專利名稱：：粘度降低的蛋白質(zhì)制劑及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本申請(qǐng)涉及蛋白質(zhì)制劑，并且更具體地涉及粘度降低的蛋白質(zhì)制劑。相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用本申請(qǐng)要求2005年12月21日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)系列號(hào)60/752660的優(yōu)先權(quán)，并通過引用的方式將其全文合并入本申請(qǐng)。
背景技術(shù)：
：據(jù)估計(jì)超過371個(gè)新的基于生物技術(shù)的藥物正在進(jìn)行工業(yè)生產(chǎn)。這種基于生物技術(shù)的藥物包括治療蛋白質(zhì)，例如酶、可溶受體、配體、血液蛋白質(zhì)和單克隆抗體?；诘鞍踪|(zhì)的治療，特別是基于單克隆抗體的治療已經(jīng)成為重要的治療疾病(例如癌癥、變應(yīng)性疾病、哮喘和器官移植)的方法。2003年年底，美國(guó)食品和藥品管理局批準(zhǔn)了14個(gè)基于抗體的治療不同的人類疾病的療法?；诳贵w的治療通常規(guī)律地給藥，并且要求通過注射方式給藥數(shù)mg/kg的劑量。皮下注射是這些療法的典型給藥途徑。由于用于皮下注射的體積小(通常是1.0mL-1.2mL)，對(duì)于高劑量的抗體治療，此給藥途徑要求高濃度的蛋白質(zhì)制劑(例如50mg/ml-300mg/ml)。高蛋白質(zhì)濃度對(duì)蛋白質(zhì)的物理和化學(xué)穩(wěn)定性提出了挑戰(zhàn)，并且造成蛋白質(zhì)制劑在制備、儲(chǔ)存和遞送上的困難。一個(gè)問題是在操作和/或儲(chǔ)存過程中，蛋白質(zhì)形成顆粒的傾向，其使得在進(jìn)一步的加工過程中的操作變得困難。為了試圖避免這個(gè)問題，已經(jīng)將表面活性劑和/或糖類加入蛋白質(zhì)制劑中。盡管表面活性劑和糖類可以降低蛋白質(zhì)形成顆粒的程度，但是它們不能解決與操作和施用濃縮的蛋白質(zhì)制劑相關(guān)的另一個(gè)問題，即粘度的增加。事實(shí)上，糖類可以增強(qiáng)蛋白質(zhì)中或者蛋白質(zhì)之間的分子間相互作用，并增加蛋白質(zhì)制劑的粘度。從操作一直到藥物遞送給患者，蛋白質(zhì)制劑增加的粘度均產(chǎn)生負(fù)面效應(yīng)。因此，在本領(lǐng)域存在開發(fā)具有適宜的低粘度的相對(duì)高濃度蛋白質(zhì)制劑的需求，其中該低粘度適于蛋白質(zhì)制劑制備、儲(chǔ)存和施用。發(fā)明概述(明涉及與具有降低的粘度的蛋白質(zhì)制劑，還涉及制備這種粘度降低的蛋白質(zhì)制劑(粘度降低制劑)的方法。一方面，本發(fā)明涉及降低蛋白質(zhì)制劑粘度的方法，該方法通過向蛋白質(zhì)制劑中添加粘度降低劑，使該蛋白質(zhì)制劑的粘度相比較于缺少該粘度降低劑的蛋白質(zhì)制劑而言降低。在一個(gè)實(shí)施方案中，該方法包括在添加粘度降低劑之前測(cè)定蛋白質(zhì)制劑的粘度。在另一個(gè)實(shí)施方案中，該方法包括在添加粘度降低劑之后測(cè)定蛋白質(zhì)制劑的粘度。而在另一個(gè)實(shí)施方案中，該方法包括在添加粘度降低劑之前和之后測(cè)定蛋白質(zhì)制劑的粘度。在某些實(shí)施方案中，相比較于在無粘度降低劑的情況下配制的制劑的粘度，粘度降低劑使蛋白質(zhì)制劑的粘度降低至少5%。一些實(shí)施方案中，粘度降低劑是氯化鈣或者氯化鎂。粘度降低劑以不會(huì)負(fù)面影響蛋白質(zhì)制劑的低濃度添加。一般地，添加到蛋白質(zhì)制劑中的粘度降低劑的終濃度介于大約lmM和大約50mM之間。在一些實(shí)施方案中，添加到蛋白質(zhì)制劑中的粘度降低劑的終濃度為介于大約5mM和大約25mM之間。在某些實(shí)施方案中，添加到蛋白質(zhì)制劑中的粘度降低劑的終濃度為介于大約lmM和大約20mM之間。在某些實(shí)施方案中，添加到蛋白質(zhì)制劑中的粘度降低劑的終濃度為介于0.5mM和14mM之間。在另一個(gè)實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)是抗體、Ig融合蛋白、受體、配體、轉(zhuǎn)錄因子、酶或者其生物活性片段。在一些實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)是抗氯化筒箭毒堿抗體(anti-myostatinantibody)、抗IL-12抗體或者抗IL-13抗體。另一方面，本發(fā)明涉及粘度降低的蛋白質(zhì)制劑。該粘度降低的蛋白質(zhì)制劑包含蛋白質(zhì)、粘度降低劑和緩沖劑。在一些實(shí)施方案中，該粘度降低劑是氯化鈣或者氯化鎂。一般地，添加到蛋白質(zhì)制劑中的粘度降低劑的終濃度介于大約lmM和大約50mM之間。在一些實(shí)施方案中，添加到蛋白質(zhì)制劑中的粘度降低劑的終濃度介于大約5mM和大約25mM之間。在某些實(shí)施方案中，添加到蛋白質(zhì)制劑中的粘度降低劑的終濃度介于大約1mM和大約15mM之間。在某些其它實(shí)施方案中，添加到蛋白質(zhì)制劑中的粘度降低劑的終濃度介于0.5mM和14mM之間。當(dāng)將粘度降低劑添加到蛋白質(zhì)制劑中至大約0.5mM到大約50mM濃度時(shí)，氯化鈉和磷酸二氫鈉不用作粘度降低劑。一般地，蛋白質(zhì)制劑的pH值介于大約5.5和大約6.5之間。在某些實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)是抗體、Ig融合蛋白、受體、配體、轉(zhuǎn)錄因子、酶或者其生物活性片段。在某些實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)制劑以藥盒形式提供。這樣的藥盒可以包含使用該蛋白質(zhì)制劑的說明書。在某些實(shí)施方案中，粘度降低的蛋白質(zhì)制劑是粘度降低的抗氯化筒箭毒堿抗體制劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，該抗氯化筒箭毒堿抗體是單克隆抗體。在另一個(gè)實(shí)施方案中，該抗氯化筒箭毒堿抗體是人源化單克隆抗體(例如，部分人源化或者完全人源化的單克隆抗體)。在某些實(shí)施方案中，抗氯化筒箭毒堿抗體是MYO-022，MYO-028或MYO-029。一般地，抗氯化筒箭毒堿抗體以介于大約25mg/ml至大約400mg/ml之間的濃度使用。一般地，添加到粘度降低的抗氯化筒箭毒堿抗體制劑中的粘度降低劑的終濃度介于大約lmM和大約50mM之間。一些實(shí)施方案中，添加到抗氯化筒箭毒堿抗體中的粘度降^f氐劑的終濃度介于大約5mM和大約25mM之間。某些實(shí)施方案中，添加到抗氯化筒箭毒堿抗體制劑中的粘度降低劑的終濃度介于大約lmM和大約15mM之間。某些實(shí)施方案中，添加到抗氯化筒箭毒堿抗體制劑中的粘度降低劑的終濃度介于0.5mM和14mM之間。當(dāng)將粘度降低劑添加到抗氯化筒箭毒堿抗體制劑中至大約0.5mM到大約50mM的濃度時(shí)，氯化鈉和磷酸二氫鈉不用作粘度降低劑。一般地，粘度降低的抗氯化筒箭毒堿抗體制劑的pH值介于大約5.5和大約6.5之間。一個(gè)實(shí)施方案中，使用組氨酸以緩沖粘度降低的氯化筒箭毒堿抗體制劑。粘度降低的氯化筒箭毒堿抗體制劑也可以包含一種或者多種冷凍保護(hù)劑、一種或者多種表面活性劑、一種或者多種抗氧化劑或者其組合。在一些實(shí)施方案中，粘度降低的抗氯化筒箭毒堿制劑是復(fù)原制劑(reconstitutedformulation)。氯化筒箭毒堿抗體可以如本文所述配制為藥物組合物，并iU皮用于治療疾病，例如但不限于治療肌營(yíng)養(yǎng)不良、少肌癥(sarcopenia)、惡病質(zhì)和二型糖尿病。在某些實(shí)施方案中，粘度降低的抗氯化筒箭毒堿抗體制劑以藥盒形式提供。這樣的藥盒可以包含使用該抗體制劑的說明書。某些實(shí)施方案中，粘度降低的蛋白質(zhì)制劑是粘度降低的抗IL-12抗體制劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，該抗IL-12抗體是單克隆抗體。在另一個(gè)實(shí)施方案中，該抗IL-12抗體是人源化的單克隆抗體(例如部分人源化或者完全人源化單克隆抗體)。在某些實(shí)施方案中，抗IL-12抗體是J695。一般地，制劑中使用的抗IL-12抗體的濃度介于大約25mg/ml至大約400mg/ml之間。一般地，添加到抗IL-12抗體制劑中的粘度降低劑的終濃度介于大約lmM和大約50mM之間。一些實(shí)施方案中，添加到抗IL-12抗體制劑中的粘度降低劑的終濃度介于大約5mM和大約25mM之間。某些實(shí)施方案中，添加到抗IL-12抗體制劑中的粘度降低劑的終濃度介于大約lmM和大約15mM之間。某些其它實(shí)施方案中，添加到抗IL-12抗體制劑中的粘度降低劑的終濃度介于0.5mM和大約14mM之間。當(dāng)將粘度降低劑添加到抗IL-12抗體制劑中至介于大約0.5mM至大約50mM之間的濃度時(shí)，氯化鈉和磷酸二氫鈉不用作粘度降低劑。一般地，粘度降低的抗IL-12抗體制劑的pH值介于大約5.5和大約6.5之間。在某些實(shí)施方案中，在粘度降低的抗IL-12抗體制劑中，組氨酸被用作緩沖劑。粘度降低的抗IL-12抗體制劑也可以包含一種或者多種冷凍保護(hù)劑、一種或者多種表面活性劑、一種或者多種抗氧化劑或者其組合。在一些實(shí)施方案中，粘度降低的抗IL-12制劑是復(fù)原制劑。如本文所公開的，抗IL-12抗體可以被配制以用作藥物組合物，并且被用于治療疾病，例如但不限于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，克隆病，銀屑病，和銀屑病性關(guān)節(jié)炎。在某些實(shí)施方案中，粘度降低的抗IL-12抗體制劑作為藥盒的一部分,皮提供。這樣的藥盒可以包含卩吏用該抗IL-12抗體制劑的i兌明書。某些實(shí)施方案中，粘度降低的蛋白質(zhì)制劑是抗IL-13抗體制劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，該抗IL-13抗體是單克隆抗體。