專利名稱：一種哲羅魚生物制片技術(shù)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種制片技術(shù)。
背景技術(shù)：
目前，采用的常規(guī)生物制片技術(shù)都是用苯醇類作為透明劑和石蠟的有機(jī)溶劑，經(jīng)苯醇類作用的一些生物材料會(huì)收縮變形，硬化脆化，不能制做成完整的片子，致使實(shí)驗(yàn)無法繼續(xù)進(jìn)行，而且苯類物質(zhì)對(duì)人的造血器官、神經(jīng)系統(tǒng)、消化系統(tǒng)都有毒害作用，如長期反復(fù)接觸苯類，甚至對(duì)中樞神經(jīng)有麻痹作用，同時(shí)也會(huì)造成環(huán)境污染；常規(guī)生物制片技術(shù)是采用中性樹膠作為封片劑，但是存在封片后看不清楚的問題。現(xiàn)有的常規(guī)生物制片技術(shù)針對(duì)性差，缺少針對(duì)單一物種的制片技術(shù)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種哲羅魚生物制片技術(shù)，目的是為了解決現(xiàn)有常規(guī)生物制片技術(shù)存在制片不完整、封片后看不清楚以及試劑有害的問題。哲羅魚生物制片技術(shù)按以下步驟進(jìn)行一、哲羅魚樣本采用Bouin氏液固定池，然后用流水沖洗lOmin，再依次置于甲液、乙液和松油醇(Terpineol)中各30min ；二、哲羅魚樣本從松油醇中取出后置于松油醇與石蠟等體積的混合液中30 40min，取出后置于石蠟中池進(jìn)行包埋，室溫下冷卻后進(jìn)行切片；三、切片進(jìn)行HE染色(蘇木精-伊紅染色法)，然后采用Euparal (英譯漢為優(yōu)巴拉爾)封片，即完成哲羅魚生物制片；其中步驟一中哲羅魚樣本為哲羅魚的各種組織；步驟一中甲液按體積份數(shù)由6份無水乙醇、3份氯仿和1份冰醋酸組成；步驟一中乙液按體積份數(shù)由6份正丁醇、3份氯仿和 1份冰醋酸組成。本發(fā)明采用兼具脫水作用的透明劑松油醇(Terpineol)代替無水乙醇和二甲苯制作石蠟切片，并以Euparal (優(yōu)巴拉爾)封片，改變了歷來采用的苯醇類作為有機(jī)溶劑，中性樹膠作為封片劑，這不僅解決了生物制片技術(shù)的難題，而且較常規(guī)制作方法節(jié)省了許多步聚，減少了環(huán)境污染，獲得了滿意的效果。本發(fā)明采用松油醇的優(yōu)點(diǎn)是它能與醇和醚相混溶，難溶于水，也可溶解石蠟、優(yōu)巴拉爾，且無毒。本發(fā)明采用Euparal的優(yōu)點(diǎn)是1、生物樣本可以直接從乙醇固定液中取出，封片； 2、干燥快一般24h ；3、折光率為1. 483較中性樹膠(1. 578)為低，比較接近動(dòng)植物細(xì)胞的折光系數(shù)(1.4左右)，因此，許多染色或染色很淺的組織，在中性樹膠中看不清的，用優(yōu)巴拉爾封片就能顯示出來。本發(fā)明哲羅魚生物制片技術(shù)所得的哲羅魚玻片標(biāo)本，具有染色新鮮，酸堿細(xì)胞分明，制片結(jié)構(gòu)完整，圖像清晰，輪廓分明的特點(diǎn)。


圖1為具體實(shí)施方式
九中所得哲羅魚成熟的卵子的玻片標(biāo)本的顯微圖；圖2為具體實(shí)施方式
十中所得哲羅魚口腔上皮組織的玻片標(biāo)本的顯微圖；圖3為具體實(shí)施方式
十一中所得哲羅魚幽門盲囊的玻片標(biāo)本的顯微圖；圖4為具體實(shí)施方式
十二中所得哲羅魚卵巢的玻片標(biāo)本的顯微圖。
具體實(shí)施例方式具體實(shí)施方式
一本實(shí)施方式哲羅魚生物制片技術(shù)按以下步驟進(jìn)行一、哲羅魚樣本采用Bouin氏液固定池，然后用流水沖洗lOmin，再依次置于甲液、乙液和松油醇 (Terpineol)中各30min ；二、哲羅魚樣本從松油醇中取出后置于松油醇與石蠟等體積的混合液中30 40min，取出后置于石蠟中池進(jìn)行包埋，室溫下冷卻后進(jìn)行切片；三、切片進(jìn)行 HE染色(蘇木精-伊紅染色法)，然后采用Euparal (英譯漢為優(yōu)巴拉爾)封片，即完成哲羅魚生物制片；其中步驟一中哲羅魚樣本為哲羅魚的各種組織；步驟一中甲液按體積份數(shù)由6份無水乙醇、3份氯仿和1份冰醋酸組成；步驟一中乙液按體積份數(shù)由6份正丁醇、3份氯仿和 1份冰醋酸組成。本實(shí)施方式步驟一中流水沖后的哲羅魚樣本可置于體積濃度為70%的乙醇中長期保存。本實(shí)施方式中松油醇(Terpineol)和Euparal (英譯漢為優(yōu)巴拉爾)，均為現(xiàn)有市售產(chǎn)品，可購買得到。
具體實(shí)施方式
