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表面活性非酶促蛋白質(zhì)用于織物洗滌的應(yīng)用的制作方法

文檔序號:1468261閱讀:205來源:國知局

專利名稱::表面活性非酶促蛋白質(zhì)用于織物洗滌的應(yīng)用的制作方法表面活性非膝&蛋白質(zhì)用于織物洗滌的應(yīng)用本發(fā)明涉及界面活性非酶促蛋白質(zhì)在織物洗涂中的應(yīng)用。本發(fā)明還涉及用于織物洗滌的含有界面活性非酶促蛋白質(zhì)的洗滌組合物,以及利用此類蛋白質(zhì)洗滌的方法。目前,織物洗滌只能在相對高的溫度下4吏污垢,特別是疏水性的污漬的清除達(dá)到令人滿意的程度。在中等溫度特別是室溫下,對于改善洗滌性能仍然有巨大的需求。根據(jù)現(xiàn)有技術(shù),特別是用表面活性劑和脂解酶可以實(shí)現(xiàn)疏水性污漬的清除。原則上已知使用i^蛋白質(zhì)作為洗滌組合物的添加劑。特別是蛋白酶被用于洗滌組合物,而且使用淀粉酶、纖維素酶或脂肪酶的使用也是已知的。更詳細(xì)的細(xì)節(jié)參見,例如,R6mppChemie-Lexikon,在線版,2.6版,Georg-Thieme畫Verlag,Stuttgart,NewYork,2005年2月中的"Waschmittel-酶"[洗潦組合物酶J。還已知蛋白質(zhì)可以用于將洗滌助劑(例如固定劑、UV保護(hù)劑、加香物質(zhì)或污垢分離助劑)固定在纖維上。為此目的,WO98/00500^5^開了纖維素酶、纖維素酶f;t生物或纖維素樣蛋白質(zhì)的用途,為此目的WO01/46357公開了具有纖維素結(jié)合位點(diǎn)和其它化合物結(jié)合位點(diǎn)的融合蛋白。界面活性蛋白質(zhì)在原則上是已知的。一類具有特別強(qiáng)表面活性的蛋白質(zhì)是即所謂的"疏水蛋白"。疏水蛋白具有顯著的界面親和力,因此適合用于包凈it^面。例如,通過用疏水蛋白包被特氟隆(Teflon)的表面,可以使特氟隆親水化。疏水蛋白是有約100-150個氨基酸的小蛋白質(zhì),其特征是絲狀真菌,例如裂褶菌(Schizophyllumcommune)。它們通常具有8個半脫氛酸單元。疏水蛋白可以首先從天然來源分離。但是,它們也可以通過遺傳工程的方法獲得。我們的在先申請PCT/EP2006/0507197〉開了疏水蛋白的此類制備過程?,F(xiàn)有技術(shù)已經(jīng)提出了疏水蛋白用于多種用途中的應(yīng)用。WO96/41882提出疏水蛋白的以下用途,其作為乳化劑、增稠劑、表面活性物質(zhì),用于使旒7jC表面親7jC化、改善親水底物的防水性、制備水包油乳狀液或油包水乳狀液。此外,提出了例如生產(chǎn)軟膏劑或乳膏劑的制藥用途,和例如皮膚保護(hù)或生產(chǎn)洗發(fā)香波或洗發(fā)液的化妝品用途。EP1252516公開了使用含有疏水蛋白的溶液在30°C-80。C的溫度下包4皮窗戶、隱形眼鏡、生物傳感器、醫(yī)療i文備、用于進(jìn)行測試或儲存的容器、船體、固體顆?;蚪煌üぞ叩目蚣芑虻妆P。WO03/53383公開了疏水蛋白在化妝品用途中用于處理角蛋白材料的應(yīng)用。WO03/10331公開了疏水蛋白包被的傳感器(例如檢測電極),其上以非共價的方式結(jié)合其它物質(zhì),例如電活性物質(zhì)、抗體或酶。到目前為止,還沒有關(guān)于界面活性非酶促蛋白質(zhì),特別是疏水蛋白,作為洗滌組合物的污垢分離添加劑用途的描述。別對于低溫洗滌的情形中洗滌性能的改善是顯著的。因此,已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了界面活性非a蛋白質(zhì)用于織物洗滌中的應(yīng)用。在本發(fā)明的第二個方面,發(fā)現(xiàn)了包含界面活性非酶促蛋白質(zhì)的洗滌組合物。在本發(fā)明的第三個方面,發(fā)現(xiàn)了在包含界面活性非i^l蛋白質(zhì)的洗滌液中洗滌的方法。在該方法的特定實(shí)施方案中,洗滌在不超過60。C的溫度下進(jìn)行。在發(fā)明的特別優(yōu)選的實(shí)施方案中,界面活性非酶促蛋白質(zhì)在每種情形中是疏水蛋白。已經(jīng)令人驚奇的發(fā)現(xiàn),洗滌液中添加界面活性非白質(zhì)顯著增強(qiáng)了洗滌作用。特別令人驚奇的是,甚至在低的洗滌溫度而且甚至在使用非常少量的蛋白質(zhì)的情況下,仍然具有這一效應(yīng)。例如,發(fā)現(xiàn)即使在洗滌液中蛋白質(zhì)濃度僅僅約2.5ppm,結(jié)合常規(guī)洗滌組合物,在僅25。C的洗滌溫度下,洗滌作用仍增強(qiáng)了高達(dá)8%。除了增強(qiáng)污垢分離作用以外,還觀察到對有色油污的防變灰作用(graying-inhibiting)。在洗滌過程中可以從織物上脫離的疏水性污漬會以細(xì)小的分離形式重新沉積到衣物上,導(dǎo)致因此變灰或變色。基于白色或淡色織物的性質(zhì),該效應(yīng)在所述白色或淡色織物中特別顯著。特別是當(dāng)表面活性劑和助洗劑系統(tǒng)處于低劑量時會出現(xiàn)該問題。與不添加界面活性非酶促蛋白質(zhì)洗滌的織物相比,本發(fā)明的添加所述蛋白質(zhì)降低了這一再沉積,因此改善了洗滌的織物的白度。發(fā)明的具體細(xì)節(jié)如下為了進(jìn)行本發(fā)明,使用了界面活性非,蛋白質(zhì)。