專利名稱：取代的1，3-二苯基丙烷衍生物、它們的制備及用途的制作方法
取代的1，3-二苯基丙烷衍生物、它們的制備及用途
本發(fā)明涉及取代的1,3-二苯基丙烷衍生物、包含它們的藥物組合物和它 們的治療用途，特別是在人類和動(dòng)物健康領(lǐng)域。
令人驚奇地，本發(fā)明人已證明本發(fā)明的化合物具有內(nèi)在的PPAR激動(dòng) 劑性質(zhì)。
因此，本發(fā)明中所述的分子在治療代謝綜合征并發(fā)癥、胰島素抵抗、 糖尿病、血脂異常、動(dòng)脈粥樣硬化、心血管疾病、肥胖癥、高血壓、炎性 疾病(哮喘等)、神經(jīng)變性疾病(阿爾茨海默氏病等)、癌癥等以及降低 總體風(fēng)險(xiǎn)方面特別令人感興趣。本發(fā)明的化合物優(yōu)選用于治療血脂異常。
糖尿病、肥胖癥和血脂異常(高血漿LDL-膽固醇和甘油三酯水平，低 HDL-膽固醇水平等)是一些被清楚地鑒定的心血管風(fēng)險(xiǎn)因素，它們使人易 于患心血管疾病(MensahM,2004)。還要考慮生活方式風(fēng)險(xiǎn)因素，例如使 用煙草、久坐的生活方式和不均衡的飲食。這些因素具有協(xié)同作用幾種 這些因素同時(shí)存在顯著增加心血管病的風(fēng)險(xiǎn)。因此，心血管疾病的總體風(fēng) 險(xiǎn)值得探討。2004年，工業(yè)化國家中血脂異常流行率達(dá)到人口的43.6%。 糖尿病患者的迅速增加目前正使糖尿病成為心血管流行病學(xué)的更重要的因 素?fù)?jù)估計(jì)，到2010年，7.6 %的人口將成為糖尿病患者(Fox-Tucker J, 2005 )。
根據(jù)國際動(dòng)脈粥樣硬化學(xué)會(huì)(International Atherosclerosis Society, 2003)，心血管疾病是工業(yè)化國家主要的死亡原因并且正在發(fā)展中國家變得 更加普遍。主要的心血管疾病是心臟病、腦缺血和外周動(dòng)脈疾病。
因此，這些數(shù)據(jù)證明應(yīng)采取有力的措施以顯著地減少心血管發(fā)病和發(fā) 病率，并且揭示尋找有效的治療方法并結(jié)合改變生活方式的必要性?？紤] 患心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)因素和它們的后果，這是全世界范圍的緊急需要。
因?yàn)楸景l(fā)明的化合物的PPAR激動(dòng)劑性質(zhì)，所以它們?cè)谂c脂質(zhì)和/或糖 代謝異常相關(guān)的疾病(pathologies)如糖尿病、肥胖癥、血脂異?；蛘哐装Y 的治療以及降低心血管總體風(fēng)險(xiǎn)方面特別令人感興趣。
已知PPARs (a、 y和S)涉及這類疾病(KotaBP等人，2005):因此，配體和受體被上市以治療這些疾病(Lefebvre P等人，2006)，而且各種選 擇性的或者非選擇性的PPAR調(diào)節(jié)劑、激動(dòng)劑或者拮抗劑目前正處于高度 開發(fā)中。對(duì)胰島素抵抗、肥胖癥、血脂異常、高血壓和/或炎癥具有有益效 果的PPAR調(diào)節(jié)劑可被用于代謝綜合征(或X綜合征)的治療(Liu Y和 Miller A， 2005)。
PPAR家族包括三種亞型，稱為a、 y和S (也稱為P)，各自由不同的基 因編碼。這些受體屬于細(xì)胞核受體和轉(zhuǎn)錄因子超家族，它們?cè)谂c某些脂肪 酸和/或它們的脂質(zhì)代謝產(chǎn)物接觸時(shí)被激活。激活的PPAR與9-順式維甲酸 受體(RXR或者類視黃質(zhì)X受體)形成異二聚體并與靶基因啟動(dòng)子的特定 應(yīng)答元件(PPRE或者過氧化物酶體增殖物應(yīng)答元件)結(jié)合，由此提供轉(zhuǎn)錄 控制。
PPARa控制(肝臟和肌肉的)脂質(zhì)代謝和葡萄糖的體內(nèi)穩(wěn)態(tài)，通過直 接控制編碼涉及脂質(zhì)體內(nèi)穩(wěn)態(tài)的蛋白質(zhì)的基因的轉(zhuǎn)錄來影響細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)和 糖類的代謝，具有抗炎和抗增殖效力，并且通過剌激膽固醇流出來防止膽 固醇在巨噬細(xì)胞中蓄積的致動(dòng)脈粥樣硬化效應(yīng)(Lefebvre P， Chinetti G， FruchartJC和StaelsB， 2006)。貝特類(非諾貝特、苯扎貝特、環(huán)丙貝特、 吉非貝齊)通過PPARcx用于臨床醫(yī)學(xué)，通過降低甘油三酯和提高HDL (高 密度脂蛋白)水平來治療某些血脂異常。
PPARy是脂肪形成的關(guān)鍵調(diào)節(jié)劑。而且，它參與成熟脂肪細(xì)胞的脂質(zhì)代 謝、葡萄糖體內(nèi)穩(wěn)態(tài)、特別是胰島素抵抗、炎癥、巨噬細(xì)胞膽固醇蓄積和 細(xì)胞增殖(Lehrke M和Lazar MA， 2005)。因此，PPARy在肥胖癥、胰島 素抵抗和糖尿病的發(fā)病機(jī)理中起作用。噻唑烷二酮類(羅格列酮、曲格列
酮等)是用于治療II型糖尿病的PPARY配體。
現(xiàn)已有PPARS配體(L-165041, GW501516目前正處在臨床開發(fā)中)， 但是目前沒有PPAR5配體被用作藥物。然而，這種受體是開發(fā)用于治療血 脂異常、動(dòng)脈粥樣硬化、肥胖癥和胰島素抵抗的可用藥物的具有吸引力的 目標(biāo)PPARS實(shí)際上參與脂質(zhì)和碳水化合物代謝的控制、能量平衡、神經(jīng) 變性、肥胖癥、巨噬泡沫細(xì)胞的形成和炎癥(GrossB等人，2005)。
除了 PPAR配體直接作用于脂質(zhì)和糖類代謝的調(diào)節(jié)，這些分子因?yàn)?PPAR的靶基因的極其多樣性而具有多效性的作用譜。這些多重性質(zhì)使PPAR成為對(duì)治療以下疾病和降低總體風(fēng)險(xiǎn)的令人感興趣的治療靶點(diǎn)動(dòng)脈 粥樣硬化、腦缺血、高血壓、與新血管形成有關(guān)的疾病(視網(wǎng)膜病變、糖 尿病等)、炎癥和自身免疫疾病(克羅恩病、銀屑病、多發(fā)性硬化、哮喘等)、 腫瘤病(癌發(fā)生等)、神經(jīng)變性疾病、與代謝綜合征相關(guān)的并發(fā)癥、胰島素 抵抗、糖尿病、血脂異常、心血管疾病、肥胖癥等。
因?yàn)楸景l(fā)明的化合物的PPAR激動(dòng)劑性質(zhì)，它們是用于改善與脂質(zhì)和/ 或糖類代謝異常相關(guān)的疾病特別是血脂異常的治療以及降低心血管總體風(fēng) 險(xiǎn)的有利的治療工具。
更一般地，通過同時(shí)作用于幾種調(diào)節(jié)過程，本發(fā)明的化合物是用于治
療以下疾病以及降低總體風(fēng)險(xiǎn)的有利治療手段與代謝綜合征有關(guān)的并發(fā) 癥(其特征是肥胖、特別是腹部肥胖、異常的血脂濃度(高甘油三酯水平
和/或低HDL膽固醇水平(血脂異常))、血糖升高和/或胰島素抵抗和高 血壓)、動(dòng)脈粥樣硬化、心血管疾病、胰島素抵抗、肥胖癥、高血壓、糖 尿病、血脂異常、心血管疾病、炎性疾病(哮喘等)、神經(jīng)變性疾病(阿 爾茨海默氏病等)、癌癥等。
本發(fā)明涉及衍生自1,3-二苯基丙垸衍生化合物的化合物，其具有以下通
式
x5 (I)
g巾
XI代表Rl或者G1-R1基團(tuán)； X2代表鹵素原子、R2或者G2-R2基團(tuán)； X3代表R3或者G3-R3基團(tuán)； X4代表鹵素原子、R4或者G4-R4基團(tuán)； X5代表R5或者G5-R5基團(tuán)； Rl代表氫原子或者非卣代垸基； R2代表氫原子或者非卣代烷基；
R3、 R4和R5相同或者不同，代表氫原子或者由一個(gè)或者多個(gè)組1或組2取代基取代的烷基或者非取代烷基；
Gl、 G2、 G3、 G4和G5相同或者不同，代表氧原子或者硫原子； X3、 X4或者X5中至少一個(gè)基團(tuán)與R3、 G3R3、 R4、 G4R4、 R5或者
G5R5X寸應(yīng)，其中
G3、 G4和G5如上所述，并且
R3、 R4和R5相同或者不同，代表由一個(gè)或者多個(gè)組1或組2取代基
取代的烷基； A代表
(i) CR6R7基團(tuán)，其中
R6和R7相同或者不同，代表氫原子、羥基、垸基或者-OR8基團(tuán)， R8定義如下，
(ii) 羰基(CO)，
(iii) 肟基(C-N-0-H)或者肟醚(C:N-0-R8)，
R8代表由芳基或者環(huán)烷基取代的烷基或者非取代烷基； D代表
(i) 與兩個(gè)氫原子連接的碳原子(CH2)，
(ii) 與氫原子和G2 二者連接以形成氧化或者硫化雜環(huán)的碳原子； 組1取代基選自-COOR9和-CONR9R10;
組2取代基選g-S03H和-SO2NR9R10;
R9、 R10和R5相同或者不同，代表氫原子或者由至少一個(gè)組1或組2 取代基取代的烷基或者非取代烷基；
除了如下通式(I)的化合物以外所述化合物中A代表-CR6R7基團(tuán)， R6和R7代表氫原子，并且所述化合物中基團(tuán)X1、 X2、 X3、 X4禾[1/或X5 中至少有三個(gè)代表氫原子；
其純立體異構(gòu)體(非對(duì)映異構(gòu)體、對(duì)映異構(gòu)體)或者混合立體異構(gòu)體、 外消旋混合物、幾何異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、鹽、水合物、溶劑合物、固體 形式以及它們的混合物。
在本發(fā)明的范圍內(nèi)，術(shù)語"烷基"指飽和的、直鏈、支鏈或者環(huán)狀的、鹵 代或者非鹵代的烴基，特別是具有1-24、優(yōu)選l、 2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9 或者10個(gè)碳原子的烴基，例如甲基、三氟甲基、乙基、正丙基、異丙基、
10正丁基、異丁基、叔丁基、仲丁基、戊基、新戊基、正己基或者環(huán)己基。
術(shù)語"環(huán)烷基"指如上所定義的垸基并且形成至少一個(gè)環(huán)(例如具有 3-8個(gè)碳原子的環(huán)垸基環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基和環(huán)辛 基)。
術(shù)語"烷氧基"指通過氧原子(醚鍵)的方式連接到分子上的烷基鏈。所 述烷基鏈對(duì)應(yīng)于上述定義?？商峁┑睦邮羌籽趸⑷籽趸?、乙氧基、 正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、叔丁氧基、仲丁氧基或者己 氧基。
術(shù)語"芳基"指優(yōu)選包含5-14、有利地包含6-14個(gè)碳原子的芳族基團(tuán)， 其可能插入一個(gè)或者多個(gè)選自N、 O、 S或者P的雜原子(更具體地稱為"雜 芳基")。它們通常是單環(huán)或者雙環(huán)，而且有利地包含6-14個(gè)碳原子，例如 苯基、a-萘基、(3-萘基、蒽基或者芴基。
術(shù)語"氧化或者硫化雜環(huán)"指插入一個(gè)或者多個(gè)選自O(shè)和S的雜原子的 如上定義的環(huán)垸基?？梢砸玫睦佑朽玎蛘哌拎?br> 鹵素原子被理解為溴原子、氯原子、氟原子或者碘原子。
非鹵代烷基是不存在鹵素原子的如上定義的烷基。
因此，至少存在一個(gè)與R3、 G3R3、 R4、 G4R4、 R5或者G5R5式對(duì)應(yīng) 的X3、 X4或者X5基團(tuán)的通式(I)化合物(其中G3、 G4和G5如上所述， 并且R3、 R4和R5相同或者不同，代表由一個(gè)或者多個(gè)組1或組2取代基 取代的烷基)因此具有至少一個(gè)分別代表由一個(gè)或者多個(gè)組1或組2取代 基取代的垸基的X3、 X4或者X5的R3、 R4和R5基團(tuán)。
本發(fā)明的一個(gè)具體方面涉及通式(I)的化合物，其中A代表羰基(CO)。
本發(fā)明的另一個(gè)具體方面涉及通式(I)的化合物，其中，A代表躬基 (C:N-0-H)或者肟醚(C-N-0-R8)，并且R8代表被芳基或者環(huán)烷基取代的烷 基或者非取代烷基。優(yōu)選地，R8代表甲基。
本發(fā)明的另一個(gè)具體方面涉及通式(I)的化合物，其中，A代表CH2基團(tuán)。
本發(fā)明的另一個(gè)具體方面涉及通式(I)的化合物，其中，A不代表CH2 基團(tuán)。
本發(fā)明的另一個(gè)具體方面涉及通式(I)的化合物，其中，A代表-CR6R7基團(tuán)，R6代表氫原子，并且R7代表羥基、烷基或者-OR8基團(tuán)，R8代表 被芳基或者環(huán)垸基取代的烷基或者非取代烷基。
優(yōu)選地，本發(fā)明涉及通式(I)的化合物，其中，A代表-CR6R7基團(tuán)，R6 代表氫原子，并且R7代表羥基。
本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選方面涉及通式(I)的化合物，其中，A代表-CR6R7 基團(tuán)，R6代表氫原子，并且R7代表-OR8基團(tuán)，R8如上定義。優(yōu)選地， R8代表優(yōu)選包含l、 2、 3或者4個(gè)碳原子的烷基。甚至更優(yōu)選地，R8代表 由芳基或者環(huán)芳基取代的烷基，所述芳基或者環(huán)烷基特別地包含6個(gè)碳原 子。
