Inc.New York，1976);“肽合成的基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)”(由IZUMIYA Nobuo所著，Maruzen Co.Ltd.，1985);“Seikagaku Jikken Koza 1”(由YAJIMA Haruaki，SAKAKIBARA Shunpei等人所著，日本生化學(xué)會(huì)編輯，Tokyo Kagaku Dojin，1977);“Zoku Seikagaku Jikken Koza 2”(由KIMURA Shun等人所著，日本生化學(xué)會(huì)編輯，Tokyo Kagaku Dojin 1987);“固相肽合成”(由J.M.Slewart和J.D.Young所著，Pizs化學(xué)公司，Illinois，1984)所述的方法，或與這些相類似的方法。上面這些方法的實(shí)際例子包括，例如，疊氮化物方法，氯化物方法，酸酐方法，混合酸酐方法，DCC方法，活性酯方法，使用Woodword試劑K的方法，羰基咪唑方法，redoc方法，DCC/HONB方法，DIC/HONB方法，DCC/HONB方法，使用BOP試劑的方法，使用DEPC試劑的方法等等。
對(duì)于一個(gè)起始碎片的優(yōu)選的實(shí)際的例子，在制備上述化合物(Ⅱ)或其鹽的情況中，可以有，例如，用結(jié)構(gòu)式(Ⅲ)表示的化合物或其鹽
其中，X′和R3具有與上述相同的意義。
化合物(Ⅲ)或其鹽可通過(guò)，例如，上述常用的肽合成方法來(lái)制備。
化合物(Ⅲ)的優(yōu)選實(shí)例包括如下化合物。
化合物編號(hào)結(jié)構(gòu)式P-1 H-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-Thr(tBu)-OtBuP-2 H-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-OtBuP-3 H-Glu(OtBu)-Gly-Glu(OtBu)-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBuP-4 H-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-OtBuP-5 H-Gly-Gly-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBuP-6 H-Glu(OtBu)-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBuP-7 H-Gly-Gly-Glu(OtBu)-OtBuP-8 H-Gly-Gly-Gly-Asp(OtBu)-OtBuP-9 H-Gly-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBuP-10 H-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBuP-11 H-Gly-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBuP-12 H-Gly-Glu(OtBu)-D-Glu(OtBu)-OtBuP-13 H-Glu(OtBu)-Gly-Glu(OtBu)-OtBuP-14 H-Glu(OtBu)-D-Glu(OtBu)-OtBuP-15 H-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBuP-16 H-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-D-Glu(OtBu)-OtBuP-17 NH2(CH2)7CO-Glu(OtBu)-OtBuP-18 NH2(CH2)11CO-Glu(OtBu)-OtBu
化合物編號(hào)結(jié)構(gòu)式P-19 4－氨基苯甲?；璆lu(OtBu)-OtBuP-20 4－(甘氨酰氨基)苯甲?；璆lu(OtBu)-OtBuP-21 NH2(CH2)5CO-Glu(OtBu)-OtBuP-22 NH2(CH2)6NHCO-Glu(OtBu)-OtBuP-23 4－(氨基甲基)苯甲?；璆lu(OtBu)-OtBu氫氯化物P-244-(N-(t-丁氧基羰基甲基)氨基甲基)苯甲?；璆lu(OtBu)-OtBuP-25 H-Gly-Lys(Boc)-Gly-OtBu作為通過(guò)與上述化合物(Ⅲ)化合制備化合物(Ⅱ)的起始碎片，可使用用結(jié)構(gòu)式(Ⅳ)表示的化合物
其中，Y表示氨基保護(hù)基;R1和R2與上述具有相同的定義。
在上述通式(Ⅳ)中用Y表示的氨基保護(hù)基與上述氨基保護(hù)基具有相同的定義。
化合物(Ⅳ)或其鹽，其中R1和R2代表一個(gè)且相同的基，可通過(guò)適當(dāng)使用本身已知的方法制備[例如，肽和蛋白質(zhì)研究國(guó)際期刊，38，1991第545-554頁(yè);化學(xué)和藥物公報(bào)，39第2590-2596頁(yè)]。
在R1和R2是相互不同的基團(tuán)的情況下，最通用的制備方法描述如下。
首先，制備甘油衍生物的一元?；衔?，例如，縮水甘油或表氯醇。另一方面，胱氨酸的二硫化物鍵(其中氨基和羧基被保護(hù))被還原打開(kāi)從而得到半胱氨酸衍生物。
通過(guò)將該半胱氨酸衍生物與上述一元甘油衍生物進(jìn)行加成反應(yīng)，得到2-氨基-6-羥基-7-酰基氧基-4-硫雜庚酸(其中已將氨基和羧基保護(hù))。
在這個(gè)反應(yīng)中，R-(+)-縮水甘油的使用得到了(6R)-2-氨基-6-羥基-7-?；趸?4-硫雜庚酸衍生物，而S-(-)-縮水甘油的使用得到了(6S)-2-氨基-6-羥基-7-酰基氧基-4-硫雜庚酸衍生物。
通過(guò)上述反應(yīng)得到的2-氨基-6-羥基-7-酰基氧基-4-硫雜庚酸在6位上的羥基進(jìn)行常規(guī)的?；?，可以得到具有不同O-?；?-氨基-6，7-雙(?；趸?-4-硫雜庚酸衍生物。
例如，通過(guò)直接使用縮水甘油而不是使用酰基甘油衍生物，得到了2-氨基-6，7-二羥基-4-硫雜庚酸衍生物，以及，通過(guò)使用常規(guī)方法將該產(chǎn)物?；奖愕氐玫搅司哂邢嗤琌-?；?-氨基-6，7-雙(?；趸?-4-硫雜庚酸衍生物。
在上述方法中，通過(guò)除去如此得到的2-氨基-6，7-雙(?；趸?-4-硫雜庚酸衍生物的羧基的保護(hù)基，可制備具有保護(hù)氨基的2-氨基-6，7-雙(?；趸?-4-硫雜庚酸衍生物。
化合物(Ⅳ)的優(yōu)選實(shí)施例包括具有保護(hù)氨基的2-氨基-6，7-雙(酰基氧基)-4-硫雜庚酸衍生物其它的實(shí)例表示如下化合物編號(hào) 結(jié)構(gòu)式GC-1 (2R,6S)-2-Fmoc-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-OHGC-2 (2R,6R)-2-Fmoc-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-OHGC-3 (2S,6R)-2-Fmoc-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-OHGC-4 (2S,6S)-2-Fmoc-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-OHGC-5 (2R,6R)-2-Fmoc-氨基-6-己酰氧基-7-PamO-4-THT-OHGC-6 (2R,6R)-2-Fmoc-氨基-6,7-雙(SteO)-4-THT-OHGC-7 (2R,6R)-2-Fmoc-氨基-6,7-雙(MyrO)-4-THT-OH將這樣得到的起始碎片用下列方法縮合，然后，如果需要的話，除去用Y表示的氨基保護(hù)基得到化合物(Ⅱ)或其鹽。
至于通過(guò)活化起始化合物的羧基得到的化合物，例如，可以使用相應(yīng)的酸酐，疊氮化物，活性酯[例如，與醇(例如，五氯苯酚、2，4，5-三氯苯酚、2，4-二硝基苯酚、氰甲基醇、對(duì)-硝基苯酚、N-羥基-5-降冰片烯-2，3-二羧酸酰亞胺、N-羥基琥珀酰亞胺、N-羥基鄰苯二甲酰亞胺、N-羥基苯并三唑)形成的酯]。對(duì)于氨基被活化的起始化合物，例如，可以使用相應(yīng)的磷酸酰胺。
所說(shuō)的縮合可在溶劑的存在下進(jìn)行。所說(shuō)溶劑選自在肽縮合反應(yīng)中使用的那些已知的溶劑。所說(shuō)的溶劑的例子包括酰胺，例如無(wú)水或含水甲酰胺、二甲基甲酰胺、N-甲基吡咯烷酮，等，亞砜如二甲基亞砜，等，芳香胺如吡啶，等，鹵代烴如氯仿、二氯甲烷，等，醚如四氫呋喃、二噁烷，等，腈如乙腈，等，酯如乙酸乙酯、甲酸乙酯，等，或這些物質(zhì)以適當(dāng)比例的混合物。
反應(yīng)溫度可適當(dāng)?shù)貜挠糜陔逆I形成反應(yīng)的已知范圍選擇，尤其是，例如，通常在約-20℃至40℃的范圍內(nèi)。
反應(yīng)時(shí)間可適當(dāng)?shù)貜挠糜陔逆I形成反應(yīng)的所需的已知范圍內(nèi)選擇，尤其是，例如，在約幾分鐘至48小時(shí)的范圍內(nèi)。
除去用Y表示的氨基保護(hù)基基本上用與上述相同的方法進(jìn)行。
在完成該反應(yīng)后，這樣得到的化合物(Ⅰ)或其鹽可用分離肽的方法來(lái)回收，例如，萃取、分配、再沉淀、結(jié)晶、各種色譜方法、高效液相色譜方法，等。
可用本身已知的方法得到本發(fā)明化合物(Ⅰ)與一種堿，尤其是藥物上可接受的堿的鹽。所說(shuō)堿的例子包括堿金屬如鈉、鉀，等，堿土金屬如鈣、鎂，等，有機(jī)堿如三乙胺、吡啶。等?？捎米陨硪阎姆椒ǖ玫交衔?Ⅰ)與一種酸，尤其是藥物上可接受的酸的鹽。所說(shuō)酸的例子包括無(wú)機(jī)酸(例如，鹽酸、硫酸、磷酸，等)，有機(jī)酸(例如，乙酸、丙酸、檸檬酸、酒石酸、馬來(lái)酸、草酸，等)等等。
化合物(Ⅱ)至(Ⅳ)的鹽使用那些實(shí)際上與化合物(Ⅰ)所用的相同的鹽。
化合物(Ⅰ)或其鹽具有顯著改善造血機(jī)能不足的狀態(tài)的顯著活性，其可用作在哺乳動(dòng)物(例如，狗、豬、牛、馬、猴、人，等)中癌的放射治療或化學(xué)治療引起的白細(xì)胞減少的治療或預(yù)防劑，在骨髓移植情況中造血刺激劑，用作具有增加白細(xì)胞作用的刺激免疫劑，以及還可作為血小板減少癥的治療劑。
化合物(Ⅰ)或其鹽是低毒性的，并可安全地使用。
在將化合物(Ⅰ)或其鹽給藥，例如，給人用藥的情況中，其可安全地單獨(dú)口服或非口服給藥，或通過(guò)與適當(dāng)?shù)乃幬锷峡山邮艿男误w，賦形劑或稀釋劑混合作為藥物組合物來(lái)使用。
上述藥物組合物的例子包括注射劑、口服給藥組合物(例如，粉末顆粒、膠囊、片劑)，局部藥(例如，transnasal劑，經(jīng)皮膚的藥劑，等)栓劑(例如，直腸栓劑、陰道栓劑)。
這些藥物組合物一般可用在藥物制備方法中所用的自身已知的方法來(lái)制備。
例如，本發(fā)明的化合物(Ⅰ)或其鹽可與分散劑[例如，Tween 80(由Atlas Powder公司，U.S.A.制造)，HCO60(由Nikko Chemicals制造)，聚乙二醇、羧甲基纖維素、藻酸鈉等]，防腐劑(例如羥苯甲酸甲酯、羥苯甲酸丙酯、芐基醇、氯代丁醇等]和等滲劑(例如，氯化鈉、甘油、山梨糖醇、葡萄糖等)一起制備成含水注射劑，或通過(guò)在植物油(如橄欖油、芝麻油、花生油、棉花籽油、玉米油等)，丙二醇等中溶解、懸浮或乳化制備成含油注射液。
為將本發(fā)明的化合物(Ⅰ)或其鹽制備成口服給藥的組合物，根據(jù)自身已知的方法，將其與賦形劑(例如乳糖、蔗糖、淀粉等)，崩解劑(例如，淀粉、碳酸鈣等)，粘合劑(例如，淀粉、阿拉伯膠、羧甲基纖維素、聚乙烯基吡咯烷酮、羥丙基纖維素等)或潤(rùn)滑劑(例如，滑石、硬脂酯鎂、聚乙二醇6000)等，一起壓縮模塑，接著，如果需要的話，用本身已知的方法隱蔽藥味或覆蓋，從而得到腸溶衣或制備成持續(xù)釋放的組合物。包衣劑的例子包括羥丙基甲基纖維素、乙基纖維素、羥甲基纖維素、羥丙基纖維素、聚氧亞乙基二醇、Tween 80、Brulonick F68、鄰苯二甲酸乙酸纖維素酯、鄰苯二甲酸羥丙基甲基纖維素酯、琥珀酸乙酯羥甲基纖維素酯、Eudragit(由德國(guó)的Rohm制造，異丁烯酸·丙烯酸共聚物)和色素如二氧化鈦、三氧化二鐵等。根據(jù)本身已知的方法可在腸溶及和核之間提供包底衣。
為將化合物(Ⅰ)或其鹽制備成局部應(yīng)用的固體、半固體或液體組合物，可采用本身已知的方法。例如，為制備固體組合物將化合物(Ⅰ)或其鹽制備成單一的粉末組合物或與賦形劑(例如，乙二醇、甘露糖醇、淀粉、微晶纖維素等)，稠化劑(例如，天然橡膠、纖維素衍生物、丙烯酸聚合物等)摻合。作為上述液體組合物，幾乎與注射液的情況一樣，包括含油或含水懸浮液。作為半固體組合物，優(yōu)選考慮含水或含油膠狀組合物或軟膏。這些組合物可以添加PH調(diào)節(jié)劑(例如，碳酸、磷酸、檸檬酸、鹽酸、氫氧化鈉，等)，防腐劑(例如，對(duì)羥基苯甲酸酯、氯代丁醇、氯化苯甲烴銨，等)。
在制備栓劑的情況中，例如，本發(fā)明的化合物(Ⅰ)或其鹽可制備成含油或水溶性固體、半固體或液體栓劑。作為上述組合物的含油基質(zhì)，可使用任意一個(gè)不溶解化合物(Ⅰ)或其鹽的基質(zhì)，其例子為高級(jí)脂肪酸甘油酯[例如，可可酯、Wittepsols(由Dynamite Nobel，Inc.制造)，等]，中級(jí)脂肪酸甘油酯[例如，Migliols(由Dynamite Nobel Inc.制造)，等]或植物油(例如，芝麻油、大豆油、棉花籽油，等)。水溶性堿的例子包括聚乙二醇和丙二醇，水溶性凝膠基質(zhì)的例子包括天然橡膠、纖維素衍生物、乙烯基聚合物、丙烯酸聚合物，等。
化合物(Ⅰ)或其鹽作為注射液用于人類治療時(shí)其劑量隨疾病，給藥途徑、病人的年齡和疾病情況而變化，在通常成年病人(50Kg體重)的情況中，其有效組分在約0.01μg至20mg，優(yōu)選0.1μg至0.2mg，最好在約0.5μg至50μg范圍內(nèi)。通過(guò)下面的參考例、加工例、實(shí)驗(yàn)例和制劑例，將更詳細(xì)地描述本發(fā)明，但不是以任何方法限制本發(fā)明。在混合溶劑中，所示的混合比的數(shù)量均為每一個(gè)溶劑的體積比。百分?jǐn)?shù)(%)意義，除非特殊說(shuō)明，為重量百分?jǐn)?shù)(W/W%)。
1H-NMR光譜通過(guò)使用四甲基硅烷作內(nèi)標(biāo)，用Varian Gemini 200(200MHz)型光譜儀來(lái)測(cè)定，所有的δ值均以ppm表示。
在參考例和加工例中所用的符號(hào)具有如下意義。s單峰，d雙重峰，t三重峰，q四重峰，dd二重雙重峰，dt二重三重峰，m多重峰，br寬帶。
參考例1H-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-Thrt(Bu)-COtBu(P-1)的制備將H-Gly-Gly-Gly-OH(10.0g，52.9mmol，由肽研究實(shí)驗(yàn)室制備)溶于4N氫氧化鈉水溶液(13.3ml)中。在冰冷卻下，向該溶液中加入4N氫氧化鈉水溶液(15.9ml)和芐氧基羰基氯(9.31ml)，然后，在20℃下，將該混合物攪拌隔夜。用醚洗滌該反應(yīng)混合物。在冰冷卻下，向該含水層中加入5M HCl從而調(diào)節(jié)PH值至3，并在冷的地方，將其靜置隔夜。用過(guò)濾收集得到的結(jié)晶沉淀。用冷水洗滌并干燥。這樣得到的晶體不用提純即可使用，產(chǎn)量為13.4g(78.5%)。
將上面得到的Z-Gly-Gly-Gly-OH(3.04g，9.41mmol)溶于DMF(200ml)中。在冰冷卻下，向該溶液中加入HONB(1.86g，10.4mmol)和DCC(2.14g，10.4mmol)。在冰冷卻下，將該混合物攪拌2小時(shí)，過(guò)濾掉不溶物質(zhì)。
將Z-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-Thr(tBu)-OtBu(6.66g，9.41mmol)溶于甲醇(300ml)中。向該溶液中加入10%(W/W，下文同)鈀-碳。在氫氣流下，在常溫常壓下，將該混合物攪拌2小時(shí)。過(guò)濾掉催化劑，蒸餾掉溶劑，將剩余物溶于DMF(150ml)。在冰冷卻下，向該溶液中加入二異丙基乙胺(1.80ml，10.4mmol)。將該混合物攪拌，并向其中加入上述制備的溶液，在20℃下將該混合物攪拌隔夜，然后蒸發(fā)掉溶劑。向殘余物中加入氯仿和水，并用氯仿萃取。氯仿層用10%(W/V)檸檬酸的水溶液、水、飽和碳酸氫鈉水溶液和水連續(xù)洗滌，然后在無(wú)水硫酸鈉上干燥。蒸餾掉溶劑。殘余物用硅膠柱色譜法[5%(V/V甲醇-氯仿]純化，接著用乙酸乙酯-乙腈重結(jié)晶得到結(jié)晶狀的Z-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-Thr(tBu)-OtBu。產(chǎn)量是5.74g(75.4%)。
m.p.167.5-168.0℃[α]25D+7.28°(c＝1.03，在DMF中)對(duì)C43H70N5O13的元素分析計(jì)算值C，58.75;H，8.03;N，9.56實(shí)測(cè)值C，58.52;H，7.78;N，9.35氨基酸分析[6N HCl，110℃，水解24小時(shí);括號(hào)中的值表示理論值]Glu1.00(1);Thr1.81(2);Gly2.84(3)上述得到的Z-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-Thr(tBu)-OtBu(1.97g，2.24mmol)溶于甲醇(60ml)中。向該溶液中加入10%鈀-碳(120mg)。在氫氣流下，在常溫常壓下，將該混合物攪拌2小時(shí)。除去催化劑，蒸餾掉溶劑留下固體產(chǎn)物P-1，產(chǎn)量是1.64g(98%)。
FAB-MS(M+H)＝879(理論值＝879)參考例2H-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-OtBu(P-2)的制備a)將H-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-OtBu(1.27g，3.05mmol)和Z-Gly-Gly-Gly-OH(0.99g，3.05mmol)溶解在DMF(20ml)中。向該溶液中加入HOBT(453mg，3.35mmol)和WSC(643mg，3.35mmol)。在20℃下，將該混合物攪拌8小時(shí)。將該反應(yīng)混合物濃縮，并將其懸浮在0.2M檸檬酸水溶液(70ml)中，接著用乙酸乙酯(100ml，7.0ml)萃取。合并乙酸乙酯層，并用10%(W/V)氯化銨水溶液、5%(W/V)碳酸氫鈉水溶液、水和飽和食鹽水溶液連續(xù)洗滌，然后在無(wú)水硫酸鈉上干燥，并接著濃縮。向該濃縮物中加入醚-己烷。用過(guò)濾收集得到的沉淀，從而得到白色粉末產(chǎn)物(1.87g，85%)Z-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-OtBu(Z-P-2)。23D+6.9°(c＝0.55，在氯仿中)對(duì)C35H55N5O11的元素分析計(jì)算值C，58.24;H，7.68;N，9.70實(shí)測(cè)值C，57.87;H，7.64;N，9.97b)將該粉末產(chǎn)物(1.09g)溶解在甲醇(36ml)中，向其中加入10%鈀-碳(109ml)。在氫氣流下，在常溫常壓下，將該混合物攪拌2小時(shí)。除去催化劑，蒸餾掉溶劑留下粉末產(chǎn)物P-2(861mg)。23D+9.1°(c＝0.53，在氯仿中)對(duì)C27H49N5O9的元素分析計(jì)算值C，55.18;H，8.40;N，11.92實(shí)測(cè)值C，54.88;H，8.57;N，11.68參考例3H-Glu(OtBu)-Gly-Glu(OtBu)-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(P-3)的制備用基本上與參考例2相同的方法，制備H-Glu(OtBu)-Gly-Glu(OtBu)-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(P-3)。
原料 反應(yīng)條件 產(chǎn)物a)1)Z-Glu(OtBu)-OH DCC 287mg Z-P-3(568mg) HOBT 188mg (550mg)OMF 25ml2)H-Gly-Glu(OtBu)- 20℃ 16hGly-D-Glu(OtBu)-OtBu(710mg)b)Z-P-3 10%Pd-C 100mg P-3(550mg) MeOH 18mg (470mg)20℃ 4h化合物Z-P-3[α]20D+5.0°(c＝0.54，在氯仿中)對(duì)C43H67N5O14的元素分析計(jì)算值C，58.82;H，7.69;N，7.98實(shí)測(cè)值C，58.67;H，7.67;N，8.26化合物P-3[α]20D-6.1°(c＝0.51，在氯仿中)對(duì)C35H61N5O12的元素分析計(jì)算值C，56.51;H，8.27;N，9.42實(shí)測(cè)值C，56.66;H，8.30;N，9.63
參考例4H-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(P-4)的制備用基本上與參考例2相同的方法，制備H-Gly-Gly-Gly-Glu-(OtBu)-OtBu(P-4)。
原料 反應(yīng)條件 產(chǎn)物a)1)Z-Gly-Gly-Gly-OH WSC 548mg Z-P-4(0.84g) HOBT 386mg (0.81g)DMF 15ml2)H-Glu(OtBu)-OtBu 20℃ 18h(0.68g)b)Z-P-4 10%Pd-C 73mg P-4(735mg) MeOH 25mg (543mg)20℃ 2h化合物Z-P-4[α]23D+9.6°(c＝0.56，在氯仿中)對(duì)C27H40N4O9的元素分析計(jì)算值C，57.43;H，7.14;N，9.92實(shí)測(cè)值C，57.60;H，7.12;N，9.88化合物P-4[α]23D+13.1°(c＝0.51，在氯仿中)對(duì)C19H34N4O7·0.5H2O的元素分析計(jì)算值C，51.92;H，8.03;N，12.75實(shí)測(cè)值C，52.09;H，7.89;N，12.56
參考例5H-Gly-Gly-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(P-5)的制備用基本上與參考例2相同的方法，制備H-Gly-Gly-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(P-5)。
原料 反應(yīng)條件 產(chǎn)物a)1)Z-Gly-Gly-Gly-OH WSC 1.06g Z-P-5(1.62g) HOBT 744mg (1.93g)DMF 25ml2)H-D-Glu(OtBu)-OtBu 20℃ 16h(1.30g)b)Z-P-5 10%Pd-C 192mg P-5(1.92g) MeOH 64mg (1.53g)20℃ 1.3h化合物Z-P-5[α]23D+9.1°(c＝0.54，在氯仿中)對(duì)C27H40N4O9的元素分析計(jì)算值C，57.43;H，7.14;N，9.92實(shí)測(cè)值C，57.38;H，7.06;N，10.02化合物P-5[α]23D-13.5°(c＝0.54，在氯仿中)對(duì)C19H34N4O7·0.5H2O的元素分析計(jì)算值C，51.92;H，8.03;N，12.75實(shí)測(cè)值C，51.98;H，7.93;N，12.68
參考例6H-Glu(OtBu)-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(P-6)的制備用基本上與參考例2相同的方法，制備H-Glu(OtBu)-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(P-6)。
原料 反應(yīng)條件 產(chǎn)物a)1)Fmoc-Glu(OtBu)-OH WSC 1.24g Fmoc-P-6(2.78g) HOBT 876mg (3.73g)DCM 85ml2)H-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu 20℃ 16h(1.86g)[α]23D-12°(c＝0.54，在氯仿中)對(duì)C39H53N3O10的元素分析計(jì)算值C，64.71;H，7.38;N，5.80實(shí)測(cè)值C，64.55;H，7.43;N，6.09c)將該粉末產(chǎn)物(2.10g)溶解在二氯甲烷(63ml)中，并向其中加入哌啶(7.0ml)，在室溫下將該混合物攪拌1小時(shí)。向該反應(yīng)混合物中加入乙酸乙酯(300ml)，并用1N HCl(70ml)和0.03N HCl(100ml×2)萃取。將含水層調(diào)節(jié)PH值至6.0，并用己烷∶乙醚(1∶1)的混合物洗滌(100ml×5)。然后，將PH值調(diào)節(jié)至8.6，接著用乙酸乙酯(150ml×2)萃取。然后在無(wú)水硫酸鈉上干燥，濃縮得到無(wú)色油狀產(chǎn)物P-6。23D-17°(c＝0.47，在氯仿中)對(duì)C24H43N3O8的元素分析計(jì)算值C，57.47;H，8.64;N，8.38實(shí)測(cè)值C，57.40;H，8.73;N，8.60參考例7H-Gly-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(P-7)的制備用基本上與參考例2相同的方法，制備H-Gly-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(P-7)。