術(shù)語"非酶促"用來表示優(yōu)選的不具有或至少沒有明顯的酶促作用的蛋白質(zhì)。術(shù)語"界面活性"用來表示使用的蛋白質(zhì)具有影響界面性質(zhì)的能力。所討論界面可以是固體-固體、固體-液體、固體-氣體、液體-液體或液體-氣體界面。特別的,它們可以是固體-液體或液體-液體界面。對于固體-液體界面的情況,所述性質(zhì)可以是,例如,固體界面的親水性或疏水性,其會在使用的蛋白質(zhì)的影響下發(fā)生改變。親水性或疏水性的改變可以以已知的方式,通過測量在包被和未包被表面上水滴的接觸角來測量。其它的界面性質(zhì)是液體表面張力的改變,可以通過已知方法測量。為了進(jìn)行本發(fā)明,優(yōu)先使用即使在低濃度下也是界面活性的蛋白質(zhì)。合適的蛋白質(zhì)特別是那些即使在0.05至50ppm濃度下也具有顯著界面活性性質(zhì)的蛋白質(zhì)。在本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案中,使用的蛋白質(zhì)的特征是在室溫下用于玻璃表面后,與水滴和未包被的玻璃表面的接觸角相比,具有導(dǎo)致等大水滴(5nl)的接觸角增加至少20。的性質(zhì)。優(yōu)選使用接觸角增加了至少25°(更優(yōu)選至少30°)的蛋白質(zhì)。對接觸角的測量是本領(lǐng)域技術(shù)人員原則上已知的。例如適用于測量接觸角的方法的確切實(shí)驗(yàn)條件詳細(xì)的敘述在實(shí)驗(yàn)部分中。在本發(fā)明特別優(yōu)選的實(shí)施方案中,使用的蛋白質(zhì)是疏7JC蛋白。在本發(fā)明的上下文中,術(shù)語"疏水蛋白"在下文中表示具有通用結(jié)構(gòu)式(I)的多肽Xii-C1-Xi-so-GF-Xo^srC^-Xi—it-G4-Xi.ioo~C5-Xi,so"C^-)Q)-s倫G7-X,搶G8-Xffl〖1)其中X可以是20個天然存在的氨基酸(Phe,Leu,Ser,Tyr,Cys,Trp,Pro,His,Gln,Arg,Ile,Met,Thr,Asn,Lys,Val,Ala,Asp,Glu,Gly)中的任一個。在式中,x基團(tuán)可以各自是相同或不同的。x旁邊的指lblL各自特定部分序列x的氨基酸數(shù)目,c是半胱氨酸、丙氨酸、絲氨酸、甘氨酸、甲硫氨酸或蘇氨酸,其中至少四個C標(biāo)注的殘基是半胱氨酸,指數(shù)n和m各自獨(dú)立為0至500之間自然數(shù),優(yōu)選的在15至300之間。式(I)的多肽的特征在于以下性質(zhì)即分別與水滴和未包被的玻璃表面的接觸角相比,在室溫下包被玻璃表面后,所述肽使等大水滴的接觸角增加至少20°,優(yōu)選的至少25°,更優(yōu)選的30。。用d至C8標(biāo)注的g酸優(yōu)選的是半胱氨酸;但是,它們也可以用其他有相似空間充滿(space-filling)的M酸代替,優(yōu)選的是丙氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、甲硫氨酸或甘氨酸。但是,在C^至CS的位置中的至少4個,優(yōu)選的至少5個,更優(yōu)選的至少6個和特別是至少7個應(yīng)該由半胱氨酸組成。在發(fā)明的蛋白質(zhì)中,半胱氨酸或者以還原的形式存在,或者與另一個形成二硫鍵。特別優(yōu)選的是導(dǎo)致C-C橋的分子內(nèi)形成,特別是其具有至少l個分子內(nèi)二硫鍵,優(yōu)選2個,更優(yōu)選3個和最優(yōu)選4個分子內(nèi)二硫鍵。在上述將半胱氨酸換成具有相似空間充滿的氛基酸的情況下,此類C位置有利地成對更換,它們可以彼此形成分子內(nèi)二硫鍵。如果在X標(biāo)注的位置也使用半胱氨酸、絲氨酸、丙氨酸、甘氨酸、甲疏氨酸或蘇氨酸,在通式的各個C位置的編號方式可以相應(yīng)的改變。優(yōu)先的4吏用通式(II)的疏水蛋白來進(jìn)行本發(fā)明Xn-C1-X3_25-C2-Xo<2-C3-X5"50-C4-X2-35-C5-X2-15-C6-Xo-2-C乙X3—35-C8-Xm(II)其中X、C和在X和C旁邊的指數(shù)各自如上定義,指數(shù)n和m各自為0至350之間的數(shù),優(yōu)選從15至300,此外,蛋白質(zhì)還具有上文說明過的改變接觸角的特征,并且另外至少6個用C標(biāo)注的殘基是半胱氨酸。更優(yōu)選的,所有的C殘基都是半胱氨酸。特別優(yōu)選的是使用通式(III)的疏水蛋白其中X、C和X旁邊的指數(shù)各自定義如上,指數(shù)n和m各自為0至200之間的數(shù),此外,蛋白質(zhì)還具有上文說明過的改變接觸角的特征,并且至少6個用C標(biāo)注的殘基是半胱氨酸。更優(yōu)逸的,所有的C殘基都是半胱氨酸。Xn和Xm殘基可以是還天然連接了疏水蛋白的肽序列。但是,所述殘基之一或二者也可以是天然沒有連接疏水蛋白的肽序列。這也理解為表示那些Xn和/或Xm殘基,其中在疏7jC蛋白中天然存在的肽序列由疏7jC蛋白中非天然存在的肽序列延長。如果Xn和Xm是沒有天然結(jié)合疏水蛋白的肽序列,上述序列通常長為至少20,優(yōu)選至少35,更優(yōu)選至少50以及,例如至少100個氨基酸。序列可以是,例如從20至500,優(yōu)選從30至400和更優(yōu)選的從35至100個氨基酸的序列。此類沒有天然結(jié)合疏水蛋白的殘基在下文中也是指融合配偶體(fusionpartner)。