在另一個(gè)實(shí)施方案中，該抗IL-13抗體是人源化的單克隆抗體(例如部分人源化或者完全人源化)。在某些實(shí)施方案中，抗IL-13抗體是IMA-638。一般地，抗IL-13抗體在制劑中以大約25mg/ml至大約400mg/ml的濃度使用。一般地，添加粘度IL-13抗體制劑。一些實(shí)施方案中，添加到抗IL-13抗體制劑中的粘度降低劑的終濃度介于大約5mM和大約25mM之間。某些實(shí)施方案中，添加到抗IL-13抗體制劑中的粘度降低劑的終濃度介于大約lmM和大約15mM之間。某些其它實(shí)施方案中，添加到抗IL-13抗體制劑中的粘度降低劑的終濃度介于0.5mM和大約14mM之間。當(dāng)將粘度降低劑添加到抗IL-13抗體制劑中至介于大約0.5mM至大約50mM之間的濃度時(shí)，氯化鈉和磷酸二氫鈉不用作粘度降低劑。一般地，粘度降低的抗IL-13抗體制劑的pH值介于大約5.5和大約6.5之間。在一個(gè)實(shí)施方案中，在粘度降低的抗IL-13抗體制劑中，組氨酸被用作緩沖劑。粘度降低的抗IL-13抗體制劑也可以包含一種或者多種冷凍保護(hù)劑、一種或者多種表面活性劑、一種或者多種抗氧化劑或者其組合。在一些實(shí)施方案中，粘度降低的抗IL-13制劑是復(fù)原制劑。抗IL-13抗體可以以藥物組合物形式配制在粘度降低制劑中，并且被用于治療疾病，例如但不限于治療呼吸道疾病(例如哮喘)；特異反應(yīng)性疾病(例如變應(yīng)性鼻炎)；皮膚(例如特應(yīng)性皮炎)、胃腸道器官(例如炎癥性腸病(IBD))的炎癥和/或自身免疫病，以及纖維變性疾病和癌癥。在某些實(shí)施方案中，粘度降低的抗IL-13抗體制劑作為藥盒被提供。這樣的藥盒可以包含使用該粘度降低的抗IL-13抗體制劑的說明書。除非另有定義，本文使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有本發(fā)明所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員所通常理解的含義。盡管與本文所公開的那些方法和材料相似或者等價(jià)的方法和材料可以被用于實(shí)踐或者檢測(cè)本發(fā)明，但是合適的方法和材料在下文公開。本文所提及的所有出版物、專利申請(qǐng)、專利和其它參考文獻(xiàn)都通過引用的方式完整地并入此處。另外，材料、方法和實(shí)施例僅用于舉例說明而不欲于限制本發(fā)明。本發(fā)明的其它特征和優(yōu)勢(shì)將從發(fā)明詳述、附圖和從權(quán)利要求中得以彰顯。附圖簡(jiǎn)要說明圖l是描述實(shí)驗(yàn)結(jié)果的圖，該實(shí)驗(yàn)用于確定多種鹽的遞增濃度對(duì)抗氯化筒箭毒堿(MYO-029)抗體制劑粘度的影響。圖2是描述實(shí)驗(yàn)結(jié)果的柱形圖，該實(shí)驗(yàn)用于確定氯化鈣的遞增濃度對(duì)抗氯化筒箭毒堿(MYO-028)抗體制劑粘度的影響。圖3是描述實(shí)驗(yàn)結(jié)果的圖，該實(shí)驗(yàn)用于確定氯化鈣的遞增濃度對(duì)抗IL-13(IMA-638)抗體制劑粘度的影響。圖4A是描述實(shí)驗(yàn)結(jié)果的柱形圖，該實(shí)驗(yàn)用于檢測(cè)在存在或缺少氯化鈣的情況下，凍融誘導(dǎo)的抗氯化筒箭毒堿(MYO-029)抗體降解的結(jié)果。通過檢測(cè)在280nm的吸光度確定蛋白質(zhì)的回收率而評(píng)估降解。圖4B是描述實(shí)驗(yàn)結(jié)果的柱形圖，該實(shí)驗(yàn)用于檢測(cè)在存在或缺少氯化4丐的情況下，凍融誘導(dǎo)的抗氯化筒箭毒堿(MYO-029)抗體降解的結(jié)果。通過大小排阻-高效液相層析(SEC-HPLC)確定形成的高分子量物類(species)的百分?jǐn)?shù)(％HMW)而評(píng)估降解。圖5A是描述實(shí)驗(yàn)結(jié)果的柱形圖，該實(shí)驗(yàn)用于檢測(cè)氯化釣的存在或者缺少(對(duì)照)對(duì)于40GC不超過7天儲(chǔ)存的抗氯化筒箭毒堿(MYO-029)抗體的液體穩(wěn)定性的影響。通過檢測(cè)在280nm的吸光度而確定MYO-029抗體的液體穩(wěn)定性。圖5B是描述實(shí)驗(yàn)結(jié)果的柱形圖，該實(shí)驗(yàn)用于檢測(cè)氯化鈣的存在或者缺少(對(duì)照)對(duì)于40GC不超過7天儲(chǔ)存的抗氯化筒箭毒堿(MYO-029)抗體的液體穩(wěn)定性的影響。通過SEC-HPLC檢測(cè)HMW的形成從而確定MYO-029抗體的液體穩(wěn)、定性。圖6是MYO-028抗體重鏈(SEQIDNO:l)和輕鏈(SEQIDNO:2)的氨基酸序列的圖示。圖7是MYO-029抗體重鏈(SEQIDNO:3)和輕鏈(SEQIDNO:4)的氨基酸序列的圖示。圖8是J695抗體重鏈(SEQIDNO:5)和輕鏈(SEQIDNO:6)的氨基酸序列的圖示。圖9是IMA-638抗體重鏈(SEQIDNO:7)和輕鏈(SEQIDNO:8)的^J^酸序列的圖示。由重鏈DNA序列編碼的最后一個(gè)氮基酸殘基Lys柳僅在少量的成熟、分泌型IMA-638中觀察到，并且推測(cè)其在細(xì)胞內(nèi)加工過程中被CHO細(xì)胞蛋白酶從單克隆抗體的主體中除去。因此，IMA-638重鏈的羧基端是Gly447。羧基端的賴氨酸加工已經(jīng)在重組和衍生自血漿的抗體中觀察到，并且其看起來不影響抗體的功能。發(fā)明詳述蛋白質(zhì)制劑的粘度牽涉穩(wěn)定性、加工、儲(chǔ)存，以及對(duì)于那些用作藥物的蛋白質(zhì)制劑，還牽涉蛋白質(zhì)制劑向患者的藥物遞送。這樣的牽涉包括但不限于通過超濾和滲濾的濃縮和緩沖液更換(隨著粘度的增加，跨膜流量將減少，因此導(dǎo)致更長(zhǎng)的操作時(shí)間)，無菌過濾(粘性溶液的無菌過濾將花費(fèi)更長(zhǎng)的時(shí)間，并且在一些情況下，非常粘滯的溶液將無法通過具有非常小孔徑的膜，例如0.22nm膜)，樣品操作(例如難于移液和難于吸入注射器中)，復(fù)原之后從儲(chǔ)存小瓶的回收、穩(wěn)定性、通過針頭的皮下或者肌內(nèi)給藥。本文提供已經(jīng)經(jīng)過鑒定的降低蛋白質(zhì)制劑的粘度的方法。該方法適于制備具有粘度降低的蛋白質(zhì)制劑("粘度降低制劑"或者"粘度降低的蛋白質(zhì)制劑")。這些粘度降低的蛋白質(zhì)制劑包含目的蛋白質(zhì)和粘度降低劑。降低蛋白質(zhì)制劑粘度的方法本文使用的術(shù)語(yǔ)"粘度，，可以是"運(yùn)動(dòng)粘度"或者"絕對(duì)粘度"。"運(yùn)動(dòng)粘度"是流體在重力影響下受阻滯的流動(dòng)的量度。當(dāng)?shù)润w積的兩種流體置于相同的毛細(xì)管粘度計(jì)中并允許通過重力作用而流動(dòng)時(shí)，粘滯的流體比較不粘滯的流體花費(fèi)更長(zhǎng)的時(shí)間流動(dòng)通過毛細(xì)管。如果一種流體耗時(shí)100秒完成其流動(dòng)，而另一種流體耗時(shí)200秒完成其流動(dòng)，則以運(yùn)動(dòng)粘度衡量，第二種流體的粘度為第一種流體粘度的兩倍。"絕對(duì)粘度"有時(shí)稱為"動(dòng)態(tài)粘度"或者"簡(jiǎn)單粘度"，是運(yùn)動(dòng)粘度和流體密度的乘積。運(yùn)動(dòng)粘度的量綱是lVt，其中l(wèi)是長(zhǎng)度，t是時(shí)間。通常，運(yùn)動(dòng)粘度以單位厘沲(cSt)表示。運(yùn)動(dòng)粘度的Sl單位是mm2/8，其為lcSt。絕對(duì)粘度以單位厘泊(cP)表示。絕對(duì)粘度的SI單位是毫帕斯卡-秒(mPa-s)，其中1cP=lmPa-s。蛋白質(zhì)制劑的粘度可以通過向制劑中添加粘度降低劑而被降低。在一些情況中，粘度降低劑以相對(duì)低的濃度添加。包含粘度降低劑的制劑的粘度相比較于缺少粘度降低劑的制劑的粘度而被降低。當(dāng)添加粘度降低劑導(dǎo)致制劑的粘度相比于相應(yīng)的不包含粘度降低劑的制劑，或者相比于不包含選定濃度的粘度降低劑的制劑而言降低時(shí)，含有粘度降低劑(例如選定濃度)的制劑是粘度降低制劑。在某些粘度降低制劑中，粘度降低劑一般4吏蛋白質(zhì)制劑的粘度相比較于無或者含有較少量粘度降低劑的蛋白質(zhì)制劑的粘度而言降低大約5%、大約10%、大約15%、大約20%、大約25%、大約30%、大約35%、大約40%、大約45%、大約50%、大約55%、大約60%、大約65%、大約70%、大約75%、大約80%、大約85%和大約90%。在一些情況中，粘度降低劑一般使蛋白質(zhì)制劑的粘度相比較于無或者含有較少量粘度降低劑的蛋白質(zhì)制劑的粘度而言降低至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%和至少卯％。在某些實(shí)施方案中，在添加粘度降低劑之前測(cè)量蛋白質(zhì)制劑的粘度。在其它實(shí)施方案中，在添加粘度降低劑之后測(cè)量蛋白質(zhì)制劑的粘度。該測(cè)量可以在向蛋白質(zhì)制劑中添加粘度降低劑之后數(shù)小時(shí)(例如1-23小時(shí))，數(shù)天(例如1-10天)，數(shù)周(例如l-5周)，數(shù)月(例如1-12月)，或數(shù)年(例如l-2年，l-3年)進(jìn)行。在另一些實(shí)施方案中，在添加粘度降低劑之前和之后檢測(cè)蛋白質(zhì)制劑的粘度。檢測(cè)粘度的方法是本領(lǐng)域所熟知的，包括例如使用毛細(xì)管粘度計(jì)，或者使用錐板式流變儀。一個(gè)實(shí)施方案中，粘度降低劑是鹽，例如氯化鈣、氯化鎂、磷酸鈉或者鹽酸精氨酸。在本文公開的方法中，粘度降低劑加入蛋白質(zhì)制劑中至終濃度介于大約0.5mM和大約100mM之間。在一個(gè)實(shí)施方案中，加入蛋白質(zhì)制劑中的粘度降低劑的終濃度介于大約5mM和大約20mM之間。在另一個(gè)實(shí)施方案中，加入蛋白質(zhì)制劑中的粘度降低劑的終濃度介于0.5mM和14mM之間。在某些實(shí)施方案之中，加入蛋白質(zhì)制劑中的粘度降低劑的終濃度為大約0.5mM至不超過20mM，或者19mM、或18mM、或17mM、或16mM、或15mM、或14mM、或13mM、或12mM、或llmM、或10mM。