原料 反應(yīng)條件 產(chǎn)物a)1)Z-Gly-Gly-OH WSC 1.63g Z-P-7(2.05g) HOBT 1.15g (3.34g)DMF 40ml2)H-Glu(OtBu)-OtBu 20℃ 17h(2.00g)b)Z-P-7 10%Pd-C 200mg P-7(無(wú)色油狀產(chǎn)物)(2.00g) MeOH 60mg (1.45g)20℃ 3h化合物Z-P-7對(duì)C25H37N3O8·0.5H2O的元素分析計(jì)算值C，58.13;H，7.41;N，8.13實(shí)測(cè)值C，58.44;H，7.37;N，8.33
參考例8H-Gly-Gly-Gly-Asp(OtBu)-OtBu(P-8)的制備用基本上與參考例2相同的方法，制備H-Gly-Gly-Gly-Asp(OtBu)-OtBu(P-8)。
原料 反應(yīng)條件 產(chǎn)物a)1)Z-Gly-Gly-Gly-OH WSC 3.44g Z-P-8(6.67g) HOBT 2.42g (8.30g)DMF 100ml2)H-Asp(OtBu)-OtBu 20℃ 15h(4.00g)b)Z-P-8 10%Pd-C 187mg P-8(1.87g) MeOH 60mg (1.35g)20℃ 2h化合物Z-P-8對(duì)C39H38N4O9的元素分析計(jì)算值C，56.72;H，6.96;N，10.18實(shí)測(cè)值C，56.48;H，6.88;N，10.23化合物P-8對(duì)C18H32N4O7的元素分析計(jì)算值C，51.91;H，7.74;N，13.45實(shí)測(cè)值C，51.80;H，8.11;N，13.50
參考例9H-Gly-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(P-9)的制備用基本上與參考例2相同的方法，制備H-Gly-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(P-9)。
原料 反應(yīng)條件 產(chǎn)物a)1)Z-Gly-Gly-OH WSC 569mg Z-P-9(790mg) HOBT 401mg (1.18g)DMF 23ml2)H-D-Glu(OtBu)-OtBu 20℃ 16h(700mg)b)Z-P-9 10%Pd-C 110mg P-9(1.10g) MeOH 40ml (850mg)20℃ 2h化合物Z-P-9[α]24D-9.3°(c＝0.53，在氯仿中)對(duì)C25H37N3O8·0.5H2O的元素分析計(jì)算值C，58.13;H，7.41;N，8.13實(shí)測(cè)值C，58.31;H，7.42;N，8.24化合物P-9[α]23D-11.9°(c＝0.37，在氯仿中)對(duì)C17H31N3O6·0.25H2O的元素分析計(jì)算值C，54.02;H，8.40;N，11.12實(shí)測(cè)值C，53.84;H，8.85;N，11.24
參考例10H-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(P-10)的制備用基本上與參考例2相同的方法，制備H-Glu-D-Glu(OtBu)-OtBu(P-10)。
原料 反應(yīng)條件 產(chǎn)物a)1)Z-Gly-OH WSC 569mg Z-P-10(620mg) HOBT 401mg (1.23g)DCM 23ml2)H-D-Glu(OtBu)-OtBu 20℃ 16h(700mg)b)Z-P-10 10%Pd-C 120mg P-10(1.23g) MeOH 40mg (830mg)20℃ 1.5h化合物Z-P-10[α]20D-10.3°(c＝0.52，在氯仿中)對(duì)C23H34N2O7·0.25H2O的元素分析計(jì)算值C，60.71;H，7.64;N，6.16實(shí)測(cè)值C，60.79;H，7.68;N，6.28化合物P-10[α]20D-17.9°(c＝0.52，在氯仿中)對(duì)C15H28N2O5的元素分析計(jì)算值C，56.94;H，8.92;N，8.85實(shí)測(cè)值C，56.81;H，8.95;N，9.04
參考例11H-Gly-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBu(P-11)的制備用基本上與參考例2相同的方法，制備H-Gly-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBu(P-11)。
原料 反應(yīng)條件 產(chǎn)物a)1)Z-Gly-OH WSC 318mg Z-P-11(347mg) HOBT 224mg (930mg)DCM 22ml2)H-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBu 20℃ 16h(670mg)b)Z-P-11 10%Pd-C 90mg P-11(870mg) MeOH 30mg (650mg)20℃ 2h化合物Z-P-11熔點(diǎn)92.4-92.7℃[α]24D-3.5°(c＝0.51，在氯仿中)對(duì)C32H49N3O10·0.25H2O的元素分析計(jì)算值C，60.03;H，7.79;N，6.56實(shí)測(cè)值C，60.18;H，7.81;N，6.26化合物P-11[α]24D-6.8°(c＝0.54，在氯仿中)對(duì)C24H43N3O8·0.25H2O的元素分析計(jì)算值C，56.95;H，8.66;N，8.30實(shí)測(cè)值C，56.92;H，8.74;N，8.06
參考例12H-Gly-Glu(OtBu)-D-Glu(OtBu)-OtBu(P-12)的制備用基本上與參考例2相同的方法，制備H-Gly-Glu(OtBu)-D-Glu(OtBu)-OtBu(P-12)。
原料 反應(yīng)條件 產(chǎn)物a)1)Z-Gly-OH WSC 334mg Z-P-12(364mg) HOBT 235mg (760mg)DCM 23ml20℃ 16h2)H-Glu(OtBu)-D-Glu(OtBu)-OtBu(700mg)b)Z-P-12 10%Pd-C 70mg P-12(700mg) MeOH 23mg (550mg)20℃ 2h化合物Z-P-12[α]23D-11.5°(c＝0.53，在氯仿中)對(duì)C32H49N3O10的元素分析計(jì)算值C，60.46;H，7.77;N，6.61實(shí)測(cè)值C，60.47;H，7.88;N，6.53化合物P-12[α]23D-19.8°(c＝0.51，在氯仿中)對(duì)C24H43N3O8·0.5H2O的元素分析
計(jì)算值C，56.45;H，8.69;N，8.23實(shí)測(cè)值C，56.52;H，8.77;N，8.25參考例13H-Glu(OtBu)-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(P-13)的制備用基本上與參考例2相同的方法，制備H-Glu(OtBu)-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(P-13)。
原料 反應(yīng)條件 產(chǎn)物a)1)Z-Glu(OtBu)-OH WSC 447mg Z-P-13(785mg) HOBT 315mg (1.20g)DCM 22ml2)H-Gly-Glu(OtBu)-OtBu 20℃ 16h(670mg)b)Z-P-13 10%Pd-C 110mg P-13(1.10g) MeOH 40mg (840mg)20℃ 2h化合物Z-P-13[α]24D+4.2°(c＝0.53，在氯仿中)對(duì)C32H49N3O10的元素分析計(jì)算值C，60.46;H，7.77;N，6.61實(shí)測(cè)值C，60.48;H，7.78;N，6.88
化合物P-13[α]24D+7.0°(c＝0.52，在氯仿中)對(duì)C24H43N3O8·0.25H2O的元素分析計(jì)算值C，56.95;H，8.66;N，8.30實(shí)測(cè)值C，56.94;H，8.60;N，8.04參考例14H-Glu(OtBu)-D-Glu(OtBu)-OtBu(P-14)的制備用基本上與參考例2相同的方法，制備H-Glu(OtBu)-D-Glu(OtBu)-OtBu(P-14)。
原料 反應(yīng)條件 產(chǎn)物a)1)Z-Glu(OtBu)-OH WSC 1.06g Z-P-14(1.86g) HOBT 746mg (3.09g)DCM 43ml2)H-D-Glu(OtBu)-OtBu 20℃ 16h(1.30g)b)Z-P-14 10%Pd-C 500mg P-14(3.00g) MeOH 67mg (2.24g)20℃ 3h化合物Z-P-14[α]23D-7.9°(c＝0.56，在氯仿中)對(duì)C30H46N2O9的元素分析
計(jì)算值C，62.27;H，8.01;N，4.84實(shí)測(cè)值C，62.49;H，8.14;N，5.07化合物P-14[α]23D+2.3°(c＝0.61，在氯仿中)對(duì)C22H40N2O7·1.5H2O的元素分析計(jì)算值C，56.03;H，9.19;N，5.94實(shí)測(cè)值C，56.04;H，8.96;N，5.92參考例15H-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBu(P-15)的制備用基本上與參考例2相同的方法，制備H-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBu(P-15)。
原料 反應(yīng)條件 產(chǎn)物a)1)Z-Glu(OtBu)-OH WSC 318mg Z-P-15(559mg) HOBT 224mg (1.06g)DCM 22ml20℃ 16h2)H-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBu(670mg)b)Z-P-15 10%Pd-C 100mg P-15(1.00g) MeOH 33ml (800mg)20℃ 2h
化合物Z-P-15[α]24D-11.7°(c＝0.53，在氯仿中)對(duì)C39H61N3O12的元素分析計(jì)算值C，61.32;H，8.05;N，5.50實(shí)測(cè)值C，61.40;H，8.13;N，5.28化合物P-15[α]24D-13.9°(c＝0.49，在氯仿中)對(duì)C31H55N3O10的元素分析計(jì)算值C，59.12;H，8.80;N，6.67實(shí)測(cè)值C，58.96;H，8.91;N，6.80參考例16H-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-D-Glu(OtBu)-OtBu(P-16)的制備用基本上與參考例2相同的方法，制備H-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-D-Glu(OtBu)-OtBu(P-16)。
原料 反應(yīng)條件 產(chǎn)物a)1)Z-Glu(OtBu)-OH WSC 334mg Z-P-16(586mg) HOBT 235mg (880mg)DCM 23ml20℃ 16h2)H-Glu(OtBu)-D-Glu(OtBu)-OtBu(700mg)
b)Z-P-16 10%Pd-C 80mg P-16(800mg) MeOH 27ml (640mg)20℃ 2h化合物Z-P-16[α]24D-20.6°(c＝0.52，在氯仿中)對(duì)C39H61N3O12的元素分析計(jì)算值C，61.32;H，8.05;N，5.50實(shí)測(cè)值C，61.20;H，8.26;N，5.31化合物P-16[α]24D-25.5°(c＝0.54，在氯仿中)對(duì)C31H55N3O10·0.25H2O的元素分析計(jì)算值C，58.70;H，8.82;N，6.63實(shí)測(cè)值C，58.76;H，8.91;N，6.45參考例17NH2(CH2)7CO-Glu(OtBu)-OtBu(P-17)的制備a)向溶于DMF(50ml)中的8-(芐氧基羰基氨基)-辛酸(1.55g)和H-Glu(OtBu)-OtBu鹽酸鹽(1.88g)溶液中加入TEA(1.70ml)和DEPC(1.29g)，在20℃下，將該反應(yīng)混合物攪拌24小時(shí)，向該反應(yīng)混合物中加入水，并用乙酸乙酯萃取。萃取液用5%(W/V，下文同)檸檬酸的水溶液、碳酸氫鈉飽和水溶液和飲和食鹽水溶液洗滌，然后在無(wú)水硫酸鈉上干燥。蒸餾掉溶劑。殘余物用硅膠色譜法(己烷∶乙酸乙酯＝2∶1)純化得到無(wú)色油狀產(chǎn)物Z-NH(CH2)7CO-Glu(OtBu)-OtBu(Z-P-17)(2.40g，收率85%)。
IR(純)ν3310，1720，1650cm-11H-NMR(CDCl3)δ1.10-1.37(8H，m)，1.44(9H，s)，1.47(9H，s)，1.48-2.43(8H，m)，3.18(2H，q，J＝6.6Hz)，4.41-4.54(1H，m)，4.70-4.88(1H，m)，5.10(2H，s)，6.15(1H，d，J＝8.0Hz)，7.27-7.37(5H，m)b)上述得到的化合物Z-P-17(1.19g)的乙醇(20ml)溶液中加入10%鈀-碳(100mg)。在20℃和氫氣流下，將該混合物攪拌2小時(shí)。將反應(yīng)混合物過(guò)濾得到無(wú)色油狀產(chǎn)物P-17(739mg，收率83%)。
IR(純)ν3280，1720，1660cm-11H-NMR(CDCl3)δ1.20-1.40(6H，m)，1.44(9H，s)，1.47(9H，s)，1.52-2.38(10H，m)，2.38-2.65(2H，m)，2.73(2H，t，J＝7.0Hz)，4.42-4.55(1H，m)，6.21(1H，d，J＝8.2Hz)參考例18NH2(CH2)11CO-Glu(OtBu)-OtBu(P-18)的制備用基本上與參考例17相同的方法，制備NH2(CH2)11CO-Glu(OtBu)-OtBu(P-18)。
原料 反應(yīng)條件 產(chǎn)物a)1)Z-NH(CH2)11COOH DEPC 2.45g Z-P-18(3.49g) TEAT 3.5ml (2.32g)DMF 100ml2)H-Glu(OtBu)-Glu(OtBu).HCl 20℃ 24h
(2.96g)b)Z-P-18 10%Pd-C 230mg P-18(2.31mg) EtOH 50ml (1.78g)20℃ 2h化合物 Z-P-18IR(純)ν3310，1725，1650cm-11H-NMR(CDCl3)δ1.10-1.41(16H，m)，1.44(9H，s)，1.47(9H，s)，1.41-2.44(8H，m)，3.19(2H，dt，J＝7.0，7.0Hz)，4.42-4.56(1H，m)，5.10(2H，s)，6.13(1H，d，J＝7.6Hz)，7.23-7.40(5H，m)化合物 P-18IR(純)ν3280，1730，1650cm-11H-NMR(CDCl3)δ1.05-1.40(16H，m)，1.44(9H，s)，1.47(9H，s)，1.55-1.72(4H，m)，1.72-2.50(10H，m)，2.68(2H，t，J＝7.0Hz)，3.19(2H，t，J＝7.6Hz)，4.43-4.57(1H，m)，6.14(1H，d，J＝7.8Hz)參考例194-氨基苯甲?；?Glu(OtBu)-OtBu(P-19)的制備向溶于DMF(200ml)中的4-氨基苯甲酸(6.86g)和H-Glu(OtBu)-OtBu鹽酸鹽(14.8g)溶液中加入TEA(17ml)和DEPC(12.2g)。在20℃下將混合物攪拌48小時(shí)，向該反應(yīng)混合物中加入水，并用乙酸乙酯萃取。萃取液用5%檸檬酸的水溶液，碳酸氫鈉飽和水溶液和飽和食鹽水溶液洗滌，然后在無(wú)水硫酸鈉上干燥。蒸餾掉溶劑。殘余物用醚洗滌得到白色粉末產(chǎn)物化合物P-19(16.2g，收率86%)。
IR(KBr)ν3450，3390，3370，1715，1625，1610cm-11H-NMR(CDCl3)δ1.42(9H，s)，1.49(9H，s)，1.90-2.53(4H，m)，3.99(2H，br s)，4.60-4.73(1H，m)，6.61-6.72(2H，m)，6.76(1H，d，J＝7.6Hz)，7.60-7.71(2H，m)參考例204-(甘氨酰氨基)苯甲酰基-Glu(OtBu)-OtBu(P-20)的制備a)向溶于吡啶(2ml)中的在參考例19中得到的化合物P-19的溶液中加入三氯化磷(0.087ml)，在室溫下，將該混合物攪拌2小時(shí)。向該混合物中再加入Z-甘氨酸(209mg)，并在20℃攪拌18小時(shí)。向該反應(yīng)混合物中加入水，并用乙酸乙酯萃取，然后在無(wú)水硫酸鈉上干燥。蒸餾掉溶劑。殘余物用硅膠柱色譜法(己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)提純得到白色粉末產(chǎn)物化合物Z-P-20(414mg，收率73%)。
IR(KBr)ν3310，1700，1640，1600cm-11H-NMR(CDCl3)δ1.42(9H，s)，1.49(9H，s)，1.95-2.55(4H，m)，4.02(2H，d，J＝5.8Hz)，4.59-4.72(1H，m)，5.17(2H，s)，5.59-5.75(1H，m)，7.09(1H，d，J＝7.8Hz)，7.30-7.42(5H，m)，7.53(2H，d，J＝8.0Hz)，7.77(2H，d，J＝8.0Hz)，8.30-8.50(1H，m)b)向溶于乙醇(4ml)的化合物Z-P-20(414mg)的溶液中加入10%鈀-碳(40mg)。在20℃下和氫氣流中，將該混合物攪拌2小時(shí)。將反應(yīng)混合物過(guò)濾得到白色粉末產(chǎn)物P-20(296mg，收率94%)。
IR(KBr)ν3425，3400，1740，1720，1680，1640，1610cm-1
1H-NMR(CDCl3)δ1.41(9H，s)，1.48(9H，s)，1.90-2.55(4H，m)，3.59(2H，br s)，4.58-4.72(1H，m)，7.02-7.15(1H，m)，7.65(2H，d，J＝8.8Hz)，7.77(2H，d，J＝8.8Hz)，9.65-9.77(1H，m)參考例21NH2(CH2)5CO-Glu(OtBu)-OtBu(P-21)的制備用基本上與參考例17相同的方法，合成NH2(CH2)5CO-Glu(OtBu)-OtBu(P-21)原料 反應(yīng)條件 產(chǎn)物a)1)Z-NH(CH2)5COOH DEPC 2.45g Z-P-21(2.92g) TEA 4.9ml (5.30g)DMF 50ml2)H-Glu(OtBu)-OtBu.HCl 0℃ 30min(2.95g)b)Z-P-21 10%Pd/C 0.5g P-21(5.30g) MeOH 100ml (3.89g)20℃ 2h
化合物 P-211H-NMR(CDCl3)δ1.389(2H，m)，1.444(9H，s)，1.50-1.75(4H，m)，1.75-2.15(2H，m)，2.15-2.38(4H，m)，2.796(2H，t，J＝6.6Hz)，3.320(2H，bs)，4.460(1H，m)，6.400(1H，d，J＝7.4Hz)IR(純)ν3270，3040，2970，2920，2855，1725，1645.1540，1470，1450，1390，1360，1320，1290，1250，1220，1150cm-1參考例22NH2(CH2)6NHCO-Glu(OtBu)-OtBu(P-22)的制備a)將六亞甲基二胺(2.32g，20mmol)溶于甲醇(20ml)中。向該溶液同時(shí)加入1N氫氧化鈉水溶液(22ml)和溶于THF(20ml)中的芐酯基氯(3.4g，20mmol)。在20℃下將混合物攪拌1小時(shí)。將反應(yīng)混合物濃縮至干燥，將濃縮液溶于氯仿(100ml)中。該溶液用水和飽和食鹽水溶液洗滌。將有機(jī)相在無(wú)水硫酸鈉上干燥，并在減壓下濃縮至干燥。使?jié)饪s液在用氨處理的硅膠柱(20g)上吸收。用氯仿-甲醇-水(65∶25∶4)進(jìn)行洗脫得到無(wú)色油狀產(chǎn)物。將該產(chǎn)物溶于TEA(1.34ml，9.64mmol)和DCM(10ml)中，在冰冷卻下，向該溶液中加入氯甲酸4-硝基苯酯(971mg，4.82mmol)，將該混合物攪拌1小時(shí)。向反應(yīng)混合物中加入氯仿(20ml)，并用水和飽和食鹽水溶液洗滌。有機(jī)相在無(wú)水硫酸鈉上干燥，并在減壓下濃縮至干燥。用乙酸乙酯洗滌濃縮液得到無(wú)色晶體狀的6-芐氧基羰基氨基-1-(對(duì)硝基苯氧基羰基)氨基己烷(1.16g，收率14.5%)。
1H-NMR(CDCl3)δ1.25-2.70(8H，m)，3.225(4H，m)，4.742(1H，br s)，5.099(2H，s)，5.25(1H，br s)，7.284(2H，d，J＝9.0Hz)，8.237(2H，d，J＝9.0Hz)b)將上面得到的化合物(1.16g，2.79mmol)和H-Glu(OtBu)-OtBu鹽酸鹽(825mg，2.79mmol)溶于DCM(10ml)中。向該溶液中加入DMAP(680mg，5.58mmol)和TEA(0.77ml，5.58mmol)，并在20℃下將該混合物攪拌2小時(shí)。向該反應(yīng)混合物中加入氯仿(20ml)。在PH為3.5時(shí)用水洗滌該混合物，接著，用碳酸氯鈉的飽和水溶液洗滌。有機(jī)相在無(wú)水硫酸鈉上干燥，并在減壓下濃縮。用硅膠柱[20g，乙酸乙酯-正己烷(2∶3)]提純濃縮物得到白色固體產(chǎn)物Z-NH(CH2)6NHCO-Glu(OtBu)-OtBu(Z-P-22)(1.50g，收率100%)。
1H-NMR(CDCl3)δ1.20-1.38(8H，m)，1.436(9H，s)，1.453(9H，s)，1.70-2.22(2H，m)，2.326(2H，m)，3.169(4H，m)，4.340(1H，m)，4.626(1H，br s)，4.869(1H，br s)，5.045(1H，d，J＝7.6Hz)，5.103(2H，s)，7.352(5H，s)IR(純)ν3350，2980，2940，2855，1730，1640，1560，1455，1395，1370，1330，1255，1150，1100，1030，850，750，735，700cm-1c)將10%鈀-碳(250mg)懸浮在甲醇(20ml)中。在氫氣流中將懸浮液攪拌30分鐘，并向其中加入化合物Z-P-22(1.50g，2.79mmol)，接著在20℃下和氫氣流中，將其攪拌1.5小時(shí)。過(guò)濾從反應(yīng)混合物中除去不溶物質(zhì)。在減壓下將濾液濃縮至干燥得到無(wú)色固體產(chǎn)物P-22(1.12g，收率100%)。
1H-NMR(CDCl3)δ1.391(10H，m)，1.431(9H，s)，1.451(9H，s)，1.747(2H，m)，1.60-2.15(2H，m)，2.90-3.20(4H，m)，4.321(1H，m)，6.013(2H，m)IR(純)ν3350，2980，2930，2860，1730，1640，1560，1500，1475，1455，1390，1365，1250，1150cm-1參考例23制備4-(氨基甲基)苯甲?；?Glu(OtBu)-OtBu鹽酸鹽(P-23)a)在冰冷卻的同時(shí)，向4-(氨基甲基)苯甲酸(25g)在2N氫氧化鈉水溶液(100ml)中的溶液滴加含芐氧基羰基氯(33.8g)的THF(50ml)溶液，將該混合物攪拌2小時(shí)。過(guò)濾收集得到的沉淀，該沉淀用水、1N HCl和乙醚洗滌，接著在減壓下干燥，得到白色粉末狀的4-(乙-氨基甲基)苯甲酸產(chǎn)物(10.5g，收率22%)。
IR(純)ν3313，1684，1612，1529，1430，1322，1292，1253，1054，761，696cm-11H-NMR(CDCl3)δ4.26(2H，d，J＝6.2Hz)，5.05(2H，s)，7.31(2H，d，J＝8.0Hz)，7.36(5H，s)，7.87(2H，d，J＝8.0Hz)b)向在DMF(20ml)中的如上合成的4-(Z-氨基甲基)苯甲酸(1.0g)、H-Glu(OtBu)-OtBu鹽酸鹽(1.15g)和DEPC(860mg)溶液中滴加TEA(1.06g)。將該混合物在20℃攪拌1小時(shí)。減壓下蒸去溶劑，剩余物用硅膠柱(正己烷∶乙酸乙酯＝2∶1)純化，得到無(wú)色蠟狀的4-(Z-氨基甲基)苯甲酰基-Glu(OtBu)-OtBu產(chǎn)物(1.86g，收率100%)。
