專利名稱：：一種異戊烯基黃酮及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種異戊烯基黃酮，以及該化合物在制備治療乳腺癌藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：小葉蓮(FructusSinopodophylli)為常用藏藥，中國藥典2005年版收載其來源為小檗科植物桃兒七尸0^^//"7/^"^,11(^^的干燥成熟果實。具有活血調(diào)經(jīng)功能，常用于治療多種婦科疾病。但是目前關(guān)于小葉蓮的研究卻少見報道。目前，從小葉蓮中分離得到的主要化合物有木脂素類(lignanoids)化合物鬼臼毒素(podophyllotoxin)、去氧鬼臼毒素(deoxypodophyllotoxin)、4'-去甲去氧鬼臼毒素(4'-demethyldesoxypodophyllotoxin)。黃酮類(flavones)化合物槲皮素(quercetin)、8-異戊烯基山柰酚(8-prenylkaemfero1)和檸檬酚(citrusinol)。至今未見小葉蓮及其化合物在抑制乳腺癌方面的報道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提出一種異戊烯基黃酮，以及該化合物在制備治療乳腺癌藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明通過將小葉蓮干燥粉碎，以80%95%乙醇回流提取2~4次，每次0.5-2小時，回收乙醇，濃縮至608(TC時相對密度為1.051.30的浸膏。將其均勻分散至水中，分別用石油醚、乙酸乙酯和水飽和正丁醇萃取，回收溶劑得到不同極性的萃取物；乙酸乙酯萃取部分經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜(石油醚-丙酮或氯仿-甲醇洗脫)并通過SephadexLH-20純化、氯仿-甲醇洗脫，得到一個新化合物，將其命名為8,2'-二異戊烯基槲皮素3-甲醚(8,2'-diprenylquercetin3-methylether)。8,2'-二異戊烯基槲皮素3-甲醚為黃色粉末，鹽酸鎂粉反應(yīng)呈陽性。HR-ESI-MS:m々453.19118[M+H]+，給出分子式C26H2807。iH-NMR、13C-NMR、HSQC和HMBC數(shù)據(jù)見表1。該化合物為一新化合物，命名為8,2'-二異戊烯基槲皮素3-甲醚。表18，2'-二異戊烯基槲皮素3-甲醚的核磁數(shù)據(jù)Position'H-NMR(500MHz，methanol-*^)"C陽NMR(125MHz,methanol-^)HSQC(13C-NMR,ppm)訓(xùn)BC(13C-NMR，ppm)2-161.83-140.34-180.45-跳766.26(1H,s)99.399.3106.2，107.9，160.7，163.17-163.18-107.99-156.210-106.2r-123.22,-129.43,-144.74,-148.35'6.75(1H,d，8.5)113.2113.2123.2，144.7，148.36,6.78(1H，d，8.5)122.5122.5129.4,148.3,161.8r'3.32(2H,d，7.0)22.422.4107.9，123.3,132.3，156.2，163.12"5.08(1H,m)123.3123.3107.93"-132.34"1.30(3H,s)17.717.7124.1,132.15"1.57(3H，d,1.0)25.925.9123.3,132.3r"3.42(2H，d，7.0)26.626.6123.2，124.1，129.4，132.1,144.72'〃5.01(1H,m)124.1124.1129.43'〃-132.14'〃1.48(3H，s)17.717.7123.3,132.35"'1.42(3H,d，1.5)25.725.7124.1,132.1-OCH33.56(3H,s)60.960.9140.34其結(jié)構(gòu)式如下:該化合物對人乳腺癌細胞的抑制作用實驗表明，其具有良好的抑制乳腺癌細胞的作用。具體實施方式實施例l干燥小葉蓮藥材，粉碎后約18kg，以8倍量95。/。乙醇回流提取2次，提取時間分別為2小時和1小時，回收乙醇，濃縮至7(TC時相對密度為1.10的浸膏約5.2kg。取約4.8kg，加10L蒸餾水充分攪拌至完全懸浮后，依次用石油醚、乙酸乙酯、水飽和正丁醇等體積萃取5次。萃取液減壓回收溶劑，得各萃取部位。取乙酸乙酯部分274g，經(jīng)硅膠柱(100~200目)色譜進行分離，氯仿-甲醇(10:0~0:10)梯度洗脫，根據(jù)TLC檢測結(jié)果，在氯仿甲醇為40:130:1極性部位含有8,2'-二異戊烯基槲皮素3-甲醚，通過SephadexLH-20純化、氯仿-甲醇(6:4)洗脫，得到8，2'-二異戊烯基槲皮素3-甲醚60mg。實施例2采用酸性磷酸酶法檢測8,2'-二異戊烯基槲皮素3-甲醚對人乳腺癌細胞的抑制作用。人乳腺癌MDA-231細胞株和人乳腺癌T47D細胞株均用含體積分數(shù)為10%新生牛血清、100U/mL青霉素、100U/mL鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)，37°C，95%濕度，5%0)2孵箱條件；常規(guī)2.5g/L胰蛋白酶消化傳代。取對數(shù)生長期細胞消化后，制成細胞懸液按1.5xlOV孔的密度接種于96孔培養(yǎng)板，培養(yǎng)24h細胞完全貼壁之后，實驗組分別加入不同濃度的化合物；空白對照組加入DMEM培養(yǎng)液。實驗中，每個濃度設(shè)6個平行孔，作用24h、48h、72h后，棄去96孔板中的培養(yǎng)基，各孔用PBS100|iL洗2遍，棄PBS,加入1Ommol/L的硝基苯磷酸鹽溶液lOOpL(O.lmol/L醋酸緩沖液配制，含O.P/。TritonX-IOO)，置于37。C孵育2h后，每孔加入lmol/L氫氧化鈉10pL終止反應(yīng)。用酶聯(lián)免疫檢測儀在405nm處檢測光吸收度"值)記錄結(jié)果，重復(fù)實驗3次。結(jié)果表明，如表2所示，8,2'-二異戊烯基槲皮素3-甲醚具有較強的乳腺癌細胞抑制作用。表28，2'-二異戊烯基槲皮素3-甲醚對兩種細胞株的ICso<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>權(quán)利要求1.一種異戊烯基黃酮類化合物8，2′-二異戊烯基槲皮素3-甲醚，其特征在于該化合物具有以下結(jié)構(gòu)式所示的化學(xué)結(jié)構(gòu)2.—種治療乳腺癌的藥物組合物，其特征在于含有如權(quán)利要求1所述的化合物，以及藥學(xué)上可以接受的載體。3.如權(quán)利要求1所述的化合物在制備治療癌癥藥物中的應(yīng)用。4.如權(quán)利要求1所述的化合物在制備治療乳腺癌藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明涉及一種異戊烯基黃酮，以及該化合物在制備治療乳腺癌藥物中的應(yīng)用。所述的異戊烯基黃酮是從小葉蓮中分離得到的一個新化合物，為8，2′-二異戊烯基槲皮素3-甲醚。對人乳腺癌細胞的抑制作用實驗表明，其具有良好的抑制乳腺癌細胞的作用。文檔編號C07D311/00GK101648934SQ200910092768公開日2010年2月17日申請日期2009年9月24日優(yōu)先權(quán)日2009年9月24日發(fā)明者越孔,尚明英,肖軍軍,葛躍偉,蔡少青,馬祥君申請人:北京大學(xué)