這用于表示蛋白質(zhì)可以由至少一個疏水蛋白部分和融合配偶體部分組成,而二者不以該形式天然共存。融合配偶體部分可以選自多種蛋白質(zhì)。還可以只有單個融合配偶體與疏水蛋白部分結(jié)合,或者還可以有多個融合配偶體與一個疏水蛋白部分結(jié)合,例如在疏水蛋白部分的氨基端(Xj和氛基端(Xm)。但是,還可以,例如,兩個融合配偶體與本發(fā)明蛋白質(zhì)的一個位置(Xn或Xm)連接。特別合適的融合配偶體是在微生物(特別是在大腸桿菌(E.coli)或枯草芽胞桿菌(Bacillussubtilis)中天然存在的蛋白質(zhì)。此類融合配偶體的實(shí)例M列yaad(SEQIDNO:15和16),yaae(SEQIDNO:17和18),以及硫氧還蛋白。非常合適的還有這些序列的片段或衍生物,其包括僅一部分(例如70至99%,優(yōu)選的5至50%和更優(yōu)選的10至40%)的上述序列,或其中與所述序列相比改變了單個氨基酸或核苷酸,在這種情況下百分比各自基于氨基酸的數(shù)目。在更優(yōu)選的實(shí)施例中,融合疏水蛋白,以及上述的融合配偶體,作為Xn或Xm基團(tuán)或作為此類基團(tuán)的末端成分,也具有所謂的親和結(jié)構(gòu)域(親和標(biāo)記物/親和尾部)。在原則上已知的方式中,這包括可以與特定互補(bǔ)基團(tuán)相互作用和可以用于更簡單的蛋白質(zhì)操作和純化的錨定基團(tuán)。此類親和結(jié)構(gòu)域的實(shí)例包括(His)k、(Arg)k、(Asp)k、(Phe)k或(Cys)k基團(tuán),其中k通常是從1至10的自然數(shù)。優(yōu)選是(His)k基團(tuán),其中k是從4到6。在上述情況下,Xn和/或Xm基團(tuán)可以僅由此類親和結(jié)構(gòu)域組成,或者天然或非天然結(jié)合了疏水蛋白的Xn或Xm基團(tuán)由末端親和結(jié)構(gòu)域延長。被修飾,例如通過糖基化、乙?;蛘咄ㄟ^化學(xué)交聯(lián),例如用戊二醛。根據(jù)發(fā)明使用的疏水蛋白及其衍生物的一個性質(zhì)是當(dāng)用所述蛋白質(zhì)包凈錄面時表面性質(zhì)的改變。表面性質(zhì)的改變可以被實(shí)驗(yàn)測定,例如,通過測量用蛋白質(zhì)包被表面前后水滴的接觸角,并且測定兩次測量的差異。進(jìn)行接觸角測量是本領(lǐng)域技術(shù)人員原則上已知的。測量基于室溫,5fi1的水滴,并使用玻璃板作為底物。用于測量接觸角的合適方法的實(shí)例的確切實(shí)驗(yàn)條件在實(shí)驗(yàn)部分給出。在其提及的條件下,根據(jù)發(fā)明使用的融合蛋白質(zhì)具有以下性質(zhì)即在每種情形中與等大水滴和未包被的玻璃表面的接觸角分別相比,將接觸角增加至少20。,優(yōu)選的至少25°,更優(yōu)選的至少30。。用于進(jìn)行本發(fā)明的特別優(yōu)選的疏水蛋白是疏水蛋白的dewA、rodA、hypA、hypB、sc3、basfl、basf2類型,其結(jié)構(gòu)特征是下面列出的序列。它們也可以只是所述蛋白質(zhì)的部分或其衍生物。還可以是多種疏水蛋白部分,優(yōu)選的是2或3個相同或不同的結(jié)構(gòu),它們彼此結(jié)合且與天然不結(jié)合疏水蛋白的對應(yīng)的適當(dāng)多肽序列結(jié)合。根據(jù)發(fā)明還特別合適的是融合蛋白質(zhì)yaad-Xa-dewA-his(SEQIDNO:20)、yaad-Xa-rodA國his(SEQIDNO:22)或yaad-Xa畫basfl-his(SEQIDNO:24)(其中多肽序列在括號中說明),以及編碼其的核酸序列,特別是根據(jù)SEQIDNO:19、21、23的序列;更優(yōu)選的,可以4吏用yaad-Xa-dewA-his(SEQIDNO:20)。從SEQIDNO.20、22或24顯示的肽序列開始,通過交換、插入或刪除至少1個到10個,優(yōu)選5個氨基酸,更優(yōu)選的所有M酸的5%而產(chǎn)生的,但仍具有起始蛋白質(zhì)至少50%程度的生物學(xué)性質(zhì)的蛋白質(zhì),也是特別優(yōu)選的實(shí)施方案。蛋白質(zhì)的生物學(xué)性質(zhì)在本文理解為表示接觸角改變至少20。,其在前文已做描述。特別適合進(jìn)行本發(fā)明的衍生物是從yaad-Xa-dewA-his(SEQIDNO:20)、yaad-Xa畫rodA畫his(SEQIDNO:22)或yaad-Xa-basfl-his(SEQIDNO:24),通過截短yaad融合配偶體衍生的殘基。使用截短的yaad殘基,而非完整的具有294個氨基酸的yaad融合配偶體(SEQIDNO:16),是有利的。但是截短的殘基應(yīng)該包含至少20個,更優(yōu)選的至少35個氬基酸。例如,可以使用的截短的基團(tuán)具有從20至293,優(yōu)選的從25至250,更優(yōu)選的從35至150以及,例如從35至100個氨基酸。此類蛋白質(zhì)的一個實(shí)例是yaad40-Xa-dewA-his(SEQIDNO:26),其具有截短至40個氮基酸的yaad殘基??梢岳迷谑杷鞍着c一個或多個融合配偶體之間的裂解位點(diǎn),來釋放純的、非衍生形式的疏水蛋白(例如,通過在甲硫氨酸上的BrCN裂解、Xa因子裂解、腸激酶裂解、凝血酶裂解、TEV裂解,等)。