專利名稱：：一種抗梭曼的抗體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種抗梭曼的抗體。
背景技術(shù)：
：梭曼(Soman)屬有機(jī)磷酸酯類化合物，通過不可逆地抑制乙酰膽堿酯酶活性而引起一系列的中樞及外周膽堿能癥狀，具有毒性強(qiáng)、作用快、難防難治等特點(diǎn)。因而對(duì)梭曼中毒的醫(yī)學(xué)防護(hù)備受關(guān)注，是防化醫(yī)學(xué)研究的重點(diǎn)之一。對(duì)于梭曼中毒，用特異性抗體結(jié)合游離的梭曼可以避免或降低毒劑對(duì)于膽堿酯酶的抑制作用，對(duì)梭曼中毒起到預(yù)防甚至一定的治療作用。傳統(tǒng)的雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗體是將半抗原與載體蛋白連接，直接免疫小鼠，產(chǎn)生鼠源抗體。由于鼠源單克隆抗體具有異源性，不能直接對(duì)人體進(jìn)行免疫，因而其在人體內(nèi)的應(yīng)用受到了限制，而人源抗體的制備難度很大。近年來，隨著鼠單抗人源化技術(shù)、抗體庫技術(shù)和轉(zhuǎn)基因鼠技術(shù)的進(jìn)展，人源抗體的研制技術(shù)正在得到解決，尤其是通過構(gòu)建大容量、具有良好多樣性的抗體庫，為人源抗體的制備提供了有效的技術(shù)平臺(tái)。噬菌體抗體庫技術(shù)是全套抗體基因展示在噬菌體表面，并能在體外模擬抗體免疫系統(tǒng)的選擇作用，呈現(xiàn)在噬菌體表面的抗體能夠在體外用固相化抗原進(jìn)行篩選。經(jīng)過幾輪"吸附一洗脫一擴(kuò)增"的淘篩，可使特異性噬菌體抗體得到富集。利用噬菌體抗體庫技術(shù)借助高效篩選系統(tǒng)，可以不經(jīng)免疫方便地制備出人源抗體(王琰,化冰,劉群英,等.半合成抗體庫的構(gòu)建及鑒定.中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志，1999;19(3):23.)。第一個(gè)來源于噬菌體抗體庫的治療性人源抗體(抗TNF-a，治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)已于2003年初批準(zhǔn)上市，印證了用大容量噬菌體抗體篩選人源抗體的可行性。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種抗梭曼的抗體。本發(fā)明所提供的抗梭曼的抗體，包括輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)，所述重鏈可變區(qū)的氨基酸序列為序列表中序列l(wèi)的自氨基末端第133-246位氨基酸殘基，所述輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列為序列表中序列l(wèi)的自氨基末端第l-lll位氨基酸殘基。上述抗體具體可為單鏈抗體。所述抗體的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)之間還可以有連接肽，所述連接肽的長度具體可為21個(gè)氨基酸殘基。上述抗梭曼的抗體為如下l)或2)所示的蛋白質(zhì)1)由序列表中序列l(wèi)所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；2)將序列表中序列1的氨基酸殘基序列經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和Z或缺失和/或添加且具有抗梭曼功能的由l)衍生的蛋白質(zhì)。上述抗梭曼的抗體的編碼基因也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。所述抗梭曼的抗體的編碼基因?yàn)槿缦耹)-3)中任一所述的基因1)其核苷酸序列是序列表中的序列2;2)在嚴(yán)格條件下可與序列表中序列2限定的DNA序列雜交且編碼上述任一抗體的DNA分子；3)與l)的基因具有90X以上的同源性且編碼上述任一抗體的DNA分子。含有上述抗梭曼的抗體編碼基因的重組表達(dá)載體、表達(dá)盒、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系或重組菌也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。本發(fā)明的抗梭曼的抗體可以用于制備治療抗梭曼的藥物。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種治療抗梭曼的藥物。