專利名稱：：用于鑒別適合處理與吸用煙草制品相關(guān)的口腔臭味的組合物的篩選方法用于鑒別適合處理與吸用煙草制品相關(guān)的口腔臭味的組合物的篩選方法發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明總體上涉及用于鑒別組合物的篩選方法，所述組合物適合用于口用組合物(例如，糖果或口香糖產(chǎn)品)，該口用組合物對處理與吸用煙草制品相關(guān)的口腔臭味有效。具體地，本發(fā)明涉及用于確定一種組合物對降低模型樣品或溶液中存在的吡啶或吡嗪化合物濃度的能力的篩選方法，所述模型樣品或溶液代表受試者在吸用煙草制品后的口腔，所述能力作為該組合物在處理與吸用煙草制品相關(guān)的口腔臭味中的有效性的指標(biāo)。發(fā)明背景據(jù)估計(jì)，全世界超過12億人吸用煙草制品。已知熱解的煙草常導(dǎo)致煙草制品吸用者的口腔中有遺味。此外，對吸煙者和他們的同伴很明顯的是，熱分解的煙草揮發(fā)物從吸煙者的口腔、呼吸道和肺部釋放出，并且以可被他人覺察到的足夠量存在于吸煙者的口氣中。這些氣味還通常作為回味被吸煙者感覺到，然而是以一種符合氣味適應(yīng)概念的方式；即，與所述氣味持續(xù)接觸使感知隨時間下降，從而使吸煙者可隨時間變得對難聞氣味的至少一種指示沒有感應(yīng)，但所述氣味可被他人感覺到。煙草制品的廣泛使用和與其相關(guān)的口腔臭味產(chǎn)生了對口氣清新產(chǎn)品的一貫需求。然而，據(jù)估計(jì)，在煙草熱解時可產(chǎn)生約4,800種化合物。此外，吸用煙草制品還導(dǎo)致香煙中存在的添加劑的熱解，在香煙中可使用多達(dá)約600種不同的添加劑。到目前為止一直難以開發(fā)用于改善與煙草煙霧相關(guān)的口腔臭味的成功方案，至少部分地是因?yàn)槎喾N可能的口腔臭味來源。此外，為了使物質(zhì)具有香味，該物質(zhì)通常應(yīng)是揮發(fā)性的，并且從鼻后(即通過口)或從鼻前(即用力吸)穿過人的鼻上皮。發(fā)明概述簡言之，本發(fā)明因而涉及用于鑒別組合物的篩選方法，所述組合物適合用于口用組合物(例如，糖果或口香糖產(chǎn)品)，該口用組合物對降低與煙草煙霧相關(guān)的口腔臭味有效，和/或涉及制備對減少與煙草煙霧相關(guān)的口腔臭味有效的口用組合物的方法。在一實(shí)施方案中，所述方法包括，在容器中將試驗(yàn)組合物與包含煙草煙霧中存在的吡啶或吡嗪化合物的模型溶液接觸，確定試驗(yàn)組合物降低容器頂部空間中的吡啶或吡嗪化合物的濃度的能力，并制得包含所述試驗(yàn)組合物的口用組合物。在該實(shí)施方案和/或本文另述的本發(fā)明的其它實(shí)施方案中，所述試驗(yàn)組合物包含蔓越桔提取物、海棠提取物、山楂果提取物、李子提取物、西梅提取物、葡萄籽提取物、葡萄皮提取物、小豆蔻油、紫花苜蓿提取物、金銀花提取物、迷迭香提取物、羅勒提取物、百里香提取物、蘆薈提取物、菊花提取物、綠茶提取物、咖啡豆提取物、甘草、歐芹籽油、松樹提取物、咖啡提取物、人參提取物、蒲公英根提取物、綠原酸、抗壞血酸、咖啡酸、乳酸鋅、硅膠、檸檬酸、馬來酸、酒石酸、丁香酚、a-環(huán)糊精、/3-環(huán)糊精、7-環(huán)糊精、奎尼酸、活性碳、或其組合。在另一實(shí)施方案中，所述方法包括，在容器中將試驗(yàn)組合物與包含煙草煙霧有氣味物質(zhì)(odorant)的模型溶液接觸，所述有氣味物質(zhì)包含吡啶、2-乙基吡啶、3-乙基吡嗪和乙基吡嗪，并確定所述試驗(yàn)組合物降低模型溶液內(nèi)一種或多種有氣味物質(zhì)在容器頂部空間中的濃度的能力。在本發(fā)明的另外實(shí)施方案中，所述方法包括制備多種試驗(yàn)組合物，在容器中將每種試驗(yàn)組合物與模型溶液單獨(dú)接觸，所述模型溶液包含存在于煙草煙霧中的吡啶或吡嗪化合物，從而確定每種試驗(yàn)組合物對降低每個容器頂部空間中吡啶或吡嗪化合物的濃度的能力，并按照將吡啶或吡嗪化合物的濃度有效降低至少約50%來鑒別出一種或多種試驗(yàn)組合物。本發(fā)明還涉及用于處理與煙草煙霧相關(guān)的口腔臭味的方法。在一這樣的實(shí)施方案中，所述方法包括給受試者施用口用組合物(例如，糖果或口香糖)，該組合物包含認(rèn)定為可降低受試者口腔中存在的吡啶或吡嗪化合物濃度的成分，所述吡啶或吡嗪化合物由吸用煙草制品造成。在另一這樣的實(shí)施方案中，所述方法包括給受試者施用口用組合物，該組合物包含這樣的成分，該成分可有效地將受試者口腔中存在的煙草煙霧有氣味物質(zhì)的濃度降低至少約50%，所述煙草煙霧有氣味物質(zhì)由吸用煙草制品造成。所述有氣味物質(zhì)包含2，4,6-三甲基吡啶、2,6-二甲基吡啶、3-乙基吡啶和2-乙基-3-甲基吡嗪。在本發(fā)明的又一這樣的實(shí)施方案中，所述方法包括分布口用組合物，該組合物包含認(rèn)定為可降低受試者口腔中存在的吡徒或吡嗪化合物濃度的成分，所述吡啶或吡嗪化合物由吸用煙草制品造成，并且包括鼓勵受試者消耗或咀嚼可改善由吸用煙草制品所造成的口腔臭味的產(chǎn)品。附圖簡要描述圖1是按實(shí)施例1中所述得到的火焰離子檢測器(FID)色譜圖。圖2是按實(shí)施例1中所述得到的總離子流(TIC)色譜圖。圖3是氣味測定圖和實(shí)施例1中所述TIC色譜的疊加。圖4顯示按實(shí)施例2中所述用Applephenor^處理模型溶液之后有氣味組分的頂部空間濃度的改變。圖5顯示按實(shí)施例2中所述用Applephenoi^處理的模型溶液的感官分析結(jié)果；誤差條表示標(biāo)準(zhǔn)誤差。圖6顯示按實(shí)施例3中所述在用Applephenoi^處理模型溶液之后各組分的頂部空間濃度降低百分比。圖7顯示感官分析結(jié)果，該結(jié)果對比了受試者在吸用香煙后的回味強(qiáng)度和在咀嚼對照口香糖及實(shí)施例4中所述包含添加的活性物(Applephenoi^)的口香糖后的回味強(qiáng)度。圖8顯示感官分析結(jié)果，該結(jié)果對比了受試者在吸用香煙后的回味強(qiáng)度和在咀嚼對照口香糖及實(shí)施例5中所述包含添加的活性物(Applephenon)的口香糖后的回味強(qiáng)度。圖9顯示蔓越桔提取物對降低來自實(shí)施例6中所述模型溶液頂部空間的有氣味物質(zhì)的頂部空間濃度的效率；誤差條表示標(biāo)準(zhǔn)誤差。圖10顯示小豆蔻油對降低來自實(shí)施例6中所述模型溶液頂部空間的有氣味物質(zhì)的頂部空間濃度的效率；誤差條表示標(biāo)準(zhǔn)誤差。圖11顯示相對于實(shí)施例6中所述的對照標(biāo)準(zhǔn)，蔓越桔提取物降低來自煙草煙霧模型溶液的吡啶和吡嗪組分的氣味的效果(以降低的百分?jǐn)?shù)計(jì))；誤差條表示標(biāo)準(zhǔn)誤差，并利用0-10范圍的數(shù)值點(diǎn)進(jìn)行感官分析。圖12顯示相對于實(shí)施例6中所述的對照標(biāo)準(zhǔn)，小豆蔻油降低來自煙草煙霧模型溶液的吡啶和吡嗪組分的氣味的效果(以降低的百分?jǐn)?shù)計(jì))；誤差條表示標(biāo)準(zhǔn)誤差，并利用0-10范圍的數(shù)值點(diǎn)進(jìn)行感官分析。圖13顯示如實(shí)施例7中所述的小豆蔻油釋放(隨時間的小豆蔻百分?jǐn)?shù))。圖14顯示如實(shí)施例8中所述的小豆蔻油釋放(隨時間的小豆蔻量)。優(yōu)選實(shí)施方案的詳細(xì)描述根據(jù)本發(fā)明，并且如下文所進(jìn)一步詳述，發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致與吸用煙草制品相關(guān)的口腔臭味的物質(zhì)，例如吡啶和/或吡嗪化合物，可用來制備模型樣品或溶液，以評價或篩選潛在活性物或試驗(yàn)組合物(例如，Applephenon,小豆蔻油或蔓越桔提取物)，所述評價或篩選是就它們降低這些指示物(indicator)或目標(biāo)化合物濃度的能力或有效性而言，所述指示物或目標(biāo)化合物是在包含它們的容器的氣態(tài)氣氛或頂部空間中。進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，活性物質(zhì)或試驗(yàn)組合物對降低容器頂部空間中這些指示化合物濃度的能力或有效性，還指示了該組合物對降低受試者在吸用煙草制品后口腔中存在的這些揮發(fā)物、致味化合物濃度的能力或有效性。因此，這些活性物或試驗(yàn)組合物可非常適合引入到口用組合物中，所述組合物包括但不限于適用于處理與吸用煙草制品相關(guān)的口腔臭味的糖果、口香糖、糖錠、壓片、可食用膜、口腔噴劑、漱口劑或牙膏產(chǎn)品。致味化合物發(fā)現(xiàn)各種芳族含氮化合物，包括吡啶和/或吡嗪化合物，導(dǎo)致了與吸用煙草制品相關(guān)的口腔臭味。具體地，發(fā)現(xiàn)二取代和三取代的吡啶和/或吡嗪化合物，包括例如低級烷基(例如Q、C2、C3、CO取代的吡啶和/或吡嗪化合物(例如甲基、乙基、丙基、丁基和/或環(huán)丁基二取代或三取代的吡啶和/或吡嗪化合物)，導(dǎo)致了這種口腔臭味。不受具體理論束縛，目前認(rèn)為各種吡啶和吡嗪化合物可能是煙堿熱解的副產(chǎn)物；具體地，在為吡啶化合物的情況下，認(rèn)為熱解導(dǎo)致煙堿(即，下面所示的3《l-甲基-2-吡咯垸基)批淀)的吡咯垸部分中碳2和碳3之間的鍵斷裂。除了存在各種吡啶和吡嗪化合物外，吡咯(例如，乙基吡咯)也被鑒別出并且與煙草煙霧臭味有關(guān)。非氮化合物，例如苯乙酮(g卩，1-苯基乙酮)和二乙酰(即，2，3-丁二酮)，也被鑒別出并且與煙草煙霧臭味有關(guān)。在下面實(shí)施例1中提供的表1中，列出了根據(jù)本發(fā)明鑒別出的示例性有氣味組分，這些有氣味組分是吸用煙草制品導(dǎo)致口腔臭味的原因。這些存在于煙草制品煙霧中的產(chǎn)生氣味的物質(zhì)中的某些可以以極低的水平存在(例如，ppm或ppb水平)，然而仍導(dǎo)致顯著的氣味。例如，吡啶被報(bào)導(dǎo)在水中具有840ppb的臨界值(FlavorBase'software,LeffingwellandAssociates,Canton,GA,2004)。