專利名稱：紫草中苯醌類化合物的提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種紫草中有效成分的提取方法，具體涉及紫草中苯醌類化合物的提 取方法。
背景技術(shù)：
紫草為紫草科(Borganiaces)e多年生草本植物，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為中 品，藥用其根部。其味苦、性寒，歸肝經(jīng)，有涼血、活血、清熱解毒的功效，臨床上用來治療血 熱毒盛、癱疹紫黑、麻疹不透、燙傷、疙疹等。紫草的綜合利用頗為廣泛，目前，中外科技界 已認(rèn)識到了紫草的藥用機(jī)理。研究證實紫草富含紫草素及其衍生物，其含量占3-6. 5%，顏 色深紅，化學(xué)結(jié)構(gòu)為苯醌類，在生物體內(nèi)的氧化還原反應(yīng)中能傳遞介子。具有止血、抗炎、抗 菌、抗病毒及抗癌的藥理活性。紫草的多種成分及其結(jié)構(gòu)決定了其功能的廣泛性和用途的 多樣化，可成為多種行業(yè)天然系列產(chǎn)品的中間體原料。目前世界上提煉生產(chǎn)紫草有效成分多采用細(xì)胞培養(yǎng)、植物油加熱分離提取液、稀 乙醇提取與堿液溶解有機(jī)溶媒萃取相結(jié)合、二氧化碳超臨界技術(shù)以及加熱過濾濃縮或干燥 結(jié)晶等傳統(tǒng)的提取工藝。用傳統(tǒng)的提取方法和工藝收率低、成本高、純度低、質(zhì)量差，不僅無 法達(dá)到藥用指標(biāo)，更無法形成規(guī)模生產(chǎn)的水平，部分工藝對環(huán)境造成污染。如果用細(xì)胞組織 培養(yǎng)工藝，投資大、難度高、時間長、產(chǎn)量低，則更無法達(dá)到企業(yè)批量生產(chǎn)規(guī)模。因此，優(yōu)化紫 草有效成分提取工藝是一個有重要意義且亟待解決的問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對上述提取紫草中有效成分工藝中存在的不足，提供了一種紫草中苯醌 類化合物的提取方法，本方法流程簡捷、成本低、有效成分收率高。本發(fā)明是通過以下措施實現(xiàn)的
紫草為紫草科紫草屬的植物，又名山紫草、紫丹、紫草根，是中草藥的一種，春秋挖根， 除去殘莖及泥土 (勿用水洗，以防退色)，曬干或微火烘干，生用。本發(fā)明采用多次回流提取、 色譜柱吸附洗脫工藝對紫草中的有效成分進(jìn)行提取，流程簡捷、成本低、收率高、質(zhì)量穩(wěn)定 優(yōu)良，所得粗品中有效成分含量高達(dá)60%以上(60-70%)，而現(xiàn)有硬紫草根的CO2超臨界萃取 物中蔡醒類色素含量僅為35. 97%。本發(fā)明所用的紫草為紫草科植物紫草，包括軟紫草和硬 紫草。具體技術(shù)方案如下
一種紫草中苯醌類化合物的提取方法，以紫草為原料，其特征是至少包括以下步驟
(1)將干燥的紫草粉碎成粗粉，加入溶劑進(jìn)行多次回流提取，總回流時間不低于
6h ；
(2)將回流提取后的混合液趁熱抽濾得提取液，每次回流所得的提取液分別保存待
用；
(3)將提取液按提取順序通入裝有球形擴(kuò)孔硅膠的色譜柱中，對提取液中的成分進(jìn)行吸附；
(4) 步驟(3)后，用洗脫液對色譜柱進(jìn)行洗脫，流出液顏色變淺或無顏色時停止洗
脫；