一般地，當(dāng)加入蛋白質(zhì)制劑中的粘度降低劑的終濃度介于大約0.5mM和大約25mM之間時(shí)，粘度降低劑是氯化^5或者氯化鎂，而不是氯化鈉或者磷酸二氫鈉。在某些實(shí)施方案中，粘度降低劑以低濃度加入，以便對(duì)蛋白質(zhì)制劑沒有負(fù)面影響。例如，在氯化鈣或者氯化鎂的濃度為20mM或者更高時(shí)，蛋白質(zhì)可以在低儲(chǔ)存溫度(例如2-8。C)下形成凝膠。因此，粘度降低劑度'制劑粘度降低的蛋白質(zhì)制劑的組成通過考慮數(shù)種因素而確定。這些因素包括但不限于蛋白質(zhì)的性質(zhì)(例如受體、抗體、Ig融合蛋白、酶)；蛋白質(zhì)的濃度；期望的pH范圍；蛋白質(zhì)制劑如何儲(chǔ)存(例如溫度)；蛋白質(zhì)制劑儲(chǔ)存的期限；以及該制劑如何施用給患者。合適粘度降低劑的選擇部分地取決于對(duì)制劑中蛋白質(zhì)的這些要求。蛋白質(zhì)可配制的目的蛋白質(zhì)包括但不限于，蛋白質(zhì)，例如氯化筒箭毒堿/GDF-8;白細(xì)胞介素(IL)(例如IL-1至IL-15);生長(zhǎng)激素(例如人生長(zhǎng)激素和牛生長(zhǎng)激素)；生長(zhǎng)激素釋放因子；甲狀旁腺素；甲狀腺刺激激素；尿酸氧化酶；尿抑胰酶素；膽紅素氧化酶；枯草蛋白酶；脂蛋白；a-l-抗胰蛋白酶；胰島素A鏈；胰島素B鏈；胰島素原；促卵泡激素；降釣素；黃體生成素；胰高血糖素；因子VIIa;因子VIII，因子VIIIC;因子IX;組織因子；馮維勒布蘭德因子；抗凝因子(例如蛋白C);心鈉素；肺表面活性劑；纖溶酶原激活物(例如尿激酶或組織型纖溶酶原激活物(t-PA));bombazine;凝血酶；纖維蛋白'溶酶；小纖維蛋白'溶酶(miniplasmin);微纖維蛋白溶敏microplasmin);腫瘤壞死因子ot和(5;腦啡肽酶;RANTES(正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌的調(diào)節(jié)活化蛋白(RegulatedonActivationNormallyT畫cellExpressedandSecreted));人巨嗟細(xì)胞炎性蛋白(MIP畫l-a);血清白蛋白(例如Aj6l清白蛋白)；苗勒管抑制物(Mullerian-inhibitingsubstance);+〉他素A鏈；松弛素B鏈；+>弛素原(prorelaxin);小鼠促性腺激素相關(guān)肽；DNA酶；抑制素；激活蛋白；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF);胎盤生長(zhǎng)因子(P1GF);激素或生長(zhǎng)因子的受體；整聯(lián)蛋白；蛋白A或蛋白D;類風(fēng)濕因子；神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子例如骨衍生的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)，神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)蛋白-3、-4、-5或-6(1^1-3、NT-4、NT-5或NT-6)或神經(jīng)生長(zhǎng)因子NGF-p;血小板衍生生長(zhǎng)因子(PDGF);成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(例如aFGF和bFGF);表皮生長(zhǎng)因子(EGF);轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF)(例如TGF畫a和TGF畫p，包括TGF-pi、TGF畫p2、TGF畫p3、TGF-p4或TGF曙p5);胰島素樣生長(zhǎng)因子I和II(IGF-I和IGF-II);脫(l-3)-IGF-I(腦IGF-I);胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白；CD蛋白(例如CD2、CD3、CD4、CD8、CD9、CD19、CD20、CD22、CD28、CD34和CD45);促紅細(xì)胞生成素(EPO);血小板生成素(TPO);骨誘導(dǎo)因子(osteoinductivefactors);免疫毒素；骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMP);干擾素例如干擾素a、p和Y;集落刺激因子(CSF)，例如M-CSF、GM-CSF和G-CSF;超氧化物歧4匕酶；T細(xì)胞受體；HER受體家族成員(例如EGF受體、HER2、HER3或HER4受體)；細(xì)胞附著分子(例如LFA-1、VLA-4、ICAM-1和VCAM);IgE;血型抗原；flk2/flt3受體；肥胖(OB)受體；衰變加速因子(DAF);病毒抗原(例如HIVgag、env、pol、tat或rev蛋白)；歸巢受體；地址素；免疫黏附素；和任何上述多肽的生物活性片段或者變體。在一些制劑中，制劑包含一種以上的蛋白質(zhì)或者片段。術(shù)語(yǔ)"生物活性片段"指保留其所來源自的蛋白質(zhì)的至少一種功能的蛋白質(zhì)片段。抗體的生物活性片段包括抗體的抗原結(jié)合片段；受體的生物活性片段包括仍然能夠結(jié)合其配體的受體片段；配體的生物活性片段包括仍然能夠結(jié)合其受體的配體的一部分；以及酶的生物活性片段包括仍然能夠催化由完整長(zhǎng)度的酶催化的反應(yīng)的酶的一部分。在一個(gè)實(shí)施方案中，生物活性片段保留其所來源自的蛋白質(zhì)的功能的至少大約5%?？梢酝ㄟ^本領(lǐng)域已知的方法檢測(cè)蛋白質(zhì)的功能(例如檢測(cè)抗體-抗原相互作用，檢測(cè)配體-受體相互作用；檢測(cè)酶活性，檢測(cè)轉(zhuǎn)錄活性或者檢測(cè)DNA-蛋白質(zhì)相互作用)。在一些情況中，片段是有治療用途的片段，其可以例如保留其所來源自的蛋白質(zhì)的某些特征(例如結(jié)合特定配體)，但是不引起由其所來源自的蛋白質(zhì)引發(fā)的細(xì)胞應(yīng)答。在某些實(shí)施方案中，要配制的蛋白質(zhì)是抗體?？贵w可以是能結(jié)合上述蛋白質(zhì)之一的抗體。本文使用的術(shù)語(yǔ)"抗體"包括多克隆抗體、單克隆抗體、具有多表位特異性的抗體組合物、雙特異抗體、雙抗體(diabody)或者抗體和重組抗體的其它純化制品?？贵w可以是完整的抗體，例如任何同種型(IgG、IgA、IgE、IgM等等)的完整抗體，或者其結(jié)合目的抗原的片段。在本發(fā)明使用的抗體的一個(gè)特定實(shí)例中，待配制的抗體是具有IgG同種型的抗體。使用常規(guī)或者其它技術(shù)可以將抗體片段化，并且篩選結(jié)合目的抗原的片段。一般地，抗體片段包含完整抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)和/或可變區(qū)。因此，術(shù)語(yǔ)抗體片段包括能夠選擇性結(jié)合選定蛋白質(zhì)的、抗體分子的蛋白水解剪切區(qū)段或者重組制備的部分。這些蛋白水解的和/或重組的片段的非限制性實(shí)例包括Fab、F(ab')2、Fab'、Fv和含有由肽接頭連接的V[Lj和/或V[H結(jié)構(gòu)域的單鏈抗體(scFv)。scFv可以共價(jià)或者非共價(jià)連接以形成具有兩個(gè)或者多個(gè)結(jié)合位點(diǎn)的抗體。一些實(shí)施方案中，抗體是人源化的單克隆抗體。本文使用的術(shù)語(yǔ)"人源化單克隆抗體，，是來自非人來源的單克隆抗體(受體)，其已被改變以含有等價(jià)人單克隆抗體(供體)中的至少一個(gè)或者多個(gè)氨基酸殘基。"完全人源化單克隆抗體"是來源自非人類來源的單克隆抗體，其已被改變以含有等價(jià)人單克隆抗體的抗原結(jié)合區(qū)中的所有氨基酸殘基。人源化抗體也可以包含在受體抗體或者供體抗體中均沒有的殘基?？梢赃M(jìn)行這些修飾以進(jìn)一步精細(xì)化和最優(yōu)化抗體的功能。人源化抗體也可以任選地包含至少一部分人免疫球蛋白恒定區(qū)(Fc)。某些實(shí)施方案中，粘度降低制劑中使用的抗體是抗氯化筒箭毒堿抗體(例如MYO-022、MYO-028(圖6)、MYO-029(圖7))。MYO-022，MYO-028，和MYO-029抗體在U.S.專利申請(qǐng)No.10/688，925(公開號(hào)2004/0142382)中公開，其通過引用的方式合并入本申請(qǐng)。其它實(shí)施方案中，抗體是IL-12抗體(例如J695(圖8))。J695抗體公開在U.S.專利No.6,914,128中，其通過引用的方式合并入本申請(qǐng)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗體是抗IL-13抗體(例如IMA-638(圖9),CAT-354)?？笽L-13抗體公開在U.S.專利申請(qǐng)No.11/149,309中，其通過引用的方式合并入本申請(qǐng)。一些實(shí)施方案中，待配制的蛋白質(zhì)是融合蛋白。一個(gè)實(shí)施方案中，融合蛋白M疫球蛋白(Ig)融合蛋白。特定的實(shí)施方案中，融合蛋白包含IgG重鏈恒定區(qū)。另一個(gè)實(shí)施方案中，融合蛋白包含對(duì)應(yīng)于人免疫球蛋白Cyl的鉸鏈區(qū)、CH2和CH3區(qū)的M酸序列。Ig融合蛋白的實(shí)例包括CTLA4Ig和VCAM2D-IgG。制備融合蛋白的方法是本領(lǐng)域已知的(例如U.S.專利No.6，887，471和6,482,409)。某些實(shí)施方案中，要配制的蛋白質(zhì)是不包括因子VII多肽或者抗IgE抗體的蛋白質(zhì)。粘度降低制劑可以含有治療特定疾病所需的一種以上蛋白質(zhì)。這些附加的蛋白質(zhì)典型地對(duì)制劑中的其它蛋白質(zhì)具有補(bǔ)充活性，并且不負(fù)面影響制劑中的其它蛋白質(zhì)。例如可能期望提供含有兩種或者多種結(jié)合氯化筒箭毒堿的抗體；兩種或者多種結(jié)合IL-12的抗體；或者兩種或者多種結(jié)合IL-13的抗體的單一制劑。另外，蛋白質(zhì)制劑還可以含有在粘度降低的蛋白質(zhì)制劑的最終用途中有用的非蛋白質(zhì)物質(zhì)。例如，可以添加蔗糖以增強(qiáng)溶液中蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性和可溶性；以及可以添加組氨酸以提供合適的緩沖能力。