鑒別致味化合物的方法根據(jù)本發(fā)明，利用本領(lǐng)域中已知的技術(shù)來鑒別上述化合物，上述化合物是受試者吸用煙制品后口腔中氣味的主要來源。一般而言，可使用本領(lǐng)域中已知的各種技術(shù)從吸過煙草制品的受試者的口腔中提取有氣味的煙草煙霧化合物，所述技術(shù)包括例如拭擦受試者的舌頭來提供待分析樣品，以確定導(dǎo)致異味的具體化合物。通常由經(jīng)過培訓(xùn)的氣味鑒別員嗅聞拭樣來確認(rèn)拭樣上存在煙草煙霧有氣味物質(zhì)。同樣使用本領(lǐng)域中已知的各種技術(shù)，可另外地或者備選地通過從吸過煙草制品的受試者口腔中獲取呼氣樣品來收集有氣味的煙草煙霧化合物。例如，受試者可向包含模擬唾液(例如，在去離子水中包含氯化鈉、碳酸氫鈉和碳酸氫鉀的溶液，按下面實(shí)施例1中所述制得)的容器中呼入氣體，以便收集樣品。一旦收集后，可使用本領(lǐng)域中已知的各種技術(shù)，鑒別存在于這些樣品中的各種致味化合物，這些化合物導(dǎo)致與吸用煙草制品相關(guān)的口腔臭味。例如，可通過固相微萃取(SPME)將包含所述物質(zhì)的氣密或密封容器(例如，包含從吸煙者口腔中取出的拭樣或者包含含有煙草煙霧有氣味物質(zhì)的部分液體樣品(例如模擬唾液)的容器)的頂部空間進(jìn)行分離，并進(jìn)行進(jìn)一步分析(例如，氣相色譜，其用于和適用于化合物檢測或鑒別的裝置例如質(zhì)譜組合)，以確定導(dǎo)致異味的個體化合物。固相微萃取技術(shù)是本領(lǐng)域中熟知的方法，該方法適用于從受試者口腔中提取含有有氣味組分的樣品，用以隨后分析。(見例如，"通過固相微萃取/氣相色譜質(zhì)譜(HS-SPME-GC-MS)測量釋放的口腔臭味物(ReleasedOralMalodorsMeasuredbySolidPhaseMicroextraetion/GasChromatographyMassSpectrometry(HS-SPME-GC-MS))",Payne,R.,Labows，J.,Liu，X，ProceedingofACS-FlavorReleaseNo.0841236925，2000)。例如，通過用氣密注射器提取口腔空氣并接著用填充柱分離和用火焰光度檢測器檢測，檢測硫化氫、甲硫醇和二甲基硫醚。(見例如，"人口腔空氣中硫化合物的直接氣相色譜分析(DirectGasChromatographAnalysisofSulphurCompoundsinMouthAirinMan)"，Tonzetich，J.,Archs,OralBiol.1971，16,587-597)。特別地，證明SPME適合從包含非常規(guī)有氣味物質(zhì)的容器的頂部空間提取揮發(fā)組分，用以隨后通過氣相色譜-嗅覺測量(GCO)分析和氣相色譜-質(zhì)譜(GC/MS)分析對氣味進(jìn)行分析。(見例如，"頂部空間固相微萃取(HeadspaceSolidPhaseMicroextraction)"，Zhang，Z.,Pawliszyn，J.,Anal.Chem.1993,65,1843-1852)。SPME的益處包括對于樣品制備的需求很少，需要極少許溶劑，并且提取時間相對快。用于GC/MS分析的合適儀器包括例如得自AgilentTechnologies(PaloAlto，CA)的Agilent6890氣相色譜(GC)/質(zhì)譜(MS)。應(yīng)注意的是，出于所有相關(guān)目的，通過引用將上述或本文另外述及的各參考文獻(xiàn)引入到本文中。在一種方法中，可使用配備有質(zhì)譜的氣相色譜對某些有氣味物質(zhì)為已知的樣品進(jìn)行分析。然后通常通過將樣品譜圖與數(shù)據(jù)庫(例如，WileyRegistryofMassSpectralData,7thEdition,JohnWiley&Sons,Inc.,2000)匹配和/或?qū)悠方M分的保留指數(shù)與已知標(biāo)準(zhǔn)匹配，可鑒別其中存在的致味組分。在可選的方法中，可通過氣相色譜-嗅覺測量法(GCO)分析來進(jìn)行有氣味物質(zhì)的鑒別，其包括利用嗅聞口(sniffport)來確定GC柱流出物的哪部分表現(xiàn)出煙草煙霧氣味特性，然后將流出物的那些部分迸行進(jìn)一步分析(例如，質(zhì)譜)以確定它們的組成。文獻(xiàn)中描述了各種GCO技術(shù)。一種這樣的方法包括Osme方法，該方法描述于"通過氣相色譜-嗅覺測量技術(shù)(Osme)對來自不同成熟期葡萄的黑比諾酒進(jìn)行氣味分析(OdoranalysisofPinotNoirWinesfromGrapesofDifferentMaturitiesbyaGasChromatography-OlfactometryTechnique(Osme))",Miranda-Lopez,R.，Libbey，L.M.,Watson，B.T.，McDaniel，M.R.,J.FoodSci.,1992,57:985-993，1019。另一方法包括CHARM分析，其描述于"氣相色譜流出物的感官分析操作(Aprocedureforthesensoryanalysisofgaschromatographiceffluents)",Acree,T.E.;Barnard,J.;Cunningham,D.G,FoodChem.1984,41，1698-1703。又一方法包括香味提取物稀釋分析，其描述于"通過香味提取物稀釋分析表征藏紅花氣味(Characterizationofsaffronflavorbyaromaextractdilutionanalysis)"，Cadwallader,K.R.;Baek,H.H.;Cai，M,Spices;Shahidi，F(xiàn).;Cadwallader,K.R.,Eds.;AmericanChemicalSociety:Washington,DC,1997，66-79。模型溶液根據(jù)本發(fā)明，一旦鑒別后，可使用上述致味化合物來制備溶液，該溶液模擬或模仿吸過煙草制品的受試者口腔中存在的唾液?？墒褂眠@些模型溶液來確定潛在活性組合物(例如，試驗(yàn)組合物)對改善歸因于吸用煙草制品的口腔臭味的功效；即，可使用這些模型溶液來確定試驗(yàn)組合物對降低一種或多種致味化合物濃度的能力，所述濃度為致味化合物存在于包含模型溶液的容器的氣態(tài)氣氛中或頂部空間中的濃度，所述能力反過來又是所述試驗(yàn)組合物在口腔中達(dá)到類似結(jié)果的能力指標(biāo)?？赏ㄟ^經(jīng)過培訓(xùn)的氣味鑒別員，確定模型溶液和吸過煙草制品的受試者的呼氣之間特性及強(qiáng)度的相似性。一般而言，通過向液體(例如，含水)介質(zhì)或溶劑中加入一種或多種經(jīng)鑒別的煙草煙霧有氣味化合物而制得模型溶液。該模型溶液還可通過向包含一種或多種煙草煙霧致味化合物的容器中加入液體介質(zhì)或溶劑而制得。液體介質(zhì)通常包含水，并且可任選包含一種或多種另加組分(例如醇，如乙醇或甲醇)。在各種實(shí)施方案中，其中加入煙草煙霧有氣味化合物的含水介質(zhì)可包含各種濃度或比例的醇(例如，乙醇)和水的組合。例如，合適的含水介質(zhì)通常包含約1%-約20。/。(以重量計(jì))或約1%-約10%(以重量計(jì))的醇如乙醇，和約80%-約99%(以重量計(jì))的水(例如，5%乙醇/95%水的溶液(以重量計(jì))或1%乙醇/99°/。(以重量計(jì))水的溶液)。一般而言，對模型溶液進(jìn)行制備，以確保在包含其的容器中初始和最終的有氣味物質(zhì)頂部空間濃度足以超過分析方法的檢測限，使得在檢測/測量中的誤差最小或被避免。因此，通常制備模型溶液以在容器中提供最低的有氣味物質(zhì)的頂部空間濃度，該濃度為至少約百萬分之(ppm)10、至少約50ppm、至少約100ppm、至少約150ppm或至少約250ppm。模型溶液通常包含一種或多種煙草煙霧有氣味物質(zhì)，使得溶液具有至少約百萬分之(ppm)(即，每毫升溶液中有氣味物質(zhì)的微克數(shù))200、更通常至少約600ppm、還更通常至少約1000ppm的有氣味物質(zhì)總濃度，和還更通常至少約1500ppm有氣味物質(zhì)總濃度。優(yōu)選地，模型溶液中存在的有氣味物質(zhì)的濃度為約600-約2000ppm的總濃度、更優(yōu)選約600-約1750ppm的總濃度和更優(yōu)選約1000-約1750ppm的總濃度。所述液體(例如，含水)介質(zhì)或溶劑(例如水、和任選的醇或一些其它組分)通常組成模型溶液的其余部分。通常，模型溶液包含吡啶或吡嗪化合物，并且在各種實(shí)施方案中，模型溶液同時包含吡啶化合物和吡嗪化合物。在一優(yōu)選實(shí)施方案中，該溶液包含多種吡啶化合物和/或多種吡嗪化合物。所述吡啶化合物可選自例如2，4,6-三甲基吡啶、2，6-二甲基吡啶、3，5-二甲基吡啶、2-乙基吡啶、3-乙基吡啶和吡啶、或其若干組合。所述吡嗪化合物可選自乙基吡嗪、2，3-二甲基吡嗪、2,5-二甲基吡嗪和2-乙基-3-甲基吡嗪、或其若干組合。例如，在至少一些實(shí)施方案中，模型溶液包含2，4，6-三甲基吡啶、2,6-二甲基吡啶、2-乙基吡啶、3-乙基吡啶、吡啶、乙基吡嗪和/或2-乙基-3-甲基吡嗪。在又一實(shí)施方案中，模型溶液另外地或者備選地包含吡啶、2-乙基吡啶、3-乙基吡嗪和/或乙基吡嗪。另外應(yīng)注意的是，一種或多種模型溶液還可任選包含吡咯(例如，乙基吡咯)和/或無氮化合物例如苯乙酮(即，l-苯基乙酮)和二乙酰(即，2,3-丁二酮)。根據(jù)本發(fā)明，鑒別出各種特別代表或類似于煙草煙霧氣味的模型溶液。一種這樣的溶液包含吡啶、2-乙基吡啶、3-乙基吡嗪和乙基吡嗪。任選地，模型溶液還可包含所述組分以及2,4,6-三甲基吡啶、2，6-二甲基吡啶、3-乙基吡啶、2-乙基-3-甲基吡嗪或其組合。這些模型溶液還可任選包含3,5-二甲基吡啶、2-乙基吡啶、3-乙基吡啶、2，3-二甲基吡嗪、2,5-二甲基吡嗪或其組合。對于上述和/或本文另述的一種或多種模型溶液(例如，包含吡啶、2-乙基吡啶、3-乙基吡嗪和乙基吡嗪的溶液)，有氣味物質(zhì)的總濃度通常為至少約200ppm、優(yōu)選至少約600ppm和更優(yōu)選至少約1000ppm，該濃度為例如約200-約1200ppm或約200-約800ppm。