本發(fā)明所提供的治療抗梭曼的藥物，它的活性成分是上述任一所述抗梭曼的抗體。本發(fā)明采用單噬粒載體通過loxp—cre定位重組構(gòu)建工作庫。梭曼由于分子量較小(M2=182)、結(jié)構(gòu)簡單、無免疫原性，用梭曼水解過渡態(tài)類似物和蛋白偶聯(lián)的人工抗原進(jìn)行抗體庫的篩選，可以篩選出與梭曼結(jié)合的抗體，甚至具有水解梭曼活性的抗體酶。在篩選的過程中，用3%的牛血清白蛋白溶解回收抗體，其目的是游離的牛血清白蛋白與抗體庫發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合，從而降低非特異性結(jié)合。在ELISA檢測(cè)過程中，包被小牛血清白蛋白做為抗原，從而選擇特異性與梭曼類似物結(jié)合的抗體，進(jìn)而進(jìn)一步鑒定其與梭曼結(jié)合的活性。用HB2151菌株進(jìn)行可溶性表達(dá)和活性鑒定，是由于在構(gòu)建噬菌體抗體載體時(shí)，在抗體基因與Gin基因之間引入了一個(gè)琥珀終止密碼子，在含有琥珀抑制基因的宿主菌中，抗體基因和GIII成為一個(gè)開放閱讀框架，這時(shí)抗體就能借助噬菌體外殼蛋白呈現(xiàn)在噬菌體表面，而在不帶有琥珀抑制基因的宿主菌HB2151中，由于終止密碼子的存在，抗體分子不與GIII融合表達(dá)，在信號(hào)肽介導(dǎo)下分泌到質(zhì)周腔中進(jìn)行折疊，便產(chǎn)生了可溶性的抗體片段(BaylyAM,KorttAA,HudsonPJ，etal.Large-scalebacterialfermentationandisolationofScFvmultimersusingaheat-induciblebacterialexpressionvector[J].JImmunolMethods,2002,262:217-227.)。將融合的噬菌體抗體轉(zhuǎn)染大腸桿菌HB2151，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)，分泌有功能的可溶性抗體，排除了噬菌體蛋白的干擾，獲得可以和梭曼結(jié)合的抗體。經(jīng)ELISA鑒定，本發(fā)明的抗梭曼的抗體具有很好的特異性，與梭曼的結(jié)合活性490nm(吸光度值)達(dá)0.79士0.01。在大容量抗體庫的篩選過程中發(fā)現(xiàn)，獲得的可結(jié)合抗原的噬菌體抗體庫的克隆中，有部分喪失了與抗原結(jié)合的活性，有部分則變成了非特異結(jié)合，其可能原因是一、有些克隆親和力較低，在噬菌體表面表達(dá)時(shí)因可能存在的多價(jià)，顯示強(qiáng)大的放大效應(yīng)；二、可溶性表達(dá)時(shí)，由于抗體分子不與GIII融合表達(dá)使蛋白的立體構(gòu)象發(fā)生了變化。圖1為陽性克隆可變區(qū)基因的指紋圖譜具體實(shí)施例方式實(shí)施例l、抗梭曼的抗體的獲得一、工作庫(大容量噬菌體抗體庫)的制備具體制備方法參見如下文獻(xiàn)SblatteroD,BradburyA.Exploitingrecombinationinsinglebacteriatomakelargephageantibodylibraries.NatBiotechnol,2000;18:74.從原始噬菌體抗體庫(喬媛媛，王琰，陳曉穗，王欲曉，化冰.大容量噬菌體抗體庫的構(gòu)建及鑒定，中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志,2004,24(3),194-197.中國人民解放軍海軍總醫(yī)院)中取出7X10^cfti的噬菌體顆粒以100:1的感染復(fù)數(shù)(multiplicityofinfection,MOI=100/1)超感染BS1365細(xì)胞(王琰，王欲曉,陳曉穗，化冰,劉曉林,用于大容量噬菌體抗體庫的表達(dá)載體的構(gòu)建及鑒定,中國免疫學(xué)雜志,2003,19(2)，93-96.中國人民解放軍海軍總醫(yī)院)，37。C水浴保溫l小時(shí)，使多副本載體進(jìn)入同一個(gè)細(xì)胞，通過cre-loxp介導(dǎo)的定位重組使同一細(xì)胞內(nèi)不同載體之間的輕、重鏈隨機(jī)交換配對(duì)。加入2YT培養(yǎng)基(含有1.6X質(zhì)量百分含量的蛋白胨、1%質(zhì)量百分含量的酵母提取物和0.5%質(zhì)量百分含量的氯化鈉)至400ml，補(bǔ)足Amp，使其在培養(yǎng)基中的終濃度為100yg/ml，振蕩培養(yǎng)至OD49^0.5。