(5 ) 將洗脫后的流出液濃縮、干燥得紫草苯醌類化合物粗品。本發(fā)明所用溶劑為6號汽油、正己烷或石油醚，優(yōu)選6號汽油，所用洗脫液為6號 汽油、正己烷或石油醚，優(yōu)選6號汽油，所用石油醚的沸程為30-90°C。為了方便溶劑或洗脫 液的重復(fù)使用，所用溶劑和洗脫液優(yōu)選為同一種物質(zhì)。步驟(1)中每次回流提取所加溶劑與紫草粗粉的重量比為1-8 :1，具體為前兩次 回流提取時溶劑與紫草粗粉的重量比為4-8 :1，第二次后回流提取所加溶劑與紫草粗粉的 重量比為1-4:1。步驟(1)中回流提取的次數(shù)至少為4次，總共回流時間為6h。步驟(1)中回流提 取的優(yōu)選方案為回流次數(shù)為4次，1-4次的回流時間依次為2h、2h、lh、lh。步驟(2)中，球形擴(kuò)孔硅膠粒徑為100-200目，吸水性能至少0. 9ml /克；所述色 譜柱為超短粗型色譜柱，所述色譜柱的徑高比為1 :1_2，色譜柱底部鑲有一 200目的篩；提 取液流速為3. 0-5. 0升/分· kg紫草；球形擴(kuò)孔硅膠與紫草的質(zhì)量比為1-3:10。本發(fā)明所用球形擴(kuò)孔硅膠經(jīng)處理后可重復(fù)使用，處理過程為洗脫后，用丙酮沖洗 色譜柱，至流出液無色時改用純水沖洗色譜柱；然后將球形擴(kuò)孔硅膠取出，在80—110°C下 干燥60— 80分鐘，然后在600°C下加熱兩分鐘，自然降溫后備用。本發(fā)明相比現(xiàn)有技術(shù)具有如下優(yōu)點1、采用低沸點溶劑熱回流提取紫草中有效成 分，將提出液直接通過超短粗硅膠色譜柱快速進(jìn)行過濾，省去濃縮、拌合硅膠烘干、上柱等 繁雜工藝，降低了柱壁效應(yīng)，提高了工作效率。2、色譜柱中使用的擴(kuò)孔硅膠，進(jìn)行再生活化 處理后可反復(fù)使用，降低了成本；3、所得苯醌類化合物的含量在60%以上(60-70%)，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高 于現(xiàn)有工藝的提取率；4、工藝操作簡單、設(shè)備要求低，適于工業(yè)化生產(chǎn)。
具體實施例方式下面通過具體實施例對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步闡述，應(yīng)該明白的是，下述說明僅是為 了解釋本發(fā)明，并不對其具體內(nèi)容進(jìn)行限制。
實施例1
將干燥的紫草粗粉碎，稱取粗粉100kg，投入提取罐中，加入相當(dāng)原藥5倍重量(500kg) 的6號溶劑汽油，加熱回流2小時，趁熱抽濾，濾液保存；向提取罐再加入6號汽油400kg， 進(jìn)行熱回流提取2小時，趁熱抽濾，提取液另外保存，如此反復(fù)熱回流提取四次，四次回流 時間分別為2小時、2小時、1小時、1小時的方式進(jìn)行。提出液分別保存?zhèn)溆?。取球形擴(kuò)孔 硅膠25kg，一次裝入超短粗型過濾柱。在過濾柱的底部鑲有一 200目的篩，該柱體的直徑 50厘米，高為100厘米。整平硅膠表面后，將上述提出液按提出順序，直接從硅膠表層中心 的上方以3升/分/kg的流速通過柱體，當(dāng)?shù)谒拇翁岢鲆毫魍旰?，更換6號溶劑汽油洗脫。 收集含有效成分的流出部分，待流出液顏色較淡時，停止收集，濃縮除去流出液中的6號溶 劑汽油，固體在低于60°C下干燥，得含量高于65%的苯醌類化合物，6號汽油可重復(fù)利用。實施例2
將干燥的紫草粗粉碎，稱取粗粉100kg，投入提取罐中，加入相當(dāng)原藥7倍重量的石油醚(沸程30-60°C)，加熱回流2小時，趁熱抽濾，濾液保存；然后再用同樣的方法回流提取 四次，每次所用石油醚的量為500 kg、400kg、300 kg、300 kg、100kg、100kg，時間為2 h、2 h、l h、l h、lh、lh，提取液分別保存。取球形擴(kuò)孔硅膠10kg，一次裝入超短粗型過濾柱。在 過濾柱的底部鑲有一 200目的蹄，該柱體的直徑100厘米，高為100厘米。整平硅膠表面后， 將上述提出液按提出順序，直接從硅膠表層中心的上方以3升/分/公斤硅膠的流速通過 柱體，當(dāng)?shù)谄叽翁岢鲆毫魍旰?，更換正己烷洗脫。收集含有效成分的流出部分，待流出液顏 色較淡時，停止收集，濃縮除去流出液中的正己烷和石油醚，固體在低于60°C下干燥，得含 量為高于60%的苯醌類化合物，正己烷可重復(fù)利用。實施例3