還可以從一個融合配偶體(例如yaad或yaae)接連產(chǎn)生融合蛋白質(zhì),以及大量的疏7JC蛋白(甚至是不同的序列的疏水蛋白),例如DewA-RodA或Sc3-DewA,Sc3-RodA。同才羊可以4吏用疏水蛋白片段(例如N-或C-端截短)或具有達(dá)70%同源性的突變蛋白質(zhì)。在每種情況下才艮據(jù)特定的應(yīng)用,即待分離的液相,選擇最佳構(gòu)建體。根據(jù)發(fā)明使用的用于織物洗滌的疏水蛋白,可以通過已知的肽合成的方法化學(xué)制備,例如通過Merrifield固相合成。天然存在的疏水蛋白可以通過合適的方法從天然來源中分離。例如參考W6sten等人,Eur.JCellBio.63,122-129(1994)或WO96/41882。不用融合配偶體從嗜熱踝節(jié)菌(Talaromycesthermophilus)產(chǎn)生疏水蛋白的遺傳工程產(chǎn)生方法描述在US2006/0040349中。融合蛋白質(zhì)可以通過遺傳工程方法優(yōu)選的制備,其中以這樣的方式結(jié)合編碼融合配偶體的一個核酸序列(特別是DNA序列)和編碼疏水蛋白部分的一個核酸序列,即通過所述方式使得宿主生物中生成由于結(jié)合的核酸序列基因表達(dá)而產(chǎn)生的所需蛋白質(zhì)。此類制備過程在例如PCT/EP2006/050719中公開。括古細(xì)菌)或真核生物,特別是細(xì)菌(包括嗜鹽菌(/^/^wcteW")和甲烷球菌(附W/iffm7cocd))、真菌、昆蟲細(xì)胞、植物細(xì)胞和哺乳動物細(xì)胞,更優(yōu)選是大腸桿菌(Escherichiacoli)、枯草芽胞桿菌(Bacillussubtilis)、巨大芽抱軒菌(必tt"7/WS柳egfltef/"附)、米曲霉(^45pe/^'〃MS"/J漢")、構(gòu)巢曲霉(^15/W^〃"51mV/"/tf"S)、黑曲霉(/45/Wg/〃MSzi/ge。、巴斯德畢赤酵母(P/cA/tf/7"5/0,/5)、假單胞菌屬物種(尸5^"flfo附0"flWS/^C)、乳酸桿菌屬(/tf"o6n"7//)、多形漢遜酵母(flam^腿/a"/拜0r/^fl)、里氏木霉(7Wc/ro^附areese/)、SF9(或相關(guān)細(xì)胞)等等。發(fā)明還提供了表達(dá)構(gòu)建體的用途,以及包含至少一種這些表達(dá)構(gòu)建體載體,所i^達(dá)構(gòu)建體在調(diào)節(jié)核酸序列的遺傳控制下包含編碼根據(jù)本發(fā)明使用的多肽的核*列。使用的構(gòu)建體優(yōu)選包括,特定編碼序列的5,上游、啟動子和3,下游,終止子序列,以及根據(jù)需要,其它常規(guī)調(diào)控元件,它們各自與編碼序列有效連接。在本發(fā)明的上下文中,"有效連接"理解為表示啟動子、編碼序列、終止子以及(根據(jù)需要)其它調(diào)節(jié)元件的順序排列,從而使得每個調(diào)節(jié)元件都可以實(shí)現(xiàn)其在編碼序列表達(dá)中所希望的功能。有效連接的序列實(shí)例是標(biāo)簽序列,還有增強(qiáng)子、多聚腺苷酸化信號等。其它調(diào)節(jié)元件包括選擇性標(biāo)記、擴(kuò)增信號、復(fù)制起點(diǎn)等。合適的調(diào)節(jié)序列是,例如,描述在Goeddel,GeneExpressionTechnology:MethodsinEnzymology185,AcademicPress,SanDiego,CA(1990)中。除了這些調(diào)節(jié)序列,這些序列的天然調(diào)節(jié)還可以出現(xiàn)在實(shí)際的結(jié)構(gòu)基因的上游,以及根據(jù)需要,被遺傳修飾從而關(guān)閉天然調(diào)節(jié),并增加基因的表達(dá)。優(yōu)選的核酸構(gòu)建體還有利的包含一個或多個所謂的"增強(qiáng)子"序列,其功能性的連接到啟動子上,能夠增加核酸序列的表達(dá)。同樣在DNA序列的3,端,還可以插入額外的有利序列,例如其它調(diào)節(jié)元件或終止子。構(gòu)建體中出現(xiàn)的核酸可以是一個或多個拷貝。根據(jù)選擇構(gòu)建體需要,還可以有其它標(biāo)記例如抗生素抗性或補(bǔ)充營養(yǎng)缺陷型的基因。存在用于制備的有利的調(diào)節(jié)序列,例如,在啟動子例如cos、tac、trp、tet、trp-tet、Ipp、lac、Ipp-lac、laclq-T7、T5、T3、gal、trc、ara、rhaP(rhaPBAD)SP6、X-PR或imlambda-P啟動子中,發(fā)現(xiàn)所述啟動子利于在革蘭氏陰性細(xì)菌中使用。其它有利的調(diào)節(jié)序列出現(xiàn)在,例如,革蘭氏陽性啟動子amy和SP02,以及酵母或真菌啟動子ADC1、MFa、AC、P-60、CYC1、GAPDH、TEF、rp28、ADH。還可以使用合成的啟動子進(jìn)行調(diào)節(jié)。為了在宿主生物中表達(dá),將核酸構(gòu)建體有利的插入到載體中,例如使得基因在宿主中最優(yōu)表達(dá)的質(zhì)?;蚴删w。除了質(zhì)粒和噬菌體,載體還理解為表示所有本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它載體,例如病毒如SV40、CMV、桿狀病毒和腺病毒、轉(zhuǎn)座子、IS元件、噬粒、黏粒和線性或環(huán)狀DNA,以及還有農(nóng)桿菌屬(Agrobacterium)系統(tǒng)。