專利名稱：N-[(2′r)-2′-脫氧-2′-氟-2′-甲基-p-苯基-5′-尿苷?；鵠-l-丙氨酸1-甲基乙基酯 ...的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本文公開核苷氨基磷酸酯和它們作為用于治療病毒性疾病的藥劑的用途。這些化合物是RNA-依賴性RNA病毒復(fù)制的抑制劑，并且可用作HCV NS5B聚合酶的抑制劑、HCV復(fù)制的抑制劑、以及用于在哺乳動物中治療丙型肝炎感染。
背景技術(shù)：
丙型肝炎病毒(HCV)感染是導(dǎo)致慢性肝臟疾病的主要健康問題，例如肝硬化和肝細(xì)胞癌，在基本上大量感染的個體中，估計為2-15%的世界人口。根據(jù)美國疾病控制中心的數(shù)據(jù)，單美國就估計有450萬的感染人口。根據(jù)世界衛(wèi)生組織的數(shù)據(jù)，全世界有超過2億的感染人口，并且每年有至少300-400萬人口被感染。一旦被感染，約20%的人清除病毒，但其余的人可能在其余下的生命中將攜帶HCV。10-20%的慢性感染個體最終發(fā)展為肝破壞性肝硬化或癌癥。病毒疾病是通過被污染的腸外血液和血液制品，受污染的針頭經(jīng)胃腸外傳播，或通過性行為和從被感染的母親或攜帶者母親垂直傳播至其后代。HCV感染的現(xiàn)有治療局限于單用重組干擾素α或聯(lián)合使用核苷類似物利巴韋林的免疫治療，該治療取得有限的臨床益處。而且，尚未建立用于HCV的疫苗。因此，急切需要一種可有效對抗慢性HCV感染的改善的治療藥劑。HCV病毒體是具有約9600個堿基的單寡核糖核苷酸基因序列的有包膜正鏈RNA病毒，編碼約3，010個氨基酸的多聚蛋白。HCV基因的蛋白產(chǎn)物包括結(jié)構(gòu)蛋白C、El和Ε2，以及非結(jié)構(gòu)蛋白NS2、NS3、NS4A與NS4B、NS5A和NS5B。據(jù)信非結(jié)構(gòu)(NS)蛋白提供病毒復(fù)制的催化作用。NS3蛋白酶釋放NS5B，多聚蛋白鏈的RNA依賴性RNA聚合酶。HCV NS5B聚合酶是從單鏈病毒RNA合成雙鏈RNA所必需的，單鏈病毒RNA在HCV的復(fù)制循環(huán)中作為模板。 因此，認(rèn)為NS5B聚合酶是HCV復(fù)制復(fù)合體中的必要組分(K. Ishi，等，！feptology (肝臟病學(xué))，1999,29 :1227-1235 ；V. Lohmann，等· ,Virology (病毒學(xué))，1998，249 :108-118)。HCV NS5B聚合酶的抑制防止形成雙鏈HCV RNA,因而構(gòu)成開發(fā)HCV特異性抗病毒療法的具有吸引力的方法。HCV屬于具有許多共性的很大的病毒科。
黃病毒科病毒的黃病毒科包括至少三種不同的屬瘟病毒屬，它導(dǎo)致牛和豬的疾?。稽S病毒屬，它是導(dǎo)致例如登革熱和黃熱病的疾病的主要原因；和丙型肝炎病毒屬 (h印aciviruses)，其唯一成員是HCV?；谘鍖W(xué)相關(guān)性分組，黃病毒屬包括多于68個成員(Calisher等.，J. Gen. Virol (遺傳病毒學(xué)雜志)，1993，70，37-43)。臨床癥狀各不相同， 包括發(fā)熱、腦炎和出血熱(Fields Virology (費(fèi)氏病毒學(xué))，編輯=Fields, B. N.，Knipe, D. M.,禾口 Howley, P. Μ. , Lippincott-Raven Publishers, Philadelphia, PA,1996, Chapter 31,931-959)。全球關(guān)注的與人類疾病相關(guān)的黃病毒屬包括登革出血熱病毒(DHF)、黃熱病病毒、休克綜合癥和日本腦炎病毒(Halstead, S. B.，Rev. Infect. Dis. , 1984,6, 251-264 ； Halstead，S. B. ,Science (科學(xué))，239 :476-481，1988 ；Monath, T. P.，New Eng. J. Me 工(新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志)1988，319，641-643)。