將干燥的紫草粗粉碎，稱取粗粉100kg，投入提取罐中，加入相當(dāng)原藥6倍重量的石油 醚(沸程30-60°C)，加熱回流2小時，趁熱抽濾，濾液保存；然后再用同樣的方法回流提取 四次，每次所用石油醚的量為6 kg、4 kg、4 kg、3 kg，時間為2h、2 h、l h、l h。每次所得提 取液分別保存。取球形擴(kuò)孔硅膠20kg，一次裝入超短粗型過濾柱。在過濾柱的底部鑲有一 200目的篩，該柱體的直徑65厘米，高為100厘米。整平硅膠表面后，將上述提出液按提出 順序，直接從硅膠表層中心的上方以4升/分/公斤硅膠的流速通過柱體，當(dāng)?shù)谖宕翁岢?液流完后，石油醚(沸程30-60°C)洗脫。收集含有效成分的流出部分，待流出液顏色較淡時， 停止收集，濃縮除去流出液中的石油醚，固體在低于60°C下干燥，得含量高于63%的苯醌類 化合物，石油醚還可重復(fù)利用。實施例4
將干燥的紫草粗粉碎，稱取粗粉100kg，投入提取罐中，加入相當(dāng)原藥8倍重量的6號汽 油，加熱回流2小時，趁熱抽濾，濾液保存；然后再用同樣的方法回流提取五次，每次所用6 號汽油的量為 500 kg,400 kg、400kg、300kg、200kg，時間為 lh、l h、l h、l h、l h。每次所 得提取液分別保存。取球形擴(kuò)孔硅膠30kg，一次裝入超短粗型過濾柱。在過濾柱的底部鑲 有一 200目的篩，該柱體的直徑65厘米，高為100厘米。整平硅膠表面后，直接將上述提出 液按提出順序，直接從硅膠表層中心的上方以5升/分/公斤硅膠的流速通過柱體，當(dāng)?shù)?六次提出液流完后，石油醚(沸程60-90°C)洗脫。收集含有效成分的流出部分，待流出液顏 色較淡時，停止收集，濃縮除去流出液中的石油醚與6號汽油，固體在低于60°C下干燥，得 含量高于65%的苯醌類化合物，石油醚和6號汽油可再用作溶劑或洗脫液。實施例5
將干燥的紫草粗粉碎，稱取粗粉100kg，投入提取罐中，加入相當(dāng)原藥6倍重量的6號汽 油，加熱至60°C回流2小時，趁熱抽濾，濾液保存；然后再用同樣的方法回流提取三次，每 次所用6號汽油的量為600kg、400 kg、400 kg，時間為2h、lh、lh，提取液分別保存。取球形 擴(kuò)孔硅膠30kg，一次裝入超短粗型過濾柱。在過濾柱的底部鑲有一 200目的篩，該柱體的直 徑50厘米，高為100厘米。整平硅膠表面后，直接將上述提出液按提出順序，直接從硅膠表 層中心的上方以3升/分/公斤硅膠的流速通過柱體，當(dāng)?shù)谒拇翁岢鲆毫魍旰?，更換6號 汽油洗脫。收集含有效成分的流出部分，待流出液顏色較淡時，停止收集，濃縮除去流出液 中的6號汽油，固體在低于60°C下干燥，得含量高于62%的苯醌類化合物，6號汽油可重復(fù) 利用。本發(fā)明所用硅膠為青島海洋化工廠生產(chǎn)的球形擴(kuò)孔硅膠，粒徑為100-200目，吸
5水性能至少0. 9ml /克，使用前用200目篩篩出細(xì)粉。本發(fā)明所用硅膠可回收利用。方法是 洗脫完成后，用丙酮沖洗色譜柱，當(dāng)流出液無色時停止沖洗，再用純水沖洗，沖洗干凈后，將 硅膠取出，在80-110°C烘干，因為吸水的擴(kuò)孔硅膠加熱太高極易引起炸裂，所以開始烘干時 最好在80—95°C，當(dāng)硅膠中水分基本去除后，再將溫度提高至110°C。烘干的時間以基本去 除擴(kuò)孔硅膠中的水分所需時間為限，最好在60—80分鐘。充分烘干后的硅膠再趁熱通過 600°C高溫二分鐘取出，然后緩緩降溫后，過200目篩，備重復(fù)使用。使用該法烘烤的硅膠可 以重復(fù)使用約30次時，硅膠炸裂率仍小于10%。
權(quán)利要求