本發(fā)明的另一個(gè)具體方面涉及通式(I)的化合物，其中，A代表-CR6R7 基團(tuán)，R6和R7相同或者不同，代表羥基、垸基或者-OR8基團(tuán)，R8代表 被芳基或者環(huán)烷基取代的烷基或者非取代烷基。
本發(fā)明的另一個(gè)具體主題涉及通式(I)的化合物，其中，X3和X5相同 或者不同，分別代表R3和R5基團(tuán)，具體地，R3和R5代表氫原子。
本發(fā)明的另一個(gè)具體主題涉及通式(I)的化合物，其中，X3和X5相同 或者不同，分別代表R3和R5基團(tuán)，R3和R5相同或者不同，代表由一個(gè) 或者多個(gè)如上定義的組1或組2取代基取代的烷基或者非取代烷基。
優(yōu)選地，X3和X5相同或者不同，分別代表R3和R5基團(tuán)，R3禾口 R5 相同或者不同，代表優(yōu)選包含1、 2、 3或者4碳原子的非取代烷基。甚至 更優(yōu)選地，X3和X5相同或者不同，代表甲基。
本發(fā)明的另一個(gè)具體方面涉及通式(I)的化合物，其中，X3和X5相同 或者不同，分別代表G3R3或者G5R5基團(tuán)，G3和G5如上所述，并且R3 和R5相同或者不同，代表氫原子。
本發(fā)明的另一個(gè)具體方面涉及通式(I)的化合物，其中，X3和X5相同 或者不同，分別代表G3R3或者G5R5基團(tuán)，G3和G5如上所述，并且R3 和R5相同或者不同，代表由一個(gè)或者多個(gè)如上定義的組1或組2取代基取 代的烷基或者非取代烷基。
本發(fā)明的另一個(gè)具體方面涉及通式(I)的化合物，其中，X3和X5相同 或者不同，分別代表G3R3或者G5R5基團(tuán)，G3和G5如上所述，并且R3 和R5相同或者不同，代表由一個(gè)或者多個(gè)如上定義的組1或組2取代基取代的烷基。
本發(fā)明的另一個(gè)具體方面涉及通式(I)的化合物，其中X4代表鹵素原子
(溴、氯、氟、碘)。
本發(fā)明的另一個(gè)具體方面涉及通式(I)的化合物，其中，X4代表R4或 者G4-R4基團(tuán)，G4如上定義，并且R4代表氫原子。
本發(fā)明的另一個(gè)具體方面涉及通式(I)的化合物，其中，X4代表R4或 者G4-R4基團(tuán)，G4如上定義，并且R4代表被一個(gè)或者多個(gè)如上定義的組 1或組2取代基取代的垸基或者非取代烷基。
本發(fā)明的另一個(gè)具體方面涉及通式(I)的化合物，其中，X4代表R4或 者G4-R4基團(tuán)，G4如上定義，并且R4代表被一個(gè)或者多個(gè)如上定義的組 1或組2取代基取代的垸基。優(yōu)選地，G4代表氧原子和/或R4代表被組1 取代基、特別是-COOH取代的烷基。甚至更優(yōu)選地，X4代 表-OC(CH3)2COOH、 -OCH2COOH或者-SC(CH3)2COOH基團(tuán)。
本發(fā)明的另一個(gè)具體主題涉及通式(I)的化合物，其中，所述X3、 X4 和X5中僅一個(gè)代表R3、 R4、 R5、 G3R3、 G4R4或者G5R5基團(tuán)，G3、 G4 和G5如上所述，并且R3、 R4和R5相同或者不同，代表被一個(gè)或者多個(gè) 如上定義的組1或組2取代基取代的烷基。
本發(fā)明的另一個(gè)具體主題涉及通式(I)的化合物，其中，所述X3、 X4 和X5中僅X4代表R4或者G4R4， G4如上定義，并且R4代表被一個(gè)或者 多個(gè)如上定義的組1或組2取代基取代的烷基。
本發(fā)明的另一個(gè)具體主題涉及通式(I)的化合物，其中，所述X3、 X4 和X5中的兩個(gè)或者三個(gè)代表R3、 R4、 R5、 G3R3、 G4R4或者G5R5基團(tuán)， G3、 G4和G5如上所述，并且R3、 R4和R5相同或者不同，代表被一個(gè) 或者多個(gè)如上定義的組1或組2取代基取代的烷基。
本發(fā)明的另一個(gè)具體方面涉及通式(I)的化合物，其中，G3、 G4和域 G5代表氧原子。
優(yōu)選地，本發(fā)明涉及通式(I)的化合物，其中，所述X3、 X4禾口X5中僅 一個(gè)與G3R3、 G4R4或者G5R5式對(duì)應(yīng)，G3、 G4和G5代表氧原子，并且 R3、 R4或者R5相同或者不同，代表被一個(gè)或者多個(gè)如上定義的組1或組 2取代基取代的烷基。甚至更優(yōu)選地，本發(fā)明涉及通式(I)的化合物，其中，所述X3、 X4和 X5中僅X4基團(tuán)與G4R4式對(duì)應(yīng)，G4代表氫原子，并且R4代表被一個(gè)或 者多個(gè)如上定義的組1或組2取代基取代的烷基。
本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選方面涉及通式(I)的化合物，其中，所述X3、 X4 和X5中兩個(gè)或者三個(gè)與G3R3、 G4R4或者G5R5式對(duì)應(yīng)，G3、 G4和G5 代表氧原子，并且R3、 R4和R5代表被一個(gè)或者多個(gè)如上定義的組1或組 2取代基取代的烷基。
本發(fā)明的具體的方面涉及通式(I)的化合物，其中，所述取代基選自組l 取代基。優(yōu)選地，組l取代基是-COOR9類，R9如上定義并且優(yōu)選代表氫 原子或者包含l、 2、 3、 4、 5或者6個(gè)碳原子的烷基。
本發(fā)明的具體方面涉及通式(I)的化合物，其中，所述X3、 X4和X5中 僅一個(gè)與式-OC(CH3)2COOR9對(duì)應(yīng)，R9如上定義并且優(yōu)選代表氫原子或者 包含l、 2、 3、 4、 5或者6個(gè)碳原子的烷基。
甚至更優(yōu)地，X4代表-OC(CH3)2COOR9基團(tuán)，R9如上定義并且優(yōu)選代 表氫原子或者包含l、 2、 3、 4、 5或者6個(gè)碳原子的烷基。
本發(fā)明的一個(gè)具體方面涉及通式(I)的化合物，其中，X1代表R1或者 G1R1羰基，Gl如上定義，并且R1代表非鹵代垸基。
例如，XI代表-OCH2CH2CH3、 -5012(:}12013基團(tuán)或者存在7個(gè)碳原子 的垸基。
優(yōu)選地，Rl代表包含l、 2或者3個(gè)碳原子的非鹵代烷基。
甚至更優(yōu)地，Xl代表-C&、 -SCF3、 -0€ 3基團(tuán)。
本發(fā)明的一個(gè)具體方面涉及通式(I)的化合物，其中，Xl代表氫原子。 優(yōu)選地，當(dāng)X1代表氫原子時(shí)，則X2與氫原子不同。
本發(fā)明的一個(gè)具體方面涉及通式(I)的化合物，其中，X2代表氫原子。 優(yōu)選地，當(dāng)X2代表氫原子時(shí)，則X1與氫原子不同。
本發(fā)明的具體方面涉及通式(I)的化合物，其中，X2代表鹵素原子(溴、 氯、氟、碘)。
本發(fā)明的具體主題涉及通式(I)的化合物，其中，X2代表R2或者G2R2 基團(tuán)，R2和G2如上所述。優(yōu)選地，R2代表氫原子、CF3基團(tuán)或者包含1、 2、 3、 4、 5、 6、 7或者8個(gè)碳原子的垸基。甚至更優(yōu)選地，X2代表-OR基團(tuán)，R代表烷基、-CF3、 -OCF3、 -OH。
本發(fā)明的具體方面涉及通式(I)的化合物，其中，D代表CH2基團(tuán)。 本發(fā)明的另一個(gè)具體主題涉及通式(I)的化合物，其中，G2和D形成氧
化或者硫化雜環(huán)以形成下式的化合物
<formula>formula see original document page 15</formula>
優(yōu)選地，G2在通式(II)中代表硫原子。
根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施方案，優(yōu)選的化合物如下所示
化合物1: 2-[2，6-二甲基-4-[3-[4-(甲硫基)苯基]-3-氧代丙基]苯氧基]-2-
化合物2: 2-[2,6-二甲基-4-[3-[2-(己氧基)苯基]-3-氧代丙基]苯氧基]畫2-
甲基丙酸
化合物3:2-「2,6-二甲基-4-「3-[4"甲硫某)苯某]-3-節(jié)氧某丙某]蘢氧某]- ,
甲基丙酸<formula>formula see original document page 15</formula>甲基丙化合物4: 2-[2，6-二甲基-4-[3-[4-(甲硫基)苯基]-3-羥基丙基]苯氧基]-2-
甲基丙酸
OH
化合物5: 2-[2，6-二甲基-4-[3-[4-(甲硫基)苯基]-3-甲氧亞胺基丙基]苯氧 基]-2-甲基丙酸
化合物6: 2-[2,6-二甲基-4-[3-[4-(甲氧基)苯基]-3-氧代丙基]苯氧基]-2-
甲基丙酸
o
化合物7: 2-[2,6-二甲基-4-[3-[4-(甲硫基)苯基]-3-氧代丙基]苯氧基]-2-
甲基乙酸
o
化合物8: 2-[2,6-二甲基-4-[3-[4-(丙氧基)苯基]-3-氧代丙基]苯氧基]-2-甲基丙酸<formula>formula see original document page 17</formula>化合物9: 2-[2-甲基-4-[3-[4-(庚基)苯基]-3-氧代丙基]苯氧基]-2-甲基丙
化合物10: 2-[2,6-二甲基-4-[3_[4-(甲硫基)苯基]-3-乙氧基丙基]苯氧 基]-2-甲基丙酸
化合物11 基]-2-甲基丙酸
2-[2,6-二甲基-4-[3-[2-(三氟甲基)苯基]-3-氧代丙基]苯氧
化合物12: 2-[2，6-二甲基-4-[3-[4-(甲硫基)苯基]丙基]苯氧基]-2-甲基丙O
化合物13: 2-[2，6-二甲基-4-[3-[4-(甲硫基)苯基]-3-氧代丙基]苯氧基]-2-
甲基丙酸異丙酯
o
化合物14: 2-[2，6-二甲基-4-[3-[4-(甲硫基)苯基]-3-肟基丙基]苯氧基]-2-
甲基丙酸
o
N
一
0H
化合物15: 2-[2，6-二甲基-4-[3-[4-(丙氧基)苯基]-3-羥基丙基]苯氧基]-2-
甲基丙酸
OH
化合物16: 2-[2,6-二甲基-4-[3-[2-(三氟甲氧基)苯萄-3-氧代丙基]苯氧 基]-2-甲基丙酸
o化合物17: 2-[2,6-: 基]-2-甲基丙酸
甲基-4-[3-[4-(甲硫基)苯基]-3-甲氧基丙基]苯氧
化合物18: 2-[2，6-二甲基-4-[2,3-二氫-4H-l-苯并噻喃-4-酮-2-基]苯氧 基]-2-甲基丙酸
化合物19: 2-[2-甲基-4-[3-[4-(丙硫基)苯基]-3-氧代丙基]苯氧基]-2-甲基
丙酸
化合物20: 2-[3-[3-[4-(甲硫基)苯基]-3-氧代丙基]苯氧基]-2-甲基丙酸
化合物21: 2-[4-[3-[4-(甲基苯基]-3-氧代丙基]苯氧基]-2-甲基丙酸0
化合物22: 2-[2,6-二甲基-4-[3-[4-(甲硫基)苯基]-3-環(huán)己基甲氧基丙基] 苯氧基]-2-甲基丙酸
化合物23: 2-[2，6-二甲基-4-[3-[4-(甲硫基)苯基]-3-丁氧基丙基]苯氧 基]-2-甲基丙酸
化合物24: 2-[2,6-二甲基-4-[3-[4-(甲硫基)苯基]-3-異丙氧基丙基]苯氧 基]-2-甲基丙酸
化合物25: 2-[2，6-二甲基-4-[3-[4-(甲硫基)苯基]-3-環(huán)己基乙氧基丙基] 苯氧基]-2-甲基丙酸甚至更優(yōu)選地，本發(fā)明優(yōu)選涉及以下化合物
化合物1: 2-[2,6-二甲基-4-[3-[4-(甲硫基)苯基]-3-氧代丙基]苯氧基]-2-
甲基丙酸；
化合物2: 2-[2,6-二甲基-4-[3-[2-(己氧基)苯基]-3-氧代丙基]苯氧基]-2-
甲基丙酸；
化合物8: 2-[2,6-二甲基-4-[3-[4-(丙氧基)苯基]-3-氧代丙基]苯氧基]-2-
甲基丙酸；
化合物13: 2-[2，6-二甲基-4-[3-[4-(甲硫基)苯基]-3-氧代丙基]苯氧基]-2-
甲基丙酸異丙酯；
化合物1。 2-[2，6-二甲基-4-[3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-3-氧代丙基]苯氧 基]-2-甲基丙酸。
本發(fā)明的化合物包括其純立體異構(gòu)體(非對(duì)映異構(gòu)體、對(duì)映異構(gòu)體) 或者混合立體異構(gòu)體、其外消旋混合物、其幾何異構(gòu)體、其互變異構(gòu)體、 其鹽、其水合物、其溶劑合物、其固體形式以及它們的混合物。
本發(fā)明的化合物可以包含一個(gè)或者幾個(gè)不對(duì)稱中心。本發(fā)明包括純的 立體異構(gòu)體(非對(duì)映異構(gòu)體、對(duì)映異構(gòu)體)或者混合立體異構(gòu)體，以及外 消旋混合物和幾何異構(gòu)體。當(dāng)需要對(duì)映體純(或者富集)的產(chǎn)物時(shí)，其可 以通過純化最終產(chǎn)物或者手性中間體，或者通過根據(jù)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員 已知的典型方法(比如使用試劑和手性催化劑)進(jìn)行不對(duì)稱合成來得到。 本發(fā)明的一些化合物可以具有不同的穩(wěn)定的互變異構(gòu)形式，并且所有這些 形式以及它們的混合物被包括在本發(fā)明中。
本發(fā)明還涉及本發(fā)明化合物的"藥學(xué)上可接受"的鹽。通常，該術(shù)語指得 自有機(jī)或無機(jī)堿或酸的有輕微毒性或者無毒性的鹽。這些鹽可以在本發(fā)明 的化合物的最后純化步驟中獲得或者通過將所述鹽包含在先前己純化的化 合物中而獲得。
21本發(fā)明的一些化合物和它們的鹽可能有幾種穩(wěn)定的固體形式。本發(fā)明 包括本發(fā)明化合物的所有固體形式，包括無定形、多形、單晶和多晶形式。
本發(fā)明的化合物可以以游離形式或者溶劑化(例如用藥學(xué)上可接受的 溶劑如水(水合物)或者乙醇)的形式存在。