瘟病毒屬包括牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)、豬瘟病毒(CSFV，也稱為豬霍亂病毒)和綿羊瘟病毒(BDV) (Moennig，V.等· Adv. Vir. Res. 1992，41，53-98)。家畜(牛、豬和羊)的瘟病毒感染造成世界范圍內(nèi)巨大的經(jīng)濟(jì)損失。BVDV導(dǎo)致牛的粘膜病且對于家畜產(chǎn)業(yè)具有顯著的經(jīng)濟(jì)重要性(Meyers, G.和 Thiel，H.J.，Advances in Virus Research (病毒研究進(jìn)展)，1996，47，53-118 ；Moennig V.，等，Adv. Vir. Res. 1992，41，53-98)。尚未像動物瘟病毒那樣全面了解人瘟病毒。然而，血清學(xué)研究顯示人類中有相當(dāng)多的瘟病毒接觸。瘟病毒和丙型肝炎病毒是黃病毒科內(nèi)密切相關(guān)的病毒屬。該科內(nèi)其它密切相關(guān)的病毒包括GB病毒A、GB病毒A-類似物、GB病毒-B和GB病毒_C(也稱為G型肝炎病毒， HGV)。丙型肝炎病毒屬(丙型肝炎病毒；HCV)由許多可感染人體的密切相關(guān)但不同基因型的病毒組成。至少有6種HCV基因型和大于50種亞型。由于瘟病毒和丙型肝炎病毒的相似性，加上丙型肝炎病毒在細(xì)胞培養(yǎng)中很難有效生長，所以，在HCV病毒研究中常常使用牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)作為代用品。瘟病毒和丙型肝炎病毒的遺傳組構(gòu)非常相似。這些正鏈RNA病毒具有單個大的開放式讀碼框(ORF)，編碼所有病毒復(fù)制所需的病毒蛋白。這些蛋白表達(dá)為多聚蛋白，多聚蛋白被細(xì)胞和病毒編碼的蛋白酶同時翻譯加工或翻譯后加工，產(chǎn)生成熟的病毒蛋白。負(fù)責(zé)病毒基因組RNA復(fù)制的病毒蛋白位于大致羧基末端之內(nèi)。ORF的三分之二稱為非結(jié)構(gòu)(NS)蛋白。瘟病毒和丙型肝炎病毒的ORF非結(jié)構(gòu)蛋白部分的基因組構(gòu)和多聚蛋白加工非常相似。 對于瘟病毒和丙型肝炎病毒，從非結(jié)構(gòu)蛋白編碼區(qū)域的氨基末端到ORF的羧基末端的連續(xù)順序，成熟非結(jié)構(gòu)(NS)蛋白由p7，NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A和NS5B組成。瘟病毒和丙型肝炎病毒的NS蛋白共有具有特殊蛋白質(zhì)功能特征的序列結(jié)構(gòu)域。 例如，兩種病毒屬中病毒的NS3蛋白都含有具有絲氨酸蛋白酶和解旋酶特征的氨基酸序列基序(Gorbalenya 等· ,Nature (自然)，1988，333，22 ；Bazan 和 Fletterick Virology (病毒學(xué))，1989，171,637-639 ；Gorbalenya 等·，Nucleic Acid Res.(核酸研究)，1989，17， 3889-3897)。類似地，瘟病毒和丙型肝炎病毒的NS5B蛋白都具有以針對RNA的RNA聚合酶為特征的基序(Koonin, Ε. V.和 Dolja, V. V.，Crir. Rev. Biochem. Molec. Biol. 1993，28， 375-430)。瘟病毒和丙型肝炎病毒的NS蛋白在病毒生命周期中的實際作用和功能是直接類似的。在兩種情況下，NS3絲氨酸蛋白酶負(fù)責(zé)ORF中其位置下游的多聚蛋白前體的所有蛋白水解加工(Wiskerchen 和 Collett, Virology (病毒學(xué))，1991，184，341-350 ； Bartenschlager ^ . , J. Virol (^ ^ ; ). 1993,67,3835-3844 ；Eckart 等.Biochem. Biophys. Res. Comm.生物化學(xué)和生物物理學(xué)研究評論1993，192，399-406 ；Grakoui等.， J. Virol (病毒學(xué)雜志)· 1993，67，2832-2843 ；Grakoui 等.，Proc. Natl. Acad Sci. USA (美國國家科學(xué)院院刊)1993，90，10583-10587 ；Hijikata 等·，J. Virol.