IR(純)ν1720，1700，1640，1530，1500，1360，1250，1145cm-11H-NMR(CDCl3)δ1.42(9H，s)，1.49(9H，s)，1.90-2.55(4H，m)，4.43(2H，d，J＝6.0Hz)，4.66(1H，m)，5.15(3H，s)，7.01(1H，d，J＝7.0Hz)，7.30-7.40(7H，m)，7.79(2H，d，J＝8.4Hz)c)使如上得到的化合物(1.85g)和10%鈀-碳(200mg)的甲醇(13ml)懸浮液催化還原，共消耗氫氣80ml。濾去催化劑，向?yàn)V液中加入4N HCl乙酸乙酯溶液(0.88ml)。該溶液濃縮得到無(wú)定形產(chǎn)物4-(氨基甲基)苯甲酰基-Glu(OtBu)-OtBu鹽酸鹽(P-23)。
IR(純)ν3400，3000，1731，1650，1540，1506，1369，1235，1151cm-11H-NMR(CDCl3)δ1.41(9H，s)，1.48(9H，s)，1.90-2.40(4H，m)，4.13(2H，s)，4.59(1H，m)，7.48(2H，d，J＝8.0Hz)，7.69(3H，d，J＝8.0Hz)參考例24制備4-(N-(叔丁氧基羰甲基)氨基甲基)苯甲?；?Glu(OtBu)-OtBu(P-24)a)在冰冷卻的同時(shí)，向?qū)兹┗郊姿峒柞?3.0g)、H-Gly-OtBu鹽酸鹽(3.0g)、TEA(1.81g)和乙酸(1.08g)的溶液加入氰基硼氫化鈉(1.15g)，將該混合物在20℃下攪拌1小時(shí)。濃縮反應(yīng)混合物，然后使其溶于乙酸乙酯中。溶液用碳酸氫鈉的飽和水溶液洗滌，接著進(jìn)行干燥。濃縮得到的混合物，濃縮液用硅膠柱(正己烷∶乙酸乙酯＝9∶1-5∶1)純化，得到4-(N-(叔丁氧基羰基甲基)氨基甲基)苯甲酸甲酯(1.98g，收率39%)。
IR(純)ν2975，1720，1605，1455，1430，1410，1390，1360，1280，1225，1150，1100cm-11H-NMR(CDCl3)δ1.47(9H，s)，3.30(2H，s)，3.85(2H，s)，3.91(3H，s)，7.41(2H，d，J＝8.4Hz)，8.00(2H，d，J＝8.4Hz)b)在冰冷卻的同時(shí)，向在DCM(20ml)中的如上合成的化合物(1.03g)和TEA(445mg)溶液中加入芐氧基羰基氯(690mg)。將該混合物攪拌2小時(shí)。減壓蒸去溶劑，將剩余物溶解在THF(6ml)-MeOH(10ml)-H2O(1ml)混合物中。向該溶液中加入LiOH·H2O(400mg)，將混合物在20℃下攪拌4小時(shí)。減壓蒸去溶劑，用5%的KHSO4水溶液使剩余物呈酸性，接著用氯仿萃取。干燥萃取液，然后在減壓下蒸去溶劑，剩余物用硅膠柱(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)純化，得到4-(N-芐氧基羰基-N-(叔丁氧基羰基甲基)氨基甲基)苯甲酸(337mg，收率23%)。
IR(純)ν1735，1705，1700，1450，1410，1360，1290，1230，1220，1150cm-1
1H-NMR(CDCl3)δ1.37(1/2x9H，s)，1.45(1/2x9H，s)，3.81(1/2x2H，s)，3.92(1/2x2H，s)，4.60-4.75(2H，m)，5.20(2H，s)，7.25-7.45(7H，m)，8.05(1/2x2H，d，J＝8.0Hz)，8.08(1/2x2H，d，J＝8.0Hz)c)將在DMF(8ml)中的如上得到的化合物(335mg)、H-Glu(OtBu)-OtBu鹽酸鹽(273mg)、DEPC(205mg)和TEA(255mg)溶液在20℃下攪拌1小時(shí)。減壓蒸去溶劑，剩余物用硅膠柱(正己烷∶乙酸乙酯＝4∶1)純化，得到4-(N-芐氧基羰基-N-(叔丁氧基羰基甲基)氨基甲基)苯甲?；?Glu(OtBu)-OtBu(504mg，收率94%)。
IR(純)ν3350，2970，1730，1710，1660，1530，1495，1450，1360，1240，1220，1150cm-11H-NMR(CDCl3)δ1.37(1/2x9H，s)，1.42(9H，s)，1.45(1/2x9H，s)，1.50(9H，s)，1.95-2.50(4H，m)，3.77(1/2x2H，s)，3.88(1/2x2H，s)，4.60-4.75(3H，m)，5.20(2H，s)，7.02(1H，d，J＝7.4Hz)，7.20-7.40(7H，m)，7.77(1/2x2H，d，J＝8.0Hz)，7.80(1/2x2H，d，J＝8.0Hz)d)對(duì)如上得到的化合物(500mg)和10%Pd-C(200mg)在甲醇(8ml)中的溶液進(jìn)行催化還原，使其消耗20ml氫氣。除去催化劑，然后減壓蒸去溶劑，剩余物用正己烷∶乙酸乙酯(3∶1)研磨，得到化合物P-24(265mg，收率67%)，為白色粉末狀產(chǎn)物。
IR(純)ν3400，2970，1730，1650，1535，1525，1360，1245，1150cm-11H-NMR(CDCl3)δ1.43(9H，s)，1.47(9H，s)，1.49(9H，s)，1.90-2.50(4H，m)，3.53(2H，s)，4.41(2H，s)，4.65(1H，m)，7.18(1H，d，J＝7.2Hz)，7.70(2H，d，J＝8.0Hz)，7.88(2H，d，J＝8.0Hz)參考例25制備H-Gly-Lys(Boc)-Gly-OtBu(P-25)按照基本上與參考例2相同的方法制備H-Gly-Lys(Boc)-Gly-OtBu(P-25)。
原料 反應(yīng)條件 產(chǎn)物a)1)Z-Gly-OH WSC 745mg Z-P-25(813mg) HOBT 525mg (1.90g)DMF 20ml2)H-Lys(Boc)-Gly-OtBu 20℃ 13h(1.27g)b)Z-P-25 10%Pd/C 154mg P-25(1.54g) MeOH 40ml (1.15g)化合物Z-P-25[α]24D-13.4°(c＝0.58，在氯仿中)對(duì)C27H42N4O8·0.5H2O的元素分析計(jì)算值C，57.95;H，7.74;N，10.01實(shí)測(cè)值C，57.73;H，7.44;N，10.03
化合物P-25[α]24D-23.8°(c＝0.58，在氯仿中)對(duì)C19H36N4O6·H2O的元素分析計(jì)算值C，52.52;H，8.81;N，12.89實(shí)測(cè)值C，52.72;H，8.81;N，12.86實(shí)施例1制備(Fmoc-(S)-Cys-OtBu)2將D-胱氨酸(5.00g，20.8mmol)溶于60%高氯酸(10.2ml)中，在冰冷卻的同時(shí)，向該溶液中加入乙酸叔丁酯(117ml)，將該混合物在20℃攪拌2天。對(duì)反應(yīng)混合物過(guò)濾，收集晶體。晶體用乙醚(150ml)洗滌，然后懸浮在碳酸氫鈉的飽和水溶液(100ml)中;該懸浮液用乙酸乙酯(2×150ml)萃取，合并乙酸乙酯層，用水洗滌，并用無(wú)水硫酸鈉干燥，濃縮后得到無(wú)色油狀產(chǎn)物(4.16g)。該油狀產(chǎn)物溶解在THF(60ml)中，在冰冷卻的同時(shí)，向該溶液中加入N-(9-芴基甲氧基羰氧基)琥珀酰亞胺(8.16g，24.2mmol)和N-乙基嗎啉(3.08ml，24.2mmol)的THF(10ml)溶液，混合物在室溫下攪拌2.5小時(shí)。濃縮反應(yīng)混合物，濃縮物懸浮在檸檬酸的10%水溶液(200ml)中。懸浮液用氯仿(2×200ml)萃取，合并氯仿層，用水洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥，接著濃縮。濃縮物用乙酸乙酯結(jié)晶得到無(wú)色晶體狀的(Fmoc-(S)-Cys-OtBu)2(8.68g，收率52%)，m.p.149.5-150℃。23D+5.9°(c＝0.52，在氯仿中)對(duì)C44H48N2O8S2的元素分析計(jì)算值C，66.31;H，6.07;N，3.51;S，8.05實(shí)測(cè)值C，66.55;H，6.13;N，3.43;S，7.97實(shí)施例2制備(2R，6S)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-OH(GC-1)a)將參考文獻(xiàn)(J.W.Metzger等人，Int.J.Peptide Protein Res.38，P545，1991)所述方法制備的(Fmoc-(R)-Cys-OtBu)2(10.0g，12.5mmol)溶于DCM(80ml)中，在冰冷卻的同時(shí)，向該溶液中加入粉末狀鋅(3.27g，50.0mmol)和MeOH-36%HCl-濃H2SO4(100∶7∶1)混合物(下文簡(jiǎn)稱為“酸混合物溶液”)(40ml)。將得到的混合物在20℃下攪拌30分鐘。向該反應(yīng)混合物中加入(S)-(-)-縮水甘油(8.29ml，125mmol)，混合物在40℃下攪拌2小時(shí)。濃縮反應(yīng)混合物直至其體積下降為40ml，然后濾去不溶物。向?yàn)V液中加入飽和鹽水溶液(200ml)，混合物用DCM(2×300ml)萃取，合并DCM層，用無(wú)水硫酸鈉干燥，然后濃縮。濃縮物用硅膠柱色譜純化，以乙酸乙酯-己烷(1∶1，2∶1)洗脫，合并含有目標(biāo)化合物的部分并濃縮得到白色粉末狀產(chǎn)物(2R，6S)-2-Fmoc-氨基-6，7-二羥基-4-THT-OtBu(GC-1a)(10.9g，收率92%)。21D+6.7°(c＝0.56，在氯仿中)對(duì)C25H31NO6·H2O的元素分析計(jì)算值C，61.08;H，6.77;N，2.85;S，6.52實(shí)測(cè)值C，60.95;H，6.62;N，2.70;S，6.31b)將化合物GC-1a(11.0，23.2mmol)溶于THF(200ml)中，向該溶液中加入棕櫚酸(19.1g，74.3mmol)、DIC(11.6ml，74.3mmol)和4-二甲氨基吡啶(DMAP，1.13g，9.26mmol)，將混合物在20℃下攪拌12小時(shí)。濃縮反應(yīng)混合物，濃縮物懸浮在10%(W/V)的檸檬酸水溶液(400ml)中。用乙酸乙酯(800ml)萃取懸浮液，乙酸乙酯層用水洗滌，然后濃縮。濃縮物用硅膠柱色譜純化，連續(xù)用乙酸乙酯-己烷(1∶20，1∶10)洗脫，合并含目標(biāo)化合物的部分并濃縮。濃縮物用己烷結(jié)晶得到無(wú)色晶體狀的(2R，6S)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-OtBu(GC-1b(14.4g，收率65%)。m.p.62.5-63.5℃對(duì)C57H91NO8S的元素分析計(jì)算值C，72.03;H，9.65;N，1.47;S，3.37實(shí)測(cè)值C，71.94;H，9.85;N，1.51;S，3.23c)將化合物GC-1b(14.4g，15.2mmol)溶于TFA(200ml)中，該溶液在20℃下放置30分鐘。濃縮反應(yīng)混合物，濃縮液溶于乙酸乙酯(500ml)中。該溶液用水洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥，接著再濃縮。得到的晶體用乙酸乙酯-己烷重結(jié)晶，得到了無(wú)色晶體狀的GC-1(12.4g，收率91%)。
m.p.82.5-83.5℃[α]23D+14.9°(c＝0.55，在氯仿中)對(duì)C53H83NO8S的元素分析計(jì)算值C，71.18;H，9.35;N，1.57;S，3.59實(shí)測(cè)值C，70.96;H，9.36;N，1.57;S，3.58實(shí)施例3制備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-二羥基-4-THT-OtBu(GC-2a)，(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-OtBu(GC-2b)，和(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-OH(GC-2)。
按照基本上與實(shí)施例2相同的方法制備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-二羥基-4-THT-OtBu(GC-2a)，(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-OtBu(GC-2b)，和(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-OH(GC-2)。
原料(g) 反應(yīng)條件 產(chǎn)物(g)a)(Fmoc-(R)-Cys-OtBu)21)鋅 3.27g GC-2a(10.0) 酸混合物溶液40ml (10.9)DCM 80ml20℃ 20min2)補(bǔ)充R-(+)-縮水甘油8.29ml40℃ 2.5hb)GC-2a 棕櫚酸 6.33g GC-2b(3.90) DIC 3.87ml (4.76)DMAP 402mgTHF 70ml20℃ 13hc)GC-2b TFA 50ml GC-2(2.50) 20℃ 1.5h (2.20)化合物GC-2a[α]21D-8.8°(c＝0.65，在氯仿中)對(duì)C25H31NO6S·0.5H2O的元素分析計(jì)算值C，62.22;H，6.68;N，2.90;S，6.64實(shí)測(cè)值C，62.14;H，6.66;N，2.81;S，6.54化合物GC-2bm.p.58.0℃對(duì)C57H91NO8S的元素分析
計(jì)算值C，72.03;H，9.65;N，1.47;S，3.37實(shí)測(cè)值C，71.94;H，9.58;N，1.43;S，3.36化合物GC-2m.p.90.0℃[α]20D+12.9°(c＝0.73，在氯仿中)對(duì)C53H63NO8S的元素分析計(jì)算值C，71.18;H，9.35;N，1.57;S，3.59實(shí)測(cè)值C，71.23;H，9.12;N，1.54;S，3.47實(shí)施例4制備(2S，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-OtBu(GC-3a)，(2S，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-OtBu(GC-3b)，和(2S，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-OH(GC-3)按照基本上與實(shí)施例2相同的方法制備(2S，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-OtBu(GC-3a)，(2S，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-OtBu(GC-3b)，和(2S，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-OH(GC-3)。
原料(g) 反應(yīng)條件 產(chǎn)物(g)a)(Fmoc-(S)-Cys-OtBu)21)鋅 656mg GC-3a(2.00) 酸混合物溶液8.0ml (2.18)DCM 16ml20℃ 30min2)補(bǔ)充(S)-(-)-縮水甘油0.67ml40℃ 5hb)GC-3a 棕櫚酸 2.60g GC-3b(1.50) DIC 1.59ml (2.44)DMAP 154mgTHF 30ml20℃ 13hc)GC-3b TFA 40ml GC-3(2.00) 20℃ 1.5h (1.80)化合物GC-3a[α]23D-7.6°(c＝0.67，在氯仿中)對(duì)C25H31NO6S的元素分析計(jì)算值C，63.40;H，6.60;N，2.96;S，6.67實(shí)測(cè)值C，63.12;H，6.55;N，2.90;S，6.81化合物GC-3bm.p.62.5-63.0℃對(duì)C57H91NO8S的元素分析
計(jì)算值C，72.03;H，9.65;N，1.47;S，3.37實(shí)測(cè)值C，72.04;H，9.78;N，1.49;S，3.38化合物GC-3m.p.82.5-83.0℃[α]23D-16.0°(c＝0.51，在氯仿中)對(duì)C53H83NO8S的元素分析計(jì)算值C，71.18;H，9.35;N，1.57;S，3.59實(shí)測(cè)值C，71.20;H，9.38;N，1.45;S，3.53實(shí)施例5制備(2S，6S)-2-Fmoc-氨基-6，7-二羥基-4-THT-OtBu(GC-4a)，(2S，6S)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-OtBu(GC-4b)，和(2S，6S)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-OH(GC-4)按照基本上與實(shí)施例2相同的方法制備(2S，6S)-2-Fmoc-氨基-6，7-二羥基-4-THT-OtBu(GC-4a)，(2S，6S)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-OtBu(GC-4b)，和(2S，6S)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-OH(GC-4)。
原料(g) 反應(yīng)條件 產(chǎn)物(g)a)(Fmoc-(S)-Cys-OtBu)21)鋅 1.31g GC-4a(4.00) 酸混合物溶液 16ml (4.01)DCM 32ml20℃ 20min2)補(bǔ)充(S)-(-)-縮水甘油3.33ml40℃ 2.5hb)GC-4a 棕櫚酸 4.78g GC-4b(2.94) DIC 2.92ml (4.22)DMAP 303mgTHF 50ml20℃ 15hc)GC-4b TFA 50ml GC-4(2.50) 20℃ 1.5h (2.24)化合物GC-4a[α]23D+8.4°(c＝0.67，在氯仿中)對(duì)C25H31NO6S的元素分析計(jì)算值C，63.40;H，6.60;N，2.96;S，6.77實(shí)測(cè)值C，63.15;H，6.47;N，2.88;S，6.67化合物GC-4bm.p.58.0℃對(duì)C57H91NO8S的元素分析
計(jì)算值C，72.03;H，9.65;N，1.47;S，3.37實(shí)測(cè)值C，72.01;H，9.55;N，1.34;S，3.36化合物GC-4m.p.88.5-89.0℃[α]23D-13.1°(c＝0.56，在氯仿中)對(duì)C53H83NO8S的元素分析計(jì)算值C，71.18;H，9.35;N，1.57;S，3.59實(shí)測(cè)值C，71.20;H，9.23;N，1.46;S，3.56實(shí)施例6制備(2R，6S)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-Thr-Thr-OH(化合物1)a)將化合物2中合成的化合物GC-1(1.79g)溶于DMF(20ml)中，在冰冷卻的同時(shí)，向該溶液中加入HONB(394mg)、DIC(344μl)和參考例1中得到的H-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-Thr(tBu)-OtBu(P-1)(1.64g)，將混合物在20℃下攪拌24小時(shí)。濃縮反應(yīng)混合物，然后將其溶于氯仿中。該溶液依次用10%(W/V)的檸檬酸水溶液、水、飽和碳酸氫鈉水溶液和水洗滌，氯仿層用無(wú)水硫酸鈉干燥，然后濃縮。向濃縮物中加入乙腈，過(guò)濾收集生成的沉淀得到白色粉末狀產(chǎn)物(2R，6S)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-(OtBu)-Thr(tBu)-Thr(tBu)-OtBu(1a)(3.16g，收率97%)。18D+6.5°(c＝0.54，在氯仿中)對(duì)C88H145N7O18S的元素分析計(jì)算值C，65.20;H，9.02;N，6.05;S，1.98實(shí)測(cè)值C，64.90;H，8.83;N，5.86;S，1.78氨基酸分析[6N HCl，110℃，水解20小時(shí);括號(hào)中的數(shù)值表示理論值]Glu1.00(1);Thr1.93(2);Gly2.95(3)FAB-MS(M+Na)＝1643(理論值1643)b)將化合物1a(2.70g)溶于DMF(27ml)中，向該溶液中加入哌啶(2.7ml)，混合物在20℃下攪拌1小時(shí)。濃縮反應(yīng)混合物，并用硅膠柱色譜純化，依次用氯仿-甲醇(50∶1，20∶1)洗脫，合并含有目標(biāo)化合物的部分，濃縮得到白色粉末狀產(chǎn)物(2R，6S)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-Thr(tBu)-OtBu(1b)(2.10g，收率90%)。18D+7.1°(c＝0.49，在氯仿中)對(duì)C73H135N7O16S的元素分析
計(jì)算值C，62.67;H，9.73;N，7.01;S，2.29實(shí)測(cè)值C，62.55;H，9.85;N，6.95;S，2.21氨基酸分析[6N HCl，110℃，水解20小時(shí);括號(hào)中的數(shù)值表示理論值]Glu1.00(1);Thr1.92(2);Gly2.95(3)FAB-MS(M+Na)＝1399(理論值1399)c)將化合物1b(200mg)溶于TFA(2.0ml)中，該溶液在20℃下放置1.5小時(shí)。濃縮反應(yīng)混合物，向濃縮中加入乙腈，過(guò)濾收集生成的沉淀得到白色粉末狀產(chǎn)物化合物1(164mg)。
對(duì)C57H103N7O16S·1.5H2O的元素分析計(jì)算值C，56.98;H，8.89;N，8.16;S，2.67實(shí)測(cè)值C，57.04;H，8.80;N，8.11;S，2.72實(shí)施例7制備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-Thr-Thr-OH(化合物2)按照基本上與實(shí)施例6相同的方法制備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-Thr(tBu)-OtBu(2a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-Thr(tBu)-OtBu(2b)，和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-Thr-Thr-OH(化合物2)。
原料(mg) 反應(yīng)條件 產(chǎn)物(mg)a) GC-2 P-1 458mg 2a(500) HONB 110mg (873)DIC 96μlDMF 5.0ml20℃ 15hb) 2a 哌啶 0.70ml 2b(770) DMF 7.0ml (623)20℃ 1h硅膠(氯仿-甲醇)50:1,20:1c) 2b TFA 1.5ml 2(150) 20℃ 1.5h (125)化合物2a[α]20D+3.4°(c＝0.66，在氯仿中)對(duì)C88H145N7O18S·0.5H2O的元素分析計(jì)算值C，64.84;H，9.03;N，6.01;S，1.97實(shí)測(cè)值C，64.88;H，9.18;N，6.08;S，1.95
化合物2b[α]20D+4.9°(c＝0.55，在氯仿中)對(duì)C73H135N7O16S·0.5H2O的元素分析計(jì)算值C，62.27;H，9.74;N，6.96;S，2.28實(shí)測(cè)值C，62.31;H，9.73;N，6.99;S，2.19化合物2[α]21D-2.3°(c＝0.58，在5%TFA-氯仿中)對(duì)C53H103N7O16S·1.5H2O的元素分析計(jì)算值C，56.98;H，8.89;N，8.16;S，2.67實(shí)測(cè)值C，56.72;H，8.62;N，8.11;S，2.63實(shí)施例8制備(2S，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-Thr-Thr-OH(化合物3)按照基本上與實(shí)施例6相同的方法制備(2S，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-Thr(tBu)-OtBu(3a)，(2S，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-Thr(tBu)-OtBu(3b)，和(2S，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-Thr-Thr-OH(化合物3)。
原料(mg) 反應(yīng)條件 產(chǎn)物(mg)a) GC-3 P-1 458mg 3a(500) HONB 110mg (885)DIC 96μlDMF 5.0ml20℃ 15hb) 3a 哌啶 0.80ml 3b(830) DMF 8.0ml (624)20℃ 1.5h硅膠(氯仿-甲醇)50:1,20:1c) 3b TFA 1.6ml 3(160) 20℃ 1.5h (130)化合物3a[α]20D+15.9°(c＝0.51，在氯仿中)對(duì)C88H145N7O18S·0.5H2O的元素分析計(jì)算值C，64.84;H，9.03;N，6.01;S，1.97實(shí)測(cè)值C，64.63;H，9.07;N，5.80;S，2.21