二 本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一不同的是步驟一中Bouin氏液由 25ml的甲醛、75ml的苦味酸飽和溶液和5ml的冰醋酸組成。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一相同。
具體實(shí)施方式
三本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一不同的是步驟一置于松油醇中 30min，中間須更換松油醇一次。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一相同。
具體實(shí)施方式
四本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一不同的是步驟一置于石蠟中池進(jìn)行包埋，中間須更換石蠟一次。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一相同。
具體實(shí)施方式
五本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一不同的是步驟二中哲羅魚樣本從松油醇中取出后置于松油醇與石蠟等體積的混合液中30min。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一相同。
具體實(shí)施方式
六本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一不同的是步驟二中哲羅魚樣本從松油醇中取出后置于松油醇與石蠟等體積的混合液中40min。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一相同。
具體實(shí)施方式
七本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一不同的是步驟二中哲羅魚樣本從松油醇中取出后置于松油醇與石蠟等體積的混合液中32 38min。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一相同。
具體實(shí)施方式
八本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一不同的是步驟二中哲羅魚樣本從松油醇中取出后置于松油醇與石蠟等體積的混合液中35min。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一相同。
具體實(shí)施方式
九本實(shí)施方式哲羅魚生物制片技術(shù)按以下步驟進(jìn)行一、哲羅魚樣本采用Bouin氏液固定池，然后用流水沖洗lOmin，再依次置于甲液、乙液和松油醇中各30min ；二、哲羅魚樣本從松油醇中取出后置于松油醇與石蠟等體積的混合液中35min， 取出后置于石蠟中池進(jìn)行包埋，室溫下冷卻后進(jìn)行切片；三、切片進(jìn)行HE染色，然后采用 Euparal封片，即完成哲羅魚生物制片；其中步驟一中哲羅魚樣本為哲羅魚成熟的卵子；步驟一中甲液按體積份數(shù)由6份無水乙醇、3份氯仿和1份冰醋酸組成；步驟一中乙液按體積份數(shù)由6份正丁醇、3份氯仿和 1份冰醋酸組成。本實(shí)施方式中所得哲羅魚成熟的卵子的玻片標(biāo)本，由圖1中，可見，標(biāo)本中樣品的酸堿細(xì)胞分明，制片結(jié)構(gòu)完整，圖像清晰，輪廓分明。
具體實(shí)施方式
十本實(shí)施方式哲羅魚生物制片技術(shù)按以下步驟進(jìn)行一、哲羅魚樣本采用Bouin氏液固定池，然后用流水沖洗lOmin，再依次置于甲液、乙液和松油醇中各30min ；二、哲羅魚樣本從松油醇中取出后置于松油醇與石蠟等體積的混合液中30min， 取出后置于石蠟中池進(jìn)行包埋，室溫下冷卻后進(jìn)行切片；三、切片進(jìn)行HE染色，然后采用 Euparal封片，即完成哲羅魚生物制片；其中步驟一中哲羅魚樣本為哲羅魚的口腔上皮組織；步驟一中甲液按體積份數(shù)由 6份無水乙醇、3份氯仿和1份冰醋酸組成；步驟一中乙液按體積份數(shù)由6份正丁醇、3份氯仿和1份冰醋酸組成。本實(shí)施方式中所得哲羅魚口腔上皮組織的玻片標(biāo)本，由圖2中，可見，標(biāo)本中樣品的酸堿細(xì)胞分明，制片結(jié)構(gòu)完整，圖像清晰，輪廓分明。
具體實(shí)施方式