(病毒學(xué)雜志)1993， 67，4665-4675 ；Tome 等·，J. Virol.(病毒學(xué)雜志)，1993，67，4017-4026)。在兩種情況下， NS4A蛋白起NS3絲氨酸蛋白酶的輔因子的作用(Bartenschlager等.，J. Virol.(病毒學(xué)雜志)1994，68，5045-5055 ；Failla 等·，J. Virol.(病毒學(xué)雜志)1994，68，3753-3760 ；Xu 等.，J.Virol.(病毒學(xué)雜志)，1997,71 :5312-5322)。兩種病毒的NS3蛋白還都作為解旋酶起作用(Kim等.，Biochem. Biophys. Res. Comm.(生物化學(xué)和生物物理學(xué)研究評論)， 1995，215，160-166 Jin 禾口 Peterson,Arch. Biochem. Biophys.，1995，323，47—53 ；Warrener 和Collett，J.Virol.(病毒學(xué)雜志)1995，69，1720-1726)。最后，瘟病毒和丙型肝炎病毒的NS5B蛋白都具有預(yù)見的針對RNA的RNA聚合酶的活性(Behrens等.，ΕΜΒ0，1996，15， 12-22 ；Lechmann 等·，J. Virol.(病毒學(xué)雜志)，1997，71，8416-8428 ；Yuan 等.，Biochem. Biophys. Res. Comm (生物化學(xué)和生物物理學(xué)研究評論).1997，232，231-235 ；Hagedorn, PCT W097/12033 ；Zhong 等，J. Virol.(病毒學(xué)雜志)，1998，72，9365-9369)。目前，對于感染丙型肝炎病毒的個體具有有限的治療選擇。目前批準(zhǔn)的治療選擇是單用重組干擾素α或聯(lián)合使用核苷類似物利巴韋林的免疫治療。該療法的局限在于其臨床有效性，并且僅50%的治療的患者對于療法有反應(yīng)。因此，非常需要更有效和新穎的療法來解決HCV感染所面臨的未滿足的醫(yī)療需要?，F(xiàn)在已經(jīng)鑒定了用于直接作用抗病毒劑的藥物開發(fā)的許多潛在的分子靶作為抗-HCV療法，包括但不限于NS2-NS3自身蛋白酶、Ν3蛋白酶、Ν3解旋酶和NS5B聚合酶。 RNA-依賴性RNA聚合酶是單鏈正義RNA基因組的復(fù)制所絕對必需的，并且該酶已經(jīng)在藥物化學(xué)師中引起極大的興趣。作為HCV感染的潛在療法的HCV NS5B抑制劑已經(jīng)在下列文獻(xiàn)中綜述Tan， S.-L，等·，Nature Rev. Drug Discov.(藥物開發(fā)自然評論)，2002，1，867-881 ;Walker， Μ. P.等·，Exp. Opin. Investigational Drugs (研究藥物實驗觀點(diǎn))，2003，12， 1269-1280 ；Ni, Z-J.,等·，Current Opinion in Drug Discovery and Development (現(xiàn)代藥物發(fā)現(xiàn)和開發(fā)觀點(diǎn))，2004，7，446-459 ;Beaulieu，P. L，等.，Current Opinion in Investigational Drugs (現(xiàn)代研究藥物觀點(diǎn))，2004，5，838-850 ；ffu, J.，等·，Current Drug Targets-Infectious Disorders (現(xiàn)代藥物靴-感染性病癥)，2003，3，207-219 ； Griffiths. C.，等，Annual Reports inMedicinal Chemistry (藥物化學(xué)年度報告)，2004， 39,223-237 ；Carrol, S.，等·，Infectious Disorders-Drug ^Targets (感染性病癥藥物靶)，2006，6，17-29。出現(xiàn)抗性HCV菌株的可能性和需要鑒定具有廣泛基因型覆蓋度的藥劑支持繼續(xù)努力來鑒定新穎和更有效的核苷作為HCV NS5B抑制劑的需要。NS5B聚合酶的核苷抑制劑可起到導(dǎo)致鏈終止的非天然底物的作用或和核苷酸競爭結(jié)合聚合酶的競爭性抑制劑的作用。