化合物3b[α]20D+21.4°(c＝0.64，在氯仿中)對(duì)C73H135N7O16S的元素分析計(jì)算值C，62.68;H，9.73;N，7.01;S，2.29實(shí)測(cè)值C，62.75;H，9.41;N，7.05;S，2.40化合物2[α]21D-21.7°(c＝0.63，在5%TFA-氯仿中)對(duì)C57H103N7O16S·H2O的元素分析計(jì)算值C，57.41;H，8.88;N，8.22;S，2.69實(shí)測(cè)值C，57.38;H，8.66;N，8.27;S，2.59實(shí)施例9制備(2S，6S)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-Thr-Thr-OH(化合物4)按照基本上與實(shí)施例6相同的方法制備(2S，6S)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-Thr(tBu)-OtBu(4a)，(2S，6S)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-Thr(tBu)-OtBu(4b)，和(2S，6S)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-Thr-Thr-OH(化合物4)。
原料(mg) 反應(yīng)條件 產(chǎn)物(mg)a) GC-4 P-1 458mg 4a(500) HONB 110mg (879)DIC 96μlDMF 5.0ml20℃ 15hb) 4a 哌啶 0.80ml 4b(820) DMF 8.0ml (651)20℃ 1h硅膠(氯仿-甲醇)50:1,20:1c) 4b TFA 1.6ml 4(160) 20℃ 1.5h (131)化合物4a[α]20D+15.3°(c＝0.65，在氯仿中)對(duì)C88H145N7O18S的元素分析計(jì)算值C，65.20;H，9.02;N，6.05;S，1.98實(shí)測(cè)值C，65.05;H，9.05;N，6.07;S，1.86
化合物4b[α]20D+24.4°(c＝0.62，在氯仿中)對(duì)C73H135N7O16S的元素分析計(jì)算值C，62.68;H，9.73;N，7.01;S，2.29實(shí)測(cè)值C，62.53;H，9.48;N，6.93;S，2.31化合物4[α]21D-15.6°(c＝0.5，在5%TFA-氯仿中)對(duì)C53H103N7O16S·1.5H2O的元素分析計(jì)算值C，56.98;H，8.89;N，8.16;S，2.67實(shí)測(cè)值C，56.74;H，8.57;N，8.03;S，2.72實(shí)施例10制備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-Thr-OH(化合物5)按照基本上與實(shí)施例6相同的方法制備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-OtBu(5a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-OtBu(5b)，和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-Thr-OH(化合物5)。
原料(g) 反應(yīng)條件 產(chǎn)物(g)a) GC-2 P-2 809mg 5a(1.23) HONB 271mg (1.91)DIC 0.24mlDMF 20ml20℃ 19hb) 5a 哌啶 1.3ml 5b(1.30) DCM 13ml (0.99)20℃ 1.3h硅膠(氯仿-甲醇)49:1,19:1,14:1c) 5b TFA 2ml 5(0.49) 20℃ 2h (0.43)化合物5a[α]23D-6.9°(c＝0.51，在氯仿中)對(duì)C80H130N6O16S的元素分析計(jì)算值C，65.63;H，8.95;N，5.74;S，2.19實(shí)測(cè)值C，65.59;H，9.16;N，5.94;S，2.27化合物5b[α]23D-6.9°(c＝0.50，在氯仿中)
對(duì)C65H120N6O14S的元素分析計(jì)算值C，62.87;H，9.74;N，6.77;S，2.58實(shí)測(cè)值C，62.96;H，9.57;N，6.89;S，2.42化合物5[α]23D+4.9°(c＝0.49，在5%TFA-氯仿中)對(duì)C53H96N6O14S·0.5H2O的元素分析計(jì)算值C，58.81;H，9.03;N，7.76;S，2.96實(shí)測(cè)值C，58.94;H，8.82;N，7.70;S，2.99實(shí)施例11制備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu-Gly-Glu-Gly-D-Glu-OH(化合物6)按照基本上與實(shí)施例6相同的方法制備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu(OtBu)-Gly-Glu(OtBu)-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(6a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu(OtBu)-Gly-Glu(OtBu)-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(6b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu-Gly-Glu-Gly-D-Glu-OH(化合物6)。
原料(g) 反應(yīng)條件 產(chǎn)物(g)a) GC-2 P-3 470mg 6a(0.51) HONB 113mg (0.71)DIC 0.10mlDMF 5ml20℃ 16hb) 6a 哌啶 0.7ml 6b(0.66) DCM 6.3ml (0.56)20℃ 1.0h硅膠(氯仿-甲醇)50:1,20:1c) 6b TFA 3.0ml 6(0.25) 20℃ 3h (0.20)化合物6a[α]23D+1.8°(c＝0.50，在氯仿中)對(duì)C88H142N6O19S的元素分析計(jì)算值C，65.24;H，8.83;N，5.19;S，1.98實(shí)測(cè)值C，65.05;H，8.87;N，5.15;S，1.91化合物6b[α]23D+1.0°(c＝0.50，在氯仿中)對(duì)C73H132N6O17S·0.5H2O的元素分析
計(jì)算值C，62.32;H，9.53;N，5.97;S，2.28實(shí)測(cè)值C，62.30;H，9.53;N，5.77;S，2.19化合物6[α]21D+3.8°(c＝0.53，在5%TFA-氯仿中)對(duì)C50H90N4O13S·H2O的元素分析計(jì)算值C，57.46;H，8.63;N，7.05;S，2.69實(shí)測(cè)值C，57.56;H，8.60;N，7.24;S，2.54實(shí)施例12制備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-OH(化合物7)按照基本上與實(shí)施例6相同的方法制備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(7a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(7b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-OH(化合物7)。
原料(g) 反應(yīng)條件 產(chǎn)物(g)a) GC-2 P-4 630mg 7a(1.31) HONB 288mg (1.64)DIC 0.25mlDCM 19ml20℃ 15hb) 7a 哌啶 1.2ml 7b(1.18) DCM 12ml (0.92)20℃ 1.3h硅膠(氯仿-甲醇)49:1,19:1,14:1c) 7b TFA 2ml 7(0.45) 20℃ 2h (0.38)化合物7a[α]23D-6.4°(c＝0.50，在氯仿中)對(duì)C72H115N5O14S的元素分析計(jì)算值C，66.18;H，8.87;N，5.36;S，2.45實(shí)測(cè)值C，66.03;H，8.87;N，5.31;S，2.22化合物7b[α]23D-6.7°(c＝0.63，在氯仿中)對(duì)C57H105N5O12S·H2O的元素分析
計(jì)算值C，62.09;H，9.78;N，6.35;S，2.91實(shí)測(cè)值C，62.12;H，9.59;N，6.36;S，2.87化合物7[α]23D+8.3°(c＝0.60，在5%TFA-氯仿中)對(duì)C49H89N5O12S·H2O的元素分析計(jì)算值C，59.43;H，9.26;N，7.07;S，3.24實(shí)測(cè)值C，59.19;H，8.96;N，6.96;S，3.26實(shí)施例13制備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-D-Glu-OH(化合物8)按照基本上與實(shí)施例6相同的方法制備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(8a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(8b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-D-Glu-OH(化合物8)。
原料(g) 反應(yīng)條件 產(chǎn)物(g)a) GC-2 P-5 1.53g 8a(1.92) HONB 684mg (3.93)DIC 0.59mlDMF 33ml20℃ 15hb) 8a 哌啶 0.82ml 8b(0.82) DCM 8.2ml (0.64)20℃ 2h硅膠(氯仿-甲醇)49:1,19:1,14:1c) 8b TFA 2ml 8(0.58) 20℃ 2h (0.45)化合物8a[α]23D-7.1°(c＝0.49，在氯仿中)對(duì)C72H115N5O14S的元素分析計(jì)算值C，66.18;H，8.87;N，5.36;S，2.45實(shí)測(cè)值C，66.12;H，8.77;N，5.52;S，2.45化合物8b[α]23D-14.5°(c＝0.53，在氯仿中)對(duì)C57H105N5O12S的元素分析
計(jì)算值C，63.13;H，9.76;N，6.46;S，2.96實(shí)測(cè)值C，63.10;H，9.83;N，6.44;S，2.77化合物8[α]23D+8.1°(c＝0.62，在5%TFA-氯仿中)對(duì)C49H89N5O12S·0.5H2O的元素分析計(jì)算值C，59.97;H，9.24;N，7.14;S，3.27實(shí)測(cè)值C，59.82;H，9.14;N，6.96;S，3.38實(shí)施例14制備(2R，6S)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-OH(化合物9)按照基本上與實(shí)施例6相同的方法制備(2R，6S)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(9a)，(2R，6S)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(9b)，和(2R，6S)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-OH(化合物9)。
原料(g) 反應(yīng)條件 產(chǎn)物(g)a) GC-1 P-4 490mg 9a(1.02) HONB 229mg (1.25)DIC 0.20mlDMF 15ml20℃ 18hb) 9a 哌啶 1.10ml 9b(1.10) DCM 11ml (0.777)20℃ 1.5h硅膠(氯仿-甲醇)49:1,19:1,c) 9b TFA 3.0ml 9(0.300) 20℃ 1.5h (0.266)化合物9a[α]24D-3.3°(c＝0.51，在氯仿中)對(duì)C72H115N5O14S·H2O的元素分析計(jì)算值C，66.18;H，8.87;N，5.36;S，2.45實(shí)測(cè)值C，66.10;H，8.89;N，5.46;S，2.58化合物9b[α]21D-5.5°(c＝0.73，在氯仿中)對(duì)C57H105N5O12S的元素分析
計(jì)算值C，63.13;H，9.76;N，6.46;S，2.96實(shí)測(cè)值C，62.84;H，9.61;N，6.42;S，2.96化合物9[α]21D+13.5°(c＝0.67，在5%TFA-氯仿中)對(duì)C49H89N5O12S·2.5H2O的元素分析計(jì)算值C，57.85;H，9.31;N，6.88;S，3.15實(shí)測(cè)值C，57.89;H，8.82;N，6.88;S，3.05實(shí)施例15制備(2R，6S)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-D-Glu-OH(化合物10)按照基本上與實(shí)施例6相同的方法制備(2R，6S)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(10a)，(2R，6S)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(10b)和(2R，6S)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-D-Glu-OH(化合物10)。
原料(g) 反應(yīng)條件 產(chǎn)物(g)a) GC-1 P-5 1.61g 10a(2.41) HONB 541mg (3.45)DIC 0.47mlDMF 25ml20℃ 19hb) 10a 哌啶 1.10ml 10b(1.10) DMF 11ml (0.783)20℃ 1.5h硅膠(氯仿-甲醇)49:1,19:1,c) 9b TFA 3.0ml 10(0.300) 20℃ 1.5h (0.262)化合物10a[α]24D-5.1°(c＝0.57，在氯仿中)對(duì)C72H115N5O14S·H2O的元素分析計(jì)算值C，66.18;H，8.87;N，5.36;S，2.45實(shí)測(cè)值C，66.07;H，8.94;N，5.48;S，2.49化合物10b[α]21D-10.7°(c＝0.57，在氯仿中)對(duì)C57H105N5O12S的元素分析
計(jì)算值C，63.13;H，9.76;N，6.46;S，2.96實(shí)測(cè)值C，63.13;H，9.51;N，6.46;S，2.96化合物10[α]21D+13.2°(c＝0.67，在5%TFA-氯仿中)對(duì)C49H89N5O12S·2H2O的元素分析計(jì)算值C，58.36;H，9.29;N，6.95;S，3.18實(shí)測(cè)值C，58.30;H，8.90;N，6.76;S，3.25實(shí)施例16制備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-D-Glu-OH(化合物11)按照基本上與實(shí)施例6相同的方法制備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu(OtBu)-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(11a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu(OtBu)-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(11b)，和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu-Gly-D-Glu-OH(化合物11)。
原料(g) 反應(yīng)條件 產(chǎn)物(g)a) GC-2 P-6 1.31g 11a(2.04) HONB 453mg (2.72)DIC 0.40mlDMF 20ml20℃ 16hb) 11a 哌啶 2.0ml 11b(2.00) DCM 18ml (1.75)20℃ 1h硅膠(乙酸乙酯-甲醇)10:0,9:1,c) 11b TFA 8.0ml(0.80) 20℃ 2h (0.56)化合物11a[α]23D-7.0°(c＝0.56，在氯仿中)對(duì)C77H124N4O15S的元素分析計(jì)算值C，67.12;H，9.07;N，4.07;S，2.33實(shí)測(cè)值C，67.01;H，9.19;N，4.01;S，2.31化合物11b[α]23D-18°(c＝0.53，在氯仿中)對(duì)C62H114N4O13S的元素分析
計(jì)算值C，64.44;H，9.94;N，4.85;S，2.77實(shí)測(cè)值C，64.23;H，9.95;N，4.94;S，2.64化合物11[α]21D+2.1°(c＝0.53，在5%TFA-氯仿中)對(duì)C50H90N4O13S·H2O的元素分析計(jì)算值C，59.73;H，9.22;N，5.57;S，3.19實(shí)測(cè)值C，59.56;H，9.05;N，5.48;S，3.15實(shí)施例17制備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Glu-OH(化合物12)按照基本上與實(shí)施例6相同的方法制備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(12a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(12b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Glu-OH(化合物12)。
原料(g) 反應(yīng)條件 產(chǎn)物(g)a) GC-2 P-7 918mg 12a(2.00) HONB 441mg (1.81)DIC 0.39mlDMF 20ml20℃ 15hb) 12a 哌啶 1.8ml 12b(1.75) DCM 18ml (1.32)20℃ 1.5h硅膠(氯仿-甲醇)50:1,20:1,c) 12b TFA 5ml 12(0.60) 20℃ 2h (0.52)化合物12a[α]23D-5.2°(c＝0.58，在氯仿中)對(duì)C70H112N4O13S的元素分析計(jì)算值C，67.28;H，9.03;N，4.48;S，2.57實(shí)測(cè)值C，67.22;H，8.84;N，4.55;S，2.51化合物12b[α]23D-7.9°(c＝0.60，在氯仿中)對(duì)C55H102N4O11S·0.5H2O的元素分析
計(jì)算值C，63.73;H，10.02;N，5.41;S，3.09實(shí)測(cè)值C，63.88;H，10.22;N，5.48;S，3.09化合物12[α]23D+14.8°(c＝0.68，在5%TFA-氯仿中)對(duì)C47H86N4O11S·2.5H2O的元素分析計(jì)算值C，58.78;H，9.55;N，5.83;S，3.34實(shí)測(cè)值C，58.91;H，8.83;N，5.67;S，3.06實(shí)施例18制備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-OH(化合物13)按照基本上與實(shí)施例6相同的方法制備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-OtBu(13a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-OtBu(13b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-OH(化合物13)。
原料(g) 反應(yīng)條件 產(chǎn)物(g)a) GC-2 H-Gly-Gly-Gly-OtBu 660mg 13a(2.18) HONB 482mg (2.50)DIC 0.42mlDMF 20ml20℃ 17hb) 13a 哌啶 1.8ml 13b(1.80) DCM 18ml (1.30)20℃ 1.3h硅膠(氯仿-甲醇)50:1,20:1,c) 13b TFA 5ml 13(0.60) 20℃ 2h (0.55)化合物13a[α]23D-11.0°(c＝0.60，在氯仿中)對(duì)C63H100N4O11S的元素分析計(jì)算值C，67.47;H，8.99;N，5.00;S，2.86實(shí)測(cè)值C，67.47;H，8.86;N，4.92;S，2.89化合物13b[α]23D-14.3°(c＝0.48，在氯仿中)對(duì)C48H90N4O9S的元素分析
計(jì)算值C，64.11;H，10.09;N，6.23;S，3.57實(shí)測(cè)值C，63.97;H，10.01;N，6.21;S，3.44化合物13[α]23D+12.2°(c＝0.63，在5%TFA-氯仿中)對(duì)C44H82N4O9S·2.5H2O的元素分析計(jì)算值C，59.50;H，9.87;N，6.31;S，3.61實(shí)測(cè)值C，59.21;H，9.17;N，6.16;S，3.34實(shí)施例19制備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Glu-OH(化合物14)按照基本上與實(shí)施例6相同的方法制備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(14a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(14b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Glu-OH(化合物14)。
原料(g) 反應(yīng)條件 產(chǎn)物(g)a) GC-2 H-Gly-Glu(OtBu)-OtBu 777mg 14a(2.03) HONB 441mg (2.20)DIC 0.39mlDMF 20ml20℃ 16hb) 14a 哌啶 1.4ml 14b(1.40) DCM 14ml (0.90)20℃ 1.0h硅膠(氯仿-甲醇)50:1,20:1,c) 14b TFA 4.0ml 14(0.40) 20℃ 2h (0.29)化合物14a[α]23D-2.0°(c＝0.50，在氯仿中)對(duì)C68H109N3O12S的元素分析計(jì)算值C，68.48;H，9.21;N，3.52;S，2.69實(shí)測(cè)值C，68.62;H，9.26;N，3.60;S，2.68化合物14b[α]23D-5.6°(c＝0.57，在氯仿中)對(duì)C53H99N3O10S的元素分析
計(jì)算值C，65.60;H，10.28;N，4.33;S，3.30實(shí)測(cè)值C，65.51;H，10.31;N，4.20;S，3.25化合物14[α]21D+2.1°(c＝0.53，在5%TFA-氯仿中)對(duì)C45H83N3O10S·0.5H2O的元素分析計(jì)算值C，62.32;H，9.76;N，4.85;S，3.70實(shí)測(cè)值C，62.16;H，9.64;N，4.61;S，3.67實(shí)施例20制備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu-OH(化合物15)按照基本上與實(shí)施例6相同的方法制備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu(OtBu)-OtBu(15a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu(OtBu)-OtBu(15b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu-OH(化合物15)。
原料(g) 反應(yīng)條件 產(chǎn)物(g)a) GC-2 H-Glu(OtBu)-OtBu 1.27g 15a(4.00) HONB 882mg (4.80)DIC 0.77mlDMF 30ml20℃ 17hb) 15a 哌啶 2.3ml 15b(2.30) DCM 23ml (1.14)20℃ 1.3h硅膠(氯仿-甲醇)50:1,20:1,c) 15b TFA 5ml 15(0.48) 20℃ 2h (0.41)化合物15a[α]23D-2.0°(c＝0.58，在氯仿中)對(duì)C66H106N2O11S的元素分析計(jì)算值C，69.81;H，9.41;N，2.47;S，2.82實(shí)測(cè)值C，69.79;H，9.26;N，2.44;S，2.74化合物15b[α]23D-10.1°(c＝0.56，在氯仿中)對(duì)C51H96N2O9S的元素分析