用一種或者多種同位素標(biāo)記的本發(fā)明的化合物也包括在本發(fā)明中這 些化合物在結(jié)構(gòu)上相同，而不同之處在于結(jié)構(gòu)中的至少一個(gè)原子被同位素 (放射性的或者非放射性的)代替?？梢园ㄔ诒景l(fā)明的化合物的結(jié)構(gòu)中
的同位素的例子可以選自氫、碳、氧和硫，例如分別為"H、 3H、 13C、 14C、 I80、 170、 35S。特別優(yōu)選放射性同位素，因?yàn)樗鼈冊(cè)谒鑫镔|(zhì)的體內(nèi)生物 利用度的研究范圍內(nèi)容易制備和檢測(cè)。特別優(yōu)選重同位素(例如211),因?yàn)?它們?cè)诜治鲅芯恐杏米鲀?nèi)標(biāo)。
本發(fā)明還涉及合成如上定義的通式(I)的化合物的方法。
本發(fā)明的方法包括
-在堿性或者酸性介質(zhì)中，至少一種式(A)化合物與至少一種式(B)化合 物的混合的步驟(i)，
(A)
(B)
其中，XI、 X2、 X3、 X4和X5具有以上給出的定義，
-然后，所得化合物的還原步驟(ii)，
-以及最后，使官能團(tuán)連接的引入步驟(iii)。
在酸性或者堿性介質(zhì)中的步驟(i)和步驟(ii)的實(shí)驗(yàn)條件對(duì)于本領(lǐng)域的技 術(shù)人員來說容易實(shí)現(xiàn)并且可以有很大的變化。合成的步驟具體可以是本發(fā) 明的"實(shí)施例"下描述的那些步驟。
兩種化合物的混合優(yōu)選按化學(xué)計(jì)量法進(jìn)行。其優(yōu)選在室溫(約18°C-25 °C)和正常大氣壓下進(jìn)行。
在堿性介質(zhì)中，優(yōu)選反應(yīng)在強(qiáng)堿例如堿金屬氫氧化物(如氫氧化鈉)或者堿金屬醇鹽(如乙醇鈉)的存在下進(jìn)行。
在酸性介質(zhì)中，優(yōu)選反應(yīng)在強(qiáng)酸例如鹽酸的存在下進(jìn)行。 所得化合物可以通過本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的經(jīng)典方法來分離。然 后，它們可以被用作例如藥物或者化妝品。
本發(fā)明的另一個(gè)主題涉及如上所述的作為藥物的化合物。 本發(fā)明的另一個(gè)主題涉及藥物組合物，所述組合物在藥學(xué)上可接受的 載體中包含至少一種如上所述的化合物，所述化合物可能與一種或者多種 其它的治療和/或化妝活性組份結(jié)合。它優(yōu)選是用于與代謝綜合征相關(guān)的并 發(fā)癥、胰島素抵抗、糖尿病、血脂異常、動(dòng)脈粥樣硬化、心血管疾病、肥 胖癥、高血壓、炎性疾病(哮喘等)、神經(jīng)變性疾病(阿爾茨海默氏病等) 或者癌癥的治療的藥物組合物。本發(fā)明的藥物組合物優(yōu)選用于治療血脂異 常。
它優(yōu)選是通過降低總體風(fēng)險(xiǎn)來治療與脂質(zhì)和/或糖類代謝異常(高血脂、
n型糖尿病、肥胖癥等)相關(guān)的心血管風(fēng)險(xiǎn)因素的藥物組合物。
本發(fā)明的另一個(gè)主題涉及包含至少一種如上所述化合物的營養(yǎng)組合物。
本發(fā)明的另一個(gè)主題涉及至少一種如上所述的化合物用于制備用于治 療多種疾病，特別是與代謝異常相關(guān)的疾病(比如血脂異常)的藥物組合 物的用途。更一般地，本發(fā)明的主題涉及至少一種上述的化合物用于制備 用于治療與脂質(zhì)和/或糖代謝異常相關(guān)的心血管風(fēng)險(xiǎn)因素并由此以降低總體 風(fēng)險(xiǎn)的藥物組合物的用途。
例如(但非限制性地)，本發(fā)明的化合物可有利地與目前市場(chǎng)上可獲得
的或者正在開發(fā)的其它治療和/或化妝藥劑聯(lián)合給藥，例如
-抗糖尿病藥促分泌劑(磺酰脲類(格列本脲、格列美脲、格列齊特 等)和格列奈類(glinides)(瑞格列奈、那格列奈等))、oc-葡糖苷酶抑 制劑、PPARy激動(dòng)劑(噻唑烷二酮類如羅格列酮、吡格列酮)、混合PPARa/y 激動(dòng)劑(替賽格列他(tesaglitazar)、莫格列他(mumglitazar))、全PPAR (同時(shí)激活三種PPAR亞型的化合物)、雙胍(二甲雙胍)、二肽基肽酶 IV抑制劑(MK-431、維格列汀(vildagliptin))、高血糖素樣肽-1 (GLP-1) 激動(dòng)劑(依澤那太)等。-胰島素
-降脂和/或降膽固醇分子貝特類(非諾貝特、吉非貝齊)、HMGCoA 還原酶或者羥基甲基戊二酰輔酶A還原酶抑制劑(他汀類，例如阿托伐他 汀、辛伐他汀、氟伐他汀)、膽固醇吸收抑制劑(依折麥布、植物甾醇類)、 CETP或者膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白抑制劑(托徹普(torcetmpib) ) 、 ACAT或 者?；o酶A膽固醇酰基轉(zhuǎn)移酶抑制劑(阿伐麥布、依魯麥布(eflucimibe))、 MTP (微粒體甘油三酯轉(zhuǎn)移蛋白)抑制劑、膽汁酸多價(jià)螯合劑(考來烯胺)、 維生素E、多不飽和脂肪酸、"-3脂肪酸、煙酸衍生物(煙酸)等。
-抗高血壓劑和降壓劑ACE (血管緊張素轉(zhuǎn)換酶)抑制劑(卡托普利、 依那普利、雷米普利或者喹那普利)、血管緊張素II受體抑制劑(氯沙坦、 纈沙坦、替米沙坦、埃坡沙坦(eposartan)、厄貝沙坦等)、卩阻斷劑(阿 替洛爾、美托洛爾、拉貝洛爾、普萘洛爾)、噻嗪類和非噻嗪類利尿劑(呋 塞米、吲達(dá)帕胺、雙氫氯噻嗪、抗醛固酮類)、血管擴(kuò)張劑、鈣通道阻滯 劑(硝苯地平、非洛地平、氨氯地平、地爾硫卓或者維拉帕米)等。
-抗血小板劑阿司匹林、噻氯匹定、雙嘧達(dá)莫、氯吡格雷、氟比洛芬等。
-減肥藥西布曲明、脂肪酶抑制劑(奧利司他)、PPAR5、大麻素 CB1受體拮抗劑(利莫那班)等。
-抗炎劑例如，腎上腺皮質(zhì)激素(潑尼松、倍他米松、地塞米松、潑 尼松龍、甲潑尼龍、氫化可的松等)、NSAID或者得自吲哚的非甾體抗炎 藥(吲哚美辛、舒林酸)、芳基烷酸(arylcarboxylic)類NSAID (非甾體 抗炎藥)(噻洛芬酸、雙氯芬酸、依托度酸、氟比洛芬、布洛芬、酮洛芬、 萘普生、萘丁美酮、阿明洛芬)、得自昔康的NSAID (非甾體抗炎藥)(美 洛昔康、吡羅昔康、替諾昔康)、來自芬那酯類的NSAID (非甾體抗炎藥)、 COX2選擇性抑制劑(塞來昔布、羅非昔布)等。
-抗氧化劑例如普羅布考等。
-用于治療心功能不全的藥劑噻嗪類和非噻嗪類利尿劑(呋塞米、口引 達(dá)帕胺、氫氯噻嗪、抗醛甾酮類)、ACE抑制劑(卡托普利、依那普利、 雷米普利或者喹那普利)、洋地黃藥物(地高辛、洋地黃毒苷)、P阻斷劑
24(阿替洛爾、美托洛爾、拉貝洛爾、普萘洛爾)、磷酸二酯酶抑制劑(依 諾昔酮、米力農(nóng))等。
-用于治療冠狀動(dòng)脈功能不全的藥劑卩阻斷劑(阿替洛爾、美托洛爾、 拉貝洛爾、普萘洛爾)、鈣通道阻滯劑(硝苯地平、非洛地平或者氨氯地 平、芐普地兒、地爾硫卓或者維拉帕米)、NO (—氧化氮)供體(三硝基 甘油、硝酸異山梨酯、嗎多明)、胺碘酮等。
-抗癌藥細(xì)胞毒素劑(與DNA (脫氧核糖核酸)相互作用的藥物、
烷化劑、順鉑及衍生物)、殺細(xì)胞藥(GnRH (促性腺激素釋放激素)類似 物、生長抑素類似物、黃體酮、抗雌激素藥、芳香酶抑制劑等)、免疫應(yīng) 答調(diào)節(jié)劑(干擾素類、IL2等))等。
-平喘藥，例如支氣管擴(kuò)張劑((32受體激動(dòng)劑)、腎上腺皮質(zhì)激素、色 苷酸鹽、白三烯受體拮抗劑(孟魯司特)等。
-用于治療皮膚病如銀屑病和皮炎的腎上腺皮質(zhì)激素
-血管擴(kuò)張劑和/或抗局部缺血藥(丁咯地兒、銀杏葉提取物、萘呋胺、 己酮可可堿、吡貝地爾)等。
本發(fā)明還涉及用于治療與脂質(zhì)和/或糖代謝相關(guān)的疾病的方法，所述方 法包括向個(gè)體、特別是人給藥有效量的如上定義的化合物或者藥物組合物。 在本發(fā)明的范圍內(nèi)，術(shù)語"有效量"指足以產(chǎn)生期望的生物學(xué)效果的化合物 量。在本發(fā)明的范圍內(nèi)，術(shù)語"個(gè)體"指哺乳動(dòng)物并且特別地指人。
術(shù)語"治療"指治愈性的、對(duì)癥的或者預(yù)防性的治療。因此，本發(fā)明的化 合物可以用于具有確診疾病的個(gè)體(例如哺乳動(dòng)物，特別是人類)。本發(fā)明 的化合物也可以用于延遲或者減慢所述疾病的進(jìn)展或者防止疾病的進(jìn)一步 進(jìn)展，由此改善患者的病癥。最后，本發(fā)明的化合物可以給藥于通?？赡?罹患所述疾病或者具有罹患所述疾病的重大風(fēng)險(xiǎn)的健康個(gè)體。
本發(fā)明的藥物組合物有利地包含一種或者多種制藥范圍內(nèi)可接受的賦 形劑或者載體(比如與藥物用途相容的和本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員熟知的鹽 水溶液、生理溶液、等滲溶液等)。該組合物可以包含一種或者多種選自分 散劑、增溶劑、穩(wěn)定劑、防腐劑等的試劑或者載體。用于這些制劑的試劑 或者載體(液體和/或可注射的和/或固體)具體是甲基纖維素、羥甲基纖維 素、羧甲基纖維素、聚山梨醇80、甘露醇、明膠、乳糖、植物油、阿拉伯
25膠、脂質(zhì)體等。所述組合物可以最終通過確保延長釋放和/或緩釋的蓋侖制
劑(galenic forms)或者蓋倫裝置(galenic devices)的方式被配制成可注射 混懸劑、凝膠、油、丸劑、栓劑、散劑、軟膠囊、膠囊、氣霧劑等形式。 對(duì)于這類制劑，可以有利地使用例如纖維素、碳酸鹽或者淀粉的試劑。
本發(fā)明的化合物或者組合物可以以不同的方式和不同的形式給藥。因 此，例如，它們可以通過全身性的方式、經(jīng)口、腸胃外、通過吸入、或者 通過注射例如由靜脈內(nèi)地、肌肉注射、皮下注射、經(jīng)皮途徑、動(dòng)脈內(nèi)注射 等。對(duì)于注射，所述化合物通常以可以使用例如注射器或者灌注來注射的 液體混懸劑的形式保存(conditioned) o
應(yīng)該理解，關(guān)于所述注射的速度和/或劑量可以由本領(lǐng)域的普通技術(shù)人 員根據(jù)患者、病理和給藥方式等來調(diào)整。通常，所述化合物以每次給藥1 yg 至2g、優(yōu)選每次給藥0.1mg至lg來給藥。如果需要，可以每天給藥，甚 至一天兒次。而且，本發(fā)明的組合物可包括其它藥劑或者活性組份。


這些附圖中使用的縮寫
-Cpd-化合物；
-Ctrl-對(duì)照；
-mpk — mg/kg沃；
-LDL-膽固醇=低密度脂蛋白膽固醇； -HDL-膽固醇=高密度脂蛋白膽固醇； -VLDL-膽固醇==極低密度脂蛋白膽固醇；
圖1-1至1-66:根據(jù)所述劑量的本發(fā)明化合物的PPAR激活性質(zhì)的體 外評(píng)價(jià)
使用猴腎成纖維細(xì)胞系(COS-7)，通過測(cè)定嵌合體的轉(zhuǎn)錄活性來體外 評(píng)價(jià)PPAR的激活，所述嵌合體由酵母Gal4轉(zhuǎn)錄因子的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域 和不同的PPAR配體的結(jié)合結(jié)構(gòu)域組成。
所述化合物以10-7至100 nM的劑量對(duì)Gal4-PPARot、 y和5嵌合體進(jìn)行 測(cè)試。測(cè)量每種條件下的誘導(dǎo)因子，即所述化合物誘導(dǎo)的發(fā)光與對(duì)照誘導(dǎo)的發(fā)光之比。誘導(dǎo)因子越高，則所述化合物具有越多的PPAR激活性質(zhì)。 -圖l-l、 1-2、 1-3:化合物1的PPARa、 y、 s激活性質(zhì)的體外評(píng)價(jià)； -圖1-4、 1-5、 1-6:化合物2的PPARa、 y、 5激活性質(zhì)的體外評(píng)價(jià)； -圖1-7、 1-8、 1-9:化合物3的PPARa、 y、 s激活性質(zhì)的體外評(píng)價(jià)； -圖1-10、 1-11、 1-12:化合物4的PPARa、 y、 s激活性質(zhì)的體外評(píng)價(jià); -圖1-13、 1-14、 1-15:化合物5的PPARa、 y、 s激活性質(zhì)的體外評(píng)價(jià); -圖1-16、 1-17、 1-18:化合物6的PPARa、 y、 5激活性質(zhì)的體外評(píng)價(jià); -圖1-19、 1-20、 l-2h化合物7的PPARa、 y、 5激活性質(zhì)的體外評(píng)價(jià); -圖1-22、 1-23、 1-24:化合物8的PPARa、 y、 s激活性質(zhì)的體外評(píng)價(jià); -圖1-25、 1-26、 1-27:化合物9的PPARa、 y、 s激活性質(zhì)的體外評(píng)價(jià); -圖1-28、 1-29、 1-30:化合物10的PPARa、 Y、 5激活性質(zhì)的體外評(píng)
價(jià)；
-圖1-31、 1-32、 1-33:化合物ll的PPARa、 y、 5激活性質(zhì)的體外評(píng)
價(jià)；
-圖1-34、 1-35、 1-36:化合物12的PPARa、 y、 5激活性質(zhì)的體外評(píng)
價(jià)；
-圖1-37、 1-38、 1-39:化合物14的PPARa、 y、 s激活性質(zhì)的體外評(píng)
價(jià)；
-圖1-40、 1-41、 1-42:化合物17的PPARa、 y、 5激活性質(zhì)的體外評(píng)