為了起到鏈終止劑的作用，核苷類似物必須被細(xì)胞所攝取并且體內(nèi)轉(zhuǎn)化為三磷酸酯以競爭聚合酶核苷酸的結(jié)合位點(diǎn)。該轉(zhuǎn)化至三磷酸酯通常受到細(xì)胞激酶的介導(dǎo)，所述細(xì)胞激酶賦予潛在核苷聚合酶抑制劑另外的結(jié)構(gòu)要求。不幸的是，這限制了作為HCV復(fù)制的抑制劑的核苷直接演變?yōu)槟軌蛟涣柞；幕诩?xì)胞的測定。在一些情況下，核苷的生物活性受到其較差的底物特性的妨礙，所述特性用于一種或多種需要將其轉(zhuǎn)化為活性三磷酸酯形式的激酶。通過核苷激酶形成單磷酸酯通常被認(rèn)為是三個磷?；录南匏俨襟E。為了避免下列需要，已經(jīng)報道制備穩(wěn)定的磷酸酯前藥 在核苷的代謝中初始磷?；襟E至活性三磷酸酯類似物。核苷氨基磷酸酯前藥已經(jīng)顯示為活性三磷酸核苷的前體，并且當(dāng)施用至病毒感染的全細(xì)胞時抑制病毒的復(fù)制(McGuigan， C.，等·，J. Med. Chem.(醫(yī)學(xué)和化學(xué)雜志)，1996，39，1748-1753 ；Valette, G.，等·，J. Med. Chem.(醫(yī)學(xué)和化學(xué)雜志)，1996，39，1981-1990 ；Balzarini，J.，等·，Proc. National Acad Sci USA(美國國家科學(xué)院院刊)，1996，93，7295-7299 ；Siddiqui，A. Q.，等.，J.Med. Chem.(醫(yī)學(xué)和化學(xué)雜志)，1999，42，4122-4128 ；Eisenberg, E. J.，等·，Nucleosides, Nucleotides and Nucleic Acids (核苷、核苷酸和核酸)，2001，20，1091-1098 ;Lee，W. Α.， 等·，Antimicrobial Agents and Chemotherapy (抗微生物劑和化學(xué)治療)，2005，49， 1898) ；US2006/0241064 和 WO 2007/095269 此外限制核苷用作可行病毒治療劑的效用是它們有時較差的物理化學(xué)和藥物動力學(xué)性質(zhì)。這些較差的性質(zhì)可限制藥劑的腸吸收并且限制攝取到靶組織或細(xì)胞中。為了改善它們的性質(zhì)，已經(jīng)使用核苷的前藥。已經(jīng)證實核苷氨基磷酸酯的制備改善了核苷的全身吸收，而且這些"前核苷酸(pronucleotide)“的氨基磷酸酯部分被中性親脂性基團(tuán)所掩蔽以獲得合適的分配系數(shù)，從而優(yōu)化至細(xì)胞中的攝取和轉(zhuǎn)運(yùn)，進(jìn)而相對于僅施用母體核苷， 顯著地提高核苷單磷酸酯類似物的細(xì)胞內(nèi)濃度。磷酸酯部分的酶介導(dǎo)的水解產(chǎn)生核苷單磷酸酯，其中限速性初始磷酰化是不需要的。為此，美國專利申請12/053,015，對應(yīng)于WO 2008/121634和US 2010/0016251，公開了多種核苷氨基磷酸酯前藥，其中許多在丙型肝炎檢測中顯示出活性。US2010/0016251中披露的一些化合物被測試為FDA批準(zhǔn)的潛在的臨床候選物。發(fā)明概述本文中公開由式4表示的化合物及其由式和表示的相應(yīng)基于磷的非對映體。
權(quán)利要求
1.一種制備由式4表示的化合物的方法
2.權(quán)利要求1所述的方法，其中對于A，X是氯化物并且η是1。
3.權(quán)利要求2所述的方法，其中A是基本上無水的。
4.權(quán)利要求3所述的方法，其中所述堿是N-甲基咪唑。
5.權(quán)利要求4所述的方法，其中A-比-B-比-3的摩爾比為約1.6-比-1. 3-比-1。
6.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述保護(hù)化合物是叔丁基-二甲基-甲硅烷基-氯化物。
7.—種通過權(quán)利要求1-6中任一項所述的方法獲得的組合物，其中所述組合物包含為所述組合物的至少約95重量％的量的4。
8.權(quán)利要求7所述的組合物，其中所述組合物包含為所述組合物的至少約97重量％的量的4。
