一種新型半胱氨酸和同型半胱氨酸熒光探針的制備與應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種可以用于半胱氨酸和同型半胱氨酸熒光識(shí)別的新型化合物，具體涉及一種新型熒光探針的制備方法及其應(yīng)用，屬于化學(xué)分析檢測(cè)【技術(shù)領(lǐng)域】。其分子結(jié)構(gòu)式如下：該熒光探針用于環(huán)境或生物樣品中的半胱氨酸和同型半胱氨酸的熒光傳感分析，對(duì)半胱氨酸和同型半胱氨酸的選擇性好，抗干擾能力強(qiáng)，可以靈敏快速地從多種氨基酸中區(qū)分出半胱氨酸和同型半胱氨酸，具有很好的應(yīng)用前景。
【專利說明】一種新型半胱氨酸和同型半胱氨酸熒光探針的制備與應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及的是化學(xué)分析檢測(cè)【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種新型半胱氨酸和同型半胱 氨酸熒光探針的制備方法以及該熒光探針在檢測(cè)亞硫酸根離子方面的應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 氨基酸是構(gòu)成蛋白質(zhì)的基本物質(zhì)，并且與生物的生命活動(dòng)有著密切的聯(lián)系。半胱 氨酸（Cysteine,Cys)和同型半胱氨酸（Homocysteine,Hcy)是含有巰基（-SH)并且結(jié)構(gòu)相 差很小的兩種氨基酸，在生理過程中有著重要的作用，醫(yī)學(xué)研究表明他們與很多疾病有關(guān)， 比如腎功能衰竭、老年癡呆癥、帕金森疾病、心血管疾病、冠心病，它們?cè)谏矬w內(nèi)含量變化 可以作為這些疾病診斷的依據(jù)。因此，人們投注了很大的精力來研究快速靈敏并且有選擇 性的檢測(cè)半胱氨酸和同型半胱氨酸的技術(shù)，目前已經(jīng)應(yīng)用的技術(shù)包括高效液相色譜法、毛 細(xì)管電泳法、電化學(xué)檢測(cè)、光學(xué)分析和質(zhì)譜鑒定，這些方法可以在體外監(jiān)測(cè)半胱氨酸和同型 半胱氨酸，不能在活細(xì)胞中的監(jiān)測(cè)。熒光分子探針不僅靈敏度高選擇性好，而且能夠在活細(xì) 胞中檢測(cè)分析物，所以研究者們開始關(guān)注將熒光分子探針的這項(xiàng)技術(shù)應(yīng)用于對(duì)體外或者細(xì) 胞內(nèi)的半胱氨酸和同型半胱氨酸進(jìn)行監(jiān)測(cè)或者細(xì)胞熒光成像。目前已經(jīng)報(bào)導(dǎo)了多種基于化 學(xué)反應(yīng)的該類探針，例如Michael加成、醒環(huán)化反應(yīng)和裂解反應(yīng)。在這些方法中，在突光分 子內(nèi)引入熒光淬滅劑2, 4-二硝基-苯磺酸鹽或2, 4-二硝基苯磺酰胺基團(tuán)，導(dǎo)致熒光猝滅， 在半胱氨酸或同型半胱氨酸誘導(dǎo)下發(fā)生的裂解，熒光得以恢復(fù)，這是一種特別有效的方法。 這類熒光探針中的大部分水溶解性較差，只能在有機(jī)溶劑或者有機(jī)溶劑與水的混合溶劑中 對(duì)半胱氨酸和同型半胱氨酸進(jìn)行監(jiān)測(cè)，使其在生物樣品或者活體中的應(yīng)用受到了限制，因 此研發(fā)能夠在水溶液或者需要很少量有機(jī)溶劑的該類探針是很有意義的。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明目的之一是提供一種合成簡(jiǎn)單、反應(yīng)條件溫和、成本較低的熒光探針合成 方法；目的之二是提供一種靈敏度高、選擇性好，抗干擾能力強(qiáng)，能夠?qū)w外或者細(xì)胞內(nèi)的 半胱氨酸和同型半胱氨酸進(jìn)行監(jiān)測(cè)或者細(xì)胞熒光成像的熒光探針。
[0004] 本發(fā)明解決問題采取的技術(shù)方案為，一種熒光增強(qiáng)法檢測(cè)半胱氨酸和同 型半胱氨酸的熒光探針，其分子結(jié)構(gòu)式如下：

【權(quán)利要求】
1. 一種新型半胱氨酸和同型半胱氨酸熒光探針，其結(jié)構(gòu)為：
2. 如權(quán)利要求1所述的半胱氨酸和同型半胱氨酸熒光探針的制備方法，其特征在于按 以下步驟進(jìn)行制備： (a) 將2-甲氧基-6-乙?；寥苡诙燃淄橹校偌尤霛恹}酸，加熱至85°C回流4h，停 止加熱冷卻至室溫，用50%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至中性，析出固體，過濾、濾餅為產(chǎn)物，蒸 餾水洗滌3次，真空干燥24h，得到中間產(chǎn)物； (b) 將上步所得產(chǎn)物2-羥基-6-乙?；寥苡跓o水二氯甲烷中，再加入三乙胺，將 2, 4-二硝基苯磺酰氯溶于無水二氯甲烷中，冰水浴下緩慢滴加到反應(yīng)液中，繼續(xù)攪拌lh， 停止反應(yīng)，旋蒸除去溶劑，經(jīng)柱層析分離得到產(chǎn)物，真空干燥24h，得到淺黃色固體，即探針 分子。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的半胱氨酸和同型半胱氨酸熒光探針的用途，其特征在于該酸 熒光探針用于環(huán)境或生物樣品中半胱氨酸和同型半胱氨酸的熒光檢測(cè)和分析。
【文檔編號(hào)】C07C309/73GK104447421SQ201410586419
【公開日】2015年3月25日 申請(qǐng)日期:2014年10月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月28日
【發(fā)明者】宋相志, 劉興江 申請(qǐng)人:蘇州羅蘭生物科技有限公司