計(jì)算值C，67.06;H，10.59;N，3.07;S，3.51實(shí)測(cè)值C，67.04;H，10.36;N，3.09;S，3.45化合物15[α]23D+3.7°(c＝0.60，在5%TFA-氯仿中)對(duì)C43H80N2O9S·0.5H2O的元素分析計(jì)算值C，63.75;H，10.08;N，3.46;S，3.96實(shí)測(cè)值C，63.70;H，9.75;N，3.31;S，3.88實(shí)施例21制備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Asp-OH(化合物6)按照基本上與實(shí)施例6相同的方法制備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Asp(OtBu)-OtBu(16a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Asp(OtBu)-OtBu(16b)，和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Asp-OH(化合物16)。
原料(g) 反應(yīng)條件 產(chǎn)物(g)a) GC-2 P-8 1.17g 16a(2.28) HONB 502mg (3.13)DIC 0.44mlDMF 20ml20℃ 15hb) 16a 哌啶 3.0ml 16b(2.94) DCM 30ml (1.83)20℃ 2h硅膠(氯仿-甲醇)50:1,20:1,c) 16b TFA 9ml 16(0.83) 20℃ 2h (0.74)化合物16a[α]22D+3.7°(c＝0.61，在氯仿中)對(duì)C71H113N5O14S的元素分析計(jì)算值C，65.97;H，8.81;N，5.42;S，2.48實(shí)測(cè)值C，65.61;H，9.13;N，5.90;S，2.24化合物16b[α]22D-1.5°(c＝0.55，在氯仿中)對(duì)C56H103N5O12S的元素分析
計(jì)算值C，62.83;H，9.70;N，6.54;S，3.00實(shí)測(cè)值C，62.77;H，9.92;N，6.75;S，3.94化合物16[α]25D+19.2°(c＝0.64，在5%TFA-氯仿中)對(duì)C48H87N5O12S·1.5H2O的元素分析計(jì)算值C，58.51;H，9.21;N，6.87;S，3.25實(shí)測(cè)值C，58.68;H，9.00;N，6.87;S，3.25實(shí)施例22制備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-D-Glu-OH(化合物17)按照基本上與實(shí)施例6相同的方法制備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(17a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(17b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-D-Glu-OH(化合物17)。
原料(g) 反應(yīng)條件 產(chǎn)物(g)a) GC-2 P-9 780mg 17a(1.68) HONB 374mg (1.97)DIC 327μlDMF 18ml20℃ 16hb) 17a 哌啶 2.0ml 17b(1.80) DCM 18ml (1.52)20℃ 1h硅膠(氯仿-甲醇)25:1,c) 17b TFA 10.0ml 17(1.00) 20℃ 3h (0.76)化合物17a[α]24D-10.0°(c＝0.54，在氯仿中)對(duì)C70H112N4O13S·0.5H2O的元素分析計(jì)算值C，66.79;H，9.05;N，4.45;S，2.55實(shí)測(cè)值C，66.59;H，8.75;N，4.75;S，2.53化合物17b[α]24D-15.7°(c＝0.49，在氯仿中)對(duì)C55H102N4O11S·0.5H2O的元素分析
計(jì)算值C，63.73;H，10.02;N，5.41;S，3.09實(shí)測(cè)值C，63.67;H，10.23;N，5.28;S，3.07化合物17[α]24D+6.0°(c＝0.51，在5%TFA-氯仿中)對(duì)C47H86N4O11S·2H2O的元素分析計(jì)算值C，59.34;H，9.54;N，5.89;S，3.37實(shí)測(cè)值C，59.01;H，9.17;N，5.92;S，3.08實(shí)施例23制備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-OH(化合物18)按照基本上與實(shí)施例6相同的方法制備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-OtBu(18a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-OtBu(18b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-OH(化合物18)。
原料(g) 反應(yīng)條件 產(chǎn)物(g)a) GC-2 H-Gly-Gly-OtBu 580mg 18a(2.50) HONB 552mg (2.42)DIC 482μlDMF 20ml20℃ 13hb) 18a 哌啶 2.2ml 18b(2.20) DCM 22ml (1.59)20℃ 1.5h硅膠(氯仿-甲醇)20:1,c) 18b TFA 6.0ml 18(0.60) 20℃ 1h (0.56)化合物18a[α]24D-7.6°(c＝0.52，在氯仿中)對(duì)C61H97N3O10S的元素分析計(jì)算值C，68.83;H，9.18;N，3.95;S，3.01實(shí)測(cè)值C，69.06;H，9.28;N，4.09;S，2.88化合物18b[α]24D-13.4°(c＝0.52，在氯仿中)對(duì)C46H87N3O8S·0.5H2O的元素分析
計(jì)算值C，64.90;H，10.42;N，4.94;S，3.77實(shí)測(cè)值C，64.99;H，10.45;N，4.82;S，3.49化合物18[α]25D+10.7°(c＝0.51，在5%TFA-氯仿中)對(duì)C42H79N3O8S·1.5H2O的元素分析計(jì)算值C，62.03;H，10.16;N，5.17;S，3.94實(shí)測(cè)值C，61.80;H，9.97;N，4.85;S，4.04實(shí)施例24制備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-D-Glu-OH(化合物19)按照基本上與實(shí)施例6相同的方法制備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(19a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(19b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-D-Glu-OH(化合物19)。
原料(g) 反應(yīng)條件 產(chǎn)物(g)a) GC-2 P-10 830mg 19a(2.12) HONB 471mg (2.18)DIC 412μlDMF 21ml20℃ 16hb) 19a 哌啶 2.0ml 19b(2.00) DCM 18ml (1.72)20℃ 1h硅膠(氯仿-甲醇)97:3,c) 19b TFA 10ml 19(1.00) 20℃ 3h (0.70)化合物19a[α]24D-12.5°(c＝0.55，在氯仿中)對(duì)C68H109N3O12S的元素分析計(jì)算值C，68.43;H，9.21;N，3.52;S，2.69實(shí)測(cè)值C，68.31;H，9.25;N，3.72;S，2.48化合物19b[α]24D-16.4°(c＝0.53，在氯仿中)對(duì)C53H99N3O10S·0.8H2O的元素分析
計(jì)算值C，64.64;H，10.30;N，4.27;S，3.26實(shí)測(cè)值C，64.62;H，10.25;N，4.08;S，3.22化合物19[α]24D+14.2°(c＝0.52，在5%TFA-氯仿中)對(duì)C45H83N3O10S·2.2H2O的元素分析計(jì)算值C，60.19;H，9.81;N，4.68;S，3.57實(shí)測(cè)值C，60.05;H，9.44;N，4.35;S，3.61實(shí)施例25制備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-D-Glu-OH(化合物20)按照基本上與實(shí)施例6相同的方法制備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-D-Glu(OtBu)-OtBu(20a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-D-Glu(OtBu)-OtBu(20b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-D-Glu-OH(化合物20)。
原料(g) 反應(yīng)條件 產(chǎn)物(g)a) GC-2 H-D-Glu(OtBu)-OtBu 0.75g 20a(2.35) HONB 518mg (2.35)DIC 0.45mlDMF 20ml20℃ 17hb) 20a 哌啶 2.0ml 20b(2.23) DCM 20ml (1.76)20℃硅膠(己烷-乙酸乙酯)4:1,3:2c) 20b TFA 10ml 20(0.77) 20℃ 2h (0.64)化合物20a[α]22D-7.4°(c＝0.60，在氯仿中)對(duì)C66H106N2O11S的元素分析計(jì)算值C，69.81;H，9.41;N，2.47;S，2.82實(shí)測(cè)值C，69.66;H，9.52;N，2.85;S，2.53化合物20b[α]22D-15.9°(c＝0.66，在氯仿中)對(duì)C51H96N2O9S·0.5H2O的元素分析
計(jì)算值C，66.41;H，10.60;N，3.04;S，3.48實(shí)測(cè)值C，66.42;H，10.42;N，3.25;S，3.21化合物20[α]25D-1.5°(c＝0.55，在5%TFA-氯仿中)對(duì)C43H80N2O9S的元素分析計(jì)算值C，64.46;H，10.06;N，3.50;S，4.00實(shí)測(cè)值C，64.56;H，9.92;N，3.42;S，3.90實(shí)施例26制備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Asp-OH(化合物21)按照基本上與實(shí)施例6相同的方法制備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Asp(OtBu)-OtBu(21a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Asp(OtBu)-OtBu(21b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Asp-OH(化合物21)。
原料(g) 反應(yīng)條件 產(chǎn)物(g)a) GC-2 H-Asp(OtBu)-OtBu 0.69g 21a(2.30) HONB 507mg (2.67)DIC 0.44mlDMF 20ml20℃ 17hb) 21a 哌啶 2.5ml 21b(2.56) DCM 25ml (1.80)20℃ 1h硅膠(己烷-乙酸乙酯)4:1,3:2c) 21b TFA 10ml 21(0.86) 20℃ 2h (0.73)化合物21a[α]22D+5.2°(c＝0.65，在氯仿中)對(duì)C65H104N2O11S的元素分析計(jì)算值C，69.61;H，9.35;N，2.50;S，2.86實(shí)測(cè)值C，69.38;H，9.49;N，2.77;S，2.69化合物21b[α]22D-1.1°(c＝0.70，在氯仿中)對(duì)C50H94N2O9S的元素分析
計(jì)算值C，66.76;H，10.54;N，3.11;S，3.57實(shí)測(cè)值C，66.87;H，10.55;N，3.36;S，3.30化合物21[α]25D+5.5°(c＝0.63，在5%TFA-氯仿中)對(duì)C42H78N2O9S的元素分析計(jì)算值C，64.09;H，9.99;N，3.56;S，4.07實(shí)測(cè)值C，64.23;H，9.74;N，3.44;S，4.02實(shí)施例27制備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-D-Asp-OH(化合物22)按照基本上與實(shí)施例6相同的方法制備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-D-Asp(OtBu)-OtBu(22a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-D-Asp(OtBu)-OtBu(22b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-D-Asp-OH(化合物22)。
原料(g) 反應(yīng)條件 產(chǎn)物(g)a) GC-2 H-D-Asp(OtBu)-OtBu 0.70g 22a(2.32) HONB 511mg (2.84)DIC 0.45mlDMF 20ml20℃ 17hb) 22a 哌啶 2.5ml 22b(2.64) DCM 25ml (1.87)20℃ 1h硅膠(己烷-乙酸乙酯)4:1,3:2c) 22b TFA 10ml 22(0.95) 20℃ 2h (0.82)化合物22a[α]22D-12.7°(c＝0.51，在氯仿中)對(duì)C65H104N2O11S的元素分析計(jì)算值C，69.61;H，9.35;N，2.50;S，2.86實(shí)測(cè)值C，69.82;H，9.48;N，2.98;S，2.53化合物22b[α]22D-22.7°(c＝0.67，在氯仿中)對(duì)C50H94N2O9S·0.5H2O的元素分析
計(jì)算值C，66.11;H，10.54;N，3.08;S，3.53實(shí)測(cè)值C，65.83;H，10.38;N，2.93;S，3.40化合物22[α]25D-10.8°(c＝0.62，在5%TFA-氯仿中)對(duì)C42H78N2O9S的元素分析計(jì)算值C，64.09;H，9.99;N，3.56;S，4.07實(shí)測(cè)值C，64.13;H，9.60;N，3.47;S，4.06實(shí)施例28制備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Glu-Glu-OH(化合物23)按照基本上與實(shí)施例6相同的方法制備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBu(23a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBu(23b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Glu-Glu-OH(化合物23)。
原料(g) 反應(yīng)條件 產(chǎn)物(g)a) GC-2 P-11 590mg 23a(0.95) HONB 210mg (1.22)DIC 185μlDMF 9.5ml20℃ 16hb) 23a 哌啶 1.1ml 23b(1.10) DCM 9.9ml (0.97)20℃ 1h硅膠(氯仿-甲醇)97:3,c) 23b TFA 4.8ml 23(0.48) 20℃ 3h (0.36)化合物23a[α]24D-7.0°(c＝0.50，在氯仿中)對(duì)C77H124N4O15S的元素分析計(jì)算值C，67.12;H，9.07;N，4.07;S，2.33實(shí)測(cè)值C，67.16;H，9.05;N，4.10;S，2.40化合物23b[α]24D-10.6°(c＝0.50，在氯仿中)對(duì)C62H114N4O13S·0.5H2O的元素分析
計(jì)算值C，63.94;H，9.95;N，4.81;S，2.75實(shí)測(cè)值C，63.91;H，9.80;N，4.74;S，2.71化合物23[α]21D+13.0°(c＝0.52，在5%TFA-氯仿中)對(duì)C50H90N4O13S·1.5H2O的元素分析計(jì)算值C，59.20;H，9.24;N，5.52;S，3.16實(shí)測(cè)值C，59.15;H，9.09;N，5.50;S，3.41實(shí)施例29制備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Glu-D-Glu-OH(化合物24)按照基本上與實(shí)施例6相同的方法制備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Glu(OtBu)-D-Glu(OtBu)-OtBu(24a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Glu(OtBu)-D-Glu(OtBu)-OtBu(24b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Glu-D-Glu-OH(化合物24)。
原料(g) 反應(yīng)條件 產(chǎn)物(g)a) GC-2 P-12 500mg 24a(0.81) HONB 178mg (0.98)DIC 157μlDMF 8.0ml20℃ 16hb) 24a 哌啶 0.9ml 24b(0.90) DCM 8.1ml (0.80)20℃ 1h硅膠(氯仿-甲醇)97:3,c) 24b TFA 4.0ml 24(0.40) 20℃ 3h (0.29)化合物24a[α]24D-12.3°(c＝0.52，在氯仿中)對(duì)C77H124N4O15S·0.5H2O的元素分析計(jì)算值C，66.68;H，9.08;N，4.04;S，2.31實(shí)測(cè)值C，66.82;H，8.83;N，4.34;S，2.33化合物24b[α]24D-15.9°(c＝0.49，在氯仿中)對(duì)C62H114N4O13S·0.5H2O的元素分析
計(jì)算值C，63.94;H，9.95;N，4.81;S，2.75實(shí)測(cè)值C，64.04;H，9.84;N，4.86;S，2.76化合物24[α]24D+5.0°(c＝0.47，在5%TFA-氯仿中)對(duì)C50H90N4O13S·H2O的元素分析計(jì)算值C，59.73;H，9.22;N，5.57;S，3.19實(shí)測(cè)值C，59.73;H，9.25;N，5.48;S，3.18實(shí)施例30制備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu-Gly-Glu-OH(化合物25)按照基本上與實(shí)施例6相同的方法制備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu(OtBu)-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(25a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu(OtBu)-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(25b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu-Gly-Glu-OH(化合物25)。
原料(g) 反應(yīng)條件 產(chǎn)物(g)a) GC-2 P-13 770mg 25a(1.24) HONB 274mg (1.63)DIC 241μlDMF 12.0ml20℃ 16hb) 25a 哌啶 1.5ml 25b(1.50) DCM 13.5ml (1.34)20℃ 1h硅膠(氯仿-甲醇)97:3,c) 25b TFA 6.7ml 25(0.67) 20℃ 3h (0.50)化合物25a[α]24D-1.7°(c＝0.51，在氯仿中)對(duì)C77H124N4O15S的元素分析計(jì)算值C，67.12;H，9.07;N，4.07;S，2.33實(shí)測(cè)值C，66.97;H，9.12;N，4.06;S，2.25化合物25b[α]24D-9.6°(c＝0.53，在氯仿中)對(duì)C62H114N4O13S·H2O的元素分析
計(jì)算值C，63.45;H，9.96;N，4.77;S，2.73實(shí)測(cè)值C，63.31;H，9.81;N，4.82;S，2.65化合物25[α]24D+8.7°(c＝0.52，在5%TFA-氯仿中)對(duì)C50H90N4O13S·1.5H2O的元素分析計(jì)算值C，59.20;H，9.24;N，5.52;S，3.16實(shí)測(cè)值C，59.34;H，9.13;N，5.53;S，3.21實(shí)施例31制備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu-Glu-OH(化合物26)按照基本上與實(shí)施例6相同的方法制備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBu(26a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBu(26b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu-Glu-OH(化合物26)。
原料(g) 反應(yīng)條件 產(chǎn)物(g)a) GC-2 H-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBu 26a(1.20) 660mg (1.63)HONB 265mgDIC 233μlDMF 12.0ml20℃ 16hb) 26a 哌啶 1.5ml 26b(1.50) DCM 13.5ml (1.32)20℃ 1h硅膠(氯仿-甲醇)97:3,c) 26b TFA 6.6ml 26(0.66) 20℃ 3h (0.47)化合物26a[α]24D-7.4°(c＝0.51，在氯仿中)對(duì)C75H121N4O14S的元素分析計(jì)算值C，68.20;H，9.23;N，3.18;S，2.43實(shí)測(cè)值C，68.26;H，9.09;N，2.95;S，2.57化合物26b[α]24D-17.7°(c＝0.53，在氯仿中)對(duì)C60H111N3O12S·0.5H2O的元素分析
計(jì)算值C，65.06;H，10.19;N，3.79;S，2.89實(shí)測(cè)值C，64.88;H，10.29;N，3.81;S，2.95化合物26[α]24D-0.9°(c＝0.52，在5%TFA-氯仿中)對(duì)C48H87N3O12S·H2O的元素分析計(jì)算值C，60.79;H，9.46;N，4.43;S，3.38實(shí)測(cè)值C，60.89;H，9.40;N，4.41;S，3.38實(shí)施例32制備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(Pam0)-4-THT-Glu-D-Glu-OH(化合物27)按照基本上與實(shí)施例6相同的方法制備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu(OtBu)-D-Glu(OtBu)-OtBu(27a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu(OtBu)-D-Glu(OtBu)-OtBu(27b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu-D-Glu-OH(化合物27)。
原料(g) 反應(yīng)條件 產(chǎn)物(g)a) GC-2 P-14 700mg 27a(1.27) HONB 282mg (1.45)DIC 247μlDMF 12.7ml20℃ 16hb) 27a 哌啶 1.4ml 27b(1.33) DCM 12.6ml (1.12)20℃ 1h硅膠(氯仿-甲醇)97:3,c) 27b TFA 5.5ml 27(0.55) 20℃ 3h (0.45)化合物27a[α]24D-12.6°(c＝0.52，在氯仿中)對(duì)C75H121N3O14S的元素分析計(jì)算值C，68.20;H，9.23;N，3.18;S，2.43實(shí)測(cè)值C，68.27;H，9.46;N，3.14;S，2.30化合物27b[α]24D-21.3°(c＝0.51，在氯仿中)對(duì)C60H111N3O12S·0.5H2O的元素分析