9.權(quán)利要求7所述的組合物，其中所述組合物包含為所述組合物的至少約99重量％的量的4。
10.權(quán)利要求7所述的組合物，其中所述組合物包含為所述組合物的至少約99.9重量％的量的4。
11.一種測定通過權(quán)利要求1-6中任一項所述的方法制備的化合物4或者權(quán)利要求 7-10中任一項所述的組合物的化學(xué)純度的方法，該方法包括通過HPLC分析所述化合物或者包含所述化合物的組合物。
12.一種測定通過權(quán)利要求1-6中任一項所述的方法制備的化合物4或者權(quán)利要求 7-10中任一項所述的組合物的結(jié)晶度的方法，該方法包括通過XRPD、X-射線結(jié)晶學(xué)測量法或光學(xué)顯微鏡檢查法分析所述化合物或者包含所述化合物的組合物。
13.一種由式表示的化合物
14.權(quán)利要求13所述的化合物，其中所述化合物是溶劑化物、水合物或無水的。
15.權(quán)利要求14所述的化合物，其中所述化合物是水合物并且所述水合物包含約0.1 至約5mol的H2O。
16.權(quán)利要求13所述的化合物，其中所述化合物是無定形的、晶體樣、結(jié)晶的或其組合。
17.權(quán)利要求16所述的化合物，其中所述化合物是結(jié)晶的。
18.一種用于治療和/或預(yù)防丙型肝炎病毒、西尼羅河病毒、黃熱病病毒、登革熱病毒、 鼻病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒、甲型肝炎病毒、牛病毒性腹瀉病毒或日本腦炎病毒的組合物，其包含藥學(xué)上可接受的介質(zhì)和權(quán)利要求13-17中任一項所述的化合物。
19.一種治療感染丙型肝炎病毒、西尼羅河病毒、黃熱病病毒、登革熱病毒、鼻病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒、甲型肝炎病毒、牛病毒性腹瀉病毒或日本腦炎病毒的宿主的方法，其包括施用有效量的權(quán)利要求13-17中任一項所述的化合物。
20.一種治療感染丙型肝炎病毒、西尼羅河病毒、黃熱病病毒、登革熱病毒、鼻病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒、甲型肝炎病毒、牛病毒性腹瀉病毒或日本腦炎病毒的宿主的方法，其包括聯(lián)合至少一種抗病毒劑施用有效量的權(quán)利要求13-17中任一項所述的化合物。
21.權(quán)利要求13-17中任一項所述的化合物、由式I表示的化合物在制備治療源自丙型肝炎病毒、西尼羅河病毒、黃熱病病毒、登革熱病毒、鼻病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒、甲型肝炎病毒、牛病毒性腹瀉病毒或日本腦炎病毒感染的任何病癥的藥物中的用途。
22.—種制備權(quán)利要求13所述的化合物的方法，該方法包括a)使丙氨酸異丙酯，A，二-X'-苯基磷酸酯，B，2'-脫氧-2'-氟-2'-C-甲基尿苷，3和堿反應(yīng)以獲得包含RP-4的第一混合物；
23.權(quán)利要求22所述的方法，其中對于A，X是氯化物并且η是1。
24.權(quán)利要求23所述的方法，其中A是基本上無水的。
25.權(quán)利要求M所述的方法，其中所述堿是N-甲基咪唑。
26.權(quán)利要求25所述的方法，其中A-比-B-比-3的摩爾比為約1.6-比-1. 3-比-1。
27.權(quán)利要求22所述的方法，其中所述保護(hù)化合物是叔丁基-二甲基-甲硅烷基-氯化物。
28.一種制備權(quán)利要求17所述的化合物的方法，該方法包括a)使丙氨酸異丙酯，A，二-X'-苯基磷酸酯，B，2'-脫氧-2'-氟-2'-C-甲基尿苷，3和堿反應(yīng)以獲得包含RP-4的第一混合物；
29.一種通過權(quán)利要求22-28中任一項所述的方法獲得的組合物，其中所述組合物包含為所述組合物的至少約95重量％的量的&-4。
30.權(quán)利要求四所述的組合物，其中所述組合物包含為所述組合物的至少約97重量％ 的量的&_4。
31.權(quán)利要求四所述的組合物，其中所述組合物包含為所述組合物的至少約99重量％ 的量的&_4。