通過另外的實(shí)例，對于包含吡啶、2-乙基吡啶、3-乙基吡嗪、乙基吡嗪、2，4,6-三甲基吡啶、2，6-二甲基吡啶、3-乙基吡啶和2-乙基-3-甲基吡嗪的溶液，有氣味物質(zhì)的總濃度通常為至少約400ppm、優(yōu)選至少約800ppm和更優(yōu)選至少約1000ppm，該濃度為例如約400-約1400ppm或約800-約1400ppm。更具體地，對于上文所述和/或本文另述的一種或多種模型溶液，每種有氣味物質(zhì)在模型溶液中存在的濃度可為lppm、至少約50ppm、優(yōu)選至少約75ppm和更優(yōu)選至少約100ppm，每種有氣味物質(zhì)的濃度為例如約1-約200ppm、約125-約175ppm或約75-約150ppm。篩選方法根據(jù)本發(fā)明，可利用上述模型溶液作為用于篩選組合物的方法的一部分，以確定該組合物對降低容器的氣態(tài)氣氛或頂部空間中有氣味物質(zhì)的濃度是否有效，所述容器中包含模型溶液。包含模型溶液的容器通常具有適當(dāng)?shù)某叽?，以提供包含有氣味物質(zhì)的容器的所需最低有氣味物質(zhì)頂部空間濃度。一般而言，本發(fā)明的篩選方法包括將模型溶液和試驗(yàn)組合物接觸。通常，試驗(yàn)組合物可以是油的形式(例如，小豆蔻油)，是試驗(yàn)組合物在含水介質(zhì)(例如，水)中的溶液，或者是在與模型溶液接觸時溶解的固體形式。使用本領(lǐng)域中已知的技術(shù)，可確定試驗(yàn)組合物降低容器頂部空間中吡啶或吡嗪化合物的濃度的能力，所述容器中包括含有有氣味物質(zhì)的模型溶液。更具體地，可通過例如如下來進(jìn)行這種確定在與試驗(yàn)組合物接觸之前，測量包含所述溶液的容器的頂部空間中吡啶或吡嗪化合物的濃度，然后在與試驗(yàn)組合物接觸之后，測量包含所述溶液的容器的頂部空間中吡啶或吡嗪化合物的濃度。容器頂部空間中吡啶化合物和/或吡嗪化合物的初始濃度和最終濃度的差別因而表示試驗(yàn)組合物對降低有氣味物質(zhì)頂部空間濃度的有效性。在這一點(diǎn)上應(yīng)注意的是，如本文另外詳述，已經(jīng)觀察到試驗(yàn)組合物對降低有氣味物質(zhì)頂部空間濃度的有效性的定量測定，和包含這種組合物的口用組合物對處理與吸用煙草制品相關(guān)的口腔臭味的定性性能之間存在相關(guān)性。通常使用本領(lǐng)域中己知的方法來確定容器頂部空間中初始和最終的批啶和/或吡嗪濃度，所述方法包括(如本文另外詳述)，通過獲取頂部空間的樣品并對該蒸氣樣品部分進(jìn)行分析，該分析包括分離，例如通過色譜，并且包括測定，例如通過質(zhì)譜。頂部空間的取樣可通過將頂部空間與對吸收頂部空間中一部分蒸氣有效的纖維接觸來進(jìn)行，所述蒸氣包含吡啶或吡嗪化合物，或者通過將頂部空間與對提取頂部空間中一部分蒸氣有效的氣密注射器接觸來進(jìn)行，所述蒸氣包含吡啶或吡嗪化合物。對一部分頂部空間的取樣或提取進(jìn)行的溫度通常為約20。C-約IO(TC或約2(TC-約40°C，優(yōu)選約20-約25°C，和還更優(yōu)選約22'C的溫度。此外，頂部空間的取樣或提取通常進(jìn)行至少約5分鐘、至少約IO分鐘、至少約20分鐘、至少約30分鐘或至少約1小時。通常，取樣或提取進(jìn)行的時段為至多約2小時、至多約3小時、至多約4小時、至多約6小時、至多約8小時或至多約IO小時。在各種其它實(shí)施方案中，取樣或提取進(jìn)行的過程可為顯著更長時段(例如，至多約12小時、至多約24小時或至多約48小時)。事實(shí)上，可連續(xù)地取多個頂部空間樣品，在上面所述的一個或多個取樣時間期間可提取多個樣品。另外地或備選地，可根據(jù)上面給出的取樣時間間歇地取樣，取樣之間的間隔不嚴(yán)格苛求。在這一點(diǎn)上應(yīng)注意的是，在與試驗(yàn)組合物接觸之前或之后，可利用本領(lǐng)域中已知的其它技術(shù)或方法，來對樣品進(jìn)行分析和容器頂部空間中給定的致味化合物的濃度進(jìn)行確定，而不背離本發(fā)明的范圍。通常在氣密或密封的容器中將模型溶液和試驗(yàn)組合物接觸。為了確保試驗(yàn)組合物和模型溶液之間足夠的接觸，通常在確定最終的吡啶或吡嗪濃度之前，將試驗(yàn)組合物和模型溶液接觸至少約5分鐘、至少約10分鐘、至少約20分鐘、至少約30分鐘或至少約1小時。通常，在確定最終的吡啶或吡嗪濃度之前，將試驗(yàn)組合物和模型溶液接觸至多約2小時、至多約3小時、至多約4小時、至多約6小時、至多約8小時或至多約IO小時的時段。在各種實(shí)施方案中，將試驗(yàn)組合物和模型溶液接觸顯著更長的時段(例如，至多約12小時，至多約24小時或至多約48小時)。對用于將試驗(yàn)組合物和模型溶液接觸的合適溫度進(jìn)行選擇，以便優(yōu)選地模擬消耗口用組合物(例如，咀嚼口香糖或消耗糖果)的受試者的口腔條件，所述口用組合物中使用該試驗(yàn)組合物。因此，試驗(yàn)組合物和模型溶液進(jìn)行接觸的溫度通常為約20'C-約IO(TC、約20'C-約40°C或約2CTC-約30'C，和優(yōu)選約20'C-約25。C，還更優(yōu)選約22°C的溫度。還可攪拌包含試驗(yàn)組合物和模型溶液的容器，例如用以模擬消耗(例如，咀嚼)條件。攪拌的程度和方式不嚴(yán)格苛求，并且可根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法來進(jìn)行。通常，將模型溶液與代表試驗(yàn)組合物量的一定量試驗(yàn)組合物接觸，所述試驗(yàn)組合物將最終用在口用組合物例如口香糖或糖果產(chǎn)品中。因?yàn)橐氲娇谟媒M合物中的試驗(yàn)組合物的比例可取決于例如其所被引入的組合物的類型和所需組合物味道而改變，所以與模型溶液接觸的試驗(yàn)組合物的量同樣可在相對寬的限度內(nèi)變化。例如，本發(fā)明一些實(shí)施方案中的模型溶液可與每毫升(ml)溶液至少約0.01毫克(mg)的試驗(yàn)組合物、每ml溶液至少約0.1mg的試驗(yàn)組合物、每ml溶液至少約0.5mg的試驗(yàn)組合物、或每ml溶液至少約lmg的試驗(yàn)組合物接觸。在至少一些實(shí)施方案中，將模型溶液與每ml溶液約0.01-約1mg的試驗(yàn)組合物、每ml溶液約0.1-約0.8mg的試驗(yàn)組合物、或每ml溶液約0.2-約0.7mg的試驗(yàn)組合物接觸。在各種其它實(shí)施方案中，通常將模型溶液與每ml溶液約1-約75mg的試驗(yàn)組合物、更通常地每ml溶液約5-約60mg的試驗(yàn)組合物、優(yōu)選每ml溶液約10-約50mg的試驗(yàn)組合物、和更優(yōu)選每ml溶液約15-約30mg的試驗(yàn)組合物接觸。應(yīng)注意的是，本發(fā)明的篩選方法可用來使用已知的組合技術(shù)試驗(yàn)多個組合物。在這種實(shí)施方案中，可制備多個試驗(yàn)組合物(例如至少約5個、至少約10個、至少約15個、至少約20個、至少約25個、至少約30個、至少約40個、至少約50個或更多試驗(yàn)組合物的庫或陣列)并將其與相同或不同的模型溶液接觸，該接觸是在例如單獨(dú)的密封容器中，或者備選地在共同基底的單獨(dú)密封孔(well)中。優(yōu)選地，將多個試驗(yàn)組合物排列成空間可尋址的方式，例如以空間可尋址方式處于共同基底(例如，微量滴定板)的孔中，以使本發(fā)明的方法更易于使用商購自動裝置(例如，商購的自動取樣裝置，其可用于和例如商購的GC/MS裝置組合)來進(jìn)行。有利地是，可并行地確定多個試驗(yàn)組合物中的每一個對降低每個容器中吡啶或吡嗪化合物濃度的能力。在至少某些實(shí)施方案中，由如此鑒別為對降低吡啶和/或吡嗪濃度有效的多種試驗(yàn)組合物中的至少兩種或更多種來制備口用組合物(例如，糖果或口香糖)。不受具體理論束縛，歸因于和本文所述試驗(yàn)組合物接觸的吡啶和/或吡嗪化合物頂部空間濃度的降低，被認(rèn)為是依照于一種或多種機(jī)理進(jìn)行。一種可能機(jī)理是試驗(yàn)組合物的加入影響模型溶液的pH。例如，包含吡啶和/或吡嗪化合物的模型溶液通常是中性(即，具有約6-約8的pH)。在向該模型溶液加入各種試驗(yàn)組合物時觀測到pH降低(即，將溶液酸化)。例如，向模型溶液中加入Applephenoi^(如實(shí)施例2中詳述)產(chǎn)生pH為約3.7的酸性溶液。目前認(rèn)為pH的這種降低歸因于Applephenoi^的主要組分，即酸性的多酚綠原酸。在包含吡啶的酸化溶液中，吡啶(其pKa為5.2)主要以陽離子存在。目前認(rèn)為帶電的吡啶物質(zhì)的氫鍵導(dǎo)致?lián)]發(fā)性降低的質(zhì)子化形式，并相應(yīng)地降低頂部空間中的濃度。另外，模型溶液的帶電組分(正或負(fù))通常比不帶電荷物質(zhì)更可水溶。有氣味組分的溶解性的提高通常與口腔中更大的唾液流有關(guān).，通過由增加的唾液流所促使的吞咽，可導(dǎo)致增加從口腔除去有氣味物質(zhì)。從口腔中除去這些可溶組分還可通過用水或其它飲料沖洗來進(jìn)行。鑒于以上，因此應(yīng)注意的是，在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的篩選方法可另外地或備選地包括篩選在不同pH值下的相同試驗(yàn)組合物和/或模型溶液，以便評價pH值對試驗(yàn)組合物性能的影響。例如，在該實(shí)施方案中，可控制試驗(yàn)組合物的內(nèi)含物，使得在與模型溶液接觸時，得到的混合物或溶液具有小于7的pH值，例如為約2-約6。另一可能機(jī)理涉及某些活性組合物的組分影響唾液蛋白的產(chǎn)生。多酚是本發(fā)明的某些活性組合物(例如，Applephenoi^和蔓越桔提取物)的組分。已知多酚、尤其是丹寧酸可使唾液蛋白沉淀。目前認(rèn)為，揮發(fā)性組分吸附至唾液蛋白，使它們較不易于釋放到溶液的頂部空間中。而且，認(rèn)為由于唾液蛋白質(zhì)的吞咽而將一部分揮發(fā)性組分從口腔除去，所述唾液蛋白質(zhì)具有吸附至其上的揮發(fā)性組分。又一可能機(jī)理涉及活性物的組分和致味化合物之間的反應(yīng)。