價(jià)；
-圖1-43、 1-44、 1-45:化合物18的PPARa、 Y、 5激活性質(zhì)的體外評(píng)
價(jià)；
-圖1-46、 1-47、 1-48:化合物19的PPARa、 y、 5激活性質(zhì)的體外評(píng)
價(jià)；
-圖1-49、 1-50、 1-51:化合物20的PPARa、 y、 5激活性質(zhì)的體外評(píng)
價(jià)；
-圖1-52、 1-53、 1-54:化合物21的PPARa、 y、 5激活性質(zhì)的體外評(píng)
價(jià)；
-圖1-55、 1-56、 1-57:化合物22的PPARa、 y、 5激活性質(zhì)的體外評(píng)
價(jià)；-圖1-58、 1-59、 1-60:化合物23的PPARa、 y、 s激活性質(zhì)的體外評(píng)
價(jià)；
畫圖1-61、 1-62、 1-63:化合物24的PPARoc、 y、 s激活性質(zhì)的體外評(píng)
價(jià)；
-圖1-64、 1-65、 1-66:化合物25的PPARa、 y、 s激活性質(zhì)的體外評(píng)
價(jià)；
圖2-1至2-9:在ApoE2/E2小鼠上進(jìn)行的本發(fā)明化合物的降血脂性質(zhì) 和刺激HDL-膽固醇合成的性質(zhì)的體內(nèi)評(píng)價(jià)
在體內(nèi)評(píng)價(jià)本發(fā)明的化合物對(duì)通過E2亞型載脂蛋白E (E2/E2)人源 化的小鼠的影響。
在用本發(fā)明的化合物口服治療8或14天后，測(cè)定血脂異常的E2/E2小 鼠的總膽固醇比率、甘油三酯比率和血漿游離脂肪酸比率。將這些參數(shù)與 得自對(duì)照動(dòng)物(未用本發(fā)明的化合物治療的動(dòng)物)的參數(shù)作比較測(cè)得的 差異顯示本發(fā)明的化合物的降血脂效力。
-圖2-1:用化合物1以50mpk給藥治療8天后的血漿膽固醇水平； -圖2-2:用化合物1以50mpk給藥治療8天后的血漿甘油三酯水平； -圖2-3:用化合物8以3-10 mpk給藥治療14天后的血漿膽固醇水平。 還通過測(cè)定肝組織中參與脂質(zhì)和/或糖類代謝以及能量耗散的基因的表 達(dá)來評(píng)價(jià)本發(fā)明的化合物的效力。將基因表達(dá)的各個(gè)水平關(guān)于參照基因 36B4的表達(dá)水平進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。然后計(jì)算誘導(dǎo)因子，即(本發(fā)明的化合物誘 導(dǎo)的)相對(duì)信號(hào)與和對(duì)照組相關(guān)的相對(duì)值的平均值的比。誘導(dǎo)因子越高， 則所述化合物就越高地促進(jìn)肝臟基因的表達(dá)。最終結(jié)果表示為得自各個(gè)實(shí) 驗(yàn)組的誘導(dǎo)值的平均值。
-圖2-4:用化合物1以50 mpk給藥治療8天后，E2/E2小鼠的肝組織 中PDK4 (丙酮酸脫氫酶激酶，亞型4)的表達(dá)
-圖2-5:用化合物1以50mpk給藥治療8天后，E2/E2小鼠的肝組織 中ApoCIII (載脂蛋白C3)的表達(dá)
-圖2-6:用化合物1以50mpk給藥治療8天后，E2/E2小鼠的肝組織 中ACO (?；o酶A氧化酶1，棕櫚酰)的表達(dá)
28-圖2-7:用化合物8以3-10 mpk給藥治療14天后，E2/E2小鼠的肝組 織中PDK4的表達(dá)
-圖2-8:用化合物8以3-10 mpk給藥治療14天后，E2/E2小鼠的肝組 織中ApoCIII的表達(dá)
-圖2-9:用化合物8以3-10 mpk給藥治療14天后，E2/E2小鼠的肝組 織中ACO的表達(dá)
圖3-1至3-9:在db/db小鼠上進(jìn)行的本發(fā)明化合物的降血脂性質(zhì)和對(duì) HDL-膽固醇合成的刺激性質(zhì)的體內(nèi)評(píng)價(jià)
用本發(fā)明的化合物口服治療28天后，通過測(cè)量HDL膽固醇和甘油三 酯和血漿游離脂肪酸的水平，來體內(nèi)評(píng)價(jià)本發(fā)明的化合物對(duì)db/db小鼠的影 響。這些參數(shù)與得自對(duì)照動(dòng)物(未用本發(fā)明的化合物治療的動(dòng)物)的參數(shù) 作比較測(cè)得的差異顯示本發(fā)明的化合物的降血脂效力。
-圖3-l:用化合物8以50 mpk給藥治療28天后的血漿HDL-膽固醇水
平
-圖3-2:用化合物8以50 mpk給藥治療28天后的血漿甘油三酯水平； -圖3-3:用化合物8以50 mpkg給藥治療28天后的血漿游離脂肪酸水平。
還通過測(cè)量肝組織和肌肉(骨骼)組織中參與脂質(zhì)和/或糖代謝和能量 耗散的基因的表達(dá)來評(píng)價(jià)本發(fā)明的化合物的效力。將基因表達(dá)的各個(gè)水平 關(guān)于參照基因36B4在肝組織中的表達(dá)水平或關(guān)于參照基因18S在腓腸肌骨 骼肌中的表達(dá)水平進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。然后計(jì)算誘導(dǎo)因子，即(本發(fā)明的化合物 誘導(dǎo)的)相對(duì)信號(hào)與和對(duì)照組相關(guān)的相對(duì)值的平均值的比。誘導(dǎo)因子越高， 則所述化合物就越高地促進(jìn)基因的表達(dá)。最終結(jié)果表示為得自各個(gè)實(shí)驗(yàn)組 的誘導(dǎo)值的平均值。
-圖3-4:用化合物8以50 mpk給藥治療28天后，db/db小鼠的肝組織 中PDK4的表達(dá)
-圖3-5:用化合物8以50 mpk給藥治療28天后，db/db小鼠的肝組織 中ACO (?；o酶A氧化酶1，棕櫚酰)的表達(dá)
-Mi^用化合物8以50mpk給藥治療28天后，db/db小鼠的骨骼肌組織中UCP2的表達(dá)
圖4-1至4-3:通過測(cè)定用本發(fā)明的化合物治療并用PMA刺激的單核 細(xì)胞的MCP1分泌，體外評(píng)價(jià)本發(fā)明的化合物的抗炎性質(zhì)
通過測(cè)定用本發(fā)明的化合物處理24小時(shí)并同時(shí)用PMA (佛波醇12-肉 豆蔻酸酯13-乙酸酯(Phorbol 12-myristate 13-acetate)，它促進(jìn)細(xì)胞的炎癥 應(yīng)答并促進(jìn)它們分化為巨噬細(xì)胞)刺激的THP1單核細(xì)胞的MCP1 (單核細(xì) 胞趨化蛋白-l)分泌，來評(píng)價(jià)本發(fā)明的化合物抗炎效力。MCP-1分泌越少， 則本發(fā)明的化合物就越抑制炎癥反應(yīng)。
-圖4-h用化合物8以1 pM給藥處理24小時(shí)后，THP1單核細(xì)胞的 MCP1分泌
統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
統(tǒng)計(jì)學(xué)研究由t檢驗(yàn)(T°/。°°)和/或單變量ANOVA方差分析以及隨 后的圖基(Tukey)檢驗(yàn)(*/**/***)組成。根據(jù)參數(shù)p的值，將結(jié)果與對(duì)照組 比較
°/* : p〈0.05; °7**: p<0.01; 000/***: pO.OOl。 實(shí)施例
標(biāo)準(zhǔn)試劑和催化劑是可商購獲得的(Aldrich、 AlfaAesar、 Acros、 Fluka 或者Lancaster)。
質(zhì)子核磁共振譜(NMR &)在Bruker AC300P波譜測(cè)定儀上測(cè)量?；瘜W(xué) 位移以ppm (百萬分率)表示，NMR信號(hào)的分裂用通常的縮寫詞表述。
實(shí)施例l:合成本發(fā)明化合物的一般步驟
本發(fā)明的化合物使用美國專利2005176808中要求保護(hù)的或所述的化合 物，通過還原和隨后的以下所述步驟之一而獲得。 一般步驟A:用三乙基硅烷還原二苯基丙烯酮
向二苯基丙烯-2-酮的二氯甲垸溶液中加入三乙基硅垸，然后滴加三氟 乙酸(7.5當(dāng)量)。在室溫下攪拌反應(yīng)混合物，通過薄層色譜法進(jìn)行反應(yīng)跟
3蹤。用水洗滌反應(yīng)混合物。用二氯甲垸萃取水層。合并的有機(jī)層用硫酸鎂
干燥并減壓濃縮。剩余物進(jìn)行柱層析(制備HPLC，多孔玻璃(Merck) RP18 12pm IOOA，柱25*250 mm)。
一般步驟B:用四氯化硅還原二苯基丙烯酮
向二苯基丙烯-2-酮的乙腈溶液中加入碘化鈉，然后滴加四氯化硅。在 室溫下攪拌反應(yīng)混合物，通過薄層色譜法進(jìn)行反應(yīng)跟蹤。30分鐘至2小時(shí) 后，將混合物在氯仿和水之間分配。用氯仿萃取水層。合并的有機(jī)層用亞 硫酸鈉干燥，然后用硫酸鎂干燥并減壓濃縮。剩余物進(jìn)行柱層析(制備 HPLC，多孔玻璃(Merck) RP18 12pm IOOA,柱25*250 mm)。
一般步驟C:肟和肟醚的合成
向二苯基丙-3-酮的吡啶溶液中加入O-烷基鹽酸羥胺 (O-alkylhydroxylamine hydrochloride)。回流16小時(shí)后，減壓濃縮混合物。 剩余物進(jìn)行柱層析。
一般步驟D:醇的合成
向二苯基丙-3-酮的乙醇溶液中加入硼氫化鈉。將反應(yīng)混合物在50°C (122°F)下攪拌16小時(shí)。冷卻后，使反應(yīng)混合物水解并減壓濃縮。將剩 余物在稀鹽酸溶液和二氯甲垸之間分配。
有機(jī)層用水洗滌，硫酸鎂干燥并減壓濃縮。剩余物進(jìn)行柱層析(制備 HPLC，多孔玻璃(Merck) RP18 12pm 100A，柱25*250mm)。
一般步驟E:醚的合成
將二苯基丙-3-醇在水/醇混合物中的溶液在催化量的三氟乙酸的存在 下在合適的溫度下用力攪拌，然后減壓濃縮。剩余物用二氯甲烷萃取。合 并的有機(jī)層用硫酸鎂干燥，過濾，然后減壓濃縮。剩余物進(jìn)行柱層析(制 備HPLC，多孔玻璃(Merck) RP18 12nm 100A，柱25*250 mm)。
實(shí)施例2:本發(fā)明化合物的合成
化合物1: 2-「2.6-二甲基-4-[344-(甲硫基成基1-3-氧代丙基1苯氧基1-2-
甲基丙酸根據(jù)所述一般步驟A，使用2-[2,6-二甲基-4-[3-[4-(甲硫基)苯基]-3-氧代 丙-2-烯基]苯氧基]-2-甲基丙酸和1.3當(dāng)量三乙基硅烷來制備該化合物； 外觀白色固體；F=109-110°C。
畫R (300 MHz， CDC13, 5 in ppm): 1.42 (s， 6H)， 2.19 (s， 6H), 2.53 (s, 3H)， 2.89 (t， 2H， J=7.59Hz)， 3.25 (t， 2H, J=7.59Hz)， 6.89 (s， 2H), 7.31 (d， 2H， J=8.17Hz), 7.88 (d, 2H， J=8.17Hz)。
MS(ES陽MS): 385.3 (M-l)。
化合物2: 2-「2,6-二甲基-4-「3-「2-(己氧基)苯基1-3-氧代丙基1苯氧基1-2-
甲基丙酸
根據(jù)所述一般步驟A，使用2-[2，6-二甲基-4-[3-[2-(己氧基)苯萄-3-氧代 丙-2-烯基]苯氧基]-2-甲基丙酸和1當(dāng)量的三乙基硅烷來制備該化合物； 外觀白色固體；F=73-75°C。
固R (300 MHz, CDC13, 5 in ppm): 0,89 (t， 3H， J=6.72Hz)， 1.32 (m， 4H), 1.45 (m， 2H)， 1.52 (s， 6H)， 1.82 (m， 2H)， 2.21 (s， 6H), 2.93 (t， 2H, J=8,19Hz), 3.33 (t， 2H, J=8.19Hz)， 4.05 (t, 2H, J=6.42Hz), 6.87 (s, 2H), 6.95 (m: 1H)， 7.01 (m, 1H), 7.44 (m， 1H), 7.68 (dd, 1H, J=1.77Hz, J=7.89Hz)。
MS(ES掘)439.4 (M畫l)。
化合物3:2-「2,6-二甲基-4-「3-「4-(甲硫基)苯基1-3-節(jié)氧基丙基成氧基1-2-
甲基丙酸在0°C，在15分鐘內(nèi)，向2-[2，6-二甲基-4-[3-[4-(甲硫基)苯基]-3-羥基 丙基]苯氧基]-2-甲基丙酸的N，N-二甲基甲酰胺溶液加入氫化鈉(2.2當(dāng)量)。 然后加入節(jié)基溴(benzyle bromide) (2.2當(dāng)量)，并將混合物在室溫下攪拌 16小時(shí)。將混合物在飽和氯化銨溶液和乙酸乙酯之間分配。合并的有機(jī)層 用硫酸鎂干燥，過濾，然后減壓濃縮。
在2N氫氧化鈉溶液的存在下(20當(dāng)量)，將剩余物溶于乙醇。將反應(yīng) 混合物攪拌6小時(shí)并減壓濃縮。剩余物用稀鹽酸溶液酸化，然后用二氯甲 垸萃取。合并的有機(jī)層用硫酸鎂干燥，過濾，然后減壓濃縮。剩余物進(jìn)行 柱層析(制備HPLC，多孔玻璃(Merck) RP18 12pm IOOA，柱25*250 mm)
外觀灰白色固體；F=69-71°C。
NMR !H (300 MHz, CDC13， 5 in ppm): 1.49 (s， 6H)， l.卯(m， IH), 2.14 (m， IH)， 2.19 (s， 6H)， 2.52 (m， IH)， 2.52 (s， 3H)， 2.68 (m, IH)， 4.24 (d， IH, J=11.8Hz), 4.28 (t, IH, J=5.25Hz)， 4.47 (d, IH, J=11.8Hz)， 6.77 (s, 2H)， 7.31 (m: 9H)。