32.權(quán)利要求四所述的組合物，其中所述組合物包含為所述組合物的至少約99.9重量％的量的&_4。
33.一種測定權(quán)利要求13-17中任一項所述的化合物或者權(quán)利要求18和四-32中任一項所述的組合物的化學(xué)純度的方法，該方法包括通過HPLC分析所述化合物或者包含所述化合物的組合物。
34.一種測定權(quán)利要求13-17中任一項所述的化合物或者權(quán)利要求18和四-32中任一項所述的組合物的結(jié)晶度的方法，該方法包括通過XRPD、X-射線結(jié)晶學(xué)測量法或光學(xué)顯微鏡檢查法分析所述化合物或者包含所述化合物的組合物。
35.一種由式表示的化合物O
36.權(quán)利要求35所述的化合物，其中所述化合物是溶劑化物、水合物或無水的。
37.權(quán)利要求36所述的化合物，其中所述化合物是水合物并且所述水合物包含約0.1 至約5mol的H2O。
38.權(quán)利要求35所述的化合物，其中所述化合物是無定形的、晶體樣、結(jié)晶的或其組合。
39.權(quán)利要求38所述的化合物，其中所述化合物是結(jié)晶的。
40.一種用于治療和/或預(yù)防丙型肝炎病毒、西尼羅河病毒、黃熱病病毒、登革熱病毒、 鼻病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒、甲型肝炎病毒、牛病毒性腹瀉病毒或日本腦炎病毒的組合物，其包含藥學(xué)上可接受的介質(zhì)和權(quán)利要求35-39中任一項所述的化合物。
41.一種治療感染丙型肝炎病毒、西尼羅河病毒、黃熱病病毒、登革熱病毒、鼻病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒、甲型肝炎病毒、牛病毒性腹瀉病毒或日本腦炎病毒的宿主的方法，其包括施用有效量的權(quán)利要求35-39中任一項所述的化合物。
42.一種治療感染丙型肝炎病毒、西尼羅河病毒、黃熱病病毒、登革熱病毒、鼻病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒、甲型肝炎病毒、牛病毒性腹瀉病毒或日本腦炎病毒的宿主的方法，其包括聯(lián)合至少一種抗病毒劑施用有效量的權(quán)利要求35-39中任一項所述的化合物。
43.權(quán)利要求35-39中任一項所述的化合物、由式I表示的化合物在制備治療源自丙型肝炎病毒、西尼羅河病毒、黃熱病病毒、登革熱病毒、鼻病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒、甲型肝炎病毒、牛病毒性腹瀉病毒或日本腦炎病毒感染的任何病癥的藥物中的用途。
44.一種制備權(quán)利要求35所述的化合物的方法，該方法包括a)使丙氨酸異丙酯，A，二-X'-苯基磷酸酯，B，2'-脫氧-2'-氟-2'-C-甲基尿苷，3和堿反應(yīng)以獲得包含SP-4的第一混合物；
45.權(quán)利要求44所述的方法，其中對于A，X是氯化物并且η是1。
46.權(quán)利要求45所述的方法，其中A是基本上無水的。
47.權(quán)利要求46所述的方法，其中所述堿是N-甲基咪唑。
48.權(quán)利要求47所述的方法，其中A-比-B-比-3的摩爾比為約1.6-比-1. 3-比-1。
49.權(quán)利要求44所述的方法，其中所述保護(hù)化合物是叔丁基-二甲基-甲硅烷基-氯化物。
50.一種制備權(quán)利要求39所述的化合物的方法，該方法包括a)使丙氨酸異丙酯，A，二-X'-苯基磷酸酯，B，2'-脫氧-2'-氟-2'-C-甲基尿苷，3和堿反應(yīng)以獲得包含SP-4的第一混合物；
51.一種制備權(quán)利要求39所述的化合物的方法，該方法包括a)使丙氨酸異丙酯，A，二-X'-苯基磷酸酯，B，2'-脫氧-2'-氟-2'-C-甲基尿苷，3和堿反應(yīng)以獲得包含SP-4的第一混合物；
52.一種制備權(quán)利要求39所述的化合物的方法，該方法包括a)使丙氨酸異丙酯，A，二-X'-苯基磷酸酯，B，2'-脫氧-2'-氟-2'-C-甲基尿苷，3和堿反應(yīng)以獲得包含SP-4的第一混合物；
53.一種通過權(quán)利要求44-52中任一項所述的方法獲得的組合物，其中所述組合物包含為所述組合物的至少約95重量％的量的$-4。