再在培養(yǎng)基中加入5ml輔助病毒VCSM13(pfu=3X1012)(MerckST200251)，3(TC培養(yǎng)過夜，次日收集噬菌體抗體庫，測(cè)定滴度。所獲噬菌體上清再以M01《1的比例感染1000ml對(duì)數(shù)生長期的XL1-Blue菌(Stratagen,貨號(hào):200228)，37"C靜置30min;取少許菌鋪含Amp的培養(yǎng)盤計(jì)算庫容，補(bǔ)足Amp至100ug/ml，再加入10mlVCSM13，3(TC培養(yǎng)過夜，次日回收上清，PEG8000(購自Promege公司)進(jìn)行沉淀，獲得工作庫。計(jì)算工作庫的庫容和抗體庫滴度，結(jié)果表明，獲得庫容為7X10^的大容量人源噬菌體抗體庫，所獲抗體庫的滴度為lX1013cfu/ml。二、抗梭曼噬菌體抗體的篩選、制備及ELISA檢測(cè)具體的篩選方法參見如下文獻(xiàn)喬媛媛,王琰，陳曉穗,等.大容量噬菌體抗體庫的構(gòu)建及鑒定.中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志，2004;24(3):194.王琰，劉群英,化,冰,等.從人源性噬菌體抗體庫分離出1株含有異常序列的抗HBsAgFab克隆.中國免疫學(xué)雜志，1998，14(1):115.將梭曼水解過渡態(tài)類似物3-羥基-1-對(duì)硝基苯基甲膦酸單頻哪基醇酯(P6)和蛋白進(jìn)行偶聯(lián)得到偶聯(lián)物，以得到的偶聯(lián)物為半抗原，以牛血清白蛋白(購自Merck公司，貨號(hào)12659)為載體蛋白進(jìn)行反應(yīng)，得到P6-BSA。P6和P6-BSA的具體制備過程見如下文獻(xiàn):楊日芳,惲榴紅,王字玲,榮康泰梭曼抗體酶研究II:"潛過渡態(tài)"半抗原設(shè)計(jì)策略及其在梭曼抗體酶研究中的應(yīng)用軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊，2000年24(2):105-109.中國人民解放軍海軍總醫(yī)院)。以上述獲得的P6-BSA作為抗原進(jìn)行下面的實(shí)驗(yàn)。將上述獲得的P6-BSA稀釋至50ug/ml，以lml包被免疫管(購自丹麥NUNC公司)，4t過夜，次日以含3%質(zhì)量百分含量脫脂奶粉的封閉液加滿免疫管，37°C封閉2小時(shí)，倒去封閉液，加入lml上述步驟一構(gòu)建的噬菌體抗體庫(抗體庫滴度為lxl013cfu/ml)，37。C孵育2小時(shí)，吸去噬菌體抗體液，以含0.05%質(zhì)量百分含量吐溫20的PBS溶液洗滌5次(第二輪洗15次，以后各輪洗滌20次以上)，然后用蒸餾水洗滌一次。回收結(jié)合于固相的噬菌體抗體，先加入lml新鮮XLl-Blue菌直接感染，37"C孵育15min后，加入10ml含20ug/mlAmp的SB培養(yǎng)基(每升SB培養(yǎng)基中含有胰蛋白胨30克,酵母粉20克,3-(N-嗎啉代)丙磺酸10克，其余為水)；再將細(xì)菌感染回收后的免疫管用PBS及蒸餾水各洗滌2次，加入lml洗脫液(含O.lmlHCl，以甘氨酸調(diào)至pH至2.2，再加入BSA使其在洗脫液中的質(zhì)量百分含量為0.1%)37'C靜置15min后再進(jìn)行洗脫回收。用吸管將洗脫液吸出后，加入45^12mol/LTris中和，再加入10mlXL1-Blue細(xì)胞37。C靜置15min后，加入10ml含100ug/mlAmp的SB培養(yǎng)基。從兩次回收的菌液中分別取出適量鋪盤測(cè)定CFU，其余細(xì)菌37r培養(yǎng)3小時(shí)，擴(kuò)大體積到100ml，加入3X1012pfu的輔助病毒VCSM13，3(TC振蕩培養(yǎng)過夜。每輪篩選后均測(cè)定次級(jí)庫的滴度，并計(jì)算噬菌體抗體庫的投入產(chǎn)出比(即回收率)，作為特異性噬菌體抗體富集的指標(biāo)，噬菌體抗體庫投入產(chǎn)出比的結(jié)果如表2所示。次日回收上清，PEG8000(購自Promege公司)進(jìn)行沉淀，所得次級(jí)噬菌體抗體庫再進(jìn)行下一輪的篩選。表2噬菌體抗體庫的投入產(chǎn)出比輪數(shù)投入產(chǎn)出投入產(chǎn)出比11X10107X1057X10—521,2X10102.24X1051.87XId531.8X10'02.06X1061.14X10—41.5X10")5X1073.33X10—:'51.6X101"6.2X1073.87X10—3經(jīng)過4輪的篩選，測(cè)定每輪洗脫回收的噬菌體滴度，發(fā)現(xiàn)得到了約一百倍富集。