這些載體可以在宿主生物中自主復(fù)制或染色體復(fù)制。合適的質(zhì)粒是,例如,在大腸桿菌中的pLG338、pACYC184、pBR322、pUC18、pUC19、pKC30、pRep4、pHSl、pKK223-3、pDHE19.2、pHS2、pPLc236、pMBL24、pLG200、pUR290、pIN-Iir,3-Bl、tgtll或pBdCI,在鏈霉菌屬(Streptomyces)中的plJ101、pIJ364、p腦2或plJ361,在芽孢桿菌屬(Bacillus)中的pUB110、pC194或pBD214,在棒狀桿菌屬(Corynebacterium)中的pSA77或pAJ667,在真菌中的pALSl、plL2或pBB116,在酵母中的2a、pAG-l、YEp6、YEpl3或pEMBLYe23或者在植物中的pLGV23、pGHlac+、pBIN19、pAK2004或pDH51。上述質(zhì)粒構(gòu)成了可行質(zhì)粒的一小部分選擇。其它質(zhì)粒也是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的,并且例如,可以取自書本CloningVectors(編著PouwdsP.H等人,Elsevier,Amsterdam-NewYork-Oxford,1985,ISBN0444904018)。有利地,為了表達(dá)其它存在的基因,核酸構(gòu)建體還額外的包含用于增強(qiáng)表達(dá)的3,-和/或5,-端的調(diào)節(jié)序列,其根據(jù)宿主生物和所選的一或多個基因?yàn)榱俗顑?yōu)表達(dá)而被選擇。這些調(diào)節(jié)序列意圖使得能夠控制基因表達(dá)和蛋白質(zhì)表達(dá)。根據(jù)宿主生物,這可以表示,例如,基因只有在誘導(dǎo)之后才表達(dá)或過表達(dá),或者立即表達(dá)和/或過表達(dá)o調(diào)節(jié)序列或因子優(yōu)選的可以正向影響,從而增加所導(dǎo)Aj^因的基因表達(dá)。因此,調(diào)節(jié)元件的擴(kuò)增可以有利地在轉(zhuǎn)錄水平通過^f吏用強(qiáng)轉(zhuǎn)錄信號例如啟動子和/或增強(qiáng)子被影響。此外,還可以通過例如,改善mRNA的穩(wěn)定性,來增強(qiáng)翻譯。在載體的另一個實(shí)施方案中,包含核酸構(gòu)建體或者核酸的載體可以以線性DNA的形式有利的導(dǎo)入微生物,并通過異源或同源重組整合到宿主生物的基因組中。該線性DNA可以由線性化的載體例如質(zhì)?;騼H由核酸構(gòu)建體或核酸構(gòu)成。為了在生物中異源基因的最優(yōu)表達(dá),根據(jù)在生物中使用的特定"密碼子選擇"改變核酸序列是有利的。"密碼子選擇,,可以參考所討論生物的其它已知基因的計(jì)算機(jī)評估來簡單的測定。通過將合適的啟動子與合適的編碼核苷酸序列和終止子信號或多聚腺苷酸化信號融合,制備表達(dá)盒。為此,使用常規(guī)重組和克隆技術(shù),描述在,例如T.Maniatis,E.F.Fritsch和J.Sambrook,MolecularCloning:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratory,ColdSpringHarbor,NY(1989)和在T.J.Silhavy,M.L.Berman和L.W.Enquist,ExperimentswithGeneFusions,ColdSpringHarborLaboratory,ColdSpringHarbor,NY(1984)以及在Ausubel,F.M.等人,CurrentProtocolsinMolecularBiology,GreenePublishingAssoc.andWileyInterscience(1987)中。為了在合適的宿主生物中表達(dá),重組的核酸構(gòu)建體或基因構(gòu)建體被有利的插入到宿主特異性載體中,所述栽體使得基因在宿主中最優(yōu)表達(dá)。載體是本領(lǐng)域技術(shù)人員普遍已知的并且可以取自例如"CloningVectors"(PouwelsP.H等人,編著,Elsevier,Amsterdam-NewYork-Oxford,1985)。在栽體的輔助下,可以制備重組微生物,所述微生物已經(jīng)被轉(zhuǎn)化了例如至少一個載體并可以用于生產(chǎn)根據(jù)發(fā)明使用的疏水蛋白或其衍生物。有利的,上述重組構(gòu)建體被引入合適的宿主系統(tǒng)并表達(dá)。優(yōu)選的使用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉的克隆和轉(zhuǎn)染方法,例如共沉淀、原生質(zhì)體融合、電穿孔、逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)染等,從而在特定表達(dá)系統(tǒng)中引起所述核酸的表達(dá)。合適的系統(tǒng)描述在,例如CurrentProtocolsinMolecularBiology,F.Ausubel等人編著,WileyInterscience,NewYork1997,或者Sambrook等人,MolecularCloning:ALaboratoryManual,第2版,ColdSpringHarborLaboratory,ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,NY,1989。