MS(ES-MS): 477.3 (M-l)。
化合物4: 2-「2,6-二甲基-4-「344-(甲硫基諒基1-3-羥基丙基1苯氧基1-2-
甲基丙酸
根據(jù)所述一般步驟D，使用2-[2,6-二甲基-4-[3-[4-(甲硫基)苯基]-3-氧代 丙基]苯氧基]-2-甲基丙酸和3當(dāng)量的硼氫化鈉來制備該化合物； 外觀微黃色固體；F=49-51°C。
33鹿RH (300 MHz， CDC13, S in ppm): 1,52 (s， 6H)， 2.04 (m， 2H)， 2.22 (s, 6H)， 2.5 (s, 3H)， 2.63 (m， 2H)， 4.66 (dd， 1H, J=5.7Hz, J=7.5Hz), 6.84 (s， 2H)， 7.27 (m，4H)。
MS(ES掘)389.3 (M+l)。
化合物5: 2-「2,6-二甲基-4-「3-「4-(甲硫基成基1-3-甲氧亞胺基丙基1苯氧
根據(jù)所述一般步驟C，使用2-[2,6-二甲基-4-[3-[4-(甲硫基)苯基]-3-氧代 丙基]苯氧基]-2-甲基丙酸來制備該化合物； 外觀微黃色粘性油。
麗R (300 MHz, CDC13， S in ppm): 1,50 (s, 6H), 2.21 (s, 6H)， 2.49 (s， 3H)， 2.73 (m, 2H), 2.96 (m， 2H), 3.99 (s， 3H)， 6.84 (s, 2H)， 7.20 (d, 2H, J=8.47Hz)， 7.51 (d, 2H, J=8.47Hz)。
MS(MALDI TOF) : 416.4 (M十l)。
化合物6: 2-「2,6-二甲基-4-「3-「4-(甲氧基成基1-3-氧代丙基1苯氧基1-2-
甲基丙酸
o
根據(jù)所述一般程序步驟B，使用2-[2，6-二甲基-4-[3-[4-(甲氧基)苯基]-3-氧代丙-2-烯基]苯氧基]-2-甲基丙酸、5當(dāng)量碘化鈉和5當(dāng)量四氯化硅來制備 該化合物；
外觀白色固體；F=279-281°C。
基l-2-甲基丙酸麗R 'H (300 MHz， CDC13, 5 ppm): 1.52 (s， 6H), 2.22 (s, 6H), 2.94 (t， 2H， J=7.59 Hz)， 3.20 (t， 2H, J=7.59Hz)， 3.87 (s， 3H), 6.88 (s， 2H), 6.93 (d， 2H, J=8.76Hz)， 7.95 (d， 2H, J=8.76Hz)。
MS(ES-MS): 369.3 (M-l)。
化合物7: 2-[2,6-二甲基-4-[3-[4-(甲硫基成基1-3-氧代丙基1苯氧基1-2-
甲基乙酸
根據(jù)所述一般程序步驟B，使用2-[2，6-二甲基-4-[3-[4-(甲氧基)苯蜀-3-氧代丙-2-烯基]苯氧基乙酸、5當(dāng)量碘化鈉和5當(dāng)量四氯化硅來制備該化合 物；
外觀白色固體；F= 138-139°C。
畫R 'H (300 MHz, CDC13, 5 ppm): 2.28 (s, 6H), 2.54 (s， 3H)， 2.96 (t, 2H, J=7.60Hz)， 3.24 (t， 2H， J=7.60Hz)， 4.45 (s, 2H), 6.92 (s， 2H)， 7.27 (d， 2H， J=8.47Hz)， 7,88 (d， 2H， J=8.47Hz)。
MS(ES-MS): 357.2 (M-l)。
化合物8: 2-「2.6-二甲某-4-「3-「4"丙氧基)苯基1-3-氧代丙基1苯氧基1-2-
甲基丙酸
根據(jù)所述一般程序步驟B，使用2-[2，6-二甲基-4-[3-[4-(丙氧基傳基]-3-氧代丙-2-烯基]苯氧基]-2-甲基丙酸、5當(dāng)量碘化鈉和5當(dāng)量四氯化硅來制備 該化合物-,外觀白色固體；F=89-92°C。
麗R 'H (300 MHz， CDC13， 5 ppm): 1.06 (t， 3H, J=7.30Hz)， 1.54 (s， 6H)， 1.85 (m, 2H), 2.23 (s, 6H), 2.95 (t, 2H, J=7.75Hz), 3.22 (t， 2H， J=7.75Hz)， 3.99 (t， 2H, J=6.57Hz)， 6.89 (s， 2H), 6.93 (d， 2H， J=8.91Hz)， 7.95 (d, 2H, J=8.91Hz)。
MS(ES畫MS): 397.3 (M-l)。
化合物9: 2-「2-甲基-4-「3-r4-凍基成基l-3-氧代丙基成氧勘-2-甲基丙
酸
根據(jù)所述一般程序步驟B，使用2-[2-甲基-4-[3-[4-(庚基傳萄-3-氧代丙 -2-烯蜀苯氧基]-2-甲基丙酸、5當(dāng)量碘化鈉和5當(dāng)量四氯化硅來制備該化合 物；
外觀白色固體；F=53-54°C。
顧R 'H (300 MHz， CDC13， S ppm): 0.89 (t, 3H， J=6.72Hz)， 1.29 (m, 8H)， 1.61 (s, 6H)， 1.62 (m, 2H)， 2.24 (s， 3H)， 2,66 (t, 2H, J=7.74Hz), 2,99 (t, 2H, J=7.59Hz)， 3.26 (t， 2H, J=7.59Hz), 6.78 (d, 1H, J=8.46Hz), 7.01 (d， 1H, J=8.46Hz)， 7.08 (s, 1H), 7.26 (d, 2H， J=8.16Hz)， 7.89 (d, 2H， J=8.16Hz)。
MS(ES-MS): 423.3 (M-l)。
化合物10: 2-「2,6-二甲基-4-「3-「4-(甲硫基)苯基l-3-乙氧基丙基l苯氧 基l-2-甲基丙酸根據(jù)所述一般步驟E，使用2-[2,6-二甲基-4-[3-[4-(甲硫基)苯基]-3-羥基 丙基]苯氧基]-2-甲基丙酸在2/3:1/3的乙醇/水混合物中回流72小時(shí)來制備 該化合物。
外觀粘性油。
NMR 'H (300 MHz， CDC13, 5 in ppm): 1,19 (t， 3H, J=7.02Hz), 1.48 (s， 6H): 1.87 (m, 1H), 2.07 (m， 1H), 2.19 (s, 6H), 2.5 (s， 3H), 2.53 (m, 1H), 2.64 (m， 1H): 3.34 (m, 2H), 4.14 (dd， 1H， J=2,34Hz， J=5,55Hz), 6.8 (s， 2H), 7.24 (m， 4H)。
MS(ES-MS): 417.4 (M-l)。
化合物11: 2-「2.6-二甲基-4-「342-(三氟甲基)苯基1-3-氧代丙基1苯氧 基l-2-甲基丙酸
根據(jù)所述一般步驟A，使用2-[2，6-二甲基-4-[3-[2-(三氟甲基)苯基]-3-氧代丙-2-烯基]苯氧基]-2-甲基丙酸和1當(dāng)量的三乙基硅烷來制備該化合物; 外觀微黃色粘性油。
畫R (300 MHz, CDC13， 5 ppm): 1.53 (s, 6H), 2.22 (s， 6H), 2.95 (t, 2H， J=7.30Hz), 3.15 (t， 2H， J=7.30Hz)， 6.86 (s， 2H), 7.32 (m， 1H), 7.56 (m, 2H), 7.71 (m, 1H)。
MS(ES隱MS): 407.3 (M-l)。
化合物12: 2-[2.6-二甲基-4-[3-[4-(甲硫基)苯基l丙基l苯氧基l-2-甲基丙
37向2-[2,6-二甲基-4-[3-[4-(甲硫基)苯基]-3-氧代丙-2-烯基]苯氧基]-2-甲
基丙酸的三氟乙酸溶液中滴加三乙基硅烷(2.7當(dāng)量)。在室溫下將反應(yīng)混 合物攪拌16小時(shí)。通過波層色譜法進(jìn)行反應(yīng)跟蹤。用水洗滌反應(yīng)混合物。 用二氯甲垸萃取水層。合并的有機(jī)層用硫酸鎂干燥，然后減壓濃縮。剩余 物進(jìn)行柱層析(洗脫劑二氯甲垸95，甲醇5。) 外觀白色固體；F=181-182°C。
NMR !H (300 MHz， DMSO-d6， 5 ppm): 1.24 (s， 6H), 1.81 (m, 2H)， 2.16 (s, 6H)， 2.42 (m, 2H)， 2.44 (s， 3H)， 2.54 (m， 2H)， 6.73 (s, 2H)， 7.15 (m, 4H)。 MS(ES-MS): 371.4 (M-l)。
化合物13: 2-「2,6-二甲基-4-「3-「4-(甲硫基)苯基1-3-氧代丙基1苯氧基1-2-
甲基丙酸異丙酯
根據(jù)所述一般步驟A，使用2-[2,6-二甲基-4-[3-[4-(甲硫基)苯基]-3-氧代 丙-2-烯基]苯氧基]-2-甲基丙酸異丙酯和1當(dāng)量的三乙基硅烷來制備該化合 物；
外觀白色固體；F=64-65°C。
NMR 'H (300 MHz， CDC13， S ppm): 1.34 (d， 6H, J=6.5Hz), 1.45 (s， 6H), 2.19 (s， 6H), 2.54 (s， 3H), 2.93 (t, 2H， J=7.89Hz)， 3.21 (t, 2H， J=7.89Hz)， 5.14 (sep, 1H， J=6.15Hz), 6.84 (s, 2H), 7.26 (d, 2H, J=8.49Hz)， 7.89 (d， 2H, J=8.49Hz)。
MS(MALDI-TOF): 429.3 (M+l)。
化合物14: 2-[2,6-二甲基-4-[3-[4-(甲硫基)苯基1-3-肟基丙基1苯氧基1-2-
甲基丙酸
38根據(jù)所述一般步驟C，使用2-[2,6-二甲基-4-[3-[4-(甲硫基)苯基]-3-氧代 丙基]苯氧基]-2-甲基丙酸來制備該化合物； 外觀白色固體；F= 144-147°C。
麗R 'H (300 MHz， DMSO-d6， S ppm): 1.31 (s， 6H), 2.11 (s, 6H)， 2.49 (s， 3H), 2.61 (dd， 2H, J=7,17Hz， J=8.76Hz)， 2.91 (t， 2H, JL47Hz), 6.85 (s， 2H)， 7.23 (d, 2H， J=8.47Hz), 7.54 (d, 2H, J=8,47Hz)， 11.21 (s, 1H)， 12,81 (s， 1H)。
MS(ES-MS): 400.3 (M-l)。
化合物15: 2-「2,6-二甲基-4-「3-「4-(丙氧基)苯基1-3-羥基丙基1苯氧基1-2-
甲基丙酸
根據(jù)所述一般步驟D，使用2-[2，6-二甲基-4-[3-[4-(丙氧基)苯基]-3-氧代 丙基]苯氧基]-2-甲基丙酸來制備該化合物； 外觀微黃色粘性油。
NMR (300 MHz, CDC13, 5 ppm): 1.05 (t， 3H， J=7.46Hz), 1.50 (s, 6H)， 1.82 (m， 2H), 2.04 (m, 2H )， 2.20 (s, 6H), 2,56 (m， 2H)， 3.93 (t， 2H, J= 6.57Hz), 4.63 (t, 1H， J=6.57Hz)， 6.81 (s， 2H), 6.88 (d， 2H, J=8.61Hz): 7.25 (d， 2H， J=8.61Hz)。
MS(ES畫MS): 399.4 (M-l)。
化合物16: 2-f2,6-二甲基-4-r3-r2-(三氟甲氧基)苯基l-3-氧代丙基l苯氧 基l-2-甲基丙酸根據(jù)所述一般步驟B，使用2-[2,6-二甲基-4-[3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-3-氧代丙-2-烯基]苯氧基]-2-甲基丙酸、5當(dāng)量的碘化鈉和5當(dāng)量的四氯化硅來 制備該化合物；
外觀微黃色粘性油。
NMR !H (300 MHz， CDC13, S ppm): 1.53 (s, 6H)， 2.21 (s， 6H), 2.94 (t, 2H, J=7.46Hz)， 3.23 (t， 2H， J=7.46Hz)， 6.85 (s， 2H), 7.36 (m, 2H)， 7.54 (m, 1H)， 7.63 (dd,lH, J=1.74Hz， J=7.59Hz)。
MS(ES-MS): 423.0 (M-l)。
化合物17: 2-「2,6-二甲基-4-「3-「4-(甲硫基)苯基1-3-甲氧基丙基1苯氧 基l-2-甲基丙酸
根據(jù)所述一般步驟E，使用2-[2,6-二甲基-4-[3-[4-(甲硫基)苯基]-3-羥基 丙基]苯氧基]-2-甲基丙酸在2/3:1/3的乙醇/水混合物中回流16小時(shí)來制備 該化合物；
外觀粘性油。
NMR 'H (300 MHz， CDC13， 5 ppm): 1.51 (s, 6H)， 1.89 (m, 1H)， 2.08 (m， 1H)， 2.21 (s， 6H), 2.5 (s, 3H)， 1.56 (m， 2H), 3.22 (s, 3H)， 4.05 (dd， 1H， JN5.82Hz， J=7.32Hz), 6.79 (s, 2H)， 7.26 (d， 2H， J=8.46Hz)， 7.21 (d, 2H， J=8.46Hz)。
MS(ES-MS): 401.3 (M-l)。
40化合物18: 2-f2,6-二甲基-4-「2,3-二氫-4H-l-苯并噻喃-4-酮-2-基l苯氧 基l-2-甲基丙酸
根據(jù)所述一般步驟B，使用2-[2，6-二甲基-4-[3-[2-(甲硫基)苯蜀-3-氧代 丙-2-烯基]苯氧基]-2-甲基丙酸、6當(dāng)量的碘化鈉和6當(dāng)量的四氯化硅來制備 該化合物；
外觀微黃色固體；F=60-63°C。
NMR (300 MHz， CDC13, 5 ppm): 1.53 (s， 6H)， 2.26 (s， 6H)， 3,18 (dd, 1H, J=3.35Hz, J=16.37Hz)， 3.28 (dd， 1H， J=12.87Hz, J=16.37Hz)， 4.62 (dd， 1H， J=3.35Hz， J=12.87Hz)， 7.06 (s， 2H), 7.22 (d， 1H， J=7.02Hz)， 7.29 (m, 1H)， 7.43 (m, 1H), 8.15 (d， 1H， J= 7.89Hz)。