更具體地，多酚(來自試驗(yàn)組合物例如蔓越桔提取物)和來自煙草煙霧的氮化合物(例如，吡啶)之間反應(yīng)，從而降低這些揮發(fā)性組分的濃度。本發(fā)明的另一活性組合物即小豆蔻中包含萜烯，最顯著地包含檸檬烯。這些化合物以類似于多酚的方式具有抗氧化活性。因此，目前認(rèn)為可能存在小豆蔻相關(guān)的萜烯和吡啶之間的反應(yīng)，以及存在揮發(fā)性組分濃度的附帶降低。無論通過何種機(jī)理實(shí)現(xiàn)濃度的降低，應(yīng)注意的是，本發(fā)明使得能夠以可計(jì)量的方式和/或分析的方式篩選試驗(yàn)組合物，以便評價它們在口用組合物例如口香糖或糖果產(chǎn)品中的潛在應(yīng)用，而不必再從頭制備這種口用組合物。如此，可更快速地并且以更有效和更有成本效益的方式來評價多個樣品。例如，在優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明可用來篩選多個試驗(yàn)組合物，以便更有效地鑒別和選擇試驗(yàn)組合物，該組合物有效地將包含模型溶液的容器的頂部空間中一種或多種吡啶和/或吡嗪化合物的濃度降低(例如使用本領(lǐng)域中已知的手段通過質(zhì)譜來確定)至少約20%或至少約30%、優(yōu)選至少約40%、更優(yōu)選至少約50%、還更優(yōu)選至少約60%、還更優(yōu)選至少約70%、還更優(yōu)選至少約80%、還更優(yōu)選至少約90%、和最優(yōu)選約100%。一旦鑒別，然后可任選對這些組合物進(jìn)行進(jìn)一步試驗(yàn)，其中它們被配置成用于進(jìn)一步試驗(yàn)的口用組合物。在一些實(shí)施方案中，這些得到的組合物(例如，口香糖和/或糖果)可實(shí)現(xiàn)受試者口腔中相同或相似的降低。如前所述，為了使物質(zhì)具有香味，該物質(zhì)通常應(yīng)是揮發(fā)性的，并從鼻后或從鼻前穿過人的鼻上皮。因此，模型溶液的揮發(fā)性有氣味物質(zhì)的頂部空間濃度的降低，通常表示對降低在吸用煙草制品之后受試者口腔中存在的揮發(fā)性組分的有效性，相應(yīng)地表示處理這些由揮發(fā)性組分的存在所造成的口腔臭味的有效性。因此，一旦根據(jù)本發(fā)明成功鑒別試驗(yàn)組合物可降低致味化合物的濃度，則可任選使用本領(lǐng)域中已知的方法用這種試驗(yàn)組合物來制備口用組合物(例如，口香糖和/或糖果產(chǎn)品)，用以由受試者來進(jìn)一步評價或使用?？墒褂帽疚拿枋龅姆椒êY選各種組合物，以確定它們降低模型溶液的有氣味物質(zhì)頂部空間濃度的能力，包括得自各種水果(例如，蔓越桔、蘋果、海棠、山楂果、李子、西梅和葡萄)、蔬菜和植物的組合物。例如，根據(jù)本發(fā)明篩選的組合物可包含如下，或備選地基本上由如下組成提取物，油，化合物，等等，它們選自蔓越桔提取物、Applephenon、海棠提取物、山楂果提取物、李子提取物、西梅提取物、葡萄籽提取物、葡萄皮提取物、小豆蔻籽提取物(例如，小豆蔻油)、紫花苜蓿提取物、金銀花提取物、迷迭香提取物、羅勒提取物、百里香提取物、蘆薈提取物、菊花提取物、綠茶提取物、咖啡豆提取物、甘草、歐芹籽油、松樹提取物、咖啡提取物、人參提取物、蒲公英根提取物、綠原酸、抗壞血酸、咖啡酸、乳酸鋅、硅膠、檸檬酸、馬來酸、酒石酸、丁香酚、a-環(huán)糊精、/3-環(huán)糊精、7-環(huán)糊精、奎尼酸及其組合。作為另外實(shí)施例，根據(jù)本發(fā)明篩選的組合物可包含如下，或備選地基本上由如下組成提取物，油，化合物，等等，它們選自蔓越桔提取物、海棠提取物、山楂果提取物、李子提取物、西梅提取物、葡萄籽提取物、葡萄皮提取物、小豆蔻籽提取物(例如，小豆蔻油)、紫花苜蓿提取物、金銀花提取物、迷迭香提取物、羅勒提取物、百里香提取物、蘆薈提取物、菊花提取物、綠茶提取物、咖啡豆提取物、甘草、歐存籽油、松樹提取物、咖啡提取物、人參提取物、蒲公英根提取物、綠原酸、抗壞血酸、咖啡酸、乳酸鋅、硅膠、檸檬酸、馬來酸、酒石酸、丁香酚、ce-環(huán)糊精、/3-環(huán)糊精、7-環(huán)糊精、奎尼酸及其組合。在某些實(shí)施方案中，篩選的組合物可得自包括例如如下的水果蔓越桔提取物、海棠提取物、山楂果提取物、李子提取物、西梅提取物、葡萄籽提取物、葡萄皮提取物及其組合。在還另外實(shí)施方案中，篩選的組合物可得自包括例如如下的植物小豆蔻籽提取物(例如，小豆蔻油)、紫花苜蓿提取物、金銀花提取物、迷迭香提取物、羅勒提取物、百里香提取物、蘆薈提取物、菊花提取物、綠茶提取物、咖啡豆提取物、甘草、歐芹籽油、松樹提取物、咖啡提取物、人參提取物、蒲公英根提取物及其組合。在還另外實(shí)施方案中，篩選的組合物包括綠原酸、抗壞血酸、咖啡酸、乳酸鋅、硅膠、檸檬酸、馬來酸、酒石酸、丁香酚、a-環(huán)糊精、/3-環(huán)糊精、7-環(huán)糊精、奎尼酸及其組合。根據(jù)本發(fā)明，還可篩選得自例如木材或堅(jiān)果殼的碳(例如，活性碳)。特別地，已確定Applephen0n、小豆蔻油和蔓越桔提取物對降低有氣味物質(zhì)的頂部空間濃度有效。組合物在口用組合物中的應(yīng)用被認(rèn)定為可有效地將容器頂部空間的吡啶或吡嗪化合物濃度降低至少約50%(或更大)的組合物特別適合引入到口用組合物中，所述吡啶或吡嗪化合物包含在所述容器中，所述口用組合物包括但不限于適用于處理與吸用煙草制品相關(guān)的口腔臭味的糖果、口香糖、糖錠、壓片、可食用膜、口腔噴劑、漱口劑或牙膏產(chǎn)品。具體地，根據(jù)本發(fā)明的篩選方法，經(jīng)鑒別對降低容器頂部空間中致味化合物(其中所述致味化合物包含在所述容器中)的濃度有效的試驗(yàn)組合物或活性組合物，適合于根據(jù)本領(lǐng)域己知的方法例如描述于美國專利No.6,627，234中的方法引入到糖果或口香糖中，通過引用將該專利的全部內(nèi)容引入到本文中。活性組合物可引入到口用組合物中而無需稀釋，或者可在引入之前稀釋。在任一情況下，糖果或口香糖中存在的活性組合物的濃度可例如為至少約0.1重量％、更通常至少約0.5重量％、和更通常約1重量％。優(yōu)選地，糖果或口香糖中存在的活性組合物的濃度可為約0.1重量％-約5重量％、更優(yōu)選約0.5重量％-約2重量％、和還更優(yōu)選約0.5重量％-約1重量％的濃度。處理口腔臭味的方法通常，通過給受試者施用包含根據(jù)本發(fā)明鑒別的活性組合物的口用組合物(例如，一片或多片糖果或口香糖產(chǎn)品)，來進(jìn)行與煙草煙霧相關(guān)的口腔臭味的處理；即，可根據(jù)本發(fā)明通過施用口用組合物來處理口腔臭味，所述口用組合物被認(rèn)定為可降低受試者口腔中的煙草煙霧有氣味物質(zhì)的濃度。更具體地，可通過給受試者施用組合物來處理口腔臭味，所述組合物可有效地將受試者口腔中由于吸用煙草制品而存在的吡啶或吡嗪的濃度降低至少約20%、至少約30%、至少約40%、至少約50%、至少約60%、至少約70%、至少約80%或至少約90%。例如，對于例如口香糖或糖果的口用組合物，施用可包括咀嚼多片口用組合物。理想地是控制所述產(chǎn)品在口腔中的持續(xù)時間和活性組合物從口用組合物中釋放的速率，以便使所述產(chǎn)品在抵抗由煙草煙霧造成的口腔臭味中效果最大化。例如，對于口香糖，施用通常包括咀嚼口香糖至少約5分鐘、更通常約5-約60分鐘、甚至更通常約10-約20分鐘、和甚至更通常約20分鐘。對于口香糖，在咀嚼的最初幾分鐘(例如，最初約2分鐘、約3分鐘、約4分鐘或甚至約5分鐘)期間從口香糖釋放的活性組合物通常為至少約5%、至少約10%、至少約25%、至少約50%、至少約75%或甚至約100%。更通常地，在咀嚼的第一個20分鐘期間，從口香糖釋放的活性組合物為至少約25%、至少約50%、至少約75%或甚至至少約100%。然而，在這一點(diǎn)上應(yīng)注意的是，在各種可選實(shí)施方案中，可能需要將活性組合物更持續(xù)地遞送到口腔中。因此，在該實(shí)施方案中，可能需要在施用的最初幾分鐘(例如，最初約2分鐘、約3分鐘、約4分鐘或甚至約5分鐘)期間將至多約25%、至多約50%或至多約75%的活性組合物釋放到口腔內(nèi)。同樣地，可能需要在施用的最初20分鐘期間將至多約50%或至多約75%的活性組合物釋放到口腔內(nèi)。促進(jìn)組合物的使用的方法本發(fā)明還涉及用于促進(jìn)口用組合物的使用的方法，所述組合物包含對降低由于吸用煙草制品而在受試者口腔中存在的吡啶或吡嗪化合物的濃度有效的組合物。通常，該方法包括向最終用戶分配或者備選地向依次會分配給最終用戶的某人分配口用組合物，該口用組合物包括但不限于糖果、口香糖、糖錠、壓片、可食用膜、口腔噴劑、漱口劑或牙膏產(chǎn)品，它們包含被認(rèn)定為可降低由于受試者吸用煙草制品而在受試者口腔中存在的吡啶或吡嗪化合物的濃度的組合物，并且鼓勵受試者消耗或咀嚼該產(chǎn)品，以改善由吸用煙草制品造成的口腔臭味。例如，這種鼓勵可通常出現(xiàn)在包含糖果或口香糖產(chǎn)品的包裝上，并且可通過常規(guī)手段(例如，電子媒體或平面媒體)來傳播。通常，將所述產(chǎn)品描述為包含這樣的成分，該成分被認(rèn)定為可降低由于吸用煙草制品而在受試者口腔中存在的吡啶或吡嗪化合物的濃度。特別地，通過進(jìn)行本文所述的篩選方法來認(rèn)定成分的有效性。對于包含這種成分的口香糖，通常鼓勵受試者將口香糖咀嚼一定的時段(例如，至少約5分鐘或約20分鐘)。通過以下實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明。不認(rèn)為這些實(shí)施例限制本發(fā)明的范圍或可實(shí)施本發(fā)明的方式。實(shí)施例實(shí)施例1該實(shí)施例詳細(xì)鑒別了有氣味組分，該組分是吸用煙草制品導(dǎo)致口腔臭味的原因。用于鑒別有氣味組分的方法包括在吸用煙草制品之前和之后拭擦受試者的口腔，并利用固相微萃取(SPME)、氣相色譜-嗅覺測量法(GCO)和氣相色譜/質(zhì)譜法(GC/MS)進(jìn)行分析。采用兩個參與者，在微分析實(shí)驗(yàn)室(Microanalytics，AMOCONcompanyRoundRock,TX)中并禾U用Maca皿do雪茄(Macanudc^robustobrand,多米尼加共和國)對有氣味化合物進(jìn)行試驗(yàn)。