還可以制備同源重組的微生物。為此,制備載體,其包括待使用的基因或編碼序列的至少一部分,其中,根據(jù)需要,引入了至少一個M酸缺失、添加或取代,從而改變(例如功能性破壞)所述序列("敲除"載體)。待引入的序列也可以,例如是來自相關(guān)微生物的同源物,或來自哺乳動物、酵母或昆蟲來源??梢詡溥x的配置用于同源重組的載體,4吏同源重組的內(nèi)源基因#:以另一方式突變或改變,但仍編碼功能性蛋白質(zhì)(例如,可以改變上游調(diào)節(jié)區(qū)從而改變內(nèi)源蛋白質(zhì)的表達(dá))。根據(jù)發(fā)明使用的基因的改變部分位于同源重組栽體內(nèi)。用于同源重組的合適載體的構(gòu)建描述在,例如,Thomas,K.R.和Capecchi,M.R.(1987)Cell51:503。原則上,所有的原核或真核生物都可以作為此類核酸或此類核酸構(gòu)建體的重組宿主生物。有利的,使用的宿主生物是微生物,例如細(xì)菌,真菌或酵母。有利的,使用革蘭氏陽性或革蘭氏陰性菌,優(yōu)選腸桿菌科(i"tera6tf"cV/ccae)、假單胞菌科(_Pscwflfo/M<mflt</ffcc—、根瘤菌科(i/r/zo油ceae)、鏈霉菌科(浙cpto附j(luò);c""ce—或諾卡氏菌科(/V(OCfln/Zflce—的細(xì)菌,更優(yōu)選使用的細(xì)菌為埃希氏菌屬CEsc&Wc/h'a)、假單胞菌屬(_Psei/o/wc>/iflw)、鏈酶菌屬(5^e/to附y(tǒng)ces)、諾卡氏菌屬(7Vooi/y///1)、4白克霍爾德菌屬(必wr^^/flfenVi)、沙門氏菌屬(^|//<股//")、農(nóng)桿菌屬(々/y^fl"m'w附)或紅球菌屬(i/^fifoC0CC"5)的細(xì)菌領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法生長或培養(yǎng)的宿主生物。微生物通常生長在液體培養(yǎng)基中,溫度為0至100。C之間,優(yōu)選的10至60。C之間,有氧氣噴射,所述液體培養(yǎng)基包括碳源(一般是糖的形式),氮源(通常是有機(jī)氮源的形式例如酵母提取物或鹽類如硫酸銨),痕量元素(例如鐵鹽、錳鹽和鎂鹽),以及根據(jù)需要,維生素。營養(yǎng)液的pH可以維持在固定值,即在生長過程中可調(diào)節(jié)或不調(diào)節(jié)。培養(yǎng)可以是分批培養(yǎng)、半分批培養(yǎng)或連續(xù)培養(yǎng)。營養(yǎng)物可以在發(fā)酵起始加入,或以半連續(xù)或連續(xù)的方式補(bǔ)充??梢酝ㄟ^實(shí)施例中描述的方法從生物中分離酶,或作為粗提取物用于反應(yīng)。根據(jù)發(fā)明使用的疏水蛋白,或其功能性、生物學(xué)活性的片段,可以通過重組制備方法制備,其中培養(yǎng)生產(chǎn)多肽的微生物,根據(jù)需要誘導(dǎo)蛋白質(zhì)表達(dá),并將它們從培養(yǎng)物中分離。如果需要,蛋白質(zhì)也可以以工業(yè),以這樣的方式生產(chǎn)??梢杂靡阎椒ㄅ囵B(yǎng)并發(fā)酵重組微生物。細(xì)菌在例如TB或LB培養(yǎng)基,溫度為20至40。C和pH為6至9中增殖。合適的培養(yǎng)條件具體描述在,例i口T.Maniatis,E.RFritsch和J.Sambrook,MolecularCloning:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratory,ColdSpringHarbor,NY(1989)。融合配偶體可以極大的方便疏水蛋白的制備生產(chǎn)融合疏水蛋白比沒有融合配偶體的疏水蛋白有顯著更高的產(chǎn)量。如果蛋白質(zhì)沒有被分泌到培養(yǎng)基中,就破壞細(xì)胞并通過已知的蛋白質(zhì)分離方法從裂解物中獲得所述產(chǎn)物。根據(jù)需要,可以通過高頻超聲、通過高壓(如弗氏細(xì)胞壓碎器(Frenchpressurecell))、通過'滲透溶解、通過去污劑、水解酶或有機(jī)溶劑的作用、通過勻漿器或通過組合多種所列方法來石皮壞細(xì)胞??梢杂靡阎纳玦普方法純化蛋白質(zhì),例如分子篩色語(凝膠過濾),如Q瓊脂糖色鐠、離子交換色諳和疏水色譜,以及其他常用方法如超濾、結(jié)晶、鹽析、透析和非變性凝膠電泳。合適的方法描述在,例如,Cooper,F.G"BiochemischeArbdtsmethoden[BiochemicalTechniques],VerlagWalterdeGruyter,Berlin,NewYork,或在Scopes,R.,ProteinPurification,SpringerVerlag,NewYork,Heidelberg,Berlin。通過為融合疏水蛋白提供特異性錨定基團(tuán),可以特別有利于簡化融合疏水蛋白的分離和純化,所述基團(tuán)可以結(jié)合固體支持物(特別是合適的聚合物)上相應(yīng)的互補(bǔ)基團(tuán)。此類固體支持物可以作為,例如,色譜柱的填充料,并且以這一方式一般可以顯著增加分離的效率。親和色i普也是已知的此類分離方法。為了摻入錨定基團(tuán),在蛋白質(zhì)的制備中可以使用載體系統(tǒng)或寡核苷酸,所述寡核苷酸用特定的核苷酸序列延長了cDNA,從而編碼改變的蛋白質(zhì)或融合蛋白質(zhì)。