這些附加的物質(zhì)可以是添加粘度降低劑之前的蛋白質(zhì)制劑的一部分，或者在制備粘度降低制劑的過程中加入。某些實(shí)施方案中，要配制的蛋白質(zhì)在其用于制劑之前是基本上純的和/或基本上均質(zhì)的(即，基本上沒有雜質(zhì)蛋白質(zhì)等等)。術(shù)語(yǔ)"基本上純的"蛋白質(zhì)指包含按重量計(jì)至少大約90%的選定蛋白質(zhì)級(jí)分，例如按重量計(jì)至少大約95%的選定蛋白質(zhì)級(jí)分的組合物。術(shù)語(yǔ)"基本上均質(zhì)的"蛋白質(zhì)指含有按重量計(jì)(排除溶液中的各種穩(wěn)定劑和水的質(zhì)量)至少大約99%的選定蛋白質(zhì)級(jí)分的組合物。低粘度制劑中的蛋白質(zhì)濃度粘度降低制劑中的蛋白質(zhì)的濃度取決于制劑的最終用途。本文公開的制劑中的蛋白質(zhì)濃度一般介于大約10mg/ml至大約300mg/ml之間，例如大約10mg/ml至大約100mg/ml，大約25mg/ml至大約100mg/ml,大約50mg/ml至大約100mg/ml，大約75mg/ml至大約100mg/ml，大約lOOmg/ml至大約200mg/ml，大約125mg/ml至大約200mg/ml，大約150mg/ml至大約200mg/ml，大約200mg/ml至大約300mg/ml,和大約250mg/ml至大約300mg/ml。例如，本文公開的制劑中的蛋白質(zhì)濃度可以介于lOmg/ml和300mg/ml之間，例如介于lOmg/ml和lOOmg/ml之間，介于25mg/ml和100mg/ml之間，介于50mg/ml和100mg/ml之間，介于75mg/ml和lOOmg/ml之間，介于lOOmg/ml和200mg/ml之間，介于125mg/ml和200mg/ml之間，介于150mg/ml和200mg/ml之間，介于200mg/ml和300mg/ml之間和介于250mg/ml和300mg/ml之間。術(shù)語(yǔ)"介于"旨在包括最小和最大濃度。粘度降低的蛋白質(zhì)制劑可以被用于治療用途。因此，用于治療應(yīng)用的制劑中的蛋白質(zhì)的濃度基于能以患者耐受的以及對(duì)患者有治療價(jià)值的劑量和體積來提供蛋白質(zhì)而確定。如果粘度降低制劑以注射方式施用，蛋白質(zhì)的濃度將取決于注射的體積(通常1.0mL-1.2mL)。基于蛋白質(zhì)的療法可能要求每周、每月或者每數(shù)月施用幾mg/kg的劑量。因此，如果蛋白質(zhì)以2-3mg/kg患者體重提供，并且平均患者體重是75kg，那么需要在1.0mL-1.2mL注射體積中遞送150mg-225mg的蛋白質(zhì)。作為備選，可以以適于每次治療在一個(gè)以上注射位點(diǎn)遞送的濃度提供制劑。隨著制劑中的蛋白質(zhì)的濃度增加，蛋白質(zhì)制劑的粘度也可能增加。制劑的粘度增加使得施用制劑更困難。因此，當(dāng)粘度增加影響制劑被應(yīng)用的能力時(shí)，需要降低蛋白質(zhì)制劑的粘度。粘度降低劑蛋白質(zhì)制劑的粘度。本文使用的術(shù)語(yǔ)"粘度降低劑"包括任何可以使蛋白質(zhì)制劑的粘度相比于不含有或者含有較小量粘度降低劑的蛋白質(zhì)制劑發(fā)生降低的試劑。例如，相比較于沒有或者含有較小量粘度降低劑的蛋白質(zhì)制劑的粘度，粘度降低劑一般4吏蛋白質(zhì)制劑的粘度降低大約5%,大約10%,大約20%，大約30%，大約40%，大約50%，大約60%，大約70%，大約90%,或大約95%。例如，相比較于沒有或者含有較小量粘度降低劑的蛋白質(zhì)制劑的粘度，粘度降低劑一般使蛋白質(zhì)制劑的粘度降低5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、90%或95%。粘度降低劑的非限制性實(shí)例包括氯化鈣、氯化鎂、鹽酸精氨酸、氯化鈉、硫氰酸鈉、硫氰酸銨、硫酸銨、磷酸鈉和氯化銨。一個(gè)實(shí)施方案中，粘度降低劑是氯化鈣。另一個(gè)實(shí)施方案中，粘度降低劑是氯化鎂。備選的實(shí)施方案中，向蛋白質(zhì)制劑中添加多于一種的粘度降低劑。一般地，粘度降低劑加入蛋白質(zhì)制劑中至終濃度介于lmM至大約150mM之間，例如介于大約lmM和大約50mM之間，介于大約2mM和大約40mM之間，介于大約3mM和大約30mM之間，介于大約4mM和大約25mM之間，介于大約5mM和大約20mM之間，介于大約5mM和大約25mM之間，介于大約5mM和大約30mM之間，介于大約5mM和大約40mM之間，和介于大約5mM和大約50mM之間。某些實(shí)施方案中，粘度降低劑添加到蛋白質(zhì)制劑中至終濃度為小于14mM，小于13mM，小于12mM，小于llmM，小于10mM，小于9mM，小于8mM，小于7mM，小于6mM，小于5mM，小于4mM，小于3mM或小于2mM。其它實(shí)施方案中，粘度降低劑添加到蛋白質(zhì)制劑中至終濃度介于0.5mM和14mM之間，介于0.5mM和13mM之間，介于0.5mM和12mM之間，介于0.5mM和llmM之間，介于0.5mM和10mM之間，介于0.5mM和9mM之間，介于0.5mM和8mM之間，介于0.5mM和7mM之間，介于0.5mM和6mM之間或介于0.5mM和5mM之間。一個(gè)實(shí)施方案中，粘度降低劑是在制劑中終濃度為介于大約5mM和大約20mM之間的氯化鈣。另一個(gè)實(shí)施方案中，粘度降低劑是在制劑中終濃度為介于5mM和大約14mM之間的氯化鈣。其它實(shí)施方案中，粘度降低劑是在制劑中終濃度為介于大約5mM和大約20mM之間的氯化鎂。另一個(gè)實(shí)施方案中，粘度降低劑是在制劑中終濃度為介于5mM和大約14mM之間的氯化鎂。蛋白質(zhì)制劑的粘度可以使用本領(lǐng)域已知的任何合適的方法檢測(cè)，包括例如使用毛細(xì)管粘度計(jì)或者錐板式流變儀。緩沖劑本文使用的術(shù)語(yǔ)"緩沖劑"包括那些可以將溶液例如制劑的pH維持在期望范圍內(nèi)的試劑。本文公開的制劑的pH通常介于大約pH5.0至大約9.0之間，例如大約pH5.5至大約6.5，大約pH5.5至大約6.0，大約pH6.0至大約6.5，pH5.5，pH6.0或pH6.5。一般地，使用可以將溶液維持在pH5.5至6.5的緩沖劑?？梢杂糜诒疚膟〉開的制劑中的緩沖劑的非限制性實(shí)例包括組氨酸、琥珀酸鹽、葡糖酸鹽、Tris(氨基丁三醇)，磷酸鹽、檸檬酸鹽、2-嗎啉代乙磺酸(MES)、磷酸鈉、乙酸鈉和二甲胂酸鹽。組氨酸是典型地用于通過皮下、肌內(nèi)或者腹膜注射給藥的粘度降低制劑中的緩沖劑。緩沖劑的濃度介于大約5mM和30mM之間。一個(gè)實(shí)施方案中，制劑的緩沖劑是濃度為大約5mM至大約20mM的組氨酸。賦形劑除了蛋白質(zhì)、粘度降低劑和緩沖劑，本文公開的粘度降低制劑還可以包括其它物質(zhì)。這些物質(zhì)包括但不限于冷凍保護(hù)劑、凍干保護(hù)劑(lyoprotectants)、表面活性劑、填充劑、抗氧化劑和穩(wěn)定劑。一個(gè)實(shí)施方案中，本文公開的粘度降低的蛋白質(zhì)制劑包括選自冷凍保護(hù)劑、凍干保護(hù)劑、表面活性劑、填充劑、抗氧化劑、穩(wěn)定劑及其組合的賦形劑。本文使用的術(shù)語(yǔ)"冷凍保護(hù)劑"，包括例如通過優(yōu)先地被排斥在蛋白質(zhì)表面外而向制劑中蛋白質(zhì)賦予對(duì)抗冷凍誘導(dǎo)的協(xié)迫的穩(wěn)定性的試劑。冷凍保護(hù)劑也可以在初次和二次干燥和長(zhǎng)期產(chǎn)品儲(chǔ)存中提供保護(hù)。冷凍保護(hù)劑的非限制性實(shí)例包括糖類(例如蔗糖、葡萄糖、海藻糖、甘露糖醇、甘露糖和乳糖)；聚合物(例如葡聚糖、羥乙基淀粉和聚乙二醇)；表面活性劑(例如聚山梨酯(例如PS-20或PS-80));和氨基酸(例如甘氨酸、精氨酸、亮氨酸和絲氨酸)。一般使用在生物系統(tǒng)中表現(xiàn)出低毒性的冷凍保護(hù)劑。冷凍保護(hù)劑如果包括在制劑中，一般地加入其至終濃度介于大約0.1%和大約10%(重量/體積)之間，例如介于大約0.5%和大約10%之間，介于大約0.5%和大約5%之間，介于大約0.5%和大約2%之間，介于大約1%和大約5%之間或介于大約5%和大約10%之間。一個(gè)實(shí)施方案中，冷凍保護(hù)劑是濃度介于大約0.5%和大約10%(重量/體積)的蔗糖。一個(gè)實(shí)施方案中，凍干保護(hù)劑;故添加到本文^Hf的制劑中。本文^f吏用的術(shù)語(yǔ)"凍干保護(hù)劑"包括在冷凍干燥或者脫水過程(初次和二次冷凍干燥循環(huán))中，例如通過提供無定形玻璃狀基質(zhì)以及通過以氫鍵和蛋白質(zhì)結(jié)合而替代在干燥過程中除去的水分子從而向蛋白質(zhì)提供穩(wěn)定性的試劑。這有助于維持蛋白質(zhì)的構(gòu)象，最小化蛋白質(zhì)在冷凍干燥循環(huán)中的降解，并改善產(chǎn)品的長(zhǎng)期穩(wěn)定性。凍干保護(hù)劑的非限制性實(shí)例包括糖類，例如(蔗糖或海藻糖)；氨基酸(例如谷氨酸一鈉、非結(jié)晶性甘氨酸或組氨酸)；甲胺(例如甜菜堿)；易溶鹽(例如硫酸鎂)；多元醇，例如三元或者高級(jí)糖醇(例如甘油、赤蘚醇、丙三醇、阿糖醇、木糖醇、山梨糖醇和甘露糖醇)；丙二醇；聚乙二醇；泊洛沙姆；及其組合。添加到制劑中的凍干保護(hù)劑的量一般是在蛋白質(zhì)制劑被凍干時(shí)不導(dǎo)致不可接受量的蛋白質(zhì)降解/聚集的量。當(dāng)凍干保護(hù)劑是糖類(例如蔗糖或者海藻糖)并且蛋白質(zhì)是抗體時(shí)，在粘度降低的蛋白質(zhì)制劑中凍干保護(hù)劑的濃度的非限制性實(shí)例是大約10mM至大約400mM，大約30mM至大約300mM，和大約50mM至大約100mM。某些實(shí)施方案中，表面活性劑包括在本文公開的制劑中。本文使用的術(shù)語(yǔ)"表面活性劑"包括通過吸附在氣-液界面而降低液體的表面張力的試劑。表面活性劑的實(shí)例包括但不限于非離子表面活性劑，例如聚山梨酯(例如聚山梨酯80或者聚山梨酯20);泊洛沙姆(例如泊洛沙姆188);TritonTM(例如TritonTMX-100);十二烷基硫酸鈉(SDS);辛基糖苷鈉(sodiumoctylglycoside);月桂基-磺基甜菜堿；豆蔻基-磺基甜菜堿；亞油基(linoleyl)-磺基甜菜堿；硬脂基-磺基甜菜堿；月桂基-肌氨酸；豆蔻基-肌氨酸；亞油基-肌氨酸；硬脂基-肌氨酸；亞油基-甜菜堿；豆蔻基-甜菜堿；鯨蠟基-甜菜堿；月桂酰胺基丙基-甜菜堿；椰油酰胺丙基-甜菜堿；亞油酰胺丙基-甜菜堿；豆蔻酰胺丙基-甜菜堿，棕櫚酰胺丙基(palmidopropyl)-甜菜堿；異硬脂酰胺丙基-甜菜堿(例如月桂酰胺丙基)；豆蔻酰胺丙基-,棕櫚酰胺丙基-或異硬脂酰胺丙基-二甲基胺；甲基椰油?