參與者在吸煙之前2小時中不食用或飲用或使用口用衛(wèi)生產(chǎn)品。參與者在吸煙之前1小時中禁止吸煙或消耗除水外的任何食品。參與者不經(jīng)常吸煙，并且參與者均具有正常的口腔健康狀態(tài)。每個參與者吸用半支雪茄(吸約20分鐘)。用帶尼龍柄的涂有尼龍網(wǎng)花邊的藥簽(TX714A,TheTexwipeCo.，UpperSaddleRiver,NJ)在舌頭表面上前后擦拭5回，從參與者的口腔中提取有氣味的煙草煙霧化合物。在通過感官篩選證實(shí)具有煙草煙霧氣味的藥簽(2個鑒別員吸聞藥簽并一致認(rèn)為氣味最大的藥簽)后，將聚丙烯柄切斷，并且將藥簽頭密封在40ml具有塑料螺帽和Teflon隔片的玻璃小瓶中，用于隨后的頂部空間取樣。對在吸煙之前IO分鐘從參與者口腔中取出的空白藥簽進(jìn)行分析，作為對照標(biāo)準(zhǔn)。利用固相微萃取(SPME)(Supelco，Beliefonte,PA)用Carboxen-聚二甲基硅氧垸纖維(75pm，23規(guī)格)對包含藥簽頭的小瓶的頂部空間提取60分鐘。將SPME纖維組件注入經(jīng)改進(jìn)用于多維分析并配備有聞吸口以及AromaTrax軟件(Microanalytics,RoundRock,TX)的Agilent6890氣相色譜(GC)/質(zhì)譜儀(MC)(AgilentTechnologies,PaloAlto,CA)中，用以分析。纖維在注入之后在GC注入口保留5分鐘。最初進(jìn)行手動SPME提取，用以分析。GC/MS操作參數(shù)包括6.5ml/分鐘的He載氣流速、分流模式(2:1)和設(shè)為25(TC的進(jìn)樣器(injector)。柱1為15米長，內(nèi)徑為0.53mm，膜厚度為lMm，具有5。/。苯基甲基聚硅氧烷固定相(SGEBP5)，并且在16psi的恒壓模式下以66cm/秒的平均速度來操作。柱2為30米長，具有l(wèi)jwn膜厚度的0.53mmwax毛細(xì)管(SGEBP20)，在5.7psi的壓力下于56cm/秒的平均速度來操作。對柱箱進(jìn)行編程，以在4(TC下保持3分鐘，然后以7'C/分鐘升至220°C并保持20分鐘。MS在電子沖擊模式(E丄)下以70eV進(jìn)行操作。使用GC聞吸口來鑒別表現(xiàn)出煙草煙霧的氣味特性的柱子洗脫液的具體時間；通過質(zhì)譜檢測器和聞吸口對(小段)包含這些氣味峰的色譜流出物的中心切割液進(jìn)行選擇性分析，用以進(jìn)一步評價和鑒別。中心切割閥位于第一柱子和第二柱子之間。第二柱子洗脫液在MS檢測器和聞吸口之間分流(50:50),而來自第一柱子的洗脫液全部通到火焰離子檢測器(FID)，除非通過中心切割閥選擇性地送至第二柱子或者除非被吹掃。香味活性化合物的另外試驗(yàn)和另外精制在WrigleyChicagoResearchandDevelopment設(shè)備上進(jìn)行，其使用具有前面所利用的相同部件的微分析GC/MS單元，除了所述Chicago單元使用LeapTechnologiesCombiPal自動取樣器外，該取樣器能夠利用自動化的SPME(LeapTechnologies,Carrboro,NC)。該GC/MS單元還在第一柱子的出口和聞吸口之間具有直接連接，以使中心切割更準(zhǔn)期和更精確。在先前使用手動取樣的分析中，僅將聞吸口連接至第二柱子的出口。用于中心切割的時間是基于在MS和在聞吸口(在第二柱子的出口)具有特定保留時間的有氣味的峰通過第一柱子(中心切割閥位于第一柱子的出口)時的反算(back-calculating)。在這種包含自動取樣器的儀器中，聞吸口具有允許直接連接至第一柱子的出口的管路，因此可基于氣味測定時間進(jìn)行中心切割。聞吸口還可任選如前文那樣連接至第二柱子的出口。對于表現(xiàn)出氣味活性但不能被確定地鑒別的組分，將中心切割流出物低溫聚集到第二柱子(利用這種包含噴霧嘴的儀器的部件，所述噴霧嘴利用液體C02)的頭部上，以提供另外的峰分離。利用SPME的頂部空間提取的時間也被延長至至多24小時，以使纖維充分負(fù)載有頂部空間揮發(fā)物。除指明外，柱子、柱箱和其它分析參數(shù)與前述保持相同。圖1是FID色譜圖，其顯示在將樣品進(jìn)樣至色譜后13.75分鐘至14.25分鐘取出的中心切段的提取煙草煙霧組分。圖2是在將樣品進(jìn)樣至色譜后13.75分鐘至14.25分鐘來自柱1出口的中心切段流出物的總離子流(TIC)色譜圖TIC。還通過在模擬唾液中截留煙霧揮發(fā)物，接著通過SPME、GCO和/或GC/MS進(jìn)行分析，從而對導(dǎo)致煙草口氣的有氣味組分進(jìn)行鑒別。根據(jù)內(nèi)部(in-house)法制備模擬唾液，該方法通過將氯化鈉、碳酸氫鈉和碳酸氫鉀溶解在去離子水中來進(jìn)行，以制備具有電解液的溶液，所述電解液存在的濃度類似于唾液。在以類似于唾液暴露于口腔中的方式暴露之后，利用該溶液來測量殘留的煙草煙霧組分。為制備暴露于雪茄煙霧的類唾液溶液，參與者從雪茄(Onyx牌；多米尼加共和國，miniBelicoso)吸入煙霧，然后用標(biāo)準(zhǔn)飲用吸管按四個單獨(dú)的兩秒種吹氣(puffs)逐漸吹入到22.5ml小瓶的底部，使得煙霧鼓泡通過溶液。然后將液體內(nèi)含物轉(zhuǎn)移至單獨(dú)的小瓶中，以確保吸附在玻璃表面上的任何煙霧揮發(fā)物被排除在外。兩個參與者評價溶液的SPME提取物，其通過氣相色譜嗅覺測量法(GCO)各分析三次，僅對具有最強(qiáng)氣味強(qiáng)度的峰通過中心切割進(jìn)行進(jìn)一步分析。另外的GCO分析提供了比以前所得更大的準(zhǔn)確度和精確度。通過對比被鑒別化合物和那些標(biāo)準(zhǔn)化合物的保留時間，并通過對比被鑒別組分與標(biāo)準(zhǔn)物的氣味，來進(jìn)行峰特征的確認(rèn)。圖3是流出物的香味測定圖和TIC分析的疊加，所述流出物來自人造唾液的SPME頂部空間提取物(在室溫下提取23小時)并接著進(jìn)行中心切割(30秒中心切害iJ)和低溫聚集(在中心切割前30秒，在中心切割期間，或在中心切割后30秒)，該圖顯示氣味強(qiáng)度得分和氣味特性。在Microanalytics上進(jìn)行的初始分析中具有香味活性的化合物被分為等級1、2或3。等級1中的那些顯示出最強(qiáng)的香味。在隨后于WrigleyR&D設(shè)備上進(jìn)行的試驗(yàn)中，根據(jù)香味強(qiáng)度，將具有香味的活性化合物指定為某一數(shù)字(表1)。通過利用Wiley數(shù)據(jù)庫(例如，WileyRegistryofMassSpectralData,7thEdition,JohnWiley&Sons,Inc.,2000)進(jìn)行譜圖匹配，并且通過將保留指數(shù)與可靠標(biāo)準(zhǔn)物匹配，來進(jìn)行組分的鑒別。結(jié)果示于表l中表1提取自口腔的化合物(造成煙草煙霧氣味)的初步鑒別。氣味強(qiáng)度(o-腦)保留指數(shù)(Kovats)描述鑒別67'1046煙草味，霉味2，3，5-三甲基吡啶3'445'945煙草味，泥土味4-乙基-3-甲基吡啶3'450'967堅(jiān)果味2-乙基-3,5-二甲基吡啶3'458'844辣味2，5-二甲基吡嗪3'4471972堅(jiān)果味2，6-二乙基吡嗪34511034煙草味，霉味2,4，6-三甲基吡啶(可力丁)3'4和2-乙基-5-甲基吡啶145'401花香味苯乙酮3等級l2979霉味乙基吡咯3等級22856辣味2,3-二甲基吡嗪3'4等級32830堅(jiān)果味甲基吡啶3等級32945煙草味環(huán)丁基吡啶3等級32525黃油味二乙酰3利用模擬唾液摻混物測得的香味活性化合物。利用藥簽測得的化合物的香味活性，并僅根據(jù)香味強(qiáng)度定位為第1、第2或第3等級。3通過與Wiley質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫的相關(guān)性鑒別的化合物。4通過匹配可靠標(biāo)準(zhǔn)的保留指數(shù)鑒別的化合物。實(shí)施例2該實(shí)施例詳細(xì)描述了Applephenon⑧(一種天然的蘋果提取物粉末，具有高的短鏈多酚，并且可高度水溶；A.M.ToddCo.Kalamazoo,即AsahiCorp.,Japan的ApplephenonMI銷售商)vs.模型溶液中的煙草煙霧氣味的體外GC/MS頂部空間和感官測量。煙草有氣味物質(zhì)頂部空間濃度和加入的活性物質(zhì)量之間關(guān)系(劑量響應(yīng))的測量包括，制備由這樣的化合物組成的模型溶液，該化合物具有的組合氣味特性和強(qiáng)度類似于在消耗兩支Marlboro淡香煙或半支強(qiáng)勁雪茄(例如Partagas1S45)之后口腔中的組合氣味特性和強(qiáng)度。將這些化合物各以150ppm(/xg/ml溶液)的濃度放入1%乙醇/99%水的溶液中，這些化合物包括可力丁(2，4,6-三甲基吡啶)，盧剔啶(2,6-二甲基吡啶)，2-乙基吡淀，3-乙基吡啶，吡啶，乙基吡嗪，2-乙基-3-甲基吡嗉。為了使物質(zhì)具有香味，該物質(zhì)應(yīng)具有揮發(fā)性，并通常經(jīng)由鼻后或鼻前入口穿過鼻上皮。唾液具有99%水和近似7的pH(實(shí)際pH取決于唾液流出速率)。由于這種原因，利用包含99%水的煙草煙霧氣味模型溶液來對活性效率進(jìn)行初始試驗(yàn)。通過降低來自水溶液的氣味的頂部空間濃度，可產(chǎn)生較少的通過鼻后或鼻前方式的香味感知。模型溶液和口腔煙草煙霧臭味之間氣味特性和強(qiáng)度的相似性是通過10個在感官分析中有經(jīng)驗(yàn)的R&D人員來確定。氣味鑒別員嗅聞具有5ml水溶液的22.5ml小瓶，并評估感知的香味特性和強(qiáng)度。用潛在的改進(jìn)活性物Applephenon(50mgwt/wt)對模型溶液(5ml)進(jìn)行處理。在22ml具有Teflon隔片的小瓶中用固相微萃取纖維(Stabilflex,Carboxen，PDMS，DVB)對所得溶液的頂部空間進(jìn)行提取10分鐘，并按上文實(shí)施例1中所述使用GC/MS和CombiPal自動取樣器進(jìn)行分析。就。/。