一種紫草中苯醌類化合物的提取方法，以紫草為原料，其特征是至少包括以下步驟(1)將干燥的紫草粉碎成粗粉，加入溶劑進(jìn)行多次回流提取，總回流時間不低于6h；(2)將回流提取后的混合液趁熱抽濾得提取液，每次回流所得的提取液分別保存待用；(3)將提取液按提取順序通入裝有球形擴(kuò)孔硅膠的色譜柱中，對提取液中的成分進(jìn)行吸附； (4)步驟(3)后，用洗脫液對色譜柱進(jìn)行洗脫，流出液顏色變淺或無顏色時停止洗脫；(5)將洗脫后的流出液濃縮、干燥得紫草苯醌類化合物粗品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征是所述溶劑為6號汽油、正己烷或石油 醚，所述洗脫液為6號汽油、正己烷或石油醚；所述石油醚的沸程為30-90°C。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征是所述溶劑為6號汽油，所述洗脫液為6號汽油。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項所述的制備方法，其特征是步驟(1)中回流提取的次數(shù) 至少為4次，總共回流時間為6h。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征是步驟(1)中回流提取的次數(shù)為4次，1-4 次的回流時間依次為2h、2h、lh、lh。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項所述的制備方法，其特征是步驟(1)中每次回流提取所 加溶劑與紫草粗粉的重量比為1-8 :1。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征是步驟(1)中，前兩次回流提取時，溶劑與 紫草粗粉的重量比為4-8 :1，第二次后回流提取所加溶劑與紫草粗粉的重量比為1-4:1。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項所述的制備方法，其特征是步驟(2)中，球形擴(kuò)孔硅膠 粒徑為100-200目，吸水性能至少0. 9ml /克；所述色譜柱為超短粗型色譜柱，所述色譜柱 的徑高比為1 :1_2，色譜柱底部鑲有一 200目的篩。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項所述的制備方法，其特征是步驟(2)中，提取液流速為 3. 0-5. 0升/分· kg ；球形擴(kuò)孔硅膠與紫草的質(zhì)量比為1-3:10。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項所述的制備方法，其特征是球形擴(kuò)孔硅膠經(jīng)處理后 重復(fù)使用，處理過程為洗脫后，用丙酮沖洗色譜柱，至流出液無色時改用純水沖洗色譜柱； 然后將球形擴(kuò)孔硅膠取出，在80—110°C下干燥60—80分鐘，然后在600°C下加熱兩分鐘， 自然降溫后備用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種紫草中苯醌類化合物的提取方法，步驟為將紫草粉碎成粗粉，加入溶劑進(jìn)行多次回流提取，總回流時間不低于6h；將回流提取后的混合液趁熱抽濾得提取液，每次回流所得的提取液分別保存待用；將提取液按提取順序通入裝有球形擴(kuò)孔硅膠的色譜柱中，對提取液中的成分進(jìn)行吸附；用洗脫液對色譜柱進(jìn)行洗脫，流出液顏色變淺或無顏色時停止洗脫；將洗脫后的流出液濃縮、干燥得紫草苯醌類化合物粗品。本方法工藝操作簡單，成本低，苯醌類化合物的含量在60%以上，適于工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號C07C50/32GK101906028SQ201010263298
公開日2010年12月8日 申請日期2010年8月26日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月26日
發(fā)明者于蓓蓓, 付加雷, 徐新剛, 閆雪生 申請人:山東省中醫(yī)藥研究院