MS(ES國MS): 369.1 (M腸l)。
化合物19: 2-「2-甲基-4-「3-「4-(丙硫基成基l-3-氧代丙基l苯氧基l-2-甲基
丙酸
根據(jù)所述一般步驟B，使用2-甲基-2-(2-甲基-4-(3-氧代-3-(4-(丙硫基) 苯基)丙-l-烯基)苯氧基)丙酸叔丁酯、3當(dāng)量的碘化鈉和3當(dāng)量的四氯化硅 來制備該化合物；
外觀粘性油。
NMR (300 MHz， CDC13, S in ppm): 1.07 (t， 3H， J=7.3Hz)， 1.61 (s， 6H), 1.73 (m， 2H), 2.24 (s， 3H), 2.98 (m, 4H)， 3.23 (t, 2H， J=7.32Hz)， 6.76 (d， 1H,J=8.19Hz), 6.97 (d， 1H， J=8.19Hz), 7.06 (s， 1H), 7.29 (d, 2H, J=8.76Hz), 7.86 (d 2H， J=8.76Hz)。
MS(ES隱MS): 392.2 (M-l)。
化合物20: 2-「3-「3-「4-(甲硫基成基l-3-氧代丙基l苯氧基l-2-甲基丙酸
根據(jù)所述一般步驟B，使用2-[3-[3-[4-(甲硫基)苯基]-3-氧代丙-2-烯基] 苯氧基]-2-甲基丙酸、7當(dāng)量的碘化鈉和7當(dāng)量的四氯化硅來制備該化合物; 外觀白色固體；F=67-68°C。
應(yīng)R !H (300 MHz， CDC13, 5 ppm): 1.62 (s， 6H), 2.51 (s， 3H), 3.01 (t， 2H， J= 7.60Hz)， 3.23 (t， 2H, J=7.60Hz), 6.76 (d, 1H, J=8.16Hz), 6.86 (s， 1H), 6.93 (d 1H， J=7.62Hz)， 7.16 (t， 1H, J=7.89Hz)， 7.25 (d, 2H, J=8.48Hz)， 7.85 (d, 2H， J=8.48Hz)。
MS(ES掘)357.3 (M隱l)。
化合物21: 2-「4-「3-「4-(甲基苯基l-3-氧代丙基l苯氧基l-2-甲基丙酸
根據(jù)所述一般步驟B，使用2-[4-[3-[4-(甲基苯基]-3-氧代丙-2-烯基]苯氧 基]-2-甲基丙酸、5量的碘化鈉和5當(dāng)量的四氯化硅來制備該化合物； 外觀白色固體；F= 124-125°C。
NMR (300 MHz, CDC13， 5 ppm): 1.56 (s, 6H)， 2.43 (s， 3H)， 3.04 (t, 2H， J=7.52Hz), 3.27 (t, 2H, J=7.52Hz), 6.9 (d， 2H, J=8.34Hz), 7.19 (d, 2H， J=8.34Hz), 7.24 (d, 2H， J=8.19Hz), 7.87 (d， 2H， J=8.19Hz)。
42MS(ES-MS): 325.3 (M-l)。
化合物23: 2-「2,6-二甲基-4-「3-「4-(甲硫基)苯基1-3-丁氧基丙基1苯氧 基l-2-甲基丙酸
根據(jù)所述一般步驟E，使用2-[2，6-二甲基-4-[3-[4-(甲硫基)苯基]-3-羥基 丙基]苯氧基]-2-甲基丙酸在50/50 丁醇/水中在70° C下進(jìn)行32小時(shí)來制備 該化合物；
外觀粘性油。
NMR (300畫z, CDC13, S in ppm): 0.81 (t， 3H, J=8.72Hz)， 1.38 (m， 2H)， 1.52 (m， 2H)， 1.51 (s， 6H), 1.86 (m， 1H)， 2.05 (m， 1H)， 2.21 (s, 6H)， 2.5 (s， 3H), 2.55 (m, 1H), 2.63 (m， 1H), 3.26 (m, 2H), 4,13 (m, 1H), 6.81 (s， 2H), 7.24 (m， 4H)。
MS(ES-MS): 443.5 (M畫l)。
化合物24: 2-「2,6-二甲基-4-「3-「4-(甲硫基)苯基l-3-異丙氧基丙基l苯氧 基l-2-甲基丙酸<formula>formula see original document page 43</formula>
根據(jù)所述一般步驟E，使用2-[2，6-二甲基-4-[3-[4-(甲硫基)苯基]-3-羥基 丙基]苯氧基]-2-甲基丙酸在50/50異丙醇/水中在70° C下進(jìn)行32小時(shí)來制備該化合物；
外觀粘性油。
NMR (300 MHz， CDC13， 5 in ppm): 1.09 (d, 3H, J=6.12Hz)， 1.14 (d, 3H: J=6.12Hz)， 1.5 (s, 6H)， 1.79-1.90 (m， 1H)， 1.97-2.09 (m, 1H), 2.2 (s, 6H)， 2,44-2.54 (m， 1H)， 2.5 (s， 3H)， 2.67 (m， 1H)， 3,47 (m， 1H), 4.27 (dd， 1H， J=5.27Hz， J=8.17Hz), 6.82 (s， 2H), 7.24 (s, 4H)。
MS(ES-MS): 429.3 (M-l)。
根據(jù)所述步驟A-E之一，以關(guān)于化合物1-21和23-24所述的方法合成 化合物22和化物25。
實(shí)施例3:本發(fā)明化合物的PPAR激活性質(zhì)的體外評(píng)價(jià)
體外評(píng)價(jià)本發(fā)明化合物的PPAR激活性質(zhì)。 原理
使用猴腎成纖維細(xì)胞系(COS-7)，通過測(cè)定嵌合體的轉(zhuǎn)錄活性來體外 評(píng)價(jià)PPAR的激活，所述嵌合體由酵母Gal4轉(zhuǎn)錄因子的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域 和不同的PPAR配體的結(jié)合結(jié)構(gòu)域組成。化合物以10.7-100 nM的劑量在 Gal4-PPARa、 y和S嵌合體進(jìn)行測(cè)試。
實(shí)驗(yàn)方案
細(xì)胞培養(yǎng)
COS-7細(xì)胞來自ATCC(美國典型培養(yǎng)物保藏中心)，培養(yǎng)在DMEM(達(dá) 爾伯克改良伊格爾培養(yǎng)基)培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基中補(bǔ)充了 10% (體積/體積) 胎牛血清、100 U/ml青霉素(Gibco, Paisley, UK)和2 mM L-谷氨酰胺(Gibco: Paisley, UK)。細(xì)胞在37°<3下于含5% C02的濕潤氣氛中培養(yǎng)。
用于轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒的描述
質(zhì)粒Gal4(RE)—TkpGL3 、 pGal4-hPPARa、 pGal4-hPPAR/、 pGal4-hPPAR5 和pGal4-(()已在文獻(xiàn)(RaspeE等人，1999)中有描述。通過在pGal4-(l)載體 中克隆通過PCR擴(kuò)增的并與人PPARa、 PPARy和PPAR5細(xì)胞核受體的DEF 結(jié)構(gòu)域?qū)?yīng)的DNA片段獲得構(gòu)建pGal4-hPPARa 、 pGal4-hPPARy和 pGal4-hPPAR5。轉(zhuǎn)染
在10%胎牛血清存在下，以1/10的pGal4-PPAR/GaW(RE)—TkpGL3 比，以150 ng的DNA逐孔轉(zhuǎn)染懸浮液中的COS-7細(xì)胞。將這些細(xì)胞涂布 在96孔板中(4xl()a細(xì)胞/孔)，然后在37。C孵育24小時(shí)。于37"C、在不含 血清的培養(yǎng)基中用供試化合物進(jìn)行激活持續(xù)24小時(shí)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，使細(xì)胞 溶解，并且使用Steady-Lite HTSPerkin Elmer)或者Steady Glow Luciferase (Promega)，根據(jù)供應(yīng)商的建議，測(cè)定熒光素酶的活性。
結(jié)果
在三種PPAR亞型上測(cè)試了本發(fā)明化合物。得自化合物1-12、 14、 16-25 的結(jié)果詳細(xì)表述在圖(1-1)至(1-66)中。
本發(fā)明人證明，用質(zhì)粒pGal4-hPPAR轉(zhuǎn)染并用本發(fā)明化合物處理的細(xì) 胞中熒光素酶活性的顯著的且劑量依賴性的提高。
結(jié)論
出乎意料地，所示的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，本發(fā)明的化合物在體外與PPAR 結(jié)合并誘導(dǎo)激活轉(zhuǎn)錄活性。
實(shí)施例4:在ApoE2/E2小鼠上進(jìn)行的本發(fā)明化合物的降血脂性質(zhì)和刺 激HDL-膽固醇合成的性質(zhì)的體內(nèi)評(píng)價(jià) 原理
用本發(fā)明的化合物治療血脂異常的E2/E2小鼠后，通過測(cè)定血漿脂質(zhì) 并分析肝臟中PPAR靶基因基因的表達(dá)來體內(nèi)評(píng)價(jià)本發(fā)明的化合物降血脂 性質(zhì)。
所用的鼠模型是ApoE2/E2小鼠，其為具有人類載脂蛋白E亞型E2的 轉(zhuǎn)基因小鼠(SullivanPM等人，1998)。在人類，這種載脂蛋白是低密度和 極低密度脂蛋白(LDL-VLDL)的一種組份，它以E2、 E3和E4三種亞型 存在。E2亞型存在影響第158位氨基酸的突變，該突變相當(dāng)大地減弱了該 蛋白與LDL受體的親和性。因此，幾乎不存在VLDL清除。然后，發(fā)生低 密度脂蛋白蓄積以及被稱為III型的混合性高脂血癥(高膽固醇與甘油三酯 比率)。
PPARa調(diào)節(jié)參與脂質(zhì)運(yùn)輸?shù)幕?載脂蛋白，例如ApoAI、 ApoAII和Apo CIII;膜運(yùn)載蛋白，例如FAT)和脂質(zhì)分解代謝的基因(ACO、 CPT-I 或者CPT-II、脂肪酸P-氧化酶)的表達(dá)。因此，在人類和嚙齒動(dòng)物，用PPARa 激活劑治療導(dǎo)致循環(huán)甘油三酯水平降低。在用本發(fā)明的化合物治療后，測(cè) 定血漿脂質(zhì)比率能評(píng)價(jià)本發(fā)明化合物的PPAR激動(dòng)劑性質(zhì)和降血脂效力。
在人類和嚙齒動(dòng)物，用PPAR激活劑治療有時(shí)還導(dǎo)致血漿HDL-膽固醇 比率的提高。測(cè)定HDL-膽固醇能顯示本發(fā)明的化合物刺激HDL-膽固醇合 成的能力。
以上在體外測(cè)定的PPARoc激動(dòng)劑性質(zhì)會(huì)在肝臟中、直接在PPARoc的控 制下，導(dǎo)致靶基因的過度表達(dá)在本實(shí)驗(yàn)中我們已研究的基因是PDK-4(參 與糖代謝的酶)、Apo CIII (參與脂質(zhì)代謝的載脂蛋白)和Acoxl (在小鼠中， Acoxl對(duì)應(yīng)人類的ACO基因(?；o酶A氧化酶，對(duì)游離脂肪酸P -氧化機(jī) 制關(guān)鍵的酶))。因此，在用本發(fā)明的化合物治療后，測(cè)定PPARoc靶基因的 轉(zhuǎn)錄活性能評(píng)價(jià)本發(fā)明化合物的降血脂性質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)方案
動(dòng)物的治療
在20 ± 3。C的恒定溫度下，將ApoE2/E2轉(zhuǎn)基因小鼠保持在12小時(shí)/12 小時(shí)的明/暗循環(huán)中。在一周的適應(yīng)期后，將小鼠稱重并分組，每組選擇6 只動(dòng)物，以使它們實(shí)驗(yàn)之前測(cè)定的體重和血漿脂質(zhì)比率分布均勻。將供試 化合物懸浮在羧甲基纖維素(SigmaC4888)中，以所選的劑量通過胃內(nèi)管 飼給藥，每天一次、持續(xù)8天(化合物l)，或每天一次、持續(xù)14天(化合 物8)。動(dòng)物可自由進(jìn)食和飲水(標(biāo)準(zhǔn)飲食)。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中，記錄食物 的攝取和體重增加。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，在4小時(shí)的禁食后，將動(dòng)物麻醉，用 (EDTA)抗凝血?jiǎng)┎杉獦?，然后將小鼠稱重并使其安樂死。通過以3000轉(zhuǎn) /分離心20分鐘分離血槳。將樣品保存在+4。C。
采集肝臟樣品，在液氮中冷凍，然后保存在-80'C以用于后續(xù)分析。
血槳脂質(zhì)的測(cè)定
通過酶劑量(bioM&ieux-Lyon-France)，根據(jù)供應(yīng)商的建議，測(cè)定血漿 脂質(zhì)濃度(總膽固醇和甘油三酯)。
在用本發(fā)明化合物口服治療8或14天后，測(cè)定血漿膽固醇比率和甘油 三酯比率。將這些比率與得自對(duì)照動(dòng)物(未用本發(fā)明的化合物治療)的比率作比較。測(cè)得的差異顯示本發(fā)明化合物的降血脂效力。
通過定量RT-PCR分析基因表達(dá)
通過使用NucleoSpin 96 RNA試劑盒(Macherey Nagel, Hoerdt, France),根據(jù)生產(chǎn)商的使用說明，從肝臟碎塊中提取總RNA。