為了筒化純化,修飾的蛋白質(zhì)包括所謂的作為錨起作用的"標(biāo)簽",例如已知的六組氨酸錨的修飾。用組氨酸錨修飾的融合疏水蛋白可以用色傳純化,例如,用鎳-瓊脂糖(nickd-Sepharose)作為柱填充料。然后,通過合適的洗脫劑例如咪唑溶液將融合疏7JC蛋白再次從柱上洗脫。在簡化的純化方法中,可以省略色語純化。為此,首先通過合適的方法M酵肉湯中去掉細(xì)胞,例如通過微量過濾或離心。然后,通過合適的方法破壞細(xì)胞,例如通過上文已經(jīng)提及的方法,將細(xì)胞碎片可以與內(nèi)含體分離。后者可以有利的通過離心實(shí)現(xiàn)。最后,以原則上已知的方式^s皮壞內(nèi)含體,從而釋放融合疏水蛋白。這可以通過例如酸、堿和/或去污劑實(shí)現(xiàn)。具有根據(jù)發(fā)明使用的融合疏水蛋白的內(nèi)含體通??梢陨踔劣?.1MNaOH在約1小時內(nèi)完全溶解。通過該簡化的方法獲得的融合疏水蛋白的純度一般是所有蛋白質(zhì)量的60至80%(重量)。通過所述簡化的純化方法獲得的溶液可以用來實(shí)施本發(fā)明,而不需要其他純化。但是,融合疏水蛋白也可以作為固體從溶液中分離。例如,這可以以原則上已知的方式,通過冷凍干燥或噴霧干燥來實(shí)現(xiàn)。在發(fā)明的優(yōu)選的實(shí)施方案中,可以通過噴霧干燥的方法分離。噴霧干燥可以使用色鐠純化的溶液,也可以優(yōu)選的使用通過制備內(nèi)含體在簡化的純化方法后獲得的溶液。為了實(shí)施噴霧干燥,根據(jù)需要可以中和溶液。發(fā)現(xiàn)pH7至9的范圍是特別有利的。通常還建議將初始溶液略微濃縮。發(fā)現(xiàn)在初始溶液中有用的固體濃度達(dá)30%(重量)。一般固體含量>5%可以產(chǎn)生精細(xì)產(chǎn)品粉末。隨后,溶液可以用原則上已知的方式噴霧干燥。噴霧干燥合適的裝置是商業(yè)可購的。最優(yōu)噴霧干燥條件隨單位類型和所需產(chǎn)量變化。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)輸入溫度為130至180'C,輸出溫度為50至80。C時對疏水蛋白溶液是有利的。任選的,噴霧干燥可以使用助劑,例如糖類、甘露糖醇、葡聚糖(dextran)或麥芽糖糊精。發(fā)現(xiàn)上述助劑的有用量是基于疏水蛋白的0至30%(重量),優(yōu)選5至20%(重量)的此類助劑。按所述制備的疏水蛋白可以直接作為融合蛋白質(zhì)使用,或在分離和移除融合配偶體后,作為"純"疏水蛋白使用。當(dāng)需要移除融合配偶體時,建議在疏水蛋白部分和融合配偶體部分之間的融合蛋白質(zhì)中摻入潛在的裂解位點(diǎn)(蛋白酶的特異性識別位點(diǎn))。合適的裂解位點(diǎn)特別是那些在疏水蛋白部分和融合配偶體部分都不存在的肽序列,所述序列可以用生物信息學(xué)工具容易的確定。特別合適的實(shí)例是曱硫氨酸的BrCN裂解,或蛋白酶介導(dǎo)的用因子Xa裂解的裂解、腸激酶裂解、凝血酶裂解或TEV裂解(煙草蝕紋病毒)。對于織物洗滌的本發(fā)明用途,界面活性非H^蛋白質(zhì)可以首先作為洗滌組合物的成分使用,并以這一形式加入洗滌液中。而且,還可以分別向洗滌液中加入界面活性非i^蛋白質(zhì),并使用不含界面活性非g蛋白質(zhì)的洗滌組合物。分別的添加可以通過添加固體形式的蛋白質(zhì)進(jìn)行,作為溶液或作為適當(dāng)?shù)闹苿?。要理解兩種添加方法也可以組合。本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)所需效果確定洗滌液中界面活性非S^L蛋白質(zhì)的量。發(fā)現(xiàn)有效量一般是0.05至50ppm,優(yōu)選的0.1至30ppm,更優(yōu)選的0.2至20ppm,甚至更優(yōu)選的0.5至10ppm以及,例如1至6ppm。發(fā)明的洗滌組合物包括至少一種洗滌活性物質(zhì)和至少一種界面活性非酶促蛋白質(zhì)。至少一種界面活性非酶促蛋白質(zhì)優(yōu)選的是導(dǎo)致如開始所述的接觸角改變的蛋白質(zhì),更優(yōu)選的至少一種疏水蛋白。要理解也可以使用不同蛋白質(zhì)的混合物。如果使用疏水蛋白,它們可以作為"純"疏水蛋白或另外以上述融合蛋白質(zhì)的形式使用。發(fā)現(xiàn)實(shí)施本發(fā)明的有用實(shí)例是yaad-Xa-dewA-his型(SEQIDNO:20)、yaad-Xa-rodA-his型(SEQIDNO:22)或yaad-Xa國basfl-his型(SEQIDNO:24)融合蛋白質(zhì)。發(fā)現(xiàn)特別有用的實(shí)例是具有完整yaad融合配偶體或具有截短的融合配偶體(例如yaad40-Xa-dewA-his(SEQIDNO:26))的yaad-Xa-dewA-his(SEQIDNO:20)。術(shù)語"用于織物洗滌的洗滌組合物"是同時不言自明且限制性的。用于洗滌織物的洗滌組合物以例如,粉末、顆粒、粒狀沉淀、糊狀、片狀、凝膠或液體形式,一般是以含水溶液(洗滌液)的形式來使用。它們的作用由化學(xué)和物理化學(xué)過程的相對復(fù)雜的相互作用組成。洗滌組合物包括至少一種洗滌活性物質(zhì),但是一般包含多種不同洗滌活性物質(zhì),它們相互作用產(chǎn)生最優(yōu)的洗滌結(jié)果。