；；撬徕c或曱基油?；Ｂ邓岫c(disodiummethylofeyl-taurate);和MonaquatTM系歹'J(MonaIndustries,Inc.,Paterson，N.J.);聚乙二醇；聚丙二醇；和乙二醇和丙二醇的共聚物(例如泊洛沙姆，PF68)。添加的表面活性劑的量將使其可以將復(fù)原蛋白質(zhì)的聚集維持在可接受的水平(如使用例如SEC-HPLC測(cè)量高分子量(HMW)物類或低分子量(LMW)物類的百分?jǐn)?shù)而確定的)、并最小化本文所述蛋白質(zhì)制劑的凍干物在復(fù)原后的顆粒形成。例如，存在于制劑(液體或者冷凍干燥之前)中的表面活性劑的量可以為大約0.001-0.5%,例如大約0.05-0.3%。一些實(shí)施方案中，粘度降低制劑中包括填充劑。本文使用的術(shù)語(yǔ)"填充劑"包括提供冷凍干燥產(chǎn)品的結(jié)構(gòu)而不直接與藥學(xué)產(chǎn)品相互作用的試劑。除了提供藥物學(xué)上巧妙的塊狀物，填充劑也可以賦予與修飾崩解溫度、提供凍融保護(hù)以及增強(qiáng)蛋白質(zhì)長(zhǎng)期儲(chǔ)存的穩(wěn)定性有關(guān)的有用性質(zhì)。填充劑的非限制性實(shí)例包括甘露糖醇、甘氨酸、乳糖和蔗糖。填充劑可以是晶體的(例如甘氨酸、甘露糖醇或者氯化鈉)或者無定形的(例如葡聚糖或羥乙基淀粉)，并且一般地以0,5%至10%的量用于蛋白質(zhì)制劑中。其它藥學(xué)上可接受載體、賦形劑或者穩(wěn)定劑(例如/>開在Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy第二十版，Gemiaro編輯，LippincottWilliams&Wilkins(2000)中的那些)也可以包括在本文公開的蛋白質(zhì)制劑中，只要其不負(fù)面影響制劑所期望的特性即可?？山邮茉泽w、賦形劑或穩(wěn)定劑在使用的劑量和濃度下對(duì)于受體(例如患者)是無毒的，并且包括其它緩沖劑；防腐劑；共-溶劑；抗氧化劑(包括抗壞血酸和甲硫氨酸)；螯合劑(例如EDTA);金屬絡(luò)合物(例如Zn-蛋白質(zhì)^物)；生物可降解聚合物(例如聚酯)；鹽形成平衡離子例如鈉，多羥基糖醇；氨基酸(例如丙氨酸、甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、組氨酸、精氨酸、賴氨酸、鳥氨酸、亮氨酸、2-苯丙氨酸、谷氨酸和蘇氨酸)；有機(jī)糖類或者糖醇，例如乳糖醇，水蘇糖，甘露糖，山梨糖，木糖，核糖，核糖醇，myoinisitose，肌醇(myoinisitol)，半乳糖，半乳糖醇，甘油，環(huán)多醇(例如肌醇)，聚乙二醇；含硫還原劑(例如尿素，谷胱甘肽，硫辛酸，硫基乙醇酸鈉，硫甘油，a-—硫甘油和硫代硫酸鈉)；低分子量蛋白質(zhì)(例如人血清白蛋白、牛血清白蛋白、明膠或者其它免疫球蛋白)；和親水聚合物(例如聚乙烯吡咯烷酮)。蛋白質(zhì)制劑實(shí)例一個(gè)實(shí)例中，MYO-029粘度降低制劑可以使用lmg/ml至300mg/ml的MYO-029抗體制備。MYO-029制劑一般地包括介于大約lmM和大約50mM之間的氯化鉤或者氯化鎂。該制劑可以包括大約5mM至大約25mM的組氨酸。該制劑可以包括大約1%至大約5%(w/v)蔗糖或者海藻糖。一些實(shí)例中，制劑可以包括大約10mM至大約25mM的甲石克氨酸。某些MYO-029制劑中添加0.05-0.2%(w/v)的聚山梨酯20或者聚山梨酯80。制劑的pH—般介于5.5和6.5之間。在一個(gè)特定的例子中，MYO-029制劑包括150mg/ml的MYO-029抗體，10mM氯化鈣或氯化鎂，20mM組氨酸，4%蔗糖，并且pH為6.0。另一個(gè)特定實(shí)例中，MYO-029制劑包括75mg/ml的MYO-029抗體，5mM氯化鉤或氯化鎂，10mM組氨酸，10mM甲減^氨酸，2%蔗糖，并且pH為6.0。另一個(gè)特定實(shí)例中，MYO-029抗體制劑包括150mg/ml的MYO-029抗體，lOmM氯化鉀或氯化鎂，20mM組氨酸，20mM甲硫氨酸，4%蔗糖，0.2%聚山梨酯-80，并且pH為6.0。MYO-028粘度降低制劑可以使用lmg/ml至300mg/ml的MYO-028抗體配制。MYO-028制劑一般地包括介于lmM和大約50mM之間的氯化釣或者氯化鎂。該制劑可以包括介于大約5mM至大約25mM之間的組氨酸。該制劑可以包括介于大約1%至大約5%(w/v)之間的蔗糖或者海藻糖。MYO-028制劑的pH—般介于大約5.5和大約6.5之間。在一個(gè)特定實(shí)例中，MYO-028抗體制劑包括50hsmg/ml的抗體，10mM組氨酸，5%蔗糖，pH為6.5。另一個(gè)特別實(shí)施例中，MYO-028抗體制劑包括50mg/ml抗體，10mM氯^(匕釣或氯化鎂，10mM組氨酸，5%蔗糖，且pH為6.5。J695粘度降低制劑可以使用lmg/ml至300mg/ml的J695抗體制備。J695制劑一般地包括介于大約lmM和大約50mM之間的氯化鈣或者氯化鎂。該制劑可以包括大約5mM至大約25mM的組氨酸。該制劑可以包括大約1%至大約5%(w/v)的蔗糖或者海藻糖。一些實(shí)例中，該制劑可以包括大約10mM至大約25mM的甲硫氨酸。某些J695制劑中添加介于大約1%至大約5%(w/v)之間的甘露糖醇。制劑的pH—般介于5.5和6.5之間。在特定的實(shí)例中，J695抗體制劑包括100mg/ml的J695抗體，10mM組氨酸，lOmM甲硫氨酸，4%甘露糖醇，1%蔗糖，以及pH為6.0。另一個(gè)特定實(shí)例中，J695抗體制劑包括100mg/ml的J695抗體，10mM組氨酸，10mM甲石克氨酸，5mM氯化釣或氯化鎂，4%甘露糖醇，1%蔗糖，pH為6.0。另一個(gè)特定實(shí)施方案中，J695抗體制劑包括100mg/ml的J695抗體，10mM組氨酸，10mM甲硫氨酸，10mM氯化釣或氯化鎂，4%甘露糖醇，1%蔗糖，pH為6.0。IMA-638蛋白質(zhì)制劑可以使用lmg/ml至300mg/ml的IMA-638抗體制備。含有IMA-638的粘度降低制劑一般地包括介于大約lmM和大約50mM之間的氯化鉀或者氯化鎂。該制劑可以包括大約5mM至大約25mM的組氨酸。該制劑也可以包括大約1%至大約10%(w/v)的蔗糖或者海藻糖。制劑的pH—般介于5.5和6.5之間。在特定的實(shí)例中，IMA-638抗體制劑包括50mg/ml的IMA-638抗體，10mM組氨酸，5%蔗糖，和pH為6.0。另一個(gè)特定實(shí)施例中，IMA-638抗體制劑包括100mg/ml的IMA-638抗體，20mM組氨酸，10%蔗糖和pH為6.0。另一個(gè)特定實(shí)例中，IMA-638抗體制劑包括50mg/ml的IMA-638抗體，5mM氯化鉤或氯化鎂，lOmM組氨酸，10%蔗糖，和pH為6.0。另一個(gè)特定實(shí)例中，IMA-638抗體制劑包括100mg/ml的IMA-638抗體，lOmM氯化釣或氯化鎂，20mM組氨酸，10%蔗糖，以及pH為6.0。儲(chǔ)存方法何合適方法儲(chǔ)存。制備用于儲(chǔ)存的粘度降低制劑的非限制性方法包括冷凍、冷凍干燥和噴霧干燥蛋白質(zhì)制劑。一些情況中，粘度降低制劑被冷凍而儲(chǔ)存。因此，期望該制劑在這樣的條件下(包括當(dāng)接受凍融循環(huán)時(shí))相對(duì)穩(wěn)定。確定制劑進(jìn)行冷凍儲(chǔ)存的適宜性的一個(gè)方法是使樣品制劑接受至少兩次，例如三次至十次凍(例如在-20。C或-80。C)融(例如在室溫迅速融化或者在水上緩慢融化)循環(huán)，確定在凍融循環(huán)之后累積的LMW物類和/或HMW物類的量，并將該量與凍融操作之前存在于樣品中的LMW物類或HMW物類的量進(jìn)行比較。LMW物類或者HMW物類的增加表明作為制劑的一部分儲(chǔ)存的蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性降低?？梢允褂么笮∨抛韪咝б合鄬游?SEC-HPLC)確定存在的LMW和HMW物類。合適的制劑可能積累不期望的HMW物類或LMW物類，但是該積累達(dá)不到該HMW物類或LMW物類的存在將造成制劑不適用于其預(yù)期用途的程度。一些情況中，制劑作為液體儲(chǔ)存。因此，期望液體制劑在這樣的^Ht下(包括在不同的溫度下)相對(duì)地穩(wěn)定。確定制劑進(jìn)行液體儲(chǔ)存的適宜性的一個(gè)方法是在幾種溫度下(例如2-8。C，15。C,20°C，25°C，30°C,35。C,40°C，和50°C)儲(chǔ)存樣品制劑，并且監(jiān)測(cè)隨時(shí)間積累的HMW物類和/或LMW物類的量(例如百分?jǐn)?shù)的改變)。另外，可以通過陽(yáng)離子交換高效液相層析(CEX-HPLC)監(jiān)測(cè)蛋白質(zhì)電荷分布圖。一般地，以適宜于試驗(yàn)和參數(shù)測(cè)定的方式，將高分子量物類或者低分子量物類的百分?jǐn)?shù)確定為制劑中總蛋白質(zhì)含量的百分?jǐn)?shù)或者確定為隨著時(shí)間(即，儲(chǔ)存期間)的百分?jǐn)?shù)增加的變化。一般地，并且在非限制性實(shí)例中，就所分析的參數(shù)(例如時(shí)間、溫度、制劑中的其它化合物、冷凍干燥或者晃動(dòng))而論，在粘度降低制劑中高分子量物類或低分子量物類的蛋白質(zhì)百分?jǐn)?shù)變化不大于10%，例如不大于大約8%，不大于大約5%或不大于大約3%。作為備選，可以在冷凍干燥之后儲(chǔ)存制劑。本文使用的術(shù)語(yǔ)"冷凍干燥"指一種方法，通過該方法，待干燥的材料首先被冷凍，然后在真空環(huán)境中通過升華作用除去水或者冷凍的溶劑。賦形劑(例如凍千保護(hù)劑)可以包括在待冷凍干燥的制劑中，以便增強(qiáng)冷凍干燥的產(chǎn)品儲(chǔ)存時(shí)的穩(wěn)定性。本文使用的術(shù)語(yǔ)"復(fù)原制劑"指通過將冷凍干燥的蛋白質(zhì)制劑溶解在稀釋液中以便該蛋白質(zhì)M在該稀釋液中而制備的制劑。