相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)對三次重復(fù)試驗(yàn)進(jìn)行評估。重復(fù)超出15%的值。通過與未加入活性物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)物的頂部空間值對比，評估頂部空間降低的百分比。結(jié)果示于表4中。如所示，所有的吡啶頂部空間濃度均降低75%以上。具有吡嗪/吡啶的水溶液的pH為7。在加入多酚之后，該溶液的pH為3.7(pH的降低歸因于Applephenor^的主要組分，即酸性多酚綠原酸)。吡啶的pKa為5.2，而吡嗪的pKa為1.1。在添加有多酚的溶液中，吡啶主要以陽離子存在，而吡嗪保持中性。作為帶電荷的物質(zhì)，水溶液中的氫鍵可引起與這種質(zhì)子化形式的吡啶相關(guān)的揮發(fā)性的降低。據(jù)猜測，吡嗪的分配系數(shù)在酸性含水條件下有利于氣體狀態(tài)，因此增加了頂部空間濃度。同樣溶液的感官分析用二十個參與者來進(jìn)行，所述參與者評價具有或不具有加入的活性物的模型溶液的氣味強(qiáng)度。用0-100點(diǎn)數(shù)值范圍的表決對氣味強(qiáng)度進(jìn)行評估，0=沒有氣味，100=氣味非常強(qiáng)烈。對響應(yīng)值進(jìn)行平均并進(jìn)行方差分析(ANOVA)，以評估統(tǒng)計(jì)顯著性。先前用于分析試驗(yàn)的同樣的(但分開的)有氣味物質(zhì)的溶液的感官分析結(jié)果列于圖5中。參與者(N-10)發(fā)現(xiàn)，具有添加的多酚的溶液在煙草氣味強(qiáng)度方面相對于具有O.05P值的對照標(biāo)準(zhǔn)顯著更低。這與前述含氮組分的頂部空間濃度的降低相一致。實(shí)施例3在初始體外試驗(yàn)(顯示潛在活性效率vs.煙草氣味)之后，設(shè)計(jì)初步試驗(yàn)，以按前述測量存在于舌頭上并用藥簽提取的殘留煙草煙霧化合物的改變。利用藥簽對活性效率進(jìn)行評價，其通過吸用半支Onyx雪茄并用Texwipe藥簽以前述方式從舌頭上移取揮發(fā)物的樣品，并通過GC/MS評價三種處理物(商購自Wm.WrigleyJr.Company(Chicago,IL)的Orb^蘋果口香糖加78mgApplephenon,Orb^蘋果口香糖，和無口香糖)對殘留的口腔煙草氣味的作用。在吸煙之后直接咀嚼口香糖20分鐘。對通過兩個參與者得到的藥簽進(jìn)行評價。試驗(yàn)控制在早上晚些時候進(jìn)行。在試驗(yàn)前2小時，參與者食用簡單的早餐(lightbreakfast)。參與者不是吸煙者，并且不具有異常的口腔問題。在用雪茄+無口香糖、雪茄+對照口香糖、和具有活性物的雪茄+口香糖以及無香煙基線進(jìn)行處理之前和之后對參與者藥簽進(jìn)行頂部空間分析。結(jié)果示于圖6中。包含活性物的口香糖和對照口香糖顯著降低了吡啶的水平(分別降低100%和91%)，4-甲基吡啶(兩種口香糖均將水平降低至低于檢測限)低于吸用雪茄然后未咀嚼任何口香糖之后在口腔中發(fā)現(xiàn)的水平。具有活性物的口香糖將2-甲基吡啶的水平降低45%，無活性物的口香糖將2-甲基吡啶的水平降低35%。兩種口香糖將乙基吡嗪水平降低大約相同(28%和25%)。得自口腔的未暴露于雪茄煙霧的藥簽不具有任何吡啶，但確實(shí)具有低水平的乙基吡嗪。因?yàn)樵谟没钚晕锾幚碇?，體外分析(如前面所解釋)的模型溶液的頂部空間數(shù)據(jù)表現(xiàn)出提高的吡嗪水平，所以沒有預(yù)期和觀測到在咀嚼口香糖+活性物之后所得樣品中乙基吡嗪減少至低于來自對照口香糖的水平。一般而言，提取自雪茄+對照口香糖以及雪茄+具有活性物的口香糖的痕量吡啶之間的差異可忽略。對照口香糖和活性口香糖之間這種可忽略的差異，可歸因于難以提取被吸附至舌頭表面的吡啶、然后精確地測量它們的濃度。而且，兩個參與者的統(tǒng)計(jì)分析沒有意義。然而，活性的或?qū)φ盏目谙闾窃诮档陀袣馕段镔|(zhì)頂部空間濃度中的作用很明顯。實(shí)施例4該實(shí)施例詳述了臨床評估，以確定相比于無活性物的對照口香糖和根本不使用口香糖，具有添加的活性物的Orb^蘋果口香糖是否降低了由香煙造成的自感(self-perceived)異味強(qiáng)度。一組由TragonCorp從Chicago,IL地區(qū)(Tragon,BuffaloGrove,IL)征募的102個參與者吸用兩支Marlboro淡香煙，然后在0時(直接在吸用后)對它們的煙草回味強(qiáng)度進(jìn)行評級，然后在吸用后的如下時間點(diǎn)(以分鐘計(jì))進(jìn)行評級1、5、10、15、20、21、25、30、35、50、60、80和卯。在吸煙后采用三種處理，(三個樣品全部為區(qū)組設(shè)計(jì))(各個參與者在連續(xù)三天中受到不同處理，并且以隨機(jī)順序施用處理物)。試驗(yàn)議定書包括如下要求消費(fèi)者在試驗(yàn)前90分鐘不食用、飲用、吸用或使用口用衛(wèi)生產(chǎn)品(包括刷劑和漱口劑)。每個消費(fèi)者在6天中評價所有的樣品和處理物；每天一個樣品。時間持續(xù)2小時，并且每段時間容納25-30個消費(fèi)者。每天進(jìn)行四個時段。基于吸煙習(xí)慣選擇消費(fèi)者，所有消費(fèi)者均是口香糖咀嚼者，均不具有牙齒或其它紊亂健康問題。消費(fèi)者在各個時段之前不消耗食物或飲料或者使用口腔衛(wèi)生產(chǎn)品。給消費(fèi)者15分鐘或更短的時間去吸用兩支香煙。消費(fèi)者在建筑物外的指定區(qū)域吸用香煙，在吸用后消費(fèi)者直接返回內(nèi)部，并使用用于強(qiáng)度的數(shù)值范圍對煙草余味的強(qiáng)度進(jìn)行評級。處理一是在吸煙后咀嚼一份顆粒口香糖20分鐘(每份相同的2粒)，所述口香糖具有混和到口香糖中心的活性物(Orbit蘋果口香糖加Applephenon)。處理二是咀嚼按前述相同方式制成的對照口香糖，該口香糖僅僅不具有活性物，以及處理三是無口香糖(參與者僅吸用香煙，并在指定時間對它們的余味強(qiáng)度進(jìn)行評級)。參與者未受到關(guān)于對煙草回味進(jìn)行評級的培訓(xùn)，并且僅要求他們基于他們常用來鑒別呼吸是否清新的方法對他們的回味強(qiáng)度進(jìn)行評級。對所有時間點(diǎn)的數(shù)據(jù)進(jìn)行協(xié)方差重復(fù)測量分析，并利用單尾檢驗(yàn)來確定顯著性的水平。添加的活性物(Applephenon,78mg)對覺察到的與吸用兩支Marlboro淡香煙相關(guān)的煙草煙霧回味的作用示于表7中。結(jié)果表明，由102個未培訓(xùn)的參與者在咀嚼用78mg活性物處理的Orb^蘋果口香糖后的一致同意而確定的回味強(qiáng)度，在所有時間點(diǎn)均低于對照標(biāo)準(zhǔn)，并且在時間20、21和25顯著更低(P0.05)。另外，用活性物處理的口香糖比對照具有顯著更低的平均峰高(P0.05)。相對于所有時間點(diǎn)的雪茄余味，活性口香糖和對照口香糖均被評定為顯著優(yōu)于不咀嚼口香糖。實(shí)施例5該實(shí)施例描述了臨床評估，以測定具有添加的活性物(Applephenoi^)的Wrigley公司Orb^蘋果口香糖對降低由吸用雪茄造成的自感口氣異味強(qiáng)度的效率。在5個分開的吸煙時段對7個參與者進(jìn)行培訓(xùn)。在每個時段內(nèi)按前述方式吸用Onyx雪茄。在用完半支雪茄后，參與者利用0-10數(shù)值點(diǎn)范圍在所述對于香煙的相同時間對他們的自感口氣異味強(qiáng)度進(jìn)行評級。試驗(yàn)進(jìn)行4天(連續(xù)兩周，每周兩天)。以無規(guī)順序經(jīng)90分鐘間隔對4次分開的處理進(jìn)行評價(連續(xù)四天，每天一種處理)，并且包括未處理，一份商購自Wm.WrigleyJr.Company(Chicago,IL)的EclipseWinterfresh口香糖，一份Wrigley的Orbit蘋果口香糖，一份具有活性物(Applephenon⑧)的Wrigley公司Orbit蘋果口香糖。在吸煙后，對初始自感口氣異味進(jìn)行評估，接著咀嚼20分鐘。在吐出后，在30分鐘、60分鐘和90分鐘進(jìn)行自感氣味評估。通過在吸用雪茄之后測量回味的自感的初步試驗(yàn)表明了潛在的活性效率。結(jié)果示于圖8中。結(jié)果表明，在咀嚼具有78mg活性物(Applephenon⑧)的Orbit⑧蘋果風(fēng)味口香糖之后，余味的強(qiáng)度被最大程度地降低并剩留最低。對于每個時間段，余味強(qiáng)度分?jǐn)?shù)顯著低于在咀嚼對照口香糖之后得到的那些分?jǐn)?shù)(P0.05)。另外，在60分鐘和90分鐘的時間下，在咀嚼具有78mg活性物的口香糖之后得到的余味強(qiáng)度分?jǐn)?shù)顯著低于在咀嚼EclipseWinterfreshTM口香糖之后測得的分?jǐn)?shù)。最后，對于每個時段，相對于根本不咀嚼口香糖，咀嚼口香糖(任何口香糖)顯著降低雪茄余味強(qiáng)度。實(shí)施例6通過氣味鑒別員的一致意見來確定包含加入到5%乙醇、95%水的溶液中的150ppm(jug/ml)各種吡啶即2-乙基吡啶、3-乙基吡啶和乙基吡嗪的模型溶液，以最好地代表煙草煙霧氣味特性和強(qiáng)度。在分開的小瓶中用兩種潛在改進(jìn)活性物中的每一種來處理模型溶液(5ml)。第一潛在活性物是蔓越桔提取物，一種可溶于水的高度濃縮天然蔓越桔提取物粉末(OceanSprayCorp.,Winthrop，MA);利用50mg、100mg、150mg、和200mg所述活性物進(jìn)行分析。第二潛在活性物是小豆蔻油，一種來自壓碎的小豆蔻籽的天然提取物(TreattFlavors,Lakeland,FL);利用在有氣味溶液中的水平如下的潛在活性物進(jìn)行分析54/ig/ml、156]Ltg/ml、207]Lig/ml和642jtig/ml。在22ml具有Teflon隔片的小瓶中用固相微萃取纖維(Stabilflex,Carboxen,PDMS，DVB)在35'C下對水溶液的頂部空間進(jìn)行提取10分鐘，并用GC/MS進(jìn)行分析。按上述使用CombiPal自動取樣器。