然后，通過在37'C于20pl含有l(wèi)X緩沖液(Sigma)、 1.5mMDTT、 0.18mMdNTP (Promega)、 200ngpdN6 (Amersham)、 30URNA酶抑制 劑(Sigma)和1 plMMLV-RT (Sigma)的總體積中反應(yīng)1小時(shí)，將1嗎 總RNA (通過使用RibogreenRNA定量試劑盒(MolecularProbes)定量) 反轉(zhuǎn)錄為互補(bǔ)DNA。
根據(jù)生產(chǎn)商的建議，在55'C的雜交溫度下、在96孔板中于5pl稀釋的 反轉(zhuǎn)錄溶液中，使用MyiQ Single-Color Real-Time PCR Detection System (Biorad, Marnes-la-Coquette， France)禾卩iQ SYBR Green Supermix試齊廿盒進(jìn)行 PCR定量實(shí)驗(yàn)。使用了所研究的基因的以下特異性引物對(duì)
PDK4:同義引物5，-TACTCCACTGCTCCAACACCTG-3，(SEQID NO: 1)和反義引物5'畫GTTCTTCGGTTCCCTGCTTG-3，(SEQID NO : 2))
ApoCIII:同義弓l物5，畫CTCTTGGCTCTCCTGGCATC-3，(SEQID NO: 3)和反義引物5'國GCATCCTGGACCGTCTTGGA-3，(SEQID NO : 4)。
ACO:同義引物5，-GAAGCCAGCGTTACGAGGTG-3，(SEQID NO: 5)和反義弓I物5，-TGGAGTTCTTGGGACGGGTG-3， (SEQ ID NO: 6)
發(fā)射熒光的量與反應(yīng)開始時(shí)存在的并在PCR過程中擴(kuò)增的cDNA的量 成正比。對(duì)于所研究的各個(gè)靶，試驗(yàn)了由幾微升不同的反轉(zhuǎn)錄溶液組成混 合物的具有連續(xù)稀釋度的一系列溶液。由此，通過使用得自與PCR溶液系 列相關(guān)的點(diǎn)的效率曲線來確定各個(gè)耙的相對(duì)表達(dá)水平。
然后，將感興趣的基因的表達(dá)水平參照基因36B4(其特異性引物為同 義引物5 ，- CATGCTCAAC ATCTCCCCCTTCTCC-3 ， ( SEQ ID NO: 9)和反 義引物5，-GGGAAGGTGTAATCCGTCTCCACAG-3，(SEQIDNO: IO))之 一進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。
47然后，計(jì)算各個(gè)樣品的誘導(dǎo)因子，即(本發(fā)明的化合物誘導(dǎo)的)相對(duì) 信號(hào)與得自對(duì)照組的相對(duì)值的平均值的比。誘導(dǎo)因子越高，則所述化合物
就越高地促進(jìn)基因的表達(dá)。最終結(jié)果表示為得自各個(gè)實(shí)驗(yàn)組的誘導(dǎo)值的平 均值。
結(jié)果
血漿脂質(zhì)的測(cè)定
圖2-1比較了用化合物1以50 mpk給藥治療8天后血漿總膽固醇比率 和得自對(duì)照動(dòng)物的比率。出乎意料地，通過治療，循環(huán)總膽固醇比率非常 顯著地降低。
圖2-2比較了用化合物1以50 mpk給藥治療8天后血漿甘油三酯比率 和得自對(duì)照動(dòng)物的比率。出乎意料地，通過治療，循環(huán)甘油三酯比率非常 顯著地降低。
圖2-3比較了用化合物8以3和10 mpk給藥治療14天后血漿總膽固醇 比率和得自對(duì)照動(dòng)物的比率。出乎意料地，通過治療，循環(huán)總膽固醇比率 非常顯著地降低。
通過定量RT-PCR分析基因表達(dá)
本發(fā)明人還證明，本發(fā)明的化合物是PPAR耙基因表達(dá)的體內(nèi)調(diào)節(jié)劑。 圖2-4、 2-5和2-6所示的結(jié)果顯示，化合物1以50 mpk向E2/E2小鼠給藥 8天誘導(dǎo)編碼PDK4的基因的肝臟表達(dá)的顯著增加(圖2-4)，誘導(dǎo)編碼 ApoCIII的基因的肝臟表達(dá)的減少(圖2-5)，并且誘導(dǎo)編碼ACO的基因的 肝臟表達(dá)的顯著增加(圖2-6)。
圖2-7、 2-8和2-9所示的結(jié)果顯示，化合物8以3和10 mpk向E2/E2 小鼠給藥14天誘導(dǎo)編碼PDK4的基因的肝臟表達(dá)的顯著增加(圖2-7)，誘 導(dǎo)編碼ApoCIII的基因的肝臟表達(dá)的減少(圖2-8)，并且誘導(dǎo)編碼ACO的 基因的肝臟表達(dá)的顯著增加(圖2-9)。
編碼特別地參與脂質(zhì)和糖代謝的酶的所有基因以及它們的表達(dá)受到本 發(fā)明化合物調(diào)節(jié)的事實(shí)加強(qiáng)了這些化合物表現(xiàn)出用于治療代謝疾病的巨大 潛力的觀點(diǎn)。
結(jié)論出乎意料地，所示的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，本發(fā)明的化合物在體內(nèi)誘導(dǎo)降血 脂效力(降低總膽固醇和甘油三酯的血漿水平)。而且，所示的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)
顯示，本發(fā)明的化合物調(diào)節(jié)受PPAR的激活的調(diào)節(jié)的基因的表達(dá)，這些基 因編碼特別地參與脂質(zhì)和糖代謝的酶。
實(shí)施例5:在db/db小鼠上進(jìn)行的本發(fā)明化合物的降血脂性質(zhì)和對(duì) HDL-膽固醇合成的刺激性質(zhì)的體內(nèi)評(píng)價(jià)
原理
用本發(fā)明的化合物通過口服途徑給藥治療血脂異常的db/db小鼠后，通 過測(cè)量血漿脂質(zhì)的血漿水平并分析PPAR耙基因的基因表達(dá)來體內(nèi)評(píng)價(jià)本 發(fā)明的化合物的降血脂性質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)方案
動(dòng)物的治療
在20士3。C的恒定溫度下，將雄性db/db小鼠保持在12小時(shí)/12小時(shí)的 明/暗循環(huán)中。在一周的適應(yīng)期后，將小鼠稱重并分組，每組選擇8只動(dòng)物， 使實(shí)驗(yàn)之前測(cè)定的體重和血漿脂質(zhì)比率的分布是均勻的。將供試化合物懸 浮在羧甲基纖維素(Sigma C4888)中，以所選的劑量通過胃內(nèi)灌服法向動(dòng) 物給藥，每天一次，持續(xù)28天。動(dòng)物可自由進(jìn)食和飲水(標(biāo)準(zhǔn)飲食)。在 整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中，記錄食物的攝取和體重增加。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，在4小時(shí) 的禁食后，將動(dòng)物麻醉，用抗凝血?jiǎng)?EDTA)采集血樣。然后將小鼠稱重并 使其安樂死。通過以3000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘分離血槳。將樣品保存在+4。C。
采集肝組織和骨骼肌樣品，并立即在液氮中冷凍，然后保存在-80。C以 用于后續(xù)分析。
血漿脂質(zhì)的測(cè)定
通過酶法測(cè)定(bioM6rieux-Lyon-Franc)，根據(jù)供應(yīng)商的建議，測(cè)定血 漿甘油三酯濃度。
HDL-膽固醇的測(cè)定
通過磷鎢酸鹽將低密度脂蛋白(VLDL禾BLDL)沉淀。通過離心除去 沉淀物。通過酶法測(cè)定(bioM6rieux-Lyon-Franc)，根據(jù)供應(yīng)商的建議，測(cè) 定存在于上清液中的HDL膽固醇。通過定量RT-PCR分析基因表達(dá) 肝組織
通過使用NucleoSpin 96 RNA試劑盒(Macherey Nagel, Hoerdt， France),根據(jù)生產(chǎn)商的使用說明，從肝臟碎塊中提取總RNA。 骨骼肌組織
通過使用RNeasy Fibrous Tissue試劑盒(Qiagen)，根據(jù)生產(chǎn)商的使用 說明，從腓腸肌骨骼肌碎塊中提取總RNA。
然后，通過在37匸下于20 jal含有1X緩沖液(Sigma)、 1.5mMDTT、 0.18mMdNTP (Promega)、 200ngpdN6 (Amersham)、 30URNA酶抑制 劑(Sigma)和1 ]ilMMLV-RT (Sigma)的總體積中反應(yīng)1小時(shí)，將1昭 總RNA (以分光光度法定量)反轉(zhuǎn)錄為互補(bǔ)DNA。
根據(jù)供應(yīng)商的建議，在55'C的雜交溫度下，在96孔板中以5nl稀釋的 反轉(zhuǎn)錄溶液，使用MyiQ Single-Color Real-Time PCR Detection System (Biorad， Marnes畫la-Coquette, France)禾口 iQ SYBR Green Supermix試齊lj盒進(jìn)行
PCR定量實(shí)驗(yàn)。使用了所研究的基因的以下特異性引物對(duì)
PDK4:同義引物5，-TACTCCACTGCTCCAACACCTG-3，(SEQID NO: l)和反義引物5，- GTTCTTCGGTTCCCTGCTTG-3， (SEQ ID NO: 2))
ACO:同義引物5'畫GAAGCCAGCGTTACGAGGTG-3，(SEQID NO: 5)和反義引物5'-TGGAGTTCTTGGGACGGGTG-3， (SEQ ID NO: 6)
UCP2:同義引物5，-GTCGGAGATACCAGAGCACTGTCG-3，(SEQ ID NO: 7)和反向引物5 ，畫CACATCAACAGGGGAGGCGA-3 ， (SEQ ID NO: 8)
發(fā)射熒光的量與反應(yīng)開始時(shí)存在的并在PCR過程中擴(kuò)增的cDN A的量 成正比。對(duì)于所研究的各個(gè)靶，進(jìn)行了由幾微升不同的反轉(zhuǎn)錄溶液組成混 合物的具有連續(xù)稀釋度的一系列溶液。由此，通過使用得自與PCR溶液系 列相關(guān)的點(diǎn)的效率曲線來確定各個(gè)耙的相對(duì)表達(dá)水平。
然后，將感興趣的基因在肝組織中的表達(dá)水平關(guān)于參照基因36B4(其特 異性引物為同義引物5，-CATGCTCAACATCTCCCCCTTCTCC-3， (SEQ IDNO: 9)和反義引物5'-GGGAAGGTGTAATCCGTCTCCACAG畫3，(SEQID
NO: IO))的表達(dá)水平進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，并將感興趣的基因在骨骼肌組織中的表 達(dá)水平關(guān)于參照基因18S (其特異性引物為同義引物 5'-CGGACACGGACAGGATTGACAG-3' (SEQ ID NO: ll)和反義引物 5'畫AATCTCGGGTGGCTGAACGC-3' (SEQ ID NO: 12))的表達(dá)水平進(jìn)行標(biāo) 準(zhǔn)化。然后，計(jì)算各個(gè)樣品相關(guān)的誘導(dǎo)因子。誘導(dǎo)因子越高，則所述化合 物就越高地促進(jìn)基因表達(dá)。最終結(jié)果表示為各個(gè)實(shí)驗(yàn)組的誘導(dǎo)值的平均值。 結(jié)果
血漿脂質(zhì)的測(cè)定
圖3-1比較了用化合物8以50 mpk給藥治療28天后的血槳HDL-膽固 醇比率和得自對(duì)照動(dòng)物的比率。出乎意料地，HDL-膽固醇比率明顯增加。
圖3-2和3-3比較了用化合物8以50 mpk治療28天后的血漿甘油三酯 比率與游離脂肪酸比率和得自對(duì)照動(dòng)物的比率。出乎意料地，通過治療， 循環(huán)甘油三酯比率和游離脂肪酸比率非常顯著地減少。
通過定量RT-PCR分析基因表達(dá)
本發(fā)明人還證明，本發(fā)明的化合物是PPAR耙基因表達(dá)的調(diào)節(jié)劑。圖 3-4、 3-5和3-6中所示的結(jié)果顯示，化合物8以50mpk向db/db小鼠給藥 28天誘導(dǎo)編碼PDK4和ACO的基因的肝臟表達(dá)的顯著增加(依次為圖3-4、 圖3-5)，并誘導(dǎo)編碼UCP2的基因在骨骼肌中的表達(dá)的增加(圖3-6)。編 碼特別地參與脂質(zhì)和糖代謝以及能量耗散的酶的所有基因以及它們的表達(dá) 受到本發(fā)明化合物調(diào)節(jié)的事實(shí)加強(qiáng)本發(fā)明的化合物具有用于治療代謝疾病 的巨大潛力的觀點(diǎn)。
結(jié)論
出乎意料地，所示的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，本發(fā)明的化合物在體內(nèi)刺激HDL 膽固醇合成而且具有降血脂質(zhì)效力(甘油三酯和游離脂肪酸血漿水平的降 低)。而且，所公開的的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，本發(fā)明的化合物調(diào)節(jié)受PPAR的 激活的調(diào)節(jié)的基因的表達(dá)，這些基因編碼特別地參與脂質(zhì)和糖代謝以及能 量耗散的酶。
實(shí)施例6:本發(fā)明化合物的抗炎性質(zhì)的體外評(píng)價(jià)