計(jì)算值C，65.06;H，10.19;N，3.79;S，2.89實(shí)測(cè)值C，65.05;H，10.33;N，3.65;S，2.88化合物27[α]24D-5.9°(c＝0.53，在5%TFA-氯仿中)對(duì)C48H87N3O12S·H2O的元素分析計(jì)算值C，60.79;H，9.46;N，4.43;S，3.38實(shí)測(cè)值C，60.88;H，9.25;N，4.43;S，3.19實(shí)施例33制備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu-Glu-Glu-OH(化合物28)按照基本上與實(shí)施例6相同的方法制備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBu(28a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBu(28b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu-Glu-Glu-OH(化合物28)。
原料(g) 反應(yīng)條件 產(chǎn)物(g)a) GC-2 P-15 715mg 28a(0.91) HONB 201mg (1.48)DIC 177μlDMF 9.1ml20℃ 16hb) 28a 哌啶 1.3ml 28b(1.35) DCM 11.7ml (1.20)20℃ 1h硅膠(氯仿-甲醇)97:3,c) 28b TFA 6.0ml 28(0.60) 20℃ 3h (0.44)化合物28a[α]24D-13.2°(c＝0.52，在氯仿中)對(duì)C84H136N4O17S的元素分析計(jì)算值C，66.99;H，9.10;N，3.72;S，2.18實(shí)測(cè)值C，67.08;H，9.14;N，3.78;S，2.16化合物28b[α]24D-19.5°(c＝0.53，在氯仿中)對(duì)C69H126N4O15S·0.5H2O的元素分析
計(jì)算值C，64.10;H，9.90;N，4.33;S，2.48實(shí)測(cè)值C，64.28;H，9.92;N，4.21;S，2.47化合物28[α]24D-5.1°(c＝0.53，在5%TFA-氯仿中)對(duì)C53H94N4O15S·0.5H2O的元素分析計(jì)算值C，59.58;H，8.96;N，5.24;S，3.00實(shí)測(cè)值C，59.36;H，8.91;N，5.20;S，2.95實(shí)施例34制備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu-Glu-D-Glu-OH(化合物29)按照基本上與實(shí)施例6相同的方法制備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-D-Glu(OtBu)-OtBu(29a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-D-Glu(OtBu)-OtBu(29b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu-Glu-D-Glu-OH(化合物29)。
原料(g) 反應(yīng)條件 產(chǎn)物(g)a) GC-2 P-16 590mg 29a(0.75) HONB 166mg (1.27)DIC 146μlDMF 7.5ml20℃ 16hb) 29a 哌啶 1.2ml 29b(1.15) DCM 10.8ml (0.99)20℃ 1h硅膠(氯仿-甲醇)97:3,c) 29b TFA 5.0ml 29(0.50) 20℃ 3h (0.36)化合物29a[α]24D-12.7°(c＝0.49，在氯仿中)對(duì)C84H136N4O17S的元素分析計(jì)算值C，66.99;H，9.10;N，3.72;S，2.13實(shí)測(cè)值C，66.80;H，9.15;N，3.65;S，2.15化合物29b[α]24D-20.7°(c＝0.51，在氯仿中)對(duì)C69H126N4O15S·H2O的元素分析
計(jì)算值C，63.66;H，9.91;N，4.30;S，2.46實(shí)測(cè)值C，63.67;H，9.88;N，4.26;S，2.48化合物29[α]24D-16.1°(c＝0.52，在5%TFA-氯仿中)對(duì)C53H94N4O15S·H2O的元素分析計(jì)算值C，59.08;H，8.98;N，5.20;S，2.98實(shí)測(cè)值C，58.85;H，8.90;N，5.17;S，2.81實(shí)施例35制備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6-羥基-7-PamO-4-THT-OtBu(GC-5a)，(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6-己酰氧基-7-PamO-4-THT-OtBu(GC-5b)和(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6-己酰氧基-7-PamO-4-THT-OH(GC-5)按照基本上與實(shí)施例2相同的方法制備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6-羥基-7-PamO-4-THT-OtBu(GC-5a)，(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6-己酰氧基-7-PamO-4-THT-OtBu(GC-5b)和(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6-己酰氧基-7-PamO-4-THT-OH(GC-5)
原料(g) 反應(yīng)條件 產(chǎn)物(g)a) (Fmoc-(R)-Cys-OtBu)21)鋅 1.25g GC-5a(3.83) 酸混合物 13ml (5.07)溶液DCM 25ml20℃ 30min2)補(bǔ)充的(S)-O-棕櫚?；s水甘油12.0g50℃ 8hb) GC-5a 己酸 1.96g GC-5b(4.80) DIC 2.64ml (5.23)DMAP 329mgTHF 90ml20℃ 17hc) GC-5b TFA 20ml GC-5(5.08) 20℃ 1.5h (4.72)化合物GC-5am.p.57.5-58.8℃[α]20D-2.9°(c＝0.55，在氯仿中)對(duì)C41H61N4O7S的元素分析計(jì)算值C，69.16;H，8.64;N，1.97;S，4.50實(shí)測(cè)值C，68.95;H，8.67;N，1.83;S，4.48
化合物GC-5b[α]20D+1.1°(c＝0.52，在氯仿中)對(duì)C47H71N4O8S的元素分析計(jì)算值C，69.68;H，8.83;N，1.73;S，3.96實(shí)測(cè)值C，69.78;H，8.90;N，1.78;S，3.80化合物GC-5[α]20D+14.0°(c＝0.56，在氯仿中)對(duì)C43H63N4O8S的元素分析計(jì)算值C，68.49;H，8.42;N，1.86;S，4.25實(shí)測(cè)值C，68.27;H，8.34;N，1.83;S，4.26實(shí)施例36制備(2R，6R)-2-氨基-6-己酰氧基-7-PamO-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-OH(化合物30)按照基本上與實(shí)施例6相同的方法制備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6-己酰氧基-7-PamO-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(30a)，(2R，6R)-2-氨基-6-己酰氧基-7-PamO-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(30b)and(2R，6R)-2-氨基-6-己酰氧基-7-PamO-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-OH(化合物30)。
原料(g) 反應(yīng)條件 產(chǎn)物(g)a) GC-5 P-4 1.88g 30a(3.00) HONB 784mg (3.32)DIC 0.69mlDMF 25ml20℃ 16hb) 30a 哌啶 3.0ml 30b(3.20) DCM 30ml (2.26)20℃ 2h硅膠(氯仿-甲醇)50:1,20:1c) 30b TFA 5ml 30(0.53) 20℃ 2h (0.46)化合物30a[α]22D-6.4°(c＝0.53，在氯仿中)對(duì)C62H95N5O14S的元素分析計(jì)算值C，63.84;H，8.21;N，6.00;S，2.75實(shí)測(cè)值C，63.67;H，8.09;N，5.89;S，2.84
化合物30b[α]22D-8.2°(c＝0.56，在氯仿中)對(duì)C47H85N5O12S的元素分析計(jì)算值C，59.78;H，9.07;N，7.42;S，3.40實(shí)測(cè)值C，59.64;H，8.87;N，7.42;S，3.37化合物30[α]22D+9.5°(c＝0.57，在5%TFA-氯仿中)對(duì)C39H69N5O12S·1.5H2O的元素分析計(jì)算值C，54.53;H，8.45;N，8.15;S，3.73實(shí)測(cè)值C，54.56;H，8.09;N，8.21;S，3.69實(shí)施例37制備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu-Gly-D-Glu-OH(化合物31)將化合物11a(600mg)溶于TFA(6.0ml)中，該溶液在20℃下放置2小時(shí)。濃縮反應(yīng)混合物，濃縮物懸浮在乙腈中，過(guò)濾懸浮液，收集到白色粉末狀化合物31，(517mg，收率98%)。25D-16.5°(c＝0.58，在5%TFA-氯仿中)對(duì)C65H100N4O15S·H2O的元素分析
計(jì)算值C，63.60;H，8.38;N，4.56;S，2.61實(shí)測(cè)值C，63.83;H，8.47;N，4.46;S，2.52實(shí)施例38制備(2R，6R)-2-乙酰氨基-6，7-雙(Pamo)-4-THT-Glu-Gly-D-Glu-OH(化合物32)以化合物11b為起始物，通過(guò)(2R，6R)-2-乙酰氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu(OtBu)-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(32a)制得了(2R，6R)-2-乙酰氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu-Gly-D-Glu-OH(化合物32)。
a)將化合物11b(700mg)溶于DCM(7.0ml)中，向該溶液中加入乙酸酐(86μl)，所得混合物在20℃下攪拌1小時(shí)。濃縮反應(yīng)混合物，濃縮物懸浮在乙腈中，過(guò)濾懸浮液，收集到白色粉末狀產(chǎn)物化合物32a(580mg)。24D-12.8°(c＝0.49，在氯仿中)對(duì)C64H116N4O14S·0.5H2O的元素分析計(jì)算值C，63.70;H，9.77;N，4.64;S，2.66實(shí)測(cè)值C，63.80;H，9.79;N，4.54;S，2.55b)按照基本上與實(shí)施例37中的去保護(hù)基反應(yīng)相同的方法處理化合物32a(530mg)的TFA溶液(5.3ml)，得到白色粉本狀產(chǎn)物化合物32(455mg)。25D-16.6°(c＝0.52，在5%TFA-氯仿中)對(duì)C52H92N4O14S·H2O的元素分析計(jì)算值C，59.63;H，9.05;N，5.35;S，3.06實(shí)測(cè)值C，59.59;H，8.99;N，5.15;S，2.91實(shí)施例39制備(2R，6R)-2-己酰氨基-6-己酰氧基-7-PamO-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-OH(化合物33)以化合物30b為起始物，通過(guò)(2R，6R)-2-己酰氨基-6-己酰氧基-7-PamO-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(33a)制得了(2R，6R)-2-己酰氨基-6-己酰氨基-7-PamO-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-OH(化合物33)。
a)將化合物30b(550mg)溶于DCM(10ml)中，在冰冷卻同時(shí)，向該溶液中加入HOBT(87mg)、WSC(123mg)和己酸(80μl)。將混合物在20℃下攪拌18小時(shí)。濃縮反應(yīng)混合物，濃縮物溶于乙酸乙酯中，接著依次用10%氯化銨水溶液、2%碳酸氫鈉水溶液和水洗滌。乙酸乙酯層用無(wú)水硫酸鈉干燥，然后再濃縮。將濃縮物懸浮在乙腈中，過(guò)濾懸浮液，收集到白色粉末狀產(chǎn)物(2R，6R)-2-己酰氧基-6-己酰氧基-7-PamO-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(33a)(534mg，收率88%)。
化合物33a[α]22D-8.0°(c＝0.56，在氯仿中)對(duì)C53H95N5O13S的元素分析計(jì)算值C，61.07;H，9.19;N，6.72;S，3.08實(shí)測(cè)值C，61.02;H，9.10;N，6.71;S，3.05b)將化合物33a(480mg)溶于TFA(5.0ml)中，將該溶液在20℃下攪拌2小時(shí)。濃縮反應(yīng)混合物，將濃縮物懸浮在乙腈中，過(guò)濾懸浮液，收集化合物33(408mg，收率95%)。
化合物33[α]22D-12.7°(c＝0.64，在5%TFA-氯仿中)對(duì)C45H79N5O13S·0.5H2O的元素分析計(jì)算值C，57.55;H，8.59;N，7.46;S，3.41實(shí)測(cè)值C，57.74;H，8.54;N，7.41;S，3.43實(shí)施例40制備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(SteO)-4-THT-OtBu(GC-6a)，和(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(SteO)-4-THT-OH(GC-6)
按照基本上與實(shí)施例2相同的方法制備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(SteO)-4-THT-OtBu(GC-6a)，和(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(SteO)-4-THT-OH(GC-6)。
原料 反應(yīng)條件 產(chǎn)物a) GC-2a 硬脂酸 5.58g GC-6a(2.65g) DIC 3.07mg (3.20g)DMAP 275mgTHF 45ml20℃ 14hb) GC-6a TFA 15ml GC6(3.00g) 20℃ 2.0ml (2.75g)化合物GC-6am.p.64.2-65.9℃[α]22D+0.2°(c＝0.92，在氯仿中)對(duì)C61H99NO8S的元素分析計(jì)算值C，72.79;H，9.91;N，1.39;S，3.19實(shí)測(cè)值C，72.60;H，10.10;N，1.66;S，3.37化合物GC-6m.p.92.0-92.8℃[α]24D+11.0°(c＝0.67，在氯仿中)對(duì)C57H91NO8S的元素分析
計(jì)算值C，72.03;H，9.65;N，1.47;S，3.37實(shí)測(cè)值C，72.21;H，10.05;N，1.57;S，3.24實(shí)施例41制備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(MyrO)-4-THT-OtBu(GC-7a)，和(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(MyrO)-4-THT-OH(GC-7)按照基本上與實(shí)施例2相同的方法制備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(MyrO)-4-THT-OtBu(GC-7a)和(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(MyrO)-4-THT-OH(GC-7)。
原料 反應(yīng)條件 產(chǎn)物a) GC-2a 肉豆蔻酸 4.22g GC-7a(2.50g) DIC 2.89ml (2.58g)DMAP 258mgTHF 45ml20℃ 14hb) GC-7a TFA 20ml GC-7(3.00g) 20℃ 2.0h (1.93g)化合物GC-7am.p.49.2-50.9℃[α]22D+0.5°(c＝0.83，在氯仿中)對(duì)C53H83NO8S的元素分析
計(jì)算值C，71.18;H，9.35;N，1.57;S，3.59實(shí)測(cè)值C，70.97;H，9.24;N，1.62;S，3.52化合物GC-7m.p.82.8-83.5℃[α]22D+12.7°(c＝0.58，在氯仿中)對(duì)C49H75NO8S·0.25H2O元素分析計(jì)算值C，69.84;H，9.03;N，1.66;S，3.81實(shí)測(cè)值C，69.85;H，9.09;N，1.62;S，3.78實(shí)施例42制備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(SteO)-4-THT-Gly-Glu-Glu-OH(化合物34)按照基本上與實(shí)施例6相同的方法制備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(SteO)-4-THT-Gly-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBu(34a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(SteO)-4-THT-Gly-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBu(34b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(SteO)-4-THT-Gly-Glu-Glu-Glu-OH(化合物34)。
原料 反應(yīng)條件 產(chǎn)物a) GC-6 P-11 1.47g 34a(2.53g) HONB 525mg (3.75g)DIC 459μlDMF 20ml20℃ 16hb) 34a 哌啶 3.6ml 34b(3.56g) DCM 30ml (2.78g)20℃ 2.0h (1.93g)硅膠(氯仿-甲醇)20:1c) 34b TFA 6.0ml 34(0.59g) 20℃ 2.0h (0.51g)化合物34a[α]24D-6.6°(c＝0.62，在氯仿中)對(duì)C81H132N4O15S的元素分析計(jì)算值C，67.84;H，9.28;N，3.91;S，2.24實(shí)測(cè)值C，67.59;H，9.54;N，4.27;S，2.46化合物34b[α]24D-10.7°(c＝0.75，在氯仿中)對(duì)C66H122N4O13S·H2O元素分析
計(jì)算值C，64.46;H，10.16;N，4.56;S，2.61實(shí)測(cè)值C，64.46;H，10.07;N，4.83;S，2.64化合物34[α]24D+10.8°(c＝0.65，在5%TFA-氯仿中)對(duì)C54H98N4O13S·4H2O的元素分析計(jì)算值C，58.14;H，9.58;N，5.02;S，2.87實(shí)測(cè)值C，58.48;H，9.20;N，5.20;S，2.72實(shí)施例43制備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(MyrO)-4-THT-Gly-Glu-Glu-OH(化合物35)按照基本上與實(shí)施例6相同的方法制備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(MyrO)-4-THT-Gly-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBu(35a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(MyrO)-4-THT-Gly-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBu(35b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(MyrO)-4-THT-Gly-Glu-Glu-OH(化合物35)。
原料 反應(yīng)條件 產(chǎn)物a) GC-7 P-11 1.21g 35a(1.83g) HONB 432mg (2.22g)DIC 378μgDMF 20ml20℃ 18hb) 35a 哌啶 3.6ml 35b(2.10g) DCM 30ml (1.58g)20℃ 2.0h硅膠(氯仿-甲醇)20:1c) 35b TFA 10ml 35(1.00g) 20℃ 2.0h (0.85g)化合物35a[α]22D-7.6°(c＝0.71，在氯仿中)對(duì)C73H116N4O15S的元素分析計(jì)算值C，66.33;H，8.85;N，4.24;S，2.43實(shí)測(cè)值C，66.30;H，8.97;N，4.38;S，2.42化合物35b[α]22D-12.0°(c＝1.11，在氯仿中)對(duì)C58H106N4O13S元素分析
計(jì)算值C，63.36;H，9.72;N，5.10;S，2.92實(shí)測(cè)值C，63.14;H，9.69;N，5.21;S，2.81化合物35[α]22D+10.9°(c＝0.86，在5%TFA-氯仿中)對(duì)C46H82N4O13S·4H2O的元素分析計(jì)算值C，55.07;H，9.04;N，5.58;S，3.20實(shí)測(cè)值C，54.96;H，9.12;N，5.25;S，2.94實(shí)施例44制備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(Pamo)-4-THT-NH(CH2)7CO-Glu-OH鹽酸鹽(化合物36)a)向在DMF(4ml)中的實(shí)施例3中全合成的GC-2(179mg)和參考例17中合成的P-17(80mg)溶液中加入TEA(0.033ml)和DEPC(49mg)，將混合物在20℃下攪拌90分鐘。向反應(yīng)混合物中加入水，用乙酸乙酯萃取。萃取液用5%的檸檬酸水溶液、飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和鹽水溶液洗滌，接著用無(wú)水硫酸鈉干燥。蒸去溶劑，剩余物用硅膠柱色譜(己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)純化，得到無(wú)色蠟狀化合物(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-NH(CH2)7CO-Glu(OtBu)-OtBu(36a)(105mg，收率41%)，。
IR(KBr)ν3300，1730，1685，1660，1645cm-11H-NMR(CDCl3)δ0.88(6H，t，J＝7.0Hz)，1.03-1.38(56H，m)，1.44(9H，s)，1.47(9H，s)，1.49-2.40(12H，m)，2.79(2H，d，J＝5.2Hz)，2.93(2H，d，J＝7.0Hz)，3.17-3.32(2H，m)，4.00-4.56(7H，m)，5.17-5.32(1H，m)，5.78-5.90(1H，m)，6.19(1H，d，J＝8.0Hz)，6.44-6.56(1H，m)，7.26-7.46(4H，m)，7.61(2H，d，J＝7.4Hz)，7.78(2H，d，J＝7.4Hz)b)向如上獲得的化合物36a(104mg)中加入哌啶(2ml)，將混合物在室溫下攪拌30分鐘，然后濃縮反應(yīng)混合物。濃縮物用硅膠柱色譜(己烷∶乙酸乙酯＝1∶1～氯仿∶甲醇＝19∶1)純化，得到無(wú)色蠟狀化合物(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-NH(CH2)7CO-Glu(OtBu)-OtBu(36b)(80mg，收率93%)。
IR(KBr)ν3320，1735，1650cm-11H-NMR(CDCl3)δ0.88(6H，t，J＝6.8Hz)，1.03-1.38(52H，m)，1.44(9H，s)，1.47(9H，s)，1.49-2.43(12H，m)，2.20(2H，t，H＝7.8Hz)，2.31(2H，t，J＝7.8Hz)，2.33(2H，t，J＝7.4Hz)，2.72(1H，dd，J＝8.8，13.6Hz)，2.75(2H，d，J＝6.0Hz)，3.12(1H，dd，J＝3.8，13.6Hz)，3.15-3.29(2H，m)，3.48(1H，dd，J＝3.8，8.8Hz)，4.14(1H，dd，J＝6.0，11.8Hz)，4.35(1H，dd，J＝3.6，11.8Hz)，4.41-4.55(1H，m)，5.09-5.22(1H，m)，6.15(1H，d，J＝8.0Hz)，7.40(1H，t，J＝5.8Hz).