就％相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)對三次重復(fù)試驗(yàn)進(jìn)行評估。重復(fù)超出15%的值。通過與未添加活性物的標(biāo)準(zhǔn)物的頂部空間值對比，評估頂部空間降低的百分比。為了使物質(zhì)具有香味，該物質(zhì)通常應(yīng)是揮發(fā)性的，并經(jīng)由鼻后或鼻前入口穿過鼻上皮。唾液具有99%水和近似7的pH(實(shí)際pH取決于唾液流速)。由于這種原因，利用包含99%水的煙草煙霧氣味模型溶液來對活性效率進(jìn)行初始試驗(yàn)。通過降低來自水溶液的氣味的頂部空間濃度，可產(chǎn)生較少的通過鼻后或鼻前方式的香味感知。圖9顯示了由添加50mg、100mg、150mg和200mg蔓越桔提取物所產(chǎn)生的結(jié)果。表2-5顯示了分別與吡啶、2-乙基吡啶、乙基吡嗪和3-乙基吡啶相關(guān)的頂部空間濃度降低的分析劑量響應(yīng)數(shù)據(jù)。表2蔓越桔提取物對吡啶頂部空間濃度的降低(表示為mg蔓越桔/ml溶液)分析劑量響應(yīng)數(shù)據(jù)。<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>n.d.表示未檢測出吡啶。表3蔓越桔提取物對2-乙基吡啶頂部空間濃度的降低(表示為mg蔓越桔/ml溶液)分析劑量響應(yīng)數(shù)據(jù)。<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>表4<table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table>表5蔓越桔提取物對3-乙基吡啶頂部空間濃度的降低(表示為mg蔓越桔/ml溶液)分析劑量響應(yīng)數(shù)據(jù)。<table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table>圖10顯示了由向模型溶液中添加54]tig/ml、156pg/ml、207pg/ml和642/xg/ml水平的小豆蔻油所產(chǎn)生的結(jié)果，所述模型溶液包含吡啶、2-乙基吡啶、3-乙基吡啶和乙基吡嗪。表6-10顯示了分別與吡啶、2-乙基吡啶、乙基吡嗪和3-乙基吡啶相關(guān)的頂部空間濃度降低的分析劑量響應(yīng)數(shù)據(jù)。表6小豆蔻油對吡啶頂部空間濃度的降低(表示為Mg小豆蔻油/ml溶液)分析劑量響應(yīng)數(shù)據(jù)。<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>表7小豆蔻油對2-乙基吡啶頂部空間濃度的降低(表示為/xg小豆蔻油/ml溶液)分析劑量響應(yīng)數(shù)據(jù)。<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>表S<table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table>表9<table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table>對于蔓越桔提取物，所有吡啶頂部空間濃度均降低85%以上。與頂部空間濃度降低相反，吡嗪水平實(shí)際上提高；認(rèn)為這種作用應(yīng)歸因于包含蔓越桔提取物的溶液的pH。通過10個參與者對包含蔓越桔提取物和小豆蔻油的模型溶液進(jìn)行感官分析，所述參與者對具有或不具有添加的活性物的煙草氣味模型溶液的氣味強(qiáng)度進(jìn)行評價。用0-10的數(shù)值范圍對氣味強(qiáng)度進(jìn)行表決評估，0=沒有氣味，10=氣味非常強(qiáng)烈。對相應(yīng)值進(jìn)行平均并進(jìn)行方差分析(ANOVA)，以評估統(tǒng)計(jì)顯著性。圖11和表IO顯示了在各種量的蔓越桔提取物活性物下的參與者響應(yīng)值。表10在對用不同濃度蔓越桔提取物(表示為mg蔓越桔/ml溶液)處理的煙草煙霧氣味溶液(水中的吡啶和吡嗪)的香味強(qiáng)度進(jìn)行評級中的參與者響應(yīng)值(N-IO)。<table>tableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table>圖12和表11顯示了在各種量的小豆蔻油活性物下的參與者響應(yīng)值。表11在對用不同濃度小豆蔻油(表示為Mg小豆蔻油/ml模型溶液)處理的煙草煙霧氣味溶液(水中的吡啶和吡嗪)的香味強(qiáng)度進(jìn)行評級中的參與者響應(yīng)值(N-IO)。<table>tableseeoriginaldocumentpage42</column></row><table>如所示，相對于P值0.05的對照標(biāo)準(zhǔn)，參與者(N-10)發(fā)現(xiàn)具有添加的活性物的溶液顯著降低了煙草氣味強(qiáng)度。實(shí)施例7該實(shí)施例詳述了由口香糖釋放的潛在活性組分。測量活性物釋放和釋放速率的方法包括，使5個試驗(yàn)者各咀嚼一份口香糖(2顆)，各咀嚼以下時間0、10、20、25分鐘。在咀嚼口香糖之后，收集咀嚼物(最少6個咀嚼物)，將其溶解在具有作為內(nèi)標(biāo)物的十一烷的氯仿溶液中。將該溶液振搖6小時，以確保溶解。然后用利用了MilIipore(Bilierica,MA)Millex-FH疏水PTFE0.4/mi的固相萃取(SPE)將液體除去并純化。對于非揮發(fā)性活性組分，例如蔓越桔提取物中的那些，將含水層除去，用以用高效液相色譜(HPLC)進(jìn)行分析。用來自蔓越桔的奎尼酸(蔓越桔中奎尼酸的百分比是已知的，因此通過定量分析口香糖中的奎尼酸，可確定口香糖中的蔓越桔)作為指示化合物。其它HPLC操作參數(shù)包括以下反相；RestekAllure有機(jī)酸柱，該柱子具有以下尺寸5微米300x4.6mm。流動相為100%pH為2.5的O.IM磷酸鹽緩沖液。另外條件流速=0.3ml/分鐘，柱溫為15'C，運(yùn)行時間為45分鐘，檢測器波長為210nm以及進(jìn)樣體積為10ml。對于如小豆蔻油中的揮發(fā)性組分，利用十一垸作為內(nèi)標(biāo)物。通過Pasteur吸液管將氯仿層(底層)除去并放入GC小瓶中，蓋上褶皺帽蓋和Teflon隔片。將液體進(jìn)樣至(分成三份)GC中，用以隨后利用Agilent7683系列自動取樣器(AgilentTechnologies,PaloAlto,CA)進(jìn)行活性組分定量，所述取樣器設(shè)定為注入5^。在標(biāo)準(zhǔn)口香糖配方的生產(chǎn)期間將蔓越桔提取物置于標(biāo)準(zhǔn)口香糖配方的口香糖中心。所述提取物包含2.3%奎尼酸。結(jié)果顯示在一份口香糖(中心+包衣)中存在1.5mg(0.05。/。)奎尼酸。這等同于一份口香糖(2顆)中65mg蔓越桔。在經(jīng)咀嚼20分鐘的口香糖中沒有檢測到奎尼酸，因此在20分鐘口香糖咀嚼期間，所有蔓越桔均從口香糖中釋放到唾液中。表12匯總了吡啶和3-乙基吡啶的頂部空間降低百分比和感官氣味強(qiáng)度降低。表13匯總了在20分鐘咀嚼時間過程中蔓越桔活性物的釋放。表12<table>tableseeoriginaldocumentpage44</column></row><table>表13<table>tableseeoriginaldocumentpage44</column></row><table>如所示，在咀嚼20分鐘期間，100%蔓越桔提取物或65mg蔓越桔提取物從口香糖釋放?；谶@些結(jié)果，認(rèn)為該量的蔓越桔提取物如果添加到5ml模型溶液中，可將吡啶的頂部空間水平降低>90%，并且可將5ml模型溶液的氣味強(qiáng)度降低44%-62%。將小豆蔻油僅添加到標(biāo)準(zhǔn)口香糖配方的口香糖包衣中。沒有將其加入到中心；乙酸a-松油酯占小豆蔻油的37%。雖然小豆蔻油中還存在大量的d-檸檬烯，但選擇乙酸a-松油酯用于該實(shí)驗(yàn)，因?yàn)榻?jīng)TIC不能將1,8桉樹腦與(1-檸檬烯分離。利用乙酸《-松油酯作為指示化合物的小豆蔻釋放結(jié)果示于圖13中。以隨時間的毫克(mg)油計(jì)的小豆蔻釋放示于圖14中。大部分小豆蔻油在0-5分鐘的咀嚼中從口香糖釋放(口香糖中的小豆蔻油在0-5分鐘降低33%)。表14顯示了小豆蔻在25分鐘咀嚼過程中的釋放；如所示，0.49mg或33。/。小豆蔻油在咀嚼后從口香糖釋放。表14<table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table>表15匯總了吡啶和3-乙基吡啶的頂部空間降低百分比和感官氣味強(qiáng)度降低。該小豆蔻釋放值可對5ml模型溶液提供約〉60。/。煙草煙霧氣味的降低。另外，該小豆蔻油釋放量可將模型溶液中包括吡嗪的所有揮發(fā)物的頂部空間濃度降低>50%。表15<table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table>-表示未測量本發(fā)明不限于上述實(shí)施方案，并且可進(jìn)行各種修飾。上述包括實(shí)施例的優(yōu)選實(shí)施方案的描述僅意欲使本領(lǐng)域其它技術(shù)人員了解本發(fā)明、其原理和其實(shí)際應(yīng)用，使得本領(lǐng)域其它技術(shù)人員將本發(fā)明以其許多方式來改變和應(yīng)用，按照可最適合于實(shí)際應(yīng)用的要求。關(guān)于在該整個說明書(包括下面的權(quán)利要求書)中使用的詞語包含、包括或含有，除非上下文另有要求，這些詞語按其基本意義使用，并清楚地理解它們應(yīng)被理解為包含在內(nèi)的，而不是排它的，并且在解釋該整個說明書中，申請人意欲如此理解這些詞語中的每一個。權(quán)利要求1.