54.權(quán)利要求53所述的組合物，其中所述組合物包含為所述組合物的至少約97重量％ 的量的$_4。
55.權(quán)利要求53所述的組合物，其中所述組合物包含為所述組合物的至少約99重量％ 的量的$_4。
56.權(quán)利要求53所述的組合物，其中所述組合物包含為所述組合物的至少約99.9重量％的量的$-4。
57.一種測定權(quán)利要求35-39中任一項所述的化合物或者權(quán)利要求40和53-56中任一項所述的組合物的化學(xué)純度的方法，該方法包括通過HPLC分析所述化合物或者包含所述化合物的組合物。
58.一種測定權(quán)利要求35-39中任一項所述的化合物或者權(quán)利要求40和53-56中任一項所述的組合物的結(jié)晶度的方法，該方法包括通過XRPD、X-射線結(jié)晶學(xué)測量法或光學(xué)顯微鏡檢查法分析所述化合物或者包含所述化合物的組合物。
59.一種制備權(quán)利要求13所述的化合物的方法，該方法包括a)使異丙基-丙氨?；?氨基磷酸酯，C'與2'-脫氧-2'-氟-2' -C-甲基尿苷， 3和堿性試劑反應(yīng)以獲得保護(hù)或未保護(hù)的
60.權(quán)利要求59所述的方法，該方法還包括任選地使保護(hù)的RP-4脫保護(hù)，并且使RP-4 進(jìn)行色譜分析、萃取或結(jié)晶以獲得純化的&_4。
61.權(quán)利要求59所述的方法，該方法還包括1)使(LG')P(0) (LG)2進(jìn)行下列反應(yīng)，其中獨(dú)立于LG'，LG是離去基團(tuán)(i)與丙氨酸異丙酯和第一堿反應(yīng)，以獲得(LG')P(0) (LG) (Ala-ift·)，接著使(LG') P(O) (LG) (Ala-iPr)與酚和第二堿反應(yīng)以獲得包含C和C'的混合物，(ii)與酚和第一堿反應(yīng)，以獲得(LG')P(O)(LG)(OPh),接著使(LG' )P(0) (LG) (OPh) 與丙氨酸異丙酯和第二堿反應(yīng)以獲得包含C和C'的混合物，或(iii)組合丙氨酸異丙酯、酚和至少一種堿以獲得包含C和C'的混合物；或者2)使(PhO)P(O)(LG)2進(jìn)行下列反應(yīng)，其中獨(dú)立于LG，LG'是離去基團(tuán)⑴與丙氨酸異丙酯和第一堿反應(yīng)，以獲得(WiO)P(O) (LG) (Ala-ift·)，接著使(PhO)P(O) (LG) (Ala-iPr)與離去基團(tuán)前體和第二堿反應(yīng)以獲得包含C和C'的混合物，
62.一種制備權(quán)利要求35所述的化合物的方法，該方法包括a)使異丙基-丙氨?；?氨基磷酸酯，C與2'-脫氧-2'-氟-2' -C-甲基尿苷，3 和堿性試劑反應(yīng)以獲得保護(hù)或未保護(hù)的；
63.權(quán)利要求62所述的方法，該方法還包括任選地使保護(hù)的RP-4脫保護(hù)，并且使獲得的進(jìn)行色譜分析、萃取或結(jié)晶以獲得純化的$-4。
64.權(quán)利要求62所述的方法，該方法還包括1)使(LG')P(0) (LG)2進(jìn)行下列反應(yīng)，其中獨(dú)立于LG'，LG是離去基團(tuán)(i)與丙氨酸異丙酯和第一堿反應(yīng)，以獲得(LG')P(0) (LG) (Ala-ift·)，接著使(LG') P(O) (LG) (Ala-iPr)與酚和第二堿反應(yīng)以獲得包含C和C'的混合物，(ii)與酚和第一堿反應(yīng)，以獲得(LG')P(O)(LG)(OPh),接著使(LG' )P(0) (LG) (OPh) 與丙氨酸異丙酯和第二堿反應(yīng)以獲得包含C和C'的混合物，或(iii)組合丙氨酸異丙酯、酚和至少一種堿以獲得包含C和C'的混合物；或者2)使(PhO)P(O)(LG)2進(jìn)行下列反應(yīng)，其中獨(dú)立于LG，LG'是離去基團(tuán)⑴與丙氨酸異丙酯和第一堿反應(yīng)，以獲得(WiO)P(O) (LG) (Ala-ift·)，接著使((W1O)P(O) (LG) (Ala-iPr)與離去基團(tuán)前體和第二堿反應(yīng)以獲得包含C和C'的混合物，