c)向如上獲得的化合物36b(80mg)中加入4N HCl乙酸乙酯溶液(4ml)，將所得混合物在20℃下攪拌4小時(shí)。蒸去溶劑得到(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-NH(CH2)7CO-Glu-OH鹽酸鹽(36)(74mg，收率100%)，其為白色粉末狀產(chǎn)物，m.p.53-56℃。23D-6.0°(c＝0.50，在氯仿中)對(duì)C52H89N4O11SCl·2H2O元素分析計(jì)算值C，59.49;H，8.93;N，5.34;S，3.05實(shí)測(cè)值C，59.62;H，8.77;N，5.37;S，3.14IR(KBr)ν3250，1740，1715，1640cm-11H-NMR(CDCl3)δ0.88(6H，t，J＝6.8Hz)，1.03-1.50(56H，m)，1.50-1.80(6H，m)，1.80-3.55(16H，m)，4.03-4.70(4H，m)，5.10-5.35(1H，m)實(shí)施例45制備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-NH(CH2)11CO-Glu-OH鹽酸鹽(化合物37)按照基本上與實(shí)施例44相同的方法制備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-NH(CH2)11CO-Glu(OtBu)-OtBu(37a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-NH(CH2)11CO-Glu(OtBu)-OtBu(37b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-NH(CH2)11CO-Glu-OH鹽酸鹽(化合物37)。
原料 反應(yīng)條件 產(chǎn)物a) GC-2 P-18 91mg 37a(179mg) DEPC 49mg (52mg)TEA 33μlDMF 4ml20℃ 90minb) 37a 哌啶 2ml 37b(104mg) 20℃ 30min (31mg)c) 37b 4N HCl乙酸乙酯 37(31mg) 4ml (29mg)20℃ 4.0h化合物 37aIR(KBr)ν3280，1730，1685，1645cm-11H-NMR(CDCl3)δ0.88(6H，t，J＝7.0Hz)，0.95-1.38(64H，m)，1.44(9H，s)，1.47(9H，s)，1.50-2.40(12H，m)，2.79(2H，d，J＝5.2Hz)，2.86-2.96(1H，m)，3.18-3.32(2H，m)，4.08-4.55(6H，m)，5.18-5.33(1H，m)，5.73-5.85(1H，m)，6.14(1H，d，J＝7.8Hz)，6.40-6.53(1H，m)，7.25-7.45(4H，m)，7.61(2H，d，J＝7.4Hz)，7.78(2H，d，J＝7.0Hz)
化合物 37bIR(KBr)ν3360，3310，1730，1650cm-11H-NMR(CDCl3)δ0.88(6H，t，J＝6.4Hz)，1.03-1.39(56H，m)，1.44(9H，s)，1.47(9H，s)，1.52-1.72(12H，m)，1.72-2.43(2H，m)，2.20(2H，t，J＝8.0Hz)，2.31(2H，t，J＝7.8Hz)，2.33(2H，t，J＝7.6Hz)，2.73(1H，dd，J＝8.7，13.0Hz)，2.75(2H，d，J＝7.4Hz)，3.11(1H，dd，J＝3.7，13.0Hz)，3.23(2H，dt，J＝7.4，7.4Hz)，3.48(1H，dd，J＝3.7，8.7Hz)，4.14(1H，dd，J＝6.2，12.0Hz)，4.35(1H，dd，J＝3.2，12.0Hz)，4.42-4.56(1H，m)，5.08-5.22(1H，m)，6.15(1H，d，J＝7.8Hz)，7.39(1H，t，J＝7.4Hz)化合物37m.p.61-64℃[α]23+4.2°(c＝0.50，在氯仿中)對(duì)C55H104N3O10SCl·2H2O的元素分析計(jì)算值C，61.68;H，10.16;N，3.92;S，2.99實(shí)測(cè)值C，62.02;H，9.33;N，3.73;S，2.64IR(KBr)ν3250，1740，1720，1640cm-11H-NMR(CDCl3)δ0.88(6H，t，J＝6.8Hz)，1.03-1.50(64H，m)，1.50-1.80(6H，m)，1.80-3.55(16H，m)，4.03-4.70(4H，m)，5.10-5.35(1H，m)實(shí)施例46制備(2R，6R)-4-(2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-氨基)苯甲?；?Glu-OH鹽酸鹽(化合物38)a)向化合物P-19(85mg)的哌啶(1.5ml)溶液中加入三氯化磷(0.01ml)?；旌衔镌?0℃下攪拌2小時(shí)，再加入化合物GC-2(100mg)，接著在20℃下攪拌3小時(shí)。向反應(yīng)混合物中加入水，用乙酸乙酯萃取。萃取液用5%的檸檬酸水溶液、飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和鹽水溶液洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥。蒸去溶劑，剩余物用硅膠柱色譜(氯仿∶己烷＝7∶1)純化，得到無(wú)色蠟狀化合物(2R，6R)-4-(2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-氨基)苯甲?；?Glu(OtBu)-OtBu(38a)(107mg，收率84%)。
IR(KBr)ν3300，1730，1685，1660，1640，1600cm-11H-NMR(CDCl3)δ0.88(6H，t，J＝7.0Hz)，1.10-1.38(48H，m)，1.42(9H，s)，1.49(9H，s)，1.55-1.83(4H，m)，1.90-2.58(8H，m)，2.75-2.86(2H，m)，3.02(2H，d，J＝6.6Hz)，4.21-4.72(8H，m)，5.24-5.49(1H，m)，5.74-5.86(1H，m)，7.01(2H，d，J＝7.6Hz)，7.32(2H，d，J＝7.6Hz)，7.35-7.87(8H，m)，8.70(1H，br s)b)向如上獲得的化合物38a(107mg)中加入哌啶(2ml)，混合物在20℃下攪拌3小時(shí)，然后濃縮反應(yīng)混合物。濃縮物用硅膠柱色譜(己烷∶乙酸乙酯＝1∶7)純化，得到無(wú)色蠟狀產(chǎn)物(2R，6R)-4-(2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-氨基)苯甲?；?Glu(OtBu)-OtBu(38b)(66mg，收率68%)。
IR(KBr)ν3430，3380，1735，1640cm-11H-NMR(CDCl3)δ0.88(6H，t，J＝6.6Hz)，1.05-1.37(48H，m)，1.42(9H，s)，1.49(9H，s)，1.52-1.82(4H，m)，1.93-2.53(8H，m)，2.70-4.00(5H，m)，4.05-4.72(3H，m)，5.10-5.24(1H，m)，7.23-7.95(4H，m)，9.71(1H，br s)c)向如上獲得的化合物38b(66mg)中加入4N HCl乙酸乙酯溶液(3ml)，將所得混合物在20℃下攪拌4小時(shí)。蒸去溶劑，得到無(wú)色粉末狀產(chǎn)物化合物38(61mg，收率100%)，m.p.94.0-96.0℃。23D+6.2°(c＝0.50，在氯仿中)對(duì)C50H86N3O10SCl·2H2O的元素分析計(jì)算值C，60.49;H，9.14;N，4.23;S，3.23實(shí)測(cè)值C，60.39;H，8.98;N，4.19，S，3.18IR(KBr)ν3400，1750，1630，1610cm-11H-NMR(CDCl3)δ0.88(6H，t，J＝6.8Hz)，1.02-1.48(48H，m)，1.48-1.68(4H，m)，2.00-2.85(13H，m)，4.05-5.32(4H，m)，7.40-8.00(4H，m)實(shí)施例47制備(2R，6R)-4-(2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-氨基)苯甲?；?Glu-OH鹽酸鹽(化合物39)按照基本上與實(shí)施例44相同的方法制備(2R，6R)-4-(2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-氨基)苯甲?；?Glu(OtBu)-OtBu(39a)，(2R，6R)-4-(2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-氨基)苯甲?；?Glu(OtBu)-OtBu(39b)和(2R，6R)-4-(2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-氨基)苯甲?；?Glu-OH鹽酸鹽(化合物39)。
原料 反應(yīng)條件 產(chǎn)物a) GC-2 P-20 87mg 39a(179mg) DEPC 49mg (146mg)TEA 33μlDMF 4ml20℃ 90minb) 39a 哌啶 3ml 39b(146mg) 20℃ 4.5h (87mg)c) 39b 4N HCl乙酸乙酯(87mg) 4ml 3920℃ 4.0h (78mg)化合物 39aIR(KBr)ν3300，1735，1730，1700，1655，1640cm-11H-NMR(CDCl3)δ0.88(6H，t，J＝6.6Hz)，1.02-1.84(64H，m)，1.42(9H，s)，1.49(9H，s)，1.84-3.15(13H，m)，4.00-4.73(9H，m)，5.15-5.28(1H，m)，5.80-5.92(1H，m)，6.92-7.13(2H，m)，7.26-7.83(12H，m)，8.53(1H，br s)
化合物 39bIR(KBr)ν3350，1735，1650，1600cm-11H-NMR(CDCl3)δ0.88(6H，t，J＝7.0Hz)，1.52-1.76(4H，m)，1.95-2.53(8H，m)，2.75(2H，d，J＝6.6Hz)，2.92(1H，dd，J＝7.8，13.6Hz)，3.11(1H，dd，J＝4.2，13.6Hz)，3.66(1H，dd，J＝4.2，7.8Hz)，4.01-4.24(3H，m)，4.37(1H，dd，J＝3.4，11.8Hz)，4.57-4.62(1H，m)，5.08-5.22(1H，m)，7.00(1H，d，J＝7.6Hz)，7.59(2H，d，J＝8.8Hz)，7.79(2H，d，J＝8.8Hz)，8.19(1H，t，J＝5.6Hz)，8.63(1H，s)化合物 39m.p.100-101℃IR(KBr)ν3400，1735cm-1對(duì)C51H96N3O10SCl·H2O的元素分析計(jì)算值C，61.44;H，9.91;N，4.41;S，3.22實(shí)測(cè)值C，61.17;H，9.81;N，4.26;S，3.211H-NMR(CDCl3)δ0.88(6H，t，J＝6.8Hz)，0.93-1.47(48H，m)，1.47-1.70(4H，m)，1.70-3.32(16H，m)，3.70-4.60(4H，m)，4.60-4.78(1H，m)，5.17-5.32(1H，m)，7.47-7.90(4H，m)實(shí)施例48制備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-NH(CH2)5CO-Glu-OH TFA鹽(化合物40)按照基本上與實(shí)施例44相同的方法合成(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-NH(CH2)5CO-Glu(OtBu)-OtBu(40a)，然后制備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-NH(CH2)5CO-Glu(OtBu)-OtBu(40b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-NH(CH2)5CO-Glu-OH TFA鹽(化合物40)。
原料 反應(yīng)條件 產(chǎn)物a) GC-2 P-21 64mg 40a(150mg) DEPC 35mg (112mg)TEA 44mgDMF 3ml0℃ 1h化合物 40a1H-NMR(CDCl3)δ0.878(6H，t，J＝6.0Hz)，1.247(52H，s)，1.433(9H，s)，1.463(9H，s)，1.465-1.720(6H，m)，1.72-2.15(2H，m)，2.15-2.40(16H，m)，2.785(2H，d，J＝5.8Hz)，2.927(2H，d，J＝6.2Hz)，3.265(2H，m)，4.05-4.55(7H，m)，5.232(1H，br s)，5.825(1H，d，J＝8.2Hz)，6.236(1H，d，J＝8.2Hz)，6.595(1H，br s)，7.366(4H，m)，7.600(2H，d，J＝7.0Hz)，7.766(2H，d，J＝7.0Hz)IR(純)ν3300，2920，2850，1735，1650，1530，1440，1370，1255，1245，1225，1155cm-1b)將化合物40a(112mg)溶于DCM(0.2ml)中，向該溶液中加入哌啶(2ml)，混合物在20℃下攪拌2小時(shí)。減壓濃縮反應(yīng)混合物，使?jié)饪s物吸附在用氨處理的硅膠柱(5g)上，用氯仿洗脫得到無(wú)色油狀產(chǎn)物化合物40b(83mg，收率89.8%)。
1H-NMR(CDCl3)δ0.878(6H，t，J＝6.0Hz)，1.254(52H，s)，1.467(9H，s)，1.499(9H，s)，1.47-1.75(6H，m)，1.72-2.15(2H，m)，2.15-2.40(10H，m)，2.60-2.80(3H，m)，3.107(1H，dd，J＝3.8Hz，13.6Hz)，3.242(2H，q，J＝6.2Hz)，3.475(1H，dd，J＝4.0Hz，6.8Hz)，4.142(1H，dd，J＝6.0Hz，12.0Hz)，4.358(1H，dd，J＝3.4Hz，11.8Hz)，4.472(2H，m)，5.154(1H，m)，6.90(1H，d，J＝7.6Hz)，7.424(1H，t，J＝7.2Hz)IR(純)ν3300，2920，2850，1735，1650，1530，1440，1370，1255，1245，1225，1155cm-1c)將化合物40b(83mg)溶于DCM(0.2ml)中，向該溶液中加入TFA(1ml)，混合物在20℃攪拌2小時(shí)。向反應(yīng)混合物中加入甲苯(1ml)，減壓下濃縮該混合物。重復(fù)該操作得到白色粉末狀產(chǎn)物化合物40(83mg，收率100%)，m.p.62-63℃[α]23D+3.4°(c＝0.16，在氯仿中);
1H-NMR(CDCl3-TFA)δ0.879(6H，t，J＝6.6Hz)，1.256(52H，s)，1.567(6H，m)，1.90-2.20(2H，m)，2.374(8H，m)，2.597(2H，t，J＝6.4Hz)，2.744(2H，d，J＝7.0Hz)，3.100(2H，m)，4.130(1H，dd，J＝6.0Hz，12.0Hz)，4.28-4.50(2H，m)，4.650(1H，m)，5.170(1H，m)，7.080(1H，d，J＝7.5Hz)，7.420(1H，br s)IR(KBr)ν3320，3100，2920，2850，1740，1665，1550，1465，1200cm-1
對(duì)C51H92N3O12SF3·H2O的元素分析計(jì)算值C，58.54;H，9.05;N，4.02;S，3.06實(shí)測(cè)值C，58.35;H，8.91;N，4.06;S，2.76實(shí)施例49制備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-NH(CH2)5NHCO-Glu-OH TFA鹽(化合物41)按照基本上與實(shí)施例48相同的方法制備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-NH(CH2)6NHCO-Glu(OtBu)-OtBu(41a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-NH(CH2)6NHCO-Glu(OtBu)-OtBu(41b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-NH(CH2)6NHCO-Glu-OH TFA鹽(化合物41)。
原料 反應(yīng)條件 產(chǎn)物a) GC-2 P-22 83mg 41a(150mg) DEPC 35mg (203mg)TEA 44mgDMF 3ml0℃ 1hb) 41a 哌啶 2ml 41b(203mg) DCM 0.2ml (137mg)20℃ 1.5hc) 41b TFA 1ml 41(137mg) 20℃ 2h (136mg)化合物 41a1H-NMR(CDCl3)δ0.879(6H，t，J＝7.0Hz)，1.254(52H，s)，1.430(9H，s)，1.448(9H，s)，1.727(8H，m)，1.75-2.20(2H，m)，2.325(6H，m)，2.780(2H，d，J＝5.0Hz)，2.944(2H，d，J＝5.2Hz)，3.05-3.50(4H，m)，4.00-4.50(9H，m)，4.860(1H，t，J＝6.0Hz)，5.249(2H，d，J＝8.2Hz)，6.08(1H，br s)，6.710(1H，br s)，7.260-7.55(4H，m)，7.612(2H，d，J＝8.0Hz)，7.767(2H，d，J＝8.0Hz)IR(純)ν3300，2920，2850，1730，1685，1640，1560，1550，1530，1460，1445，1360，1250，1150，1100，1030cm-1化合物 41b1H-NMR(CDCl3)δ0.879(6H，t，J＝6.2Hz)，1.254(52H，s)，1.439(9H，s)，1.461(9H，s)，1.597(8H，m)，1.75-2.20(2H，m)，2.311(6H，m)，2.745(2H，m)，3.00-3.45(4H，m)，3.483(1H，m)，4.136(1H，dd，J＝6.4Hz，12.4Hz)，4.353(2H，m)，4.700(1H，t，J＝5.2Hz)，5.078(1H，d，J＝7.6Hz)，5.162(1H，br s)，7.440(1H，br s)
IR(純)ν3350，2920，2850，1730，1640，1560，1460，1450，1390，1360，1250，1260，1150，1100，750，730cm-1化合物 41m.p.44-46℃[α]23D-2.9°(c＝0.415，在氯仿中);
1H-NMR(CDCl3)δ0.880(6H，t，J＝6.2Hz)，1.255(52H，s)，1.591(8H，m)，2.0-2.20(2H，m)，2.302(6H，m)，2.779(2H，m)，3.00-3.45(3H，m)，3.516(2H，m)，3.80-4.25(6H，m)，4.340(2H，m)，5.200(1H，br s)，7.57(1H，br s)，7.710(1H，br s)IR(KBr)ν3400，2920，2850，1740(sh.)，1700，1670(sh.)，1460，1420，1280，1260，1240，1200，1175，1130cm-1對(duì)C50H95N4O12SF3的元素分析計(jì)算值C，58.11;H，9.27;N，5.42;S，3.10實(shí)測(cè)值C，58.19;H，8.77;N，5.24;S，2.78實(shí)施例50制備(2R，6R)-4-(2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-氨甲基)苯甲?；?Glu-OH鹽酸鹽(化合物42)按照基本上與實(shí)施例44相同的方法制備(2R，6R)-4-(2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-氨甲基)苯甲?；?Glu(OtBu)-OtBu(42a)，(2R，6R)-4-(2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-氨甲基)苯甲?；?Glu(OtBu)-OtBu(42b)和(2R，6R)-4-(2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-氨甲基)苯甲?；?Glu-OH鹽酸鹽(化合物42)。
原料 反應(yīng)條件 產(chǎn)物a) GC-2 P-23 106mg 42a(200mg) DEPC 55mg (247mg)TEA 70mgDMF 10ml20℃ 30minb) 42a 哌啶 2ml 42b(243mg) DCM 0.5ml (195mg)20℃ 30minc) 42b 4N HCl乙酸乙酯 4ml 42(112mg) 20℃ 2h (88mg)化合物 42aIR(純)ν3300，2920，2850，1730，1660，1530，1500，1445，1360，1240，1150cm-11H-NMR(CDCl3)δ0.88(6H，t，J＝6.8Hz)，1.25(48H，s)，1.42(9H，s)，1.49(9H，s)，1.40-1.65(4H，m)，1.95-2.50(8H，m)，2.77(2H，d，J＝6.6Hz)，2.90-3.00(2H，m)，4.05-4.55(8H，m)，4.66(1H，m)，5.24(1H，m)，5.78(1H，br)，6.98(1H，br)，7.02(1H，d，J＝7.4Hz)，7.25-7.45(6H，m)，7.58(2H，d，J＝7.4Hz)，7.76(2H，d，J＝7.2Hz)，7.78(2H，d，J＝8.4Hz)化合物 42bIR(純)ν3350，2920，2850，1730，1650，1535，1520，1500，1460，1450，1360，1250，1150cm-1
1H-NMR(CDCl3)δ0.88(6H，t，J＝6.8Hz)，1.25(48H，s)，1.42(9H，s)，1.49(9H，s)，1.45-1.65(4H，m)，1.73(2H，br s)，1.90-2.50(8H，m)，2.75(2H，d，J＝6.4Hz)，2.81(1H，dd，J＝13.4，8.4Hz)，3.14(1H，dd，J＝13.4，3.8Hz)，3.57(1H，dd，J＝8.4，4.0Hz)，4.14(1H，dd，J＝12.0，6.2Hz)，4.36(1H，dd，J＝12.0，3.2Hz)，4.49(2H，d，J＝6.2Hz)，4.66(1H，m)，5.16(1H，m)，7.02(1H，d，J＝7.4Hz)，7.35(2H，d，J＝8.2Hz)，7.79(2H，d，J＝8.2Hz)，7.83(1H，br)化合物 42m.p.79-80℃[α]20D+15.1°(c＝0.305，在氯仿中);
IR(KBr)ν3450，2920，2850，1730，1710，1690，1670，1640，1630，1620，1560，1540，1500，1460cm-11H-NMR(CDCl3-TFA)δ0.88(6H，t，J＝6.8Hz)，1.25(48H，s)，1.40-1.65(4H，m)，2.00-3.30(12H，m)，4.00-4.80(6H，m)，5.22(1H，m)，7.00-8.10(6H，m).