本文使用的術(shù)語(yǔ)"稀釋液，，是可藥用(施用給人類時(shí)是安全和無毒性的)物質(zhì)，并且可用于制備液體制劑，例如冷凍干燥之后復(fù)原的制劑。稀釋液的非限制性實(shí)例包括無菌水、注射用制菌水(BWFI)，pH緩沖溶液(例如磷酸緩沖鹽溶液)、無菌鹽溶液、Ringer氏溶液、葡萄糖溶液或者鹽和/或緩沖劑的水性溶液。檢測(cè)粘度降低制劑在冷凍干燥之后制劑中蛋白質(zhì)組分的穩(wěn)定性，對(duì)于確定制劑的適宜性是有用的。該方法與上述針對(duì)冷凍而>5^開的方法相似，只是樣品制劑被冷凍干燥而非冷凍，使用稀釋液進(jìn)行復(fù)原并且復(fù)原后的制劑接受有關(guān)LMW物類和/或HMW物類的存在的檢測(cè)。相比較于沒有進(jìn)^亍冷凍干燥的對(duì)應(yīng)的樣品制劑，冷凍干燥樣品中LMW物類或HMW物類的增加表明冷凍干燥樣品穩(wěn)定性的降低。一些情況中，制劑是噴霧干燥然后儲(chǔ)存的。對(duì)于噴霧干燥，在干燥氣流存在下液體制劑被氣霧化。水從制劑小滴中除去而^氣流中，產(chǎn)生藥物制劑的干燥顆粒。賦形劑可以包括在制劑中以便(1)在噴霧干燥脫水過程中保護(hù)蛋白質(zhì)，(2)在噴霧干燥之后的儲(chǔ)存期間保護(hù)蛋白質(zhì)，和/或(3)賦予溶液適于氣霧化的特性。該方法與上述針對(duì)冷凍而公開的方法相似，只是樣品制劑被噴霧干燥而非冷凍，在稀釋液中復(fù)原并且復(fù)原后的制劑接受有關(guān)LMW物類和/或HMW物類的存在的檢測(cè)。相比較于沒有進(jìn)4亍冷凍干燥的對(duì)應(yīng)的樣品制劑，噴霧干燥的樣品中LMW物類或HMW物類的增加表明噴霧干燥樣品的穩(wěn)定性降低。治療方法本文公開的粘度降低制劑可以作為藥物組合物用于治療和/或預(yù)防有需求的患者的疾病或者紊亂。術(shù)語(yǔ)"治療"指治療性治療和預(yù)防性或者防止性治療兩者。治療包括向患者(其中該患者具有疾病、疾病的癥狀、具有發(fā)生疾病的風(fēng)險(xiǎn)或者罹患疾病的素質(zhì))的身體、分離的組織或者來自其的細(xì)胞施用或者給予粘度降低制劑，目的是治愈、醫(yī)治、緩解、減輕、改變、補(bǔ)救、改善、改良或者影響疾病、疾病的癥狀或者罹患疾病的素質(zhì)。"有治療需求"的那些患者包括那些已經(jīng)患病的患者和那些有待預(yù)防病癥的患者。術(shù)語(yǔ)"病癥"指任何將受益于使用本文公開的蛋白質(zhì)制劑治療的狀況。其包拾隄性和急性紊亂或疾病，包括那些易于引起受試者(患者)感染正被討論的疾病的病理狀況?？墒褂帽疚墓_的制劑治療的病癥的非限制性實(shí)例包括自身免疫疾病、炎癥、肌肉消耗疾病、變態(tài)反應(yīng)、癌癥、肌營(yíng)養(yǎng)不良、少肌癥、惡病質(zhì)、二型糖尿病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、克隆病、4艮屑病、銀屑病性關(guān)節(jié)炎、哞喘、皮炎、變應(yīng)性鼻炎、慢性阻塞性肺病、嗜酸性粒細(xì)胞增多、纖維化和粘液過度產(chǎn)生。一個(gè)實(shí)施方案中，適合用作藥物組合物的粘度降低制劑包含抗氯化筒箭毒堿抗體和粘度降低劑。一個(gè)實(shí)施方案中，抗氯化筒箭毒堿抗體是MYO-029。其它實(shí)施方案中，抗氯化筒箭毒堿抗體是MYO-022或MYO-028。一般地，抗氯化筒箭毒堿抗體在制劑中的濃度介于大約0.5mg/ml和大約300mg/ml之間。另一個(gè)實(shí)施方案，藥物組合物中的粘度降低劑的終濃度介于大約0.5mM和20mM之間。另一個(gè)實(shí)施方案中，藥物組合物中的粘度降低劑的終濃度介于大約0.5mM和14mM之間。另一個(gè)實(shí)施方案，藥物組合物包含抗氯化筒箭毒堿抗體、粘度降低劑和緩沖劑，其中制劑的pH介于大約5.5至大約6.5之間。本文公開的藥物組合物還可以含有其它蛋白質(zhì)、藥物和/或賦形劑。特別地，可用于治療正在討論的病癥的其它蛋白質(zhì)或者物質(zhì)也可以凈皮加入到制劑中。含有抗氯化筒箭毒堿抗體的藥物組合物可以用于治療或者預(yù)防病癥，例如但不限于肌肉消耗疾病，肌營(yíng)養(yǎng)不良，少肌癥，惡病質(zhì)，和二型糖尿病。另一個(gè)實(shí)施方案，藥物組合物包含抗IL-12抗體和粘度降低劑。一個(gè)實(shí)施方案，抗IL-12抗體是J695。一般地，制劑中抗IL-12抗體的濃度介于大約0.5mg/ml和大約300mg/ml之間。另一個(gè)實(shí)施方案，藥物組合物中的粘度降低劑的終濃度介于大約0.5mM和20mM之間。另一個(gè)實(shí)施方案中，藥物組合物中的粘度降低劑的終濃度介于大約0.5mM和14mM之間。另一個(gè)實(shí)施方案，藥物組合物包含抗IL-12抗體、粘度降低劑和緩沖劑，其中制劑的pH介于大約5.5至大約6.5之間。本文公開的藥物組合物還可以含有其它蛋白質(zhì)、藥物和/或賦形劑。特別地，可以用于治療正在討論的病癥的其它蛋白質(zhì)或者物質(zhì)也可以被力口入到制劑中。含有抗IL-12抗體的藥物組合物可以用于治療或者預(yù)防疾病，例如但不限于自身免疫病、炎癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、克隆病、4艮屑病和4艮屑病性關(guān)節(jié)炎。另一個(gè)實(shí)施方案中，藥物組合物包含抗IL-13抗體和粘度降低劑。一個(gè)實(shí)施方案中，抗IL-13抗體是IMA-638。一般地，制劑中抗IL-13抗體的濃度介于大約0.5mg/ml和大約300mg/ml之間。另一個(gè)實(shí)施方案，藥物組合物中的粘度降低劑的終濃度介于大約0.5mM和20mM之間。另一個(gè)實(shí)施方案中，藥物組合物中的粘度降低劑的終濃度介于大約0.5mM和14mM之間。另一個(gè)實(shí)施方案，藥物組合物包含抗IL-13抗體、粘度降低劑和緩沖劑，其中制劑的pH介于大約5.5至大約6.5之間。本文公開的藥物組合物還可以含有其它蛋白質(zhì)、藥物和/或賦形劑。特別地，可以用于治療正在討論的疾病的其它蛋白質(zhì)或者物質(zhì)也可以被加入到制劑中。含有抗IL-13抗體的藥物組合物可以用于治療或者預(yù)防疾病，例如但不限于哮喘疾病、特異反應(yīng)性疾病、慢性阻塞性肺病、涉及氣道炎癥的病癥、嗜酸性粒細(xì)胞增多、纖維化和粘液過度產(chǎn)生、炎癥、自身免疫病、腫瘤或癌癥，以及病毒感染。施用本文公開的粘度降低制劑可以使用本領(lǐng)域已知的方法向需要治療的受試者施用，所述方法為例如在一段長(zhǎng)時(shí)間中以合適方式單次或者多次推注(bolus)或者輸注(例如通過皮下、靜脈內(nèi)、^M內(nèi)、肌內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、損傷內(nèi)或關(guān)節(jié)內(nèi)途徑的注射或者輸注)施用，局部施用，吸入或者通過持續(xù)釋放或者緩釋施用。如果制劑已被冷凍干燥，該冷凍干燥的材料首先在施用之前在合適的液體中復(fù)原。冷凍干燥的材料可以在例如BWFI，磷酸緩沖鹽溶液或者在冷凍干燥之前蛋白質(zhì)所存在的相同制劑中復(fù)原。為了方便施用和劑量的一致性，胃腸外組合物可以被制備為單位劑量形式。本文^f吏用的"單位劑量形式"指適于作為單一劑量用于待治療受試者的物理上離散的單位；每個(gè)單位含有經(jīng)計(jì)算可以產(chǎn)生期望治療效果的預(yù)定量的活性化合物以及選定的藥學(xué)載體。在吸入方法的情況中，例如定量吸入器，該裝置被i殳計(jì)用來遞送合適量的制劑。對(duì)于通過吸入的施用，從含有合適的拋射劑(例如氣體，例如二氧化碳)的加壓容器或者分配器中或從噴霧器中以氣霧劑噴霧形式遞送化合物。作為備選，吸入的劑量形式可以使用干粉吸入器通過干粉形式提供。也可以將粘度降低制劑截留在微嚢(例如通過凝聚技術(shù)或者通過界面聚合技術(shù)制備的微嚢，分別例如羥甲基纖維素或明膠微嚢和聚-(甲基丙烯酸曱酯)微嚢)中、截留在膠體藥物遞送系統(tǒng)(例如脂質(zhì)體、白蛋白微球、;微乳劑、納米顆粒和納米嚢)中、或者截留在巨乳劑(macroemulsion)中。這些技術(shù)公開在Remington'sPharmaceuticalSciences,第二十版(同上引文)。也可以制備本文公開的蛋白質(zhì)制劑的持續(xù)釋放制劑。持續(xù)釋放制劑合適的實(shí)例包括含有蛋白質(zhì)制劑的固體疏水性聚合物的半滲性基質(zhì)。持續(xù)釋放基質(zhì)的實(shí)例包括聚酯、水凝膠(例如聚(2-羥乙基-甲基丙烯酸酉旨)或聚(乙烯醇))、聚丙交酯、L-谷氨酸和r乙基-L-谷氨酸酯的共聚物，不可降解的乙烯-乙酸乙烯酯共聚物、可降解的乳酸-羥基乙酸共聚物和聚-D-(-)-3-羥基丁酸。由于聚丙交酯共乙交酯(PLGA)聚合物的生物相容性和廣泛的生物可降解性質(zhì)，例如可以使用其開發(fā)本文公開的蛋白質(zhì)的持續(xù)釋放制劑。PLGA的降解產(chǎn)物乳酸和羥基乙酸可以很快在人體內(nèi)被清除。而且，取決于該聚合物的分子量和組成，其降解性可以被調(diào)節(jié)為數(shù)月至數(shù)年。脂質(zhì)體組合物也可以用于配制本文公開的蛋白質(zhì)或者抗體。劑量制劑的毒性和治療效果可以通過本領(lǐng)域已知的藥學(xué)方法而確定，例如使用細(xì)胞培養(yǎng)物或者實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用于確定例如LD5o(群體的半數(shù)致死劑量)和EDso(群體的半數(shù)治療有效劑量)。毒性和治療效果之間的劑量比率是治療指數(shù)，并且其可以被束述為L(zhǎng)D5o/EDso的比率。圍。這些制劑的劑量一般地位于包括EDso且?guī)缀鯚o或者完全無毒性的循環(huán)濃度的范圍中。取決于使用的劑量形式和使用的施用途徑，劑量可以在這個(gè)范圍內(nèi)變化。對(duì)于任何在本發(fā)明的方法中使用的制劑，最初可以從細(xì)胞培養(yǎng)物試驗(yàn)估計(jì)治療有效劑量?？梢栽趧?dòng)物模型中配制劑量以獲得包括在細(xì)胞培養(yǎng)物中所確定的IC5。(即，達(dá)到癥狀半數(shù)-最大抑制的受試化合物的濃度)的循環(huán)血漿濃度范圍。這些信息可以被用于更準(zhǔn)確地確定在人中的有用劑量?？梢允褂美绺咝б合鄬游鰴z測(cè)血漿中的水平。