十一本實(shí)施方式哲羅魚生物制片技術(shù)按以下步驟進(jìn)行一、哲羅魚樣本采用Bouin氏液固定池，然后用流水沖洗lOmin，再依次置于甲液、乙液和松油醇中各30min ；二、哲羅魚樣本從松油醇中取出后置于松油醇與石蠟等體積的混合液中40min， 取出后置于石蠟中池進(jìn)行包埋，室溫下冷卻后進(jìn)行切片；三、切片進(jìn)行HE染色，然后采用 Euparal封片，即完成哲羅魚生物制片；其中步驟一中哲羅魚樣本為哲羅魚的幽門盲囊；步驟一中甲液按體積份數(shù)由6份無水乙醇、3份氯仿和1份冰醋酸組成；步驟一中乙液按體積份數(shù)由6份正丁醇、3份氯仿和 1份冰醋酸組成。本實(shí)施方式中所得哲羅魚幽門盲囊的玻片標(biāo)本，由圖3中，可見，標(biāo)本中樣品的酸堿細(xì)胞分明，制片結(jié)構(gòu)完整，圖像清晰，輪廓分明。
具體實(shí)施方式
十二 本實(shí)施方式哲羅魚生物制片技術(shù)按以下步驟進(jìn)行一、哲羅魚樣本采用Bouin氏液固定2h，然后用流水沖洗lOmin，再依次置于甲液、乙液和松油醇中各30min ；二、哲羅魚樣本從松油醇中取出后置于松油醇與石蠟等體積的混合液中30 40min，取出后置于石蠟中池進(jìn)行包埋，室溫下冷卻后進(jìn)行切片；三、切片進(jìn)行HE染色，然后采用Euparal封片，即完成哲羅魚生物制片；其中步驟一中哲羅魚樣本為哲羅魚的卵巢；步驟一中甲液按體積份數(shù)由6份無水乙醇、3份氯仿和1份冰醋酸組成；步驟一中乙液按體積份數(shù)由6份正丁醇、3份氯仿和1份冰醋酸組成。本實(shí)施方式中所得哲羅魚卵巢的玻片標(biāo)本，由圖4中，可見，標(biāo)本中樣品的酸堿細(xì)胞分明，制片結(jié)構(gòu)完整，圖像清晰，輪廓分明。
權(quán)利要求
1.一種哲羅魚生物制片技術(shù)，其特征在于哲羅魚生物制片技術(shù)按以下步驟進(jìn)行一、 哲羅魚樣本采用Bouin氏液固定池，然后用流水沖洗lOmin，再依次置于甲液、乙液和松油醇中各30min ；二、哲羅魚樣本從松油醇中取出后置于松油醇與石蠟等體積的混合液中 30 40min，取出后置于石蠟中池進(jìn)行包埋，室溫下冷卻后進(jìn)行切片；三、切片進(jìn)行HE染色，然后采用Euparal封片，即完成哲羅魚生物制片；其中步驟一中哲羅魚樣本為哲羅魚的各種組織；步驟一中甲液按體積份數(shù)由6份無水乙醇、3份氯仿和1份冰醋酸組成；步驟一中乙液按體積份數(shù)由6份正丁醇、3份氯仿和1份冰醋酸組成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種哲羅魚生物制片技術(shù)，其特征在于步驟一中Bouin氏液由25ml的甲醛、75ml的苦味酸飽和溶液和5ml的冰醋酸組成。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種哲羅魚生物制片技術(shù)，其特征在于步驟一置于松油醇中 30min，中間須更換松油醇一次。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種哲羅魚生物制片技術(shù)，其特征在于步驟一置于石蠟中池進(jìn)行包埋，中間須更換石蠟一次。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種哲羅魚生物制片技術(shù)，其特征在于步驟二中哲羅魚樣本從松油醇中取出后置于松油醇與石蠟等體積的混合液中32 38min。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種哲羅魚生物制片技術(shù)，其特征在于步驟二中哲羅魚樣本從松油醇中取出后置于松油醇與石蠟等體積的混合液中35min。
全文摘要
一種哲羅魚生物制片技術(shù)，它涉及一種制片技術(shù)。它解決了現(xiàn)有常規(guī)生物制片技術(shù)存在制片不完整、封片后看不清楚以及試劑有害的問題。方法一、哲羅魚樣本采用Bouin氏液固定，然后流水沖洗，再依次置于甲液、乙液和松油醇中；二、哲羅魚樣本從松油醇中取出后置于松油醇與石蠟等體積的混合液中，再置于石蠟中包埋，冷卻后切片；三、切片進(jìn)行HE染色，然后采用優(yōu)巴拉爾封片即完成。本發(fā)明中哲羅魚生物制片技術(shù)所得的哲羅魚玻片標(biāo)本，具有染色新鮮，酸堿細(xì)胞分明，制片結(jié)構(gòu)完整，圖像清晰，輪廓分明的特點(diǎn)，較常規(guī)制作方法節(jié)省了許多步驟，減少了環(huán)境污染。
文檔編號(hào)G09B23/36GK102184670SQ20111002828
公開日2011年9月14日 申請(qǐng)日期2011年1月26日 優(yōu)先權(quán)日2011年1月26日
發(fā)明者關(guān)海紅, 尹家勝 申請(qǐng)人:中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黑龍江水產(chǎn)研究所