從第三和第四輪篩選得到的菌落中隨機(jī)挑取350個(gè)單克隆，接種在含有100嗎/mlAmp的2YT培養(yǎng)液中培養(yǎng)過夜，第二天分別取30ul菌液到lmlSB培養(yǎng)基中，37'C培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長期，加入輔助病毒VCSM13，3(TC培養(yǎng)過夜，收取上清即得到噬菌體抗體。將上述制備的噬菌體抗體進(jìn)行ELISA檢測(cè)，同時(shí)以卵清蛋白(OA)(購自Sigma公司)和牛血清白蛋白(BSA)作為對(duì)照。將濃度為50yg/ml的P6-BSA作為抗原包被ELISA板，l小時(shí)后棄去孔內(nèi)液體，用含3。/。質(zhì)量百分含量脫脂奶粉的PBS封閉后分別加入上述制備的噬菌體抗體，37"C孵育1小時(shí)；用含0.05%質(zhì)量百分含量Tween20的PBS溶液洗滌3次，加入HRP標(biāo)記的抗M13羊單抗(Pharmacia,27-9420-01)37。C孵育l小時(shí)，洗滌后加入OPD底物顯色，讀取A490。顯色陽性的克隆再以P6-BSA、BSA和卵清蛋白為抗原同時(shí)包被ELISA板，鑒定其抗原抗體反應(yīng)的特異性。實(shí)驗(yàn)設(shè)三次重復(fù)，結(jié)果表明，所制備的噬菌體抗體中，有105個(gè)能與P6-BSA結(jié)合，陽性率為30%，其中，有52個(gè)與牛血清白蛋白或卵清蛋白不結(jié)合，具備特異性(14.9%)。選取其中3個(gè)結(jié)合活性高的克隆的噬菌體抗體進(jìn)行ELISA檢測(cè)，結(jié)果如表3所示。表3噬菌體抗體與不同抗原反應(yīng)的ELISA檢測(cè)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>OA0.06±0.020.01±0.000.12±0.01BSA-O,Ol土O.01-0.01±0.02O.OO士O.00表3中，OA表示卵清蛋白，BSA表示牛血清白蛋白，l-3分別為3個(gè)結(jié)合活性高的克隆的噬菌體抗體。三、可溶性抗梭曼抗體的表達(dá)與ELISA鑒定將上述步驟二ELISA鑒定出的52個(gè)特異性陽性的梭曼噬菌體抗體108倍稀釋后感染大腸桿菌HB2151(王琰，劉群英,化冰,陳宇萍,朱迎春,陳曉穗,從半合成抗體庫克隆抗TNF-a人單鏈抗體,免疫學(xué)雜志,1999,15(4):87-89.中國人民解放軍海軍總醫(yī)院)，37。C孵育15分鐘后鋪培養(yǎng)盤。挑取單個(gè)集落接種于含有100|ag/mlAmp的2YT培養(yǎng)液中培養(yǎng)過夜，第二天取30ul菌液接種到lmlSB培養(yǎng)基中，37"C培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長期，加入IPTG(購自Promege公司)使其在培養(yǎng)基中的終濃度為lmmol/L，3(TC培養(yǎng)過夜，收取上清即得到可溶性抗體。非抑制表型菌HB2151中，ScFv以游離可溶的形式存在，在GIII信號(hào)肽介導(dǎo)下分泌表達(dá)。將上述獲得的可溶性抗體進(jìn)行ELISA檢測(cè)，同時(shí)以卵清蛋白(OA)(購自Sigma公司)和牛血清白蛋白(BSA)作為對(duì)照。將P6-BSA稀釋至10yg/ml，以50ul包被ELISA板，l小時(shí)后棄去孔內(nèi)液體，用含3%質(zhì)量百分含量脫脂奶粉的PBS封閉后分別加入上述獲得的可溶性抗體，37"C孵育1小時(shí)，用含0.05%質(zhì)量百分含量Tween20的PBS溶液洗滌3次，加入HRP標(biāo)記的抗V5抗體(Invitrogen，R961-25)進(jìn)行反應(yīng)，再用含0.05%質(zhì)量百分含量Tween20的PBS溶液洗漆3次，37。C孵育1小時(shí)后加入OPD底物顯色，讀取A490。實(shí)驗(yàn)設(shè)三次重復(fù)，結(jié)果表明，有14個(gè)克隆ELISA檢測(cè)有活性，并與P6-BSA特異性結(jié)合。挑選其中3個(gè)結(jié)合活性高的克隆的可溶性抗體及進(jìn)行ELISA檢測(cè)，結(jié)果如表4所示。