65.一種制備權(quán)利要求35所述的化合物的方法，該方法包括a)使異丙基-丙氨?；?氨基磷酸酯與3' -0-保護(hù)或未保護(hù)的3和堿性試劑反應(yīng)以獲得包含保護(hù)或未保護(hù)的的組合物Y
66.權(quán)利要求65所述的方法，其中所述堿性試劑是叔丁基氯化鎂并且C C'的比率大于或等于約1 1。
67.權(quán)利要求65所述的方法，其中所述堿性試劑是叔丁基氯化鎂并且C C'的比率大于約1 1。
68.權(quán)利要求65所述的方法，其中所述堿性試劑是叔丁基氯化鎂并且C C'的比率為至少約 1.5 1，約 2. 3 1，約 4 1，約 5.7 1，約 9 1，約 19 1，約 32. 3 1，約 49 1 或約 99 1。
69.權(quán)利要求65所述的方法，其中所述LG'是對硝基苯氧基，所述堿性試劑是叔丁基氯化鎂，并且C C'的比率為至少約1.5 1，約2. 3 1，約4 1，約5. 7 1，約9 1， 約 19 1，約 32.3 1，約 49 1 或約 99 1。
70.一種選自3a，3b，3c和3d的化合物
71.一種由下列結(jié)構(gòu)表示的化合物
72.權(quán)利要求71所述的化合物，其中LG'是甲苯磺酸酯基、樟腦磺酸酯基、芳氧基、或被至少一個吸電子基團(tuán)取代的芳氧基。
73.權(quán)利要求71所述的化合物，其中LG'是對硝基苯氧基、對氯苯氧基、鄰氯苯氧基、 2,4- 二硝基苯氧基或五氟苯氧基。
74.權(quán)利要求71所述的化合物，其中LG'是對硝基苯氧基。
75.權(quán)利要求74所述的化合物，其為結(jié)晶的形式。
76.一種制備權(quán)利要求71所述的C或C'的方法，該方法包括1)使(LG')P(0) (LG)2進(jìn)行下列反應(yīng)(i)與丙氨酸異丙酯和第一堿反應(yīng)，以獲得(LG')P(0) (LG) (Ala-ift·)，接著使(LG') P(O) (LG) (Ala-iPr)與酚和第二堿反應(yīng)以獲得包含C和C'的混合物，(ii)與酚和第一堿反應(yīng)，以獲得(LG')P(O)(LG)(OPh),接著使(LG' )P(0) (LG) (OPh) 與丙氨酸異丙酯和第二堿反應(yīng)以獲得包含C和C'的混合物，或(iii)組合丙氨酸異丙酯、酚和至少一種堿以獲得包含C和C'的混合物；或者2)使(PhO)P(O)(LG)2進(jìn)行下列反應(yīng)，其中獨(dú)立于LG，LG'是離去基團(tuán)⑴與丙氨酸異丙酯和第一堿反應(yīng)，以獲得(WiO)P(O) (LG) (Ala-ift·)，接著使(PhO)P(O) (LG) (Ala-iPr)與離去基團(tuán)前體和第二堿反應(yīng)以獲得包含C和C'的混合物，
77.權(quán)利要求76所述的方法，該方法包括使所述混合物進(jìn)行結(jié)晶，該方法還包括3)將所述混合物溶解或混懸到溶劑中，以及4)添加C或C'的晶種。
78.權(quán)利要求13或35所述的化合物，其中所述化合物是同位素標(biāo)記的。
全文摘要
本文公開式4的核苷氨基磷酸酯以及它們作為用于治療病毒性疾病的藥劑的用途。這些化合物是RNA-依賴性5RNA病毒復(fù)制的抑制劑，并且可用作HCV NS5B聚合酶的抑制劑、HCV復(fù)制的抑制劑、以及用于在哺乳動物中治療丙型肝炎感染。還公開一種由式4表示的化合物的制備方法(式4)其中P*表示手性磷原子，該方法包括a)使丙氨酸異丙酯，(式A)，二-X′-苯基磷酸酯，(式B)，2′-脫氧-2′-氟-2′-C-甲基尿苷，(式3)和堿反應(yīng)以獲得包含4的第一混合物；其中X是酸的綴合堿，n是0或1，并且X′是鹵素，b)使所述第一混合物和保護(hù)化合物反應(yīng)以獲得包含4的第二混合物；以及c)任選地，使所述第二混合物進(jìn)行結(jié)晶、色譜分析或萃取以獲得4。
文檔編號C07H19/073GK102459299SQ201080032541
公開日2012年5月16日 申請日期2010年5月20日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月20日
發(fā)明者加納帕蒂·雷迪·帕穆拉帕蒂, 千炳權(quán), 布魯斯·S·羅斯, 張海仁, 王培源, 蘇格納·拉謝康達(dá), 邁克爾·約瑟夫·索菲婭 申請人:法莫賽特股份有限公司