一種用于制備對降低與煙草煙霧有關(guān)的口腔臭味有效的口用組合物的方法，所述方法包括在容器中將試驗(yàn)組合物與模型溶液接觸，所述模型溶液包含在煙草煙霧中存在的吡啶或吡嗪化合物，其中所述試驗(yàn)組合物包含蔓越桔提取物、海棠提取物、山楂果提取物、李子提取物、西梅提取物、葡萄籽提取物、葡萄皮提取物、小豆蔻油、紫花苜蓿提取物、金銀花提取物、迷迭香提取物、羅勒提取物、百里香提取物、蘆薈提取物、菊花提取物、綠茶提取物、咖啡豆提取物、甘草、歐芹籽油、松樹提取物、咖啡提取物、人參提取物、蒲公英根提取物、綠原酸、抗壞血酸、咖啡酸、乳酸鋅、硅膠、檸檬酸、馬來酸、酒石酸、丁香酚、α-環(huán)糊精、β-環(huán)糊精、γ-環(huán)糊精、奎尼酸、活性碳、或其組合；確定試驗(yàn)組合物降低所述容器的頂部空間中吡啶或吡嗪化合物濃度的能力；和制備包含所述試驗(yàn)組合物的口用組合物。2.權(quán)利要求1所述的方法，其還包括在所述接觸之前稀釋所述試驗(yàn)組合物。3.權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述口用組合物包含糖果、口香糖、糖錠、壓片、可食用膜、口腔噴劑、漱口劑、牙膏產(chǎn)品或其組合。4.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的方法，其中通過包括以下的方法來確定試驗(yàn)組合物降低所述容器的頂部空間中吡啶或吡嗪化合物濃度的能力在與試驗(yàn)組合物接觸之前，測量包含模型溶液的所述容器的頂部空間中吡啶或吡嗪化合物的濃度，以確定所述頂部空間中初始的吡啶或吡嗪化合物濃度；在與試驗(yàn)組合物接觸之后，測量包含模型溶液的所述容器的頂部空間中吡啶或吡嗪化合物的濃度，以確定所述頂部空間中最終的吡啶或吡嗪化合物濃度；和確定容器的頂部空間中吡啶或吡嗪化合物初始濃度和最終濃度的差異。5.權(quán)利要求4所述的方法，其中在測量包含試驗(yàn)組合物和模型溶液的容器的頂部空間中吡啶或吡嗪化合物濃度之前，將試驗(yàn)組合物與容器內(nèi)包含吡啶或吡嗪化合物的模型溶液接觸并任選攪拌，在約2(TC的溫度下持續(xù)至少約io分鐘。6.權(quán)利要求4或5所述的方法，其中在與試驗(yàn)組合物接觸之前和/或之后，所述測量容器頂部空間中吡啶或吡嗪化合物的濃度包括對頂部空間中包含吡啶或吡嗪化合物的一部分蒸氣進(jìn)行取樣；和對取樣部分的蒸氣進(jìn)行包括色譜的分析。7.權(quán)利要求6所述的方法，其中所述取樣包括將頂部空間與氣密注射器接觸，并從容器中提取在頂部空間中的包含吡啶或吡嗪化合物的一部分蒸氣，其中所述容器是密封的。8.權(quán)利要求6或7所述的方法，其還包括對取樣部分的蒸氣進(jìn)行質(zhì)譜分析。9.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述試驗(yàn)組合物與包含吡啶化合物的模型溶液接觸。10.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中吡啶化合物的濃度降低至少約50%。11.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述試驗(yàn)組合物與3包含吡嗪化合物的模型溶液接觸。12.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中吡嗪化合物的濃度降低至少約50%。13.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述試驗(yàn)組合物與包含吡啶化合物和吡嗪化合物的模型溶液接觸。14.權(quán)利要求13所述的方法，其中吡啶化合物的濃度和吡嗪化合物的濃度降低至少約50%。15.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述試驗(yàn)組合物包含小豆蔻油、蔓越桔提取物或其組合。16.—種用于鑒別適用于口用組合物的組合物的方法，所述口用組合物對降低與煙草煙霧有關(guān)的口腔臭味有效，所述方法包括在容器中將試驗(yàn)組合物與模型溶液接觸，該模型溶液含有煙草煙霧有氣味物質(zhì)，該有氣味物質(zhì)包含吡啶、2-乙基吡啶、3-乙基吡嗪和乙基吡嗪，其中所述試驗(yàn)組合物包含蔓越桔提取物、海棠提取物、山楂果提取物、李子提取物、西梅提取物、葡萄籽提取物、葡萄皮提取物、小豆蔻油、紫花苜蓿提取物、金銀花提取物、迷迭香提取物、羅勒提取物、百里香提取物、蘆薈提取物、菊花提取物、綠茶提取物、咖啡豆提取物、甘草、歐芹籽油、松樹提取物、咖啡提取物、人參提取物、蒲公英根提取物、綠原酸、抗壞血酸、咖啡酸、乳酸鋅、硅膠、梓檬酸、馬來酸、酒石酸、丁香酚、a-環(huán)糊精、/3-環(huán)糊精、7-環(huán)糊精、奎尼酸、活性碳、或其組合；和確定所述試驗(yàn)組合物降低所述模型溶液內(nèi)一種或多種有氣味物質(zhì)在所述容器頂部空間中的濃度的能力。17.權(quán)利要求16所述的方法，其中所述模型溶液還包含2,4，6-三甲基吡啶、2,6-二甲基吡啶、3-乙基吡啶、2-乙基-3-甲基吡嗪或其組合。18.權(quán)利要求16或17所述的方法，其中所述模型溶液還包含3，5-二甲基吡啶、2-乙基吡啶、3-乙基吡啶、2,3-二甲基吡嗪、2，5-二甲基吡嗪或其組合。19.權(quán)利要求16至18中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述口用組合物包含糖果、口香糖、糖錠、壓片、可食用膜、口腔噴劑、漱口劑、牙膏產(chǎn)品或其組合。20.權(quán)利要求16至19中任一項(xiàng)所述的方法，其中通過包含如下的方法來確定試驗(yàn)組合物降低一種或多種有氣味物質(zhì)在所述容器頂部空間中的濃度的能力在與試驗(yàn)組合物接觸之前，測量包含模型溶液的所述容器的頂部空間中一種或多種有氣味物質(zhì)的濃度，以確定所述頂部空間中初始的有氣味物質(zhì)濃度；在與試驗(yàn)組合物接觸之后，測量包含模型溶液的所述容器的頂部空間中一種或多種有氣味物質(zhì)的濃度，以確定所述頂部空間中最終的有氣味物質(zhì)濃度；和確定容器的頂部空間中一種或多種有氣味物質(zhì)的初始濃度和最終濃度之間的差異。21.權(quán)利要求16至20中任一項(xiàng)所述的方法，其中有氣味物質(zhì)的濃度降低至少約50%。22.權(quán)利要求16至21中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述試驗(yàn)組合物包含小豆蔻油、蔓越桔提取物或其組合。23.—種處理與煙草煙霧有關(guān)的口腔臭味的方法，該方法包括給受試者施用口用組合物，該口用組合物包含這樣的成分，該成分將因吸用煙草制品而存在于受試者口腔中的煙草煙霧有氣味物質(zhì)的濃度有效降低至少約50%，其中所述有氣味物質(zhì)包含2,4,6-三甲基吡啶、2,6-二甲基吡啶、3-乙基吡啶和2-乙基-3-甲基吡嗪，并且所述成分包含蔓越桔提取物、海棠提取物、山楂果提取物、李子提取物、西梅提取物、葡萄籽提取物、葡萄皮提取物、小豆蔻油、紫花苜蓿提取物、金銀花提取物、迷迭香提取物、羅勒提取物、百里香提取物、蘆薈提取物、菊花提取物、綠茶提取物、咖啡豆提取物、甘草、歐芹籽油、松樹提取物、咖啡提取物、人參提取物、蒲公英根提取物、綠原酸、抗壞血酸、咖啡酸、乳酸鋅、硅膠、檸檬酸、馬來酸、酒石酸、丁香酚、Q!-環(huán)糊精、P-環(huán)糊精、，環(huán)糊精、奎尼酸、活性碳、或其組合。24.權(quán)利要求23所述的方法，其中所述口用組合物包含糖果、口香糖、糖錠、壓片、可食用膜、口腔噴劑、漱口劑、牙膏產(chǎn)品或其組合。25.權(quán)利要求23或24所述的方法，其中所述施用包括咀嚼包含所述組合物的口香糖至少約5分鐘。26.權(quán)利要求23至25中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述施用包括咀嚼口香糖約5-約60分鐘。27.權(quán)利要求23至26中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述有氣味物質(zhì)還包含3，5-二甲基吡啶、2-乙基吡啶和吡啶。28.權(quán)利要求23至27中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述有氣味物質(zhì)還包含乙基吡嗪、2，3-二甲基吡嗪和2,5-二甲基吡嗪。29.權(quán)利要求23至28中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述成分包括小豆蔻油、蔓越桔提取物或其組合。30.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述試驗(yàn)組合物或成分被認(rèn)定為對降低因吸用煙草制品而存在于受試者口腔中的吡啶或吡嗪化合物的濃度有效。31.包含根據(jù)權(quán)利要求1至30中的任一項(xiàng)被認(rèn)定為降低吡啶或吡嗪化合物濃度的組合物或成分的糖果或口香糖，在降低因吸用煙草制品而存在于受試者口腔中的吡啶或吡嗪化合物的濃度中的應(yīng)用。32.—種有效地將因吸用煙草制品而存在的吡啶或吡嗪化合物的濃度降低至少約20%的組合物，其用于處理口腔中的口腔臭味。33.—種有效地將因吸用煙草制品而存在的吡啶或吡嗪化合物的濃度降低至少約20%的組合物，其用以制造用于處理口腔中的口腔臭味的藥物。34.權(quán)利要求32或33所述的應(yīng)用，其中所述組合物將因吸用煙草制品而存在的吡啶或吡嗪化合物的濃度有效降低至少約30%。全文摘要本發(fā)明總體上涉及用于鑒別組合物的篩選方法，所述組合物適合用于口用組合物(例如，糖果或口香糖產(chǎn)品)，該口用組合物對處理與吸用煙草制品相關(guān)的口腔臭味有效。具體地，本發(fā)明涉及用于確定組合物對降低模型樣品或溶液中存在的吡啶或吡嗪化合物濃度的能力的篩選方法，所述模型樣品或溶液代表受試者在吸用煙草制品后的口腔，所述能力作為該組合物在處理與吸用煙草制品相關(guān)的口腔臭味中的有效性的指標(biāo)。文檔編號A61Q11/00GK101237910SQ200680028531公開日2008年8月6日申請日期2006年8月2日優(yōu)先權(quán)日2005年8月2日發(fā)明者拉塞爾·阿爾博特·巴澤摩爾,查爾斯·J·哈里森申請人:Wm.雷格利Jr.公司