表4可溶性抗體與不同抗原反應(yīng)的ELISA檢測(cè)123P6-BSA0.55±0.010.58±0.020.79±0.01OA0.01±0.000,15±0.010.18±0.01BSA-0.01±0.01-0.01±0.02-0,04±0.03表4中，OA表示卵清蛋白，BSA表示牛血清白蛋白，l-3分別為3個(gè)結(jié)合活性高的克隆的可溶性抗體。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果中，可溶性表達(dá)后的活性與噬菌體表達(dá)不完全一致，可能是誘導(dǎo)條件發(fā)生了變化，或表面表達(dá)的抗體片段受周圍膜環(huán)境的影響，立體結(jié)構(gòu)有所不同導(dǎo)致結(jié)合活性發(fā)生了改變。此外用ELISA檢測(cè)噬菌體抗體，也可導(dǎo)致ELISA結(jié)果有所不同。四、抗體可變區(qū)基因的多樣性分析(DNA指紋)提取上述步驟三篩選到的特異性結(jié)合克隆的質(zhì)粒，并以其為模板，以P1:5，國CGGCAGCCGCTGGATTGTTA-3，為上游引物，以P2:5'-CTAAACAACTTTCAACAGT-3，為下游引物，PCR擴(kuò)增ScFv基因；PCR擴(kuò)增產(chǎn)物用CL-6B凝膠(購自Phamacia公司)微型柱離心純化，再用限制性內(nèi)切酶MvaI(購自TAKARA公司)37"C消化2h，取10w1酶切產(chǎn)物進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳，EB染色后根據(jù)DNA指紋圖譜分析其多樣性。陽性克隆可變區(qū)基因的指紋圖譜如圖l所示。其中，泳道M為DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)，泳道l-14分別為來自14個(gè)陽性克隆的指紋圖譜。上述14個(gè)陽性克隆共有4種指紋圖譜，利用PCGENE軟件對(duì)這4種指紋圖譜進(jìn)行序列分析，結(jié)果表明，克隆l(圖1中泳道3)L鏈可變區(qū)基因來自VL2亞群，H鏈可變區(qū)基因來自VH3亞群；克隆2(圖l中泳道l)L鏈可變區(qū)基因來自VkII亞群，H鏈可變區(qū)基因來自VH3亞群；克隆3(圖1中泳道7)L鏈可變區(qū)基因來自VL1亞群，H鏈可變區(qū)基因來自VH3亞群；克隆4(圖1中泳道9)L鏈可變區(qū)基因來自VL2亞群，H鏈可變區(qū)基因來自VH3亞群。上述ELISA檢測(cè)結(jié)合活性最高的抗梭曼的抗體(圖1中泳道7)的氨基酸序列如序列1所示，其中自氨基末端第133-246位為重鏈可變區(qū)，自氨基末端第1-111位為輕鏈可變區(qū)。9序列表〈110〉中國人民解放軍海軍總醫(yī)院〈120>—種抗梭曼的抗體〈130〉CGGNARZ92023〈160〉2<210〉1<211>246<212>PRT〈213〉人工序列〈220><223〉<400>1GinSerValLeuThrGinProProSerValSerAlaAlaProGlyGin151015LysValThrlieSerCysSerGlySerSerSerAsnlieGlyAsnAsn202530TyrValSerTrpTyrGinGinLeuProGlyThrAlaProLysLeuLeu354045lieTyrAspAsnAsmLysArgProSerGlylieProAspArgPheSer505560<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>LeuGluTrpValAlaSerlieLysGinAspGlySerAspLysTyrTyr180185190ValAspSerValLysGlyArgPheThrlieSerArgAspSerAlaThr195200205AsnSerLeuHisLeuGinMetAsnSerLeuThrAlaGluAspThrAla210215220ValTyrTyrCysAlaArgGlyAspMetAspTyrTrpGlyGinGlySer225230235240LeuValThrValSerSer245<210>2<211〉738<212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉<400>2cagtctgtgctgacgcagccgccctcagtgtctgcggccccaggacagaaggtcaccatc60tcctgctctggaagcagctccaacattgggaataattatgtatcctggtaccagcagctc120ccaggaacagcccccaaactcctxat"t"ta1:gacaataataagcgaccctcagggatt:cct180gaccgattctctggcttcaagt:ccggcacgtcagccaccctgggcatcaccggactccag240actggggacgeiggccgattattactgcggaacatgggatgigcagcctgagtgctgtggU300ttcggcggagggaccaagctgaccgtcctaggttccggagggtcgaccataacttcgcat360aatgtatactatacgaagttatcctcgagcggtaccgaggtgcagctggtgcagtctggg420ggaggcttggtccagcctggggggtccctgagactctcctgtgcaacctctggattcacc480tttagttcttattggatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtg540gccagcataaagcaagatggaagtgacaaatactatgtggactctgtgaagggccgattc600accatctccagagacagcgccacgaactcacttcatctgcaaatgaacagcctgacagcc660gaggacacggctgtgtattactgtgcg卿ggtga"Utggactactggggccagggatxc720ctggtcaccgtctcctca7381權(quán)利要求1、一種抗梭曼的抗體，包括輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)，其特征在于所述重鏈可變區(qū)的氨基酸序列為序列表中序列1的自氨基末端第133-246位氨基酸殘基，所述輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列為序列表中序列1的自氨基末端第1-111位氨基酸殘基。2、根據(jù)權(quán)利要求l所述的抗體，其特征在于所述抗體為單鏈抗體。3、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的抗體，其特征在于所述抗體為如下l)或2)所示的蛋白質(zhì)1)由序列表中序列l(wèi)所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；2)將序列表中序列1的氨基酸殘基序列經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有抗梭曼功能的由l)衍生的蛋白質(zhì)。4、權(quán)利要求l-3中任一所述抗體的編碼基因。5、根據(jù)權(quán)利要求4所述的編碼基因，其特征在于所述編碼基因?yàn)槿缦耹)-3)中任一所述的基因1)其核苷酸序列是序列表中的序列2;2)在嚴(yán)格條件下可與序列表中序列2限定的DNA序列雜交且編碼權(quán)利要求l-3中任一所述抗體的DNA分子；3)與l)的基因具有90%以上的同源性且編碼權(quán)利要求1-3中任一所述抗體的DNA分子。6、含有權(quán)利要求4或5所述基因的重組表達(dá)載體或表達(dá)盒。7、含有權(quán)利要求4或5所述基因的轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系。8、含有權(quán)利要求4或5所述基因的重組菌。9、權(quán)利要求l-3中任一所述的抗體在制備治療抗梭曼的藥物中的應(yīng)用。10、一種治療抗梭曼的藥物，它的活性成分是權(quán)利要求1-3中任一所述的抗體。全文摘要本發(fā)明公開了一種抗梭曼的抗體。本發(fā)明所提供的抗梭曼的抗體，包括輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)，所述重鏈可變區(qū)的氨基酸序列為序列表中序列1的自氨基末端第133-246位氨基酸殘基，所述輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列為序列表中序列1的自氨基末端第1-111位氨基酸殘基。本發(fā)明以固相化的P6-BSA為抗原，運(yùn)用構(gòu)建的大容量噬菌體抗體庫，成功地篩選到人源抗梭曼抗體，經(jīng)ELISA鑒定，本發(fā)明的抗梭曼的抗體具有很好的特異性，與梭曼的結(jié)合活性490nm(吸光度值)達(dá)0.79±0.01。文檔編號(hào)C07K16/44GK101463088SQ200910076198公開日2009年6月24日申請(qǐng)日期2009年1月13日優(yōu)先權(quán)日2009年1月13日發(fā)明者周麗君,楊日芳,琰王,王欲曉,王玉霞,賈蓓媛申請(qǐng)人:中國人民解放軍海軍總醫(yī)院