專利名稱：短果茴芹中孕烯醇酮的提取分離方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種食用植物的提取分離方法，具體涉及一種短果茴芹中有效成分孕烯醇酮的提取分離方法。
背景技術(shù)：
短果茴芹可入藥，具有活血降壓、清熱解毒、利濕、止痛等功效。目前，短果茴芹的研究?jī)H見(jiàn)菜籽精油化學(xué)組成分析和全草的營(yíng)養(yǎng)成分分析，而其具體的功能成分研究未見(jiàn)報(bào)道。有研究表明孕烯醇酮飽和后的類固醇類的孕烷醇酮可以用作制備治療和預(yù)防高血壓的藥物。提取分離過(guò)程中盡可能保存有效成分，簡(jiǎn)化步驟，減少成本，是開(kāi)發(fā)短果茴芹成為降血壓功能性食品的關(guān)鍵。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種短果茴芹中孕烯醇酮的提取方法。該方法工藝簡(jiǎn)單，耗時(shí)短。所述方法包括乙醇提取，溶劑萃取，硅膠柱分離，大孔樹(shù)脂柱分離和十八烷基鍵合相硅膠C-18柱分離。新鮮短果茴芹，陰干，粉碎成粗粉。乙醇提取加入粗粉重量10倍質(zhì)量濃度為90%的乙醇，回流提取3次，每次煮沸 2h。過(guò)濾，合并提取液，備用。溶劑萃取將提取液減壓回收乙醇，吹干至無(wú)醇味，得浸膏。加入浸膏重量5倍的蒸餾水形成混懸液。石油醚萃取至無(wú)色后，用乙酸乙酯萃取?；厥找宜嵋阴ト芤旱枚坦钋垡宜嵋阴犹崛∥?，減壓回收晾干，得乙酸乙酯層浸膏。硅膠柱分離乙酸乙酯層浸膏與100-200目硅膠按質(zhì)量比1 1拌樣，裝入10倍浸膏質(zhì)量的硅膠柱中進(jìn)行分離。用環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲醇(20 1 0 — 0 0 1)為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，用TLC法檢測(cè)洗脫液。每份洗脫液250ml，減壓回收，共收集405瓶。大孔樹(shù)脂柱分離合并第335-345份的洗脫液，吹干后90%的乙醇溶解，蒸餾水稀釋過(guò)濾后用大孔樹(shù)脂柱分離。分別用質(zhì)量濃度為75%、85%和100%的乙醇對(duì)分離液進(jìn)行梯度洗脫。十八烷基鍵合相硅膠C-18柱分離收集75%的洗脫液，減壓回收再進(jìn)行C-18層析柱分離，甲醇水(3 10— 1 0)，每次收集洗脫液15ml于小瓶中，甲醇重結(jié)晶，得無(wú)色細(xì)晶，經(jīng)核磁解析得出為孕烯醇酮。


圖1孕烯醇酮結(jié)構(gòu)2孕烯醇酮1H NMR圖譜圖3孕烯醇酮13CNMR圖譜
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1提取首先取新鮮短果茴芹，陰干，粉碎成粗粉4. 395kg。然后加入粗粉重量10倍質(zhì)量濃度為90%的乙醇回流提取3次，每次煮沸2h。過(guò)濾，合并提取液，備用。將提取液減壓回收乙醇，吹干至無(wú)醇味，得浸膏。萃取加入上述浸膏重量5倍的蒸餾水形成混懸液。石油醚萃取至無(wú)色后，用乙酸乙酯萃取?；厥找宜嵋阴ト芤旱枚坦钋垡宜嵋阴犹崛∥?，減壓回收晾干，得乙酸乙酯層浸膏125g。分離乙酸乙酯層浸膏與100-200目硅膠按質(zhì)量比1 1拌樣，裝入10倍質(zhì)量的硅膠柱中進(jìn)行分離。用環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲醇(20 1 0 —0 0 1)為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，用TLC法檢測(cè)洗脫液。每份洗脫液250ml，減壓回收，共收集405瓶。合并第 335-345份的洗脫液，吹干后90%的乙醇溶解，蒸餾水稀釋過(guò)濾后用大孔樹(shù)脂柱分離。分別用質(zhì)量濃度為75 %、85 %和100 %的乙醇對(duì)分離液進(jìn)行梯度洗脫。收集75 %的洗脫液，減壓回收再進(jìn)行C-18層析柱分離，甲醇水(3 10— 1 0)，每次收集洗脫液15ml于小瓶中，甲醇重結(jié)晶，得無(wú)色細(xì)晶15mg。實(shí)施例2提取首先取新鮮短果茴芹，陰干，粉碎成粗粉7. Okgo然后加入粗粉重量10倍質(zhì)量濃度為90%的乙醇回流提取3次，每次煮沸2h。過(guò)濾，合并提取液，備用。將提取液減壓回收乙醇，吹干至無(wú)醇味，得浸膏。萃取加入上述浸膏重量5倍的蒸餾水形成混懸液。石油醚萃取至無(wú)色后，用乙酸乙酯萃取?；厥找宜嵋阴ト芤旱枚坦钋垡宜嵋阴犹崛∥?，減壓回收晾干，得乙酸乙酯層浸膏140g。分離乙酸乙酯層浸膏與100-200目硅膠按質(zhì)量比1 1拌樣，裝入10倍質(zhì)量的硅膠柱中進(jìn)行分離。