制劑蛋白質(zhì)的合適劑量將取決于待治療疾病的類型，疾病的嚴(yán)重性和病程，施用的活性劑是用于預(yù)防還是治療目的，在先治療，患者的臨床病史和對(duì)活性劑的應(yīng)答，以及主治醫(yī)師的判斷。一般地，遞送制劑以使該劑量介于大約O.lmg蛋白質(zhì)/kg體重至100mg蛋白質(zhì)/kg體重之間。制劑可以一次或者在一系列治療中施用給患者。一個(gè)實(shí)施方案，氯化筒箭毒堿抗體(例如MYO-22，MYO-28，MYO-029)制劑以lmg/kg體重至10mg/kg體重的劑量施用給有需要的患者。另一個(gè)實(shí)施方案，IL-12抗體制劑以lmg/kg體重至5mg/kg體重的劑量施用給有需要的患者。另一個(gè)實(shí)施方案，IL-13抗體制劑以大約0.5mg/kg患者的體重至大約5mg/kg患者的體重的劑量施用給有需要的患者。用于體內(nèi)施用的制劑必須是無菌的。制劑可以例如在配制液體或者冷凍干燥和復(fù)原之前或者之后經(jīng)過濾通過無菌濾膜而除菌。本文公開的治療組合物一般地被放置在具有無菌獲取口的容器(例如靜脈溶液帶)中，或者放置在具有皮下注射針頭可以穿透的塞子的小瓶中。產(chǎn)品另一個(gè)實(shí)施方案中，提供含有本文公開的制劑并且典型地提供其使用說明書的產(chǎn)品。該產(chǎn)品包含適于容納制劑的容器。合適的容器包括但不限于瓶、小瓶(例如雙室瓶)、注射器(例如單室或者雙室注射器)、試管、噴霧器、吸入器(例如定量吸入器或者干粉吸入器)或者儲(chǔ)庫(kù)。容器可以由各種材料制備，例如玻璃、金屬或者塑料(例如聚碳酸酯，聚苯乙烯，聚丙烯)。容器容納制劑，并且容器上或者伴隨容器的標(biāo)簽可以給出用于復(fù)原和/或使用的說明。標(biāo)簽還可以指示制劑用于或者意欲用于皮下施用。含有制劑的容器可以是多次使用的小瓶，其允許重復(fù)施用制劑，例如2-6個(gè)劑量。產(chǎn)品還可以包含含有合適稀釋液的第二容器，該稀釋液例如是WFI，0.9%NaCl，BWFI或者磷酸緩沖鹽溶液。當(dāng)產(chǎn)品含有冷凍干燥形式的蛋白質(zhì)制劑時(shí)，混合稀釋液和冷凍干燥制劑可以在復(fù)原制劑中提供一般地至少20mg/ml的蛋白質(zhì)終濃度。產(chǎn)品還可以包含從商業(yè)和使用者角度而言所期望的其它材料，包括其它緩沖劑、稀釋液、濾器、針頭、注射器和有4吏用說明的^兌明書。通過下述實(shí)施例進(jìn)一步舉例說明本發(fā)明。實(shí)施例僅以舉例說明的目的提供。其不應(yīng)理解為以任何方式構(gòu)成對(duì)本發(fā)明范圍和內(nèi)容的限制。實(shí)施例實(shí)施例1抗體制劑的粘度如表1所述，配制抗-卩-淀粉狀蛋白肽(抗-AB),抗-IL-13，抗-IL-12(J695)和抗氯化筒箭毒堿(MYO-029)抗體。使用AntonPaarPhysicaMCR301錐板式流變儀測(cè)量這些抗體制劑的粘度。具體地，CP25-1(24.971mm直徑，1.002。角)錐體用于所有的測(cè)量；剪切率恒定在898l/s，持續(xù)100秒。每10秒進(jìn)行檢測(cè)。使用內(nèi)置的Peltier溫度控制裝置在4。C和25。C都進(jìn)行粘度的檢測(cè)。加載在板上的液體樣品是卯nl。每個(gè)樣品重復(fù)分析三次。下表1列出了不同制劑中不同抗體在不同濃度的粘度4j_<table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table>表1中顯示的數(shù)據(jù)說明抗氯化筒箭毒堿(MYO-029)的粘度顯著地高于表中列出的其它抗體的粘度。所有抗體的粘度在4。C增加。對(duì)于MYO-029而言，這種增加按比例計(jì)高得多。實(shí)施例2多種鹽對(duì)于MYO-029抗體制劑的粘度的影響在10mM組氨酸，2%蔗糖(pH6.0)中配制濃度是73mg/ml的MYO-029抗體。使用移液管將濃的鹽溶液(例如氯化鈣、氯化鎂、氯化鈉和磷酸二氫鈉)稀釋在MYO-029抗體制劑中。如實(shí)施例1所述，檢測(cè)這些鹽對(duì)MYO-029抗體制劑粘度的影響。這些數(shù)據(jù)顯示在圖1中。濃度范圍在大約5mM至大約20mM的MgCl2和CaCl2兩者均顯著地降低MYO-029抗體制劑的粘度。另一方面，NaCl和NaH2P04在這個(gè)范圍內(nèi)幾乎無影響。因此，與氯化鈉和磷酸二氬鈉不同，濃度在大約5mM至大約20mM的氯化鈣和氯化鎂是MYO-029抗體制劑的有效粘度降低劑。實(shí)施例3氯化鈣對(duì)J695抗體制劑的粘度的影響在兩個(gè)不同的J695抗體濃度(即100mg/ml和300mg/ml)檢測(cè)J695抗體制劑的粘度。較高濃度的J695抗體制劑的粘度將比較低濃度的J695抗體制劑的粘度高。將氯化4丐添加到300mg/ml的J695抗體制劑中至終濃度為大約5mM至20mM。在此情形中，預(yù)期抗體制劑的粘度將相比較于沒有氯化釣的J695制劑而言降低。因此，濃度為大約5mM至大約20mM的氯化鈣是J695抗體制劑的有效粘度降低劑。實(shí)施例4氯化釣對(duì)MYO-028抗體制劑粘度的影響使用CentriconUltrafree-4將另一個(gè)抗氯化筒箭毒堿抗體MYO-028濃縮到濃度為95mg/mL。根據(jù)下表2將氯化鈣添加到MYO-028中。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage34</column></row><table>在10mM組氨酸，5V。蔗糖(pH6.5)中配制95mg/mL的MYO-028。CaCl2溶液由10mM組氨酸，2%蔗糖，2MCaCl2組成。緩沖液由10mM組氨酸，5%蔗糖(pH6.5)組成。使用如實(shí)施例1所公開的相同的流變儀方法、還使用solventtrap防止蒸發(fā)、在板上上樣100jiLMYO-028液體樣品，測(cè)量這些MYO-028抗體制劑的粘度，該試驗(yàn)在室溫進(jìn)行。來自這些實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)顯示在圖2中。相比較于缺少CaCl2的MYO-028制劑，添加25mM和50mMCaCl2降低MYO-028抗體制劑的粘度。這些數(shù)據(jù)表明CaCl2適合用作降低蛋白質(zhì)制劑粘度的試劑，例如以配制粘度降低的抗體制劑。實(shí)施例5氯化釣對(duì)IMA-638抗體制劑粘度的影響為了檢測(cè)氯化釣對(duì)IMA-638抗體制劑粘度的影響，使用移液管將不同量的氯化釣添加到IL-13抗體(IMA-638)的等分試樣中。IMA-638抗體等分試樣具有大約150mg/mL的蛋白質(zhì)濃度。圖3給出氯化鈣對(duì)IMA-638蛋白質(zhì)制劑粘度的影響的圖表說明。IMA-638的粘度沒有顯示出與MYO-029中觀察到的相同的粘度降低。這些數(shù)據(jù)說明鑒定合適用于蛋白質(zhì)制劑的粘度降低劑的方法。實(shí)施例6氯化釣對(duì)MYO-029抗體穩(wěn)定性的影響向蛋白質(zhì)制劑中添加化合物(即粘度降低劑，例如CaCl2)可能潛在地影響分子在凍融誘導(dǎo)的協(xié)迫下的穩(wěn)定性。這個(gè)影響對(duì)于凍融期間蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性可能是有害的、有利的或者無影響的。為了評(píng)估試劑(即CaCh)對(duì)凍融誘導(dǎo)的MYO-029抗體降解的影響，在有或者無5mMCaCl2的條件下，將分子在-80。C和37°C進(jìn)行10次凍融循環(huán)。通過超濾和滲濾將MYO-029藥物物質(zhì)配制在含有或者缺少氯化鋅的10mM組氨酸，2%蔗糖中。蛋白質(zhì)終濃度大約是75mg/mL。20微升等分試樣在-80V:冷凍并在室溫融化。重復(fù)5和10個(gè)凍融循環(huán)。4吏用配制緩沖劑稀釋樣品25倍，并通過檢測(cè)280nm的吸光度而分析蛋白質(zhì)的濃度，以及使用SEC-HPLC檢測(cè)高分子量產(chǎn)物的百分?jǐn)?shù)(。/。HMW)。對(duì)凍融誘導(dǎo)的降解的影響通過如下進(jìn)行評(píng)估(i)蛋白質(zhì)回收(280nm的吸光度)和(ii)通過大小排阻-高效液相層析(SEC-HPLC)確定的高分子量形成百分比(％HMW)。對(duì)此分子，最常見的降解途徑是HMW形成。這些研究的結(jié)果在圖4A和圖4B中顯示。相比較于對(duì)應(yīng)的沒有CaCh的對(duì)照樣品，向制劑中添加5mMCaCl2對(duì)蛋白質(zhì)回收或者。/。HMW形成沒有任何影響。因此，氯化鈣的添加沒有顯示出影響MYO-029抗體制劑的穩(wěn)定性。這說明CaCh適合用作蛋白質(zhì)制劑中的粘度降低劑，例如在粘度降低的抗體制劑中。實(shí)施例7氯化釣對(duì)MYO-029抗體制劑穩(wěn)定性的影響向蛋白質(zhì)制劑中添加CaCl2可能影響分子隨著時(shí)間的液體穩(wěn)定性。此影響對(duì)于儲(chǔ)存期的蛋白質(zhì)穩(wěn)定性可能是有害的、有益的或者沒有影響。為了評(píng)估此試劑在熱誘導(dǎo)的降解上對(duì)MYO-029的液體穩(wěn)定性的影響，含有MYO-029的制劑在50°C進(jìn)行長(zhǎng)達(dá)7天的儲(chǔ)存。在不同時(shí)間點(diǎn)取等分試樣并通過280nm的吸光度分析蛋白質(zhì)的濃度，以及通過SEC-HPLC分析％HMW。數(shù)據(jù)在圖5A和圖5B中顯示。與對(duì)照樣品相比，向制劑添加CaCl2對(duì)于儲(chǔ)存在50°C的液體狀態(tài)的蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性沒有負(fù)面影響。在含有CaCl2的材料中，藥物中HMW的百分?jǐn)?shù)看起來也輕樣i較少些。這些數(shù)據(jù)進(jìn)一步表明使用CaCh作為粘度降低劑是合適的。其還表明確定降低蛋白質(zhì)制劑粘度的試劑的適宜性(例如就試劑是否對(duì)制劑中蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性產(chǎn)生影響而言)的方法。實(shí)施例8氯化鈣對(duì)冷凍干燥的MYO-029的穩(wěn)定性的影響向蛋白質(zhì)制劑添加試劑(例如CaCl2)可能潛在地影響蛋白質(zhì)冷凍干燥劑型隨著時(shí)間的穩(wěn)定性。