對(duì)C51H87N3O10S·HCl·H2O的元素分析計(jì)算值C，61.95;H，9.17;N，4.25;S，3.24;Cl，3.59實(shí)測(cè)值C，61.66;H，8.93;N，4.24;S，3.44;Cl，3.79實(shí)施例51制備(2R，6R)-4-(N-(2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT)-N-(羧甲基)氨甲基)苯甲酰基-Glu-OH(化合物43)按照基本上與實(shí)施例44相同的方法制備
(2R，6R)-4-(N-(2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT)-N-(t-丁氧基羰基甲基)氨甲基)苯甲?；?Glu(OtBu)-OtBu(43a)，和(2R，6R)-4-(N-(2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT)-N-(羧甲基)氨甲基)苯甲?；?Glu-OH(化合物43)。
原料 反應(yīng)條件 產(chǎn)物a) GC-2 P-24 62mg 43a(100mg) DEPC 30mg (134mg)TEA 48mgDMF 6ml20℃ 1hb) 43a TFA 1ml 43(110mg) DCM 0.5ml (70mg)化合物 43aIR(純)ν2920，2850，1730，1650，1360，1250，1150cm-11H-NMR(CDCl3)δ0.88(6H，t，J＝6.8Hz)，1.25(48H，s)，1.40(1/2x9H，s)，1.42(9H，s)，1.44(1/2x9H，s)，1.49(9H，s)，1.45-1.70(4H，m)，2.00-2.50(8H，m)，2.65-3.20(4H，m)，3.70-4.50(8H，m)，4.60-4.80(3H，m)，5.17(1H，m)，5.70-5.80(1H，m)，7.00-7.10(1H，m)，7.25-7.45(6H，m)，7.61(2H，d，J＝7.4Hz)，7.75-7.90(4H，m)化合物 .43m.p.58-59℃[α]20D-12.6°(c＝0.25，在氯仿中);
IR(KBr)ν2921，2852，1739，1640，1540，1465，1450，1250，1220，1160cm-1
1H-NMR(CDCl3)δ0.87(6H，t，J＝6.6Hz)，1.25(48H，s)，1.40-1.70(4H，m)，2.00-2.50(8H，m)，2.60-3.00(4H，m)，3.90-4.50(8H，m)，5.17(1H，m)，6.27(1H，m)，7.15-7.45(6H，m)，7.50-7.85(6H，m)對(duì)C68H100N3O14S·H2O的元素分析計(jì)算值C，66.21;H，8.33;N，3.41;S，2.60實(shí)測(cè)值C，66.44;H，8.32;N，3.21;S，2.66實(shí)施例52制備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Lys-Gly-OH 2TFA鹽(化合物44)按照基本上與實(shí)施例6相同的方法制備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Lys(Boc)-Gly-OtBu(44a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Lys(Boc)-Gly-OtBu(44b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Lys-Gly-OH2TFA鹽(化合物44)。
原料(g) 反應(yīng)條件 產(chǎn)物(g)a) GC-2 P-25 1.01mg 44a(1.97) HONB 435mg (2.24)DIC 380μlDMF 30ml20℃ 13hb) 44a 哌啶 2.0ml 44b(2.00) DCM 20ml (1.23)20℃ 2h硅膠(氯仿-甲醇)50:1c) 44b TFA 6.0ml 44(0.25) 20℃ 2h (0.23)化合物44a[α]25D-10.0°(c＝0.66，在氯仿中)對(duì)C72H117N5O13S的元素分析計(jì)算值C，66.89;H，9.12;N，5.42;S，2.48實(shí)測(cè)值C，67.10;H，9.37;N，5.18;S，2.49化合物44b[α]25D-15.2°(c＝0.56，在氯仿中)對(duì)C57H107N5O11S的元素分析
計(jì)算值C，63.95;H，10.07;N，6.54;S，3.00實(shí)測(cè)值C，63.70;H，10.20;N，6.50;S，2.99化合物44[α]25D+5.5°(c＝0.62，在5%TFA-氯仿中)對(duì)C48H91N5O9S·2TFA的元素分析計(jì)算值C，54.67;H，8.21;N，6.13;S，2.81實(shí)測(cè)值C，54.29;H，8.19;N，6.47;S，3.06實(shí)施例53制備鈉鹽1)在40℃下將化合物12(5.0g)溶于20%(v/v)乙腈-0.5%(w/v)碳酸氫鈉水溶液(5L)中，在溶液的PH值調(diào)節(jié)為9.5后，溶液在Diaion HP-20(1.0L，Mitsubishi Kasei公司，日本)上進(jìn)行色譜分離，其中Diaion HP-20已事先用20%(v/v)含水乙腈溶液使其膨脹。樹(shù)脂用20%(v/v)含水乙腈溶液(5L)洗滌，接著用40%(v/v)含水乙腈溶液(4L)和60%(v/v)含水乙腈溶液(5L)展開(kāi)。濃縮洗脫液，然后冷凍干燥得到粉末狀產(chǎn)物。將粉末狀產(chǎn)物懸浮在丙酮(150ml)中，過(guò)濾收集不溶物質(zhì)，得到為白色粉末狀物質(zhì)化合物12的二鈉鹽(4.5g)
FAB-MS(M+H)＝959對(duì)C47H84N4O11SNa2·3H2O的元素分析計(jì)算值C，55.71;H，8.95;N，5.53;S，3.16Na，4.54實(shí)測(cè)值C，55.90;H，9.39;N，5.34;S，3.16;Na，4.782)在40℃將化合物19(11.0g)溶于15%(v/v)乙腈-0.5%(w/v)碳酸氫鈉水溶液(5L)中，在溶液的PH值調(diào)節(jié)為9.5后，在Diaion HP-20(1.0L，Mitsubish Kasei公司，日本)上對(duì)溶液進(jìn)行色譜分離，其中Diaion HP-20已事先用15%(v/v)含水乙腈溶液膨脹。樹(shù)脂用15%(v/v)含水乙腈溶液(5L)洗滌，接著用40%(v/v)含水乙腈溶液(12L)展開(kāi)。濃縮洗脫液，然后冷凍干燥得到粉末狀產(chǎn)物。將該產(chǎn)物懸浮在丙酮(200ml)中，過(guò)濾收集不溶物，得到化合物23的二鈉鹽(9.9g)，其為白色粉末狀物質(zhì)。
FAB-MS(M+H)＝902對(duì)C45H81N3O10SNa2·3H2O的元素分析計(jì)算值C，56.52;H，9.17;N，4.39;S，3.35;Na，4.81實(shí)測(cè)值C，56.61;H，9.14;N，4.26;S，3.35;Na，5.253)在40℃下將化合物23(14.0g)溶于5%(v/v)乙腈-0.5%(w/v)碳酸氫鈉水溶液(7L)中。將溶液的PH值調(diào)節(jié)為9.5后，在Diaion HP-20(1.4L，Mitsubishi Kasei公司，日本)上進(jìn)行色譜分離，其中Diaion HP-20已事先用5%(v/v)含水乙腈溶液使其膨脹。樹(shù)脂用5%(v/v)含水乙腈溶液(7L)洗滌，接著用40%(v/v)含水乙腈溶液(8.5L)展開(kāi)。濃縮洗脫液，然后冷凍干燥得到粉末狀產(chǎn)物。將該產(chǎn)物懸浮在丙酮(600ml)中，過(guò)濾收集不溶物得到化合物23的三鈉鹽(11.5g)，其為白色粉末狀物質(zhì)。
FAB-MS(M+H)＝1053對(duì)C50H87N4O13SNa3·4H2O的元素分析計(jì)算值C，53.37;H，8.51;N，4.98;S，2.85;Na，6.13實(shí)測(cè)值C，53.48;H，8.81;N，4.89;S，3.03;Na，6.04)在40℃將化合物25(8.0g)溶于5%(v/v)乙腈-0.5%(w/v)碳酸氫鈉水溶液(4L)中，在溶液的PH值調(diào)節(jié)為9.5后，在Diaion HP-20(1.5L，Mitsubishi Kasei公司，日本)上對(duì)溶液進(jìn)行色譜分離，其中Diaion HP-20事先已用5%(v/v)含水乙腈溶液使其膨脹。樹(shù)脂用5%(v/v)含水乙腈溶液(7.5L)洗滌，接著用40%(v/v)含水乙腈溶液(6L)展開(kāi)。濃縮洗脫液，然后冷凍干燥得到白色粉末狀產(chǎn)物。將該產(chǎn)物懸浮在丙酮(200ml)中，過(guò)濾收集不溶物質(zhì)，得到化合物25的三鈉鹽(7.0g)，其為白色粉末狀物質(zhì)。
FAB-MS(M+H)＝1053對(duì)C50H87N4O13SNa3·2.5H2O的元素分析
計(jì)算值C，54.68;H，8.44;N，5.10;S，2.92;Na，6.28實(shí)測(cè)值C，54.48;H，8.64;N，5.09;S，2.79;Na，6.135)在40℃下將化合物7(200mg)溶于30%(v/v)甲醇-0.5%(w/v)碳酸氫鈉水溶液(300ml)中，在溶液的PH值調(diào)節(jié)為9.5后，在Diaion HP-20(50ml，Mitsubishi Kasei公司，日本)上對(duì)溶液進(jìn)行色譜分離，其中Diaion HP-20事先已用30%(v/v)含水甲醇溶液膨脹。樹(shù)脂用30%(v/v)含水甲醇溶液(200ml)和50%(v/v)含水甲醇溶液(200ml)洗滌，接著用80%(v/v)含水甲醇溶液(600ml)展開(kāi)。濃縮洗脫液，然后冷凍干燥得到白色粉末狀產(chǎn)物。將該粉末狀產(chǎn)物懸浮在丙酮(8ml)中，過(guò)濾收集不溶物，得到化合物7的二鈉鹽(75mg)，其為白色粉末狀物質(zhì)。
對(duì)C49H87N5O12SNa2·2.5H2O的元素分析計(jì)算值C，55.45;H，8.74;N，6.60;S，3.02;
實(shí)測(cè)值C，55.47;H，8.55;N，6.48;S，3.11;
上面實(shí)施例中所得到的化合物的結(jié)構(gòu)式列在表1中。
表1化合物 實(shí)施例 結(jié)構(gòu)式編號(hào) 編號(hào)1 6 (2R,6S)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Glu-Thr-Thr-OH2 7 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Thr-Thr-OH3 8 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-Thr-Thr-OH4 9 (2S,6S)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-Thr-Thr-OH5 10 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-Thr-OH6 11 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Glu-Gly-D-Glu-OH7 12 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-
Glu-OH8 13 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-D-Glu-OH9 14 (2R,6S)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-OH10 15 (2R,6S)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-D-Glu-OH11 16 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Glu-Gly-D--Glu-OH12 17 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Glu-OH13 18 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly--OH14 19 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Glu-OH15 20 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Glu-OH16 21 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙
(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Asp-OH17 22 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-D--Glu-OH18 23 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-OH19 24 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Gly-D-Glu--OH20 25 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-D-Glu-OH21 26 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Asp-OH22 27 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-D-Asp-OH23 28 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Glu-Glu-OH24 29 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Glu-D--Glu-OH25 30 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Glu-Gly-Glu-
OH26 31 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Glu-Glu-OH27 32 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Glu-D-Glu-OH28 33 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Glu-Glu-Glu-OH29 34 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Glu-Glu-D-Glu-OH30 36 (2R,6R)-2-氨基-6-己酰氧基-7-PamO-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-OH31 37 (2R,6R)-2-Fmoc-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Glu-Gly-D-Glu-OH32 38 (2R,6R)-2-乙酰氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Glu-Gly-D--Glu-OH33 39 (2R,6R)-2-己酰氨基-6-己酰氧基-7-(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-OH
34 42 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙-(SetO)-4-THT-Gly-Glu-GluOH35 43 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(MyrO)-4-THT-Gly-Glu-Glu-OH36 44 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-NH(CH2)7CO-Glu-OH鹽酸鹽37 45 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-NH(CH2)11CO-Glu-OH鹽酸鹽38 46 (2R,6R)-4-(2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-氨基)苯甲?；?Glu-OH鹽酸鹽39 47 (2R,6R)-4-(2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Gly-氨基)苯甲?；?Glu-OH鹽酸鹽40 48 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-NH(CH2)5CO-Glu-OH TFA 鹽41 49 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-NH(CH2)6NHCO-Glu-OH TFA 鹽
42 50 (2R,6R)-4-(2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-氨甲基)苯甲?；?Glu-OH 鹽酸鹽43 51 (2R,6R)-4-(N-(2-Fmoc-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT)-N-(羧甲基)氨甲基)苯甲酰基-Glu-OH44 52 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Lys-Gly-OH 2TFA 鹽化合物1-15在高效液相色譜中的保留時(shí)間在下面給出柱YMC-Pack A-602 NH2(Yamamura Chemical Laboratories，日本)流動(dòng)相85%甲醇/0.02M磷酸鹽緩沖液(PH4.8)流速1.0ml/min.
檢測(cè)方法UV，214nm保留時(shí)間(分鐘)化合物2，17.1; 化合物1，17.3;
化合物4，15.8; 化合物3，15.9化合物7，20.7; 化合物5，18.5化合物9，20.7; 化合物8，19.7化合物12，19.4; 化合物10，19.8化合物15，18.4; 化合物14，9.4
化合物(Ⅰ)的生物活性在下面描述。
實(shí)施例1前述實(shí)施例中制備的化合物(Ⅰ)對(duì)小鼠骨髓細(xì)胞增生的促進(jìn)作用見(jiàn)表2。
表 2對(duì)小鼠骨髓細(xì)胞增生的促進(jìn)作用化合物 最小有效濃度編號(hào) (MEC,ng/ml)*11 0.6252 <0.1568 <0.15612 <0.15614 0.15636 <0.15644 <0.156＊1 假定沒(méi)有加入實(shí)驗(yàn)化合物的實(shí)驗(yàn)組的骨髓增生為1，當(dāng)觀察到骨髓增生為原來(lái)的1.3倍或更多時(shí)，記錄下此時(shí)的化合物濃度。
測(cè)定方法向含有2×106/ml BALB/c小鼠骨髓細(xì)胞、2mML-谷氨酰胺、20μg/ml慶大霉素(Flow Laboratories Inc.，蘇格蘭)、10%胎兒腓腸血清(BW，USA)的RPMI1640培養(yǎng)介質(zhì)[Bio-Wittaker Inc.，(簡(jiǎn)稱BW)，USA]中加入適當(dāng)濃度的實(shí)驗(yàn)化合物，該培養(yǎng)物在含有5%二氧化碳的空氣中于37℃下保溫3天，接著用MTT歸納法[Tada等人，Journal of Jmmunological Methods vol.93.P，157，1986]測(cè)定骨髓細(xì)胞的增生情況。
實(shí)施例2化合物(Ⅰ)增加小鼠脾細(xì)胞數(shù)目的作用見(jiàn)表3。
表 3增加脾細(xì)胞數(shù)目的作用藥物劑量(mg/Kg/天) 脾細(xì)胞數(shù)(%)*1僅有環(huán)磷酰胺 33.4環(huán)磷酰胺+(化合物8) 0.1 78.6＊1 在腹膜內(nèi)施以生理鹽水溶液(含有2%阿拉伯樹(shù)膠)的小鼠的脾細(xì)胞數(shù)定為100%。
測(cè)定方法以200mg/Kg的劑量用溶解在生理鹽水溶液中的環(huán)磷酰胺對(duì)BALB/C小鼠進(jìn)行腹膜內(nèi)注射。從第三天開(kāi)始，連續(xù)4天用懸浮在含有2%阿拉伯樹(shù)膠的生理鹽水溶液中實(shí)驗(yàn)化合物對(duì)小鼠進(jìn)行腹膜內(nèi)給藥。在完成給藥的第二天，數(shù)出脾的錐蟲(chóng)藍(lán)發(fā)色細(xì)胞的數(shù)目。
實(shí)施例3化合物(Ⅰ)對(duì)增加小鼠白細(xì)胞數(shù)目的作用見(jiàn)表4。
表 4增加白細(xì)胞數(shù)目的作用化合物劑量(mg/Kg/天) 白細(xì)胞數(shù)(%)*1編號(hào)2 0.063 1027 0.031 12914 0.13 118＊1 給出的數(shù)值是相對(duì)于下面小鼠白細(xì)胞(假定為100%)的百分?jǐn)?shù)，這些小鼠以相對(duì)于20g體重0.2ml的劑量口服生理鹽水溶液(代替環(huán)磷酰胺)，然后從口服的第二天開(kāi)始，連續(xù)5天、每天一次用5%葡萄糖皮下給藥。順便提一下，本實(shí)驗(yàn)自始至終，小鼠白細(xì)胞數(shù)目的平均值和標(biāo)準(zhǔn)偏差為41±11%，這些小鼠以150mg/Kg的劑量口服環(huán)磷酰胺，然后從第二天開(kāi)始，連續(xù)5天、每天一次用相對(duì)于20g體重0.2ml5%葡萄糖的劑量皮下給藥。
測(cè)定方法年齡為六周的雌CDF1/Crj小鼠(5只/組)用于該實(shí)驗(yàn)。以150mg/Kg的劑量使每只小鼠口服溶解在生理鹽水溶液中的環(huán)磷酰胺。從第二天起，以下列劑量用懸浮在5%葡萄糖中的化合物每天一次(共5天)對(duì)每只小鼠皮下給藥。完成給藥的第二天，用EDTA處理的玻璃毛細(xì)管從周靜脈中取出100μl外圍血液，然后用自動(dòng)細(xì)胞分析儀(Sysmex K-2000，Toa Medical Electronics，日本)數(shù)出白細(xì)胞數(shù)目。
實(shí)驗(yàn)例4前述實(shí)施例中制備的化合物(Ⅰ)促進(jìn)巨核細(xì)胞群生長(zhǎng)的作用見(jiàn)表5。
表 5實(shí)驗(yàn)化合物 濃度 巨核細(xì)胞群形成編號(hào) (ng/ml) 的程度*112 0.4 1.824 2.01＊1 沒(méi)有加入化合物(Ⅰ)的實(shí)驗(yàn)組的巨核細(xì)胞的數(shù)目定為1。
測(cè)定方法根據(jù)血漿凝塊方法[Mizoguti等人，ExperimentalHematology Vol.7，PP，345-351，1979]研究巨核細(xì)胞群的形成。
以適當(dāng)?shù)臐舛认蚝?×106/ml BALB/c小鼠骨髓細(xì)胞、20%胎兒腓腸血清(BW，USA)、1%血清白蛋白、0.026mg/mlCaCl2、0.02mg/mlL一天冬酰胺、10%檸檬酸鈉牛血漿的NCTC-109培養(yǎng)介質(zhì)(Gibco BRL Inc.USA)中加入實(shí)驗(yàn)化合物，然后徹底混合。將0.4ml上述培養(yǎng)液的等分試樣放置在35×10mm塑料盤(A/S Nunc，丹麥)的中央使其結(jié)塊。向培養(yǎng)盤中加入0.6ml含有10%胎兒腓腸血清的α-MEM培養(yǎng)介質(zhì)(BW，USA)，然后使培養(yǎng)液在含有5%CO2的空氣中于37℃下保溫7天。保溫后，除去血漿結(jié)塊周圍的培養(yǎng)介質(zhì)，向血漿結(jié)塊表面放置一小塊濾紙使其除去水分。然后，將1-2滴5%戊二醛滴在血塊上面的濾紙上。10分鐘后，撤去濾紙，并用0.1M磷酸鹽緩沖液(PH6.0)洗滌血塊。用乙酰膽堿酯酶(下文縮寫(xiě)為AchE)使血塊染色。向含有碘化乙酰硫膽堿(30mg)的0.1M磷酸鹽緩沖液(45ml)中依次加入30mM硫酸銅水溶液(6ml)和0.1M檸檬酸鈉水溶液(3ml)以及5mM鐵氰化鉀水溶液(6ml)。每次得到的溶液都取出2ml加入盤中。在33℃下放置4-6小時(shí)后，數(shù)出巨核細(xì)胞群的數(shù)目。
實(shí)驗(yàn)例5前述實(shí)施例中制備的化合物(Ⅰ)促進(jìn)AchE陽(yáng)性細(xì)胞生長(zhǎng)的作用見(jiàn)表6。
表 6實(shí)驗(yàn)化合物濃度(ng/ml) AchE陽(yáng)性細(xì)胞活性程度*1編號(hào)7 0.1 1.5112 0.1 1.4323 0.1 1.67＊1沒(méi)有加入實(shí)驗(yàn)化合物(Ⅰ)的實(shí)驗(yàn)組的AchE活性定為1。
測(cè)定方法根據(jù)熒光法(Ishibashi等人，Proceedings of the National Academy of Science U.S.A.，Vol.86，PP.5953-5957，1989)研究AchE活性。
將沒(méi)有粘連的BALB c小鼠骨髓細(xì)胞(1×106細(xì)胞/ml)懸浮在含有1% Neutridoma-SP(Boheringer Mannhaim，德國(guó))的Dulbecco介質(zhì)(Gibco BRL Inc，USA)的Iscove變體中。25μl適當(dāng)濃度的實(shí)驗(yàn)化合物溶液在96孔的平板中接種，向每個(gè)穴中的實(shí)驗(yàn)化合物溶液加入100μl非粘連骨髓細(xì)胞懸浮液。在37℃下保溫5天后，向穴中加入25μl6%戊二醛水溶液。在4℃下靜置30分鐘后，該混合物在5℃下離心(850×g)，并棄去上清液。用100μl磷酸鹽緩沖鹽水洗滌孔中的沉淀后，向沉淀加入含有0.2%聚氧乙烯-10-辛基苯基醚(POPE)、1mM乙二胺四乙酸鹽(EDTA)、0.12M氯化鈉和50mMN-2-羥基乙基哌啶-N′-2-乙磺酸(HEPES)的100μl緩沖液(PH7.5)。再加入10μl碘化乙酰硫膽堿水溶液(濃度1.6mg/ml)。在33℃下保溫3小時(shí)后，分出10μl得到的溶液。向該溶液中加入10μl10.4mM7-二乙氨基-3-(4′-馬來(lái)酰亞氨基苯基)-4-甲基香豆素水溶液和含有0.2%POPE、1mMEDTA和50mM乙酸鈉的100μl緩沖液(PH5.0)，并用熒光計(jì)測(cè)定熒光發(fā)射(激發(fā)波長(zhǎng)365nm，熒光波長(zhǎng)450nm)。
實(shí)驗(yàn)例6毒性實(shí)驗(yàn)沒(méi)有發(fā)現(xiàn)以100mg/Kg劑量用化合物3腹膜內(nèi)給藥的小鼠死亡。
實(shí)施例7毒性實(shí)驗(yàn)沒(méi)有發(fā)現(xiàn)以100mg/Kg劑量用化合物7的二鈉鹽皮下給藥的小鼠死亡。
化合物(Ⅰ)或其鹽是低毒性的，可以完全使用。
從前面的實(shí)驗(yàn)例可以清楚地看出，化合物(Ⅰ)或其鹽對(duì)改善造血機(jī)能具有出色的活性，可用作治療或預(yù)防由于放射治療或化學(xué)治療哺乳動(dòng)物(如狗、貓、牛、馬、猴、人等)的癌癥引起的白細(xì)胞減少癥的藥物，可在骨髓移植情況下用作刺激造血的試劑，可用作具有增加白細(xì)胞作用的增強(qiáng)免疫試劑，以及用作血小板減少癥的治療試劑。
制劑例1將實(shí)施例8制得的化合物2(4g)和甘露醇(50g)溶于含有聚乙二醇400(30%w/w)的無(wú)菌蒸餾水(1l)中，在無(wú)菌條件下過(guò)濾上述溶液。然后將1ml該溶液裝在一只安瓿(每只裝1ml)中，從而制得每只安瓿含有4mg化合物2的靜脈注射針劑。
制劑例2將實(shí)施例53制得的化合物23的三鈉鹽(40mg)和甘露醇(50g)溶于含有聚乙二醇400(30%w/w)的無(wú)菌蒸餾水(1l)，在無(wú)菌條件下過(guò)濾上述溶液，然后將1ml該溶液裝在一只安瓿(每只裝1ml)中，從而制得每只安瓿含有40μg化合物23的三鈉鹽的靜脈注射針劑。
權(quán)利要求
1.下列通式的化合物或其鹽
其中每個(gè)R1和R2是氫或脂?；珹是可被保護(hù)的氨基，X是由1-10個(gè)氨基酸殘基組成的氨基酸序列，這些氨基酸殘基中至少有一個(gè)氨基酸殘基帶有增加水溶性的基團(tuán)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中A是氨基。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中A是可被取代氧羰基取代的氨基。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中帶有增加水溶性基團(tuán)的氨基酸殘基是酸性氨基酸殘基。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中帶有增加水溶性基團(tuán)的氨基酸殘基是堿性氨基酸殘基。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中脂酰基是C2-30脂?；?br> 7.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R1和R2中的至少一個(gè)基團(tuán)是脂?；?。
8.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R1是脂酰基。
9.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R2是脂?；?br> 10.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中化合物是(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(十六烷酰氧基)-4-硫雜庚?；?甘氨酰-谷氨酰-谷氨酸。
11.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中化合物是(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(十六烷酰氧基)-4-硫雜庚?；?甘氨酰-甘氨酰-谷氨酸。
12.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中化合物是(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(十六烷酰氧基)-4-硫雜庚?；?谷氨酰-甘氨酰-谷氨酸。
13.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中化合物是(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(十六烷酰氧基)-4-硫雜庚?；?甘氨酰-D-谷氨酸。
14.一種具有增加白細(xì)胞作用的刺激免疫組合物，其包括權(quán)利要求1所要求保護(hù)的化合物或其鹽。
15.根據(jù)權(quán)利要求14的刺激免疫組合物，其中R1和R2中的至少一個(gè)基團(tuán)是脂?；?。
16.治療血小板減少癥的組合物，其包括權(quán)利要求1中所要求保護(hù)的化合物或其鹽。
17.一種制備權(quán)利要求1所要求保護(hù)的化合物或其鹽的方法，包括使下式的化合物或其鹽進(jìn)行去保護(hù)基反應(yīng)
其中每個(gè)R1和R2是氫或脂酰基，R3是保護(hù)基，A是可被保護(hù)的氨基，X′是由1-10個(gè)任意保護(hù)的氨基酸殘基組成的氨基酸序列，這些殘基中至少有一個(gè)任意保護(hù)的氨基酸殘基帶有增加水溶性基團(tuán)。
全文摘要
上式的化合物或其鹽。具有出色的改善造血機(jī)能失調(diào)的活性并可用作刺激免疫試劑或治療血小板減少癥的藥劑。通式中每個(gè)R
文檔編號(hào)C07K5/103GK1094731SQ9312175
公開(kāi)日1994年11月9日 申請(qǐng)日期1993年12月28日 優(yōu)先權(quán)日1992年12月28日
發(fā)明者谷田清一, 飛田恒明, 脅舛光廣, 原田節(jié)夫, 幸重浩一 申請(qǐng)人:武田藥品工業(yè)株式會(huì)社