51原理
通過測(cè)量用本發(fā)明的化合物處理24小時(shí)并同時(shí)用PMA (佛波醇12-肉 豆蔻酸酯13-乙酸酯，它促進(jìn)細(xì)胞的炎癥應(yīng)答并促進(jìn)它們分化為巨噬細(xì)胞) 刺激的單核細(xì)胞的MCP1 (單核細(xì)胞趨化蛋白-l)分泌，來評(píng)價(jià)本發(fā)明的化 合物的抗炎效力。MCP-1分泌越少，則本發(fā)明的化合物就越抑制炎癥反應(yīng)。
實(shí)驗(yàn)方案
THP-1細(xì)胞的培養(yǎng)和處理
將THP-1人單核細(xì)胞系(ATCC來源)培養(yǎng)在具有25mM羥乙基哌嗪 乙磺酸(Gibco; 42401-018)、 1%谷氨酰胺(Gibco; 25030-24)、 1%青霉素 /鏈霉素(BiochromAG; A2213)禾n 10%去補(bǔ)體(decomplemented)胎牛血 清(SVF. Gibco; 26050-088)的RPMI1640培養(yǎng)基中。
將細(xì)胞以870000個(gè)細(xì)胞/孔的密度涂布在24孔板(PrimariaBD Falcon) 中，然后在37。C和5。/。C02下于含有0.2%胎牛血清的培養(yǎng)基中，在5ng/ml 佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酉旨(PMA)和lpM本發(fā)明化合物8的存在下 培養(yǎng)24小時(shí)。將本發(fā)明的化合物溶解在二甲基亞砜(DMSO，F(xiàn)luka; 41640) 中。將本發(fā)明的化合物的效力與單獨(dú)的DMSO的效力做比較。
MCP1分泌的測(cè)定
將處理培養(yǎng)基復(fù)原，使用ELISA試劑盒《 Human MCP-1 ELISA Set (BDOptEIA; 555179)，根據(jù)生產(chǎn)商的建議，測(cè)定MCP1濃度。
將MCP1置于平板上，通過抗MCP1特異性抗體識(shí)別。該特異性抗體 本身被用過氧化物酶偶聯(lián)的第二抗體特異性地識(shí)別。由酶活性產(chǎn)生的染色 與被固定的MCP1的量呈正比，并可通過分光光度法測(cè)定。從代表已知濃 度的點(diǎn)進(jìn)行一系列測(cè)定，并由此計(jì)算各個(gè)樣品的MCP1濃度。
然后計(jì)算誘導(dǎo)因子，即本發(fā)明的化合物誘導(dǎo)的信號(hào)與由對(duì)照組誘導(dǎo)的 信號(hào)的比率。該因子越小，則所述化合物就越抑制MCP1的分泌。最終結(jié) 果表示為得自各個(gè)實(shí)驗(yàn)組的誘導(dǎo)值的平均值。
結(jié)果
本發(fā)明人己證明，本發(fā)明的化合物對(duì)體外單核細(xì)胞具有抗炎效力。圖 4-1所示的結(jié)果顯示，l^M的本發(fā)明化合物8誘導(dǎo)單核細(xì)胞分泌的MCP1 顯著減少。結(jié)論
出乎意料地，所公開的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，本發(fā)明的化合物對(duì)被PMA刺激 的單核細(xì)胞具有抗炎效力。
總結(jié)
本發(fā)明人已證明，本發(fā)明的化合物具有降血脂性質(zhì)，導(dǎo)致血漿膽固醇 比率和甘油三酯比率的減少，還刺激HDL-膽固醇的合成。而且，本發(fā)明人 已證明，本發(fā)明的化合物能調(diào)節(jié)編碼特別地參與脂質(zhì)和糖代謝以及能量耗 散的酶的基因的表達(dá)。
本發(fā)明人還證明，本發(fā)明的化合物具有抗炎性質(zhì)。
這些得自體內(nèi)和體外的結(jié)果證明，本發(fā)明的化合物對(duì)例如血脂異常、II
型糖尿病和肥胖癥的重要疾病的治療潛力。 文獻(xiàn)目錄
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權(quán)利要求
1. 衍生自取代的1，3-二苯基丙烷的化合物，其具有以下通式(I)其中X1代表R1或者G1-R1基團(tuán)；X2代表鹵素原子、R2或者G2-R2基團(tuán)；X3代表R3或者G3-R3基團(tuán)；X4代表鹵素原子、R4或者G4-R4基團(tuán)；X5代表R5或者G5-R5基團(tuán)；R1代表氫原子或者非鹵代烷基；R2代表氫原子或者非鹵代烷基；R3、R4和R5相同或者不同，代表氫原子或者由一個(gè)或者多個(gè)組1或組2取代基取代的烷基或者非取代烷基；G1、G2、G3、G4和G5相同或者不同，代表氧原子或者硫原子；X3、X4或者X5中至少一個(gè)基團(tuán)與R3、G3R3、R4、G4R4、R5或者G5R5對(duì)應(yīng)，其中G3、G4和G5如上所述，并且R3、R4和R5相同或者不同，代表由一個(gè)或者多個(gè)組1或組2取代基取代的烷基；A代表(i)CR6R7基團(tuán)，其中R6和R7相同或者不同，代表氫原子、羥基、烷基或者-OR8基團(tuán)，R8定義如下，(ii)羰基(CO)，(iii)肟基(C＝N-O-H)或者肟醚(C＝N-O-R8)，R8相同或者不同，代表由芳基或者環(huán)烷基取代的烷基或者非取代烷基；D代表(i)與兩個(gè)氫原子連接的碳原子(CH2)，(ii)與氫原子和G2二者連接以形成氧化或者硫化雜環(huán)的碳原子；組1取代基選自-COOR9和-CONR9R10；組2取代基選自-SO3H和-SO2NR9R10；R9、R10和R5相同或者不同，代表氫原子或者由至少一個(gè)組1或組2取代基取代的烷基或者非取代烷基；除了如下通式(I)的化合物以外所述化合物中A代表-CR6R7基團(tuán)，R6和R7代表氫原子，并且所述化合物中基團(tuán)X1、X2、X3、X4和/或X5中至少有三個(gè)代表氫原子；其純立體異構(gòu)體(非對(duì)映異構(gòu)體、對(duì)映異構(gòu)體)或者混合立體異構(gòu)體、外消旋混合物、幾何異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、鹽、水合物、溶劑合物、固體形式以及它們的混合物。
2. 權(quán)利要求l的化合物，其特征在于，A不代表CH2基團(tuán)。
3. 權(quán)利要求1或2的化合物，其特征在于，A代表羰基(CO)。
4. 權(quán)利要求l-3中任一項(xiàng)的化合物，其特征在于，所述X3、 X4和X5 基團(tuán)中僅一個(gè)代表R3、 R4、 R5、 G3R3、 G4R4或G5R5，其中G3、 G4和G5如權(quán)利要求1所述，并且R3、 R4和R5代表由一個(gè)或者多個(gè)如權(quán)利要求1所定義的組1或組2 取代基取代的烷基。
5. 權(quán)利要求1-4之一的化合物，其特征在于，X3、 X4和X5中僅X4 代表R4或G4R4基團(tuán)，G4如權(quán)利要求l所定義，并且R4代表由一個(gè)或者多個(gè)組1或組2取代基取代的烷基。
6. 前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的化合物，其特征在于，G3、 G4和/或G5代表氧原子。
7. 前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的化合物，其特征在于，所述取代基選自如權(quán)利要求1中所定義的組1取代基。
8. 前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的化合物，其特征在于，所述X3、 X4和X5 基團(tuán)中僅一個(gè)與式-OC(CH3)2COOR9對(duì)應(yīng)，R9如權(quán)利要求l中所定義。
9. 前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的化合物，其特征在于，X3和X5相同或者 不同，分別代表R3和R5基團(tuán)，R3和R5代表由一個(gè)或者多個(gè)如權(quán)利要求 1中所定義的組1或組2取代基取代的垸基或者非取代烷基。
10. 前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的化合物，其特征在于，XI代表Rl或者 G1R1基團(tuán)，Gl如權(quán)利要求1中所定義，且R1代表非鹵代垸基。
11. 前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的化合物，其特征在于，X2代表氫原子。
12. 前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的化合物，其特征在于，D代表-CH2基團(tuán)。
13. 前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的化合物，其特征在于，它們選自 2-[2,6-二甲基-4-[3-[4-(甲硫基)苯基]-3-氧代丙基]苯氧基]-2-甲基丙酸； 2-[2,6-二甲基-4-[3-[2-(己氧基)苯基]-3-氧代丙基]苯氧基]-2-甲基丙酸； 2-[2,6-二甲基-4-[3-[4-(甲硫基)苯蜀-3-甲氧亞胺基丙基]苯氧基]-2-甲基丙酸；2-[2，6-二甲基-4-[3-[4-(甲氧基)苯萄-3-氧代丙基]苯氧基]-2-甲基丙酸； 2,6-二甲基-4-[3-[4-(甲硫基)苯基]-3-氧代丙基]苯氧基乙酸； 2-[2，6-二甲基-4-[3-[4-(丙氧基)苯萄-3-氧代丙基]苯氧基]-2-甲基丙酸； 2-[2-甲基-4-[3-[4-(庚基傳基]-3-氧代丙基]苯氧基]-2-甲基丙酸； 2-[2，6-二甲基-4-[3-[2-(三氟甲基)苯基]-3-氧代丙基]苯氧基]-2-甲基丙酸；2-[2,6-二甲基-4-[3-[4-(甲硫基)苯基]丙蜀苯氧基]-2-甲基丙酸； 2-[2,6-二甲基-4-[3-[4-(甲硫萄苯基]-3-氧代丙基]苯氧基]-2-甲基丙酸異 丙酯；2-[2,6-二甲基-4-[3-[4-(甲硫基)苯基]-3-肟基丙基]苯氧基]-2-甲基丙酸； 2-[2,6-二甲基-4-[3-[4-(丙氧基)苯基]-3-羥基丙基]苯氧基]-2-甲基丙酸； 2-[2,6-二甲基-4-[3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-3-氧代丙基]苯氧基]-2-甲基丙酸；2-[2,6-二甲基-4-[2,3-二氫-4H-l-苯并噻喃-4-酮-2-基]苯氧基]-2-甲基丙酸；2-[3-[3-[4-(甲硫基)苯基]-3-氧代丙基]苯氧基]-2-甲基丙酸；2-[2，6-二甲基-4-[3-[4-(甲硫基)苯基]-3-環(huán)己基甲氧基丙基]苯氧基]-2-甲 基丙酸；2-[2，6-二甲基-4-[3-[4-(甲硫基)苯基]-3-丁氧基丙基]苯氧基]-2-甲基丙酸；2-[2，6-二甲基-4-[3-[4-(甲硫基)苯基]-3-異丙氧基丙基]苯氧蜀-2-甲基丙酸；2-[2，6-二甲基-4-[3-[4-(甲硫基)苯基]-3-環(huán)己基乙氧基丙基]苯氧基]-2-甲 基丙酸；2-[2,6-二甲基-4-[3-[4-(甲硫基)苯基]-3-芐氧基丙基]苯氧基]-2-甲基丙酸；2-[2,6-二甲基-4-[3-[4-(甲硫基)苯基]-3-羥基丙基]苯氧基]-2-甲基丙酸； 2-[2,6-二甲基-4-[3-[4-(甲硫基)苯基]-3-乙氧基丙基]苯氧基]-2-甲基丙酸；2-[2,6-二甲基-4-[3-[4-(甲硫基)苯基]-3-甲氧基丙基]苯氧基]-2-甲基丙酸；2_[2_甲基-4-[3_[4-(丙硫基)苯蜀-3-氧代丙基]苯氧基]-2-甲基丙酸； 2-[4-[3-[4-(甲基苯基]-3-氧代丙基]苯氧基]-2-甲基丙酸。
14. 權(quán)利要求1-13中任一項(xiàng)的化合物，其作為藥物。
15. 藥物組合物，所述組合物在藥學(xué)上可接受的載體中包含至少一種如權(quán)利要求1-13所定義的化合物，所述化合物可能與一種或者多種其它治療 和/或化妝活性劑結(jié)合。
16. 藥物組合物，所述組合物在藥學(xué)上可接受的載體中包含至少一種如 權(quán)利要求1-13中任一項(xiàng)所定義的化合物，所述化合物與一種或者多種下列化合物結(jié)合-抗糖尿病藥 -胰島素-降脂和/或降膽固醇分子 -抗高血壓劑或降壓劑 -抗血小板齊u -減肥藥 -抗炎劑 -抗氧化劑-用于治療心功能不全的藥劑 -用于治療冠狀動(dòng)脈功能不全的藥劑- 抗癌藥-平喘藥 -平喘藥-用于治療皮膚病的腎上腺皮質(zhì)激素 -血管擴(kuò)張劑和/或抗局部缺血藥。
17. 權(quán)利要求15或16的藥物組合物，其用于治療與代謝綜合征相關(guān)的 并發(fā)癥、胰島素抵抗、糖尿病、血脂異常、動(dòng)脈粥樣硬化、心血管疾病、 肥胖癥、高血壓、炎性疾病、神經(jīng)變性疾病或者癌癥。
18. 權(quán)利要求15或16的藥物組合物，其用于治療血脂異常。
19. 權(quán)利要求15或16的藥物組合物，其用于治療與脂質(zhì)和/或糖代謝 異常相關(guān)的心血管風(fēng)險(xiǎn)因素。
全文摘要
本發(fā)明涉及取代的1，3-二苯基丙烷衍生物、包含它們的藥物組合物和它們的治療用途，特別是在人類和動(dòng)物健康領(lǐng)域。
文檔編號(hào)C07C251/48GK101506138SQ200780030962
公開日2009年8月12日 申請(qǐng)日期2007年6月21日 優(yōu)先權(quán)日2006年6月21日
發(fā)明者J-F·德洛梅爾, K·科蒙-貝特朗, R·漢夫 申請(qǐng)人:基恩菲特