此影響可能對(duì)于儲(chǔ)存期的蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性是有害的、有益的或者沒有影響的。為了評(píng)估此賦形劑對(duì)冷凍干燥的MYO-029的穩(wěn)定性的影響，含有該分子的制劑在有或者無(對(duì)照)5mMCaCl2的情況下冷凍干燥，并且在50。C和4。C儲(chǔ)存4周。每周拿出小瓶，并通過280nm的吸光度分析蛋白質(zhì)的濃度，通過SEC-HPLC分析HMW的百分?jǐn)?shù)，以及通過陽(yáng)離子交換-高效液相層析(CEX-HPLC)分析電荷的分布。也檢測(cè)小瓶撤出體積和粘度(僅僅在一個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè))。A.復(fù)原藥物產(chǎn)品的粘度當(dāng)制劑中含有5mM氯化鉤時(shí)，大約150mg/mL濃度的MYO-029藥物產(chǎn)品的粘度被降低(該粘度以與實(shí)施例1所公開的基本上相同的方式檢測(cè))。B.從小瓶中轍出的體積當(dāng)制劑中存在CaCh時(shí)，使用lmL注射器和21G針頭從小瓶中能夠移出的藥物產(chǎn)品的量增加。C.蛋白質(zhì)的濃度相比較于對(duì)照，向制劑中添加CaCl2不影響蛋白質(zhì)的回收。D.高分子量5mM的CaCh對(duì)在4°C儲(chǔ)存四周之后形成的HMW物類的百分?jǐn)?shù)沒有任何顯著的影響。然而，在50。C，預(yù)期HMW形成率相比較于對(duì)照將顯著地降低。E.電荷分布通過CEX-HPLC(用于研究蛋白質(zhì)中的電荷差異的一種層析方法)，分析穩(wěn)定性時(shí)間點(diǎn)。在CEX-HPLC中，帶較多負(fù)電荷的分子比帶較多正電荷的分子較早洗脫。該方法用于檢測(cè)天冬酰胺殘基脫酰胺為天冬氨酸或者異天冬氨酸。脫酰胺作用導(dǎo)致蛋白質(zhì)的凈負(fù)電荷增加，并且其將從HPLC柱中較早地洗脫。在這個(gè)實(shí)驗(yàn)中，研究氯化4丐對(duì)導(dǎo)致不同于對(duì)照的電荷變化的蛋白質(zhì)降解的影響。相比較于沒有氯化鈣的對(duì)照，預(yù)期隨著時(shí)間將發(fā)生相同的電荷改變。因此，預(yù)期在兩個(gè)儲(chǔ)存溫度下CaCl2對(duì)MYO-029的電荷分布沒有影響。總之，相比較于對(duì)照樣品，當(dāng)以冷凍干燥狀態(tài)在4。C和50。C儲(chǔ)存時(shí)，向制劑添加CaCh對(duì)制劑中蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性相對(duì)于沒有氯化鉤的實(shí)驗(yàn)對(duì)照而言，沒有顯著的副作用。在一些情況中，發(fā)現(xiàn)CaCh有益于蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性。其它實(shí)施方案應(yīng)理解的是，盡管本發(fā)明已經(jīng)結(jié)合發(fā)明詳述進(jìn)行描述，但以上描述意欲舉例而非限制本發(fā)明的范圍，該范圍由后附權(quán)利要求的范圍限定。其它方面、優(yōu)勢(shì)和修飾都屬于下述的權(quán)利要求的范圍。權(quán)利要求1、降低蛋白質(zhì)制劑的粘度的方法，該方法包括(a)提供蛋白質(zhì)制劑；和(b)向蛋白質(zhì)制劑中添加氯化鈣或者氯化鎂至濃度介于大約0.5mM和大約20mM之間，其中相比較于沒有粘度降低劑的蛋白質(zhì)制劑的粘度，含有氯化鈣或者氯化鎂的蛋白質(zhì)制劑的粘度被降低。2、權(quán)利要求l的方法，其中該蛋白質(zhì)選自抗體、Ig融合蛋白、受體、轉(zhuǎn)錄因子、酶、配體，和其生物活性片段。3、權(quán)利要求l的方法，其中該蛋白質(zhì)是抗體或者其生物活性片段。4、權(quán)利要求l的方法，其中該蛋白質(zhì)是Ig融合蛋白。5、權(quán)利要求l的方法，其中該蛋白質(zhì)是抗體，并且該抗體是抗氯化筒箭毒堿抗體、抗IL-12抗體或者抗IL-13抗體。6、權(quán)利要求5的方法，其中該抗氯化筒箭毒堿抗體是MYO-029，其中該抗IL-12抗體是J695，并且其中該抗IL-13抗體是IMA-638。7、權(quán)利要求l的方法，其中相比較于缺少粘度降低劑的制劑的粘度，該蛋白質(zhì)制劑的粘度被降低至少大約5%。8、粘度降低制劑，包括(i)蛋白質(zhì)；(ii)在制劑中濃度介于大約5mM和大約20mM之間的粘度降低劑，其中該粘度降低劑不是氯化鈉或者磷酸二氫鈉；和(iii)緩沖劑；其中制劑的pH是大約5.5至6.5。9、權(quán)利要求8的粘度降低制劑，其中該蛋白質(zhì)選自抗體、Ig融合蛋白、受體、轉(zhuǎn)錄因子、酶、配體，和其生物活性片段。10、權(quán)利要求8的方法，其中該蛋白質(zhì)是抗體或者其生物活性片段。11、權(quán)利要求8的方法，其中該蛋白質(zhì)是Ig融合蛋白。12、權(quán)利要求8的蛋白質(zhì)制劑，其中該粘度降低劑是氯化鈣或者氯化鎂。13、抗氯化筒箭毒堿抗體制劑，包括(i)抗氯化筒箭毒堿抗體或者其氯化筒箭毒堿結(jié)合片段；(ii)粘度降4氐劑；和(iii)緩沖劑，其中制劑的pH是大約5.5至6.5。14、權(quán)利要求13的方法，其中該抗氯化筒箭毒堿抗體是單克隆抗體。15、權(quán)利要求14的方法，其中該抗氯化筒箭毒堿抗體是人源化單克隆抗體。16、權(quán)利要求14的方法，其中如BiacoreTM所測(cè)定的，抗氯化筒箭毒堿抗體以大約6Xl(T11M的Kd結(jié)合氯化筒箭毒堿。17、4又利要求14的方法，其中該抗氯化筒箭毒堿抗體選自MYO-022，MYO028和MYO-029。18、權(quán)利要求13的方法，其中制劑中抗氯化筒箭毒堿的濃度是大約25mg/ml至大約400mg/ml。19、權(quán)利要求13的方法，其中該粘度降低劑是氯化鈣或者氯化鎂。20、權(quán)利要求13的方法，其中該粘度降低劑是濃度為大約5mM至大約20mM的氯化4丐。21、權(quán)利要求13的方法，其中緩沖劑是在制劑中濃度為大約4mM至大約60mM的組氨酸緩沖劑。22、權(quán)利要求13的方法，其中該制劑還包括冷凍保護(hù)劑。23、權(quán)利要求22的方法，其中該冷凍保護(hù)劑是在制劑中濃度為大約0.5%至大約5%(重量/體積)的蔗糖或者海藻糖。24、權(quán)利要求13的方法，其中該制刑還包括在制劑中濃度為大約0。/。至0.2%(重量/體積)的表面活性劑。25、權(quán)利要求24的方法，其中該表面活性劑是聚山梨酯-20或者聚山梨酯-80。26、權(quán)利要求13的方法，其中該制劑還包括抗氧化劑。27、權(quán)利要求26的方法，其中該抗氧化劑是甲硫氨酸、并且制劑中甲硫氨酸的濃度介于大約2mM和大約20mM之間。28、權(quán)利要求13的抗氯化筒箭毒堿抗體制劑，其中(i)抗氯化筒箭毒堿抗體是濃度為大約20mg/ml至大約400mg/ml的完全人源化的抗氯化筒箭毒堿抗體；(ii)粘度降低劑是濃度為大約5mM至20mM的氯化鈣或者氯化鎂;(iii)緩沖劑是濃度為大約5mM至大約20mM的組氨酸緩沖劑，其中制劑的pH是大約6.0。29、權(quán)利要求13的制劑，其中該制劑是被冷凍干燥的。30、權(quán)利要求13的制劑，其中相比較于缺少粘度降低劑的制劑，該制劑的粘度被降低至少大約5%。31、用于治療選自肌營(yíng)養(yǎng)不良，少肌癥，惡病質(zhì)和二型糖尿病的疾病的藥物組合物，其中該藥物組合物包括權(quán)利要求9的抗氯化筒箭毒堿抗體制劑。32、治療選自肌營(yíng)養(yǎng)不良，少肌癥，惡病質(zhì)和二型糖尿病的疾病的方法，該方法包括施用藥學(xué)有效量的抗體制劑，該抗體制劑包括(i)抗氯化筒箭毒堿抗體或者其氯化筒箭毒堿結(jié)合片段；(ii)粘度降低劑；和(iii)緩沖劑，其中制劑的pH是大約5.5至6.5。33、權(quán)利要求32的方法，其中該抗體制劑通過注射、靜脈內(nèi)輸注給藥或者通過噴霧器或者以干粉形式進(jìn)行肺給藥。34、包括含有權(quán)利要求1的制劑的容器的藥盒。35、權(quán)利要求34的藥盒，還包括所述制劑給藥的說明書。36、降低蛋白質(zhì)制劑的粘度的方法，該方法包括(i)提供蛋白質(zhì)制劑；和(ii)向蛋白質(zhì)制劑中添加粘度降低劑，其中該粘度降低劑是氯化釣或者氯化鎂，并且其中該粘度降低劑在制劑中的濃度介于大約lmM和大約25mM之間。37、鑒定粘度降低的蛋白質(zhì)制劑的方法，該方法包括(i)提供蛋白質(zhì)制劑；(ii)向蛋白質(zhì)制劑中添加粘度降低劑，其中該粘度降低劑是氯化鈣或者氯化鎂，并且其中粘度降低劑在制劑中的濃度介于大約lmM和大約25mM之間，由此形成粘度可能降低的制劑；和(iii)測(cè)定該粘度可能降低的蛋白質(zhì)制劑的粘度，其中當(dāng)相比較于無粘度降低劑的蛋白質(zhì)制劑的粘度，該粘度可能降低的蛋白質(zhì)制劑的粘度被降低時(shí)，該制劑是粘度降低的制劑。38、權(quán)利要求1的方法，其中該方法還包括測(cè)定蛋白質(zhì)制劑的穩(wěn)定性。39、權(quán)利要求37的方法，其中該方法還包括測(cè)定蛋白質(zhì)制劑的穩(wěn)定性。40、權(quán)利要求39的方法，其中該蛋白質(zhì)制劑的穩(wěn)定性是在凍融該蛋白質(zhì)制劑之后、在50"C儲(chǔ)存該蛋白質(zhì)制劑1-7天之后或者在冷凍干燥之后進(jìn)行測(cè)定的。41、權(quán)利要求39的方法，其中通過相比較于對(duì)照，分析該蛋白質(zhì)制劑的高分子量物類的百分?jǐn)?shù)、低分子量物類的百分?jǐn)?shù)或者電荷分布，而測(cè)定穩(wěn)定性。全文摘要本發(fā)明提供了蛋白質(zhì)制劑和用于降低蛋白質(zhì)制劑粘度的方法。用于降低蛋白質(zhì)制劑粘度的方法包括向蛋白質(zhì)制劑中添加粘度降低劑，例如氯化鈣或者氯化鎂。文檔編號(hào)C07K16/24GK101378782SQ200680053125公開日2009年3月4日申請(qǐng)日期2006年12月21日優(yōu)先權(quán)日2005年12月21日發(fā)明者N·W·沃恩,P·E·尼科爾斯,P·J·洛雷羅申請(qǐng)人:惠氏公司