用環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲醇(20 1 0 —0 0 1)為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，用TLC法檢測(cè)洗脫液。每份洗脫液250ml，減壓回收，共收集405瓶。合并第 335-345份的洗脫液，吹干后90%的乙醇溶解，蒸餾水稀釋過(guò)濾后用大孔樹(shù)脂柱分離。分別用質(zhì)量濃度為75%、85%和100%的乙醇對(duì)分離液進(jìn)行梯度洗脫。收集75%的洗脫液，減壓回收再進(jìn)行C-18層析柱分離，甲醇水(3 10 —1 0)，每次收集洗脫液15ml于小瓶中，甲醇重結(jié)晶，得無(wú)色細(xì)晶孕烯醇酮的鑒定無(wú)色細(xì)晶，不溶于水，溶于乙醇等有機(jī)溶劑。1H 匪R(100MHz，DMS0) δ 0. 62 (3H，s，H-19)，1. 08 (3H，s，H-18)，2. 11 (3H，s，H-21)， 3. 51 (1H, m, Η-3)，5· 34 (1Η, t, J = 2. 3Ηζ, Η_6)；13C NMR (400ΜΗζ，DMS0) δ 12. 9 (C—18)，19. 1 (C—19)，20. 6 (C_l 1)，22. 2 (C—16)， 24. 0 (C-15) ,31. 2(C-2) ,31. 4 (C_7) ,31. 4(C_8, C-21) ,31. 4(C_21) , 36. 9 (C-IO)， 37. 9 (C-I)，38. 9 (C-12)，42. 2 (C_4)，43. 2 (C-13)，49. 5 (C_9)，56. 0 (C-14)，62. 6 (C-17)， 70. 0 (C-3)，120. 2 (C-6)，141. 2 (C_5)，208. 5 (C-20)。
權(quán)利要求
1.本發(fā)明涉及一種從短果茴芹中分離純化孕烯醇酮的方法，其特征在于所述方法包括下述步驟a)溶劑萃取將提取液減壓回收乙醇，吹干至無(wú)醇味，得浸膏，加入浸膏重量5倍的蒸餾水形成混懸液，石油醚萃取至無(wú)色后，用乙酸乙酯萃?。籦)硅膠柱分離乙酸乙酯層拌樣，裝入硅膠柱中進(jìn)行分離，用環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲醇(20 1 0 —0 0 1)為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，用TLC法檢測(cè)洗脫液，每份洗脫液 250ml，減壓回收，共收集405瓶；c)大孔樹(shù)脂柱分離合并第335-345份的洗脫液，吹干后90%的乙醇溶解，蒸餾水稀釋樣品，過(guò)濾后用大孔樹(shù)脂柱分離，分別用不同濃度的乙醇對(duì)樣品進(jìn)行梯度洗脫；d)十八烷基鍵合相硅膠C-18柱分離收集洗脫液，減壓回收再進(jìn)行十八烷基鍵合相硅膠C-18層析柱分離，甲醇水(3 10 — 1 0)，每次收集洗脫液15ml于小瓶中，甲醇重結(jié)晶，得無(wú)色細(xì)晶。
2.根據(jù)權(quán)利要求Ia所述的溶劑萃取，其特征在于和蒸餾水形成混懸液后，石油醚萃取需至無(wú)色。
3.根據(jù)權(quán)利要求Ib所述的硅膠柱分離，乙酸乙酯層浸膏與100-200目硅膠按質(zhì)量比是 1 1拌樣，裝入10倍浸膏質(zhì)量的硅膠柱中進(jìn)行分離。
4.根據(jù)權(quán)利要求Ic所述的大孔樹(shù)脂分離，洗脫液乙醇的質(zhì)量濃度是75%、85%和 100%。
5.根據(jù)權(quán)利要求Id所述的十八烷基鍵合相硅膠C-18柱分離，收集的洗脫液是75%的乙醇洗脫液。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種短果茴芹中有效成分孕烯醇酮的提取方法。該方法工藝簡(jiǎn)單，D101大孔樹(shù)脂和十八烷基鍵合相硅膠C-18填料可以反復(fù)再生使用，成本低，耗時(shí)短。所述方法包括乙醇提取，溶劑萃取，硅膠柱分離，大孔樹(shù)脂柱分離和十八烷基鍵合相硅膠C-18柱分離。探究短果茴芹中有效成分的提取工藝，是開(kāi)發(fā)短果茴芹成為降血壓功能性食品的關(guān)鍵。
文檔編號(hào)C07J7/00GK102382162SQ20111041208
公開(kāi)日2012年3月21日 申請(qǐng)日期2011年12月13日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月13日
發(fā)明者關(guān)爽, 盧靜, 王大成, 許琳莉, 鄧婕, 鄧旭明, 錢(qián)文輝, 黃國(guó)任 申請(qǐng)人:吉林大學(xué)