洗滌組合物的重要洗滌活性成分特別是表面活性劑,還有助洗劑,輔助助洗劑(cobuilder)、漂白系統(tǒng)和洗滌組合物酶。還可以另外使用典型的添加劑,例如芳香劑、緩蝕劑、染料傳遞抑制劑、抑泡劑或熒光增白劑作為洗滌組合物的成分。表面活性劑可以是陰離子、非離子、陽離子或兩性表面活性劑。合適的非離子表面活性劑特別是-烷氧基化CVC22-醇,例如脂肪醇烷氧基化物、羰基合成醇烷氧基化物(oxoalcoholalkoxylate)和格爾伯特醇(Guerbetalcohol)乙氧基化物可以使用環(huán)氧乙烷、氧化丙烯和/或環(huán)氧丁烷進(jìn)行烷氧基化作用。可以存在嵌段共聚物或隨機(jī)共聚物。每摩爾醇,通常包括2至50mo1,優(yōu)選的3至20mol至少一種烯基氧化物。優(yōu)選的烯化氧是環(huán)氧乙烷。醇類優(yōu)選具有10至18個碳原子。-烷基酚烷IL^化物,特別是烷基酚乙氧基化物,其包括CVd4-烷基鏈和5至30mol的烯化lL/摩。-烷基多葡糖苷,其包括QrC22-,優(yōu)選的d。-C『烷基鏈和一般1至20,優(yōu)選的1.1至5個葡糖苷單元。-N-烷基葡萄糖酰胺(N-alkylglucamide)、脂肪酸酰胺烷氧基化物、脂肪酸鏈烷醇酰胺烷基氧化物,和環(huán)氧乙烷、氧化丙烯和/或環(huán)氧丁烷的嵌段共聚物。合適的陰離子表面活性劑是,例如-(脂肪)醇硫酸鹽,其具有8至22,優(yōu)選的10至18個碳原子,特別是C9-Cu-醇硫酸鹽,C12《14-醇硫酸鹽,C『d8-醇硫酸鹽、硫酸月桂鹽、十六烷J^危酸鹽、肉豆蔻^i^危酸鹽、棕櫚酰石危酸鹽(palmitylsulfate)、石更脂酰硫酸鹽和動物脂肪酸硫酸鹽。-硫酸化烷氧基化CVC22-醇(烷基醚硫酸鹽)通過以下制備該類型的化合物例如,首先烷氧基化C8-C22-,優(yōu)選的d(rd8-醇,如脂肪醇,然后硫酸化該烷氧基化產(chǎn)物。對于烷氧基化作用,優(yōu)選的使用環(huán)氧乙烷。-線性Cs-C2。-烷基苯磺酸鹽(LAS),優(yōu)選的線性CVd3-烷基笨璜酸鹽和C9-C『烷基曱苯磺酸鹽。畫鏈烷磺酸鹽,特別是C『C24-,,優(yōu)選的d。畫Qs-鏈烷磺酸鹽。-皂類,例如Cs-C24-羧酸的鈉鹽和鐘鹽。將陰離子表面活性劑優(yōu)選的以鹽的形式加入洗滌組合物。合適的鹽是,例如,堿金屬鹽如鈉鹽、鉀鹽和鋰鹽,銨鹽如羥乙基銨鹽、二(羥乙基)-銨鹽和三(羥乙基)銨鹽。合適的陽離子表面活性劑包括-CVC25-烷基胺;-N,N-二甲基-N-(CVC4-羥烷基)(<:7-<:25-烷_&)銨鹽;-用烷化劑季銨化的單-和二(<:7-<:25-烷基)二甲基銨化合物;畫酯季銨化物(esterquats),特別是被<:8調(diào)<:22-羧酸酯化的季銨化酯化單-、二-和三鏈烷醇胺。-咪唑淋季銨化物(imidazolinequats),特別是通式II或III的1-烷基咪峻啉錯鹽(l畫alkylimidazoliniumsalt),其中變量定義如下R3是d-C25-烷基或CVC25-鏈烯基;R4是d-CV烷基或羥基-Ci-C4-烷基;R5是d-Cr烷基、羥基-d-Cr烷基或R、(CO)-X-(CH2)m-基團(tuán)(X:-O-或-NH-;m:2或3),其中至少一個RS基團(tuán)是OC22-烷基。合適的兩性表面活性劑是,例如烷基甜菜堿、烷基酰胺甜菜堿、M丙酸鹽、M甘氨酸鹽和兩性咪唑錄鹽化合物。在洗滌過程中,助洗劑(也已知不均勻無機(jī)助洗劑,HIB)作用為軟化水。它們通過其堿度支持洗滌作用,并從污垢和纖維橋中濾去鈣離子和鎂離子,并且促進(jìn)色素污垢^:在洗滌液中。合適的無機(jī)助洗劑特別是-具有離子交換性質(zhì)的晶體和無定形鋁硅酸鹽,特別是沸石多種類型的沸石是合適的,特別是沸石A、X、B、P、MAP和HS,所述沸石為Na形式或其中Na已經(jīng)被其他陽離子例如Li、K、Ca、Mg或銨部分替換的形式。國晶體硅酸鹽,特別是二硅酸鹽和片狀硅酸鹽,例如5-和(3畫Na2Si20s??梢砸云鋲A金屬、堿土金屬或銨鹽的形式使用硅酸鹽;優(yōu)選給出的為硅酸鈉、硅酸鋰和硅酸鎂。-無定形硅酸鹽,例如硅酸鈉和無定形二硅酸鹽。-碳酸鹽和碳酸氫鹽可以以它們的堿金屬、堿土金屬或銨鹽的形式使用它們。優(yōu)選給出了碳酸鈉、碳酸鋰和碳酸鎂以及碳酸氫鈉、碳酸氫鋰和碳酸氫鎂,特別是碳酸鈉和/或碳酸氫鈉。-聚磷酸鹽,例如三聚磷酸鈉。輔助助洗劑與助洗劑協(xié)同作用,例如通過作為一類備用品(store),其比助洗劑更迅速的吸收鉀離子或鎂離子,并將它們傳遞給助洗劑。此夕卜,它們可以通過吸附在晶種上阻止其生長。合適的有機(jī)輔助助洗劑特別是-低分子量羧酸例如檸檬酸,疏7jc修飾的檸檬酸,例如松萆酸、蘋果酸、酒石酸、葡糖酸、戊二酸、琥珀酸、亞胺二琥珀酸、氧二琥珀酸(oxydisuccinicacid)、丙三羧酸、丁坑四曱酸、環(huán)戊烷甲酸、烷基琥珀酸和鏈烯基琥珀酸和氨基多羧酸,例如氨三乙酸、P-丙氨酸雙乙酸、乙二胺四乙酸、絲氨酸雙乙酸、異絲氨酸雙乙酸、N-(2-羥乙基)亞氨乙酸、乙二胺二琥珀酸,以及甲基甘氨酸雙乙酸和乙基甘氨酸雙乙酸。-低聚和多聚羧酸,例如丙烯酸和天冬氨酸均聚物、低聚馬來酸、馬來酸和丙烯酸、異丁烯酸或C2-C22-烯烴的共聚物,例如,異丁烯或長鏈a-烯烴、乙烯基CrCs-烷基醚、乙烯基乙酸酯、乙烯基丙酸酯、CrCV醇的(曱基)丙烯酸酯和苯乙烯。優(yōu)選給出了丙烯酸的均聚物和丙烯酸與馬來酸的共聚物。低聚和多聚碳酸以酸的形式或作為鈉鹽的形式使用。合適的漂白劑是,例如過氧化氬和無機(jī)鹽的加合物,如過硼酸鈉一水合物、過硼酸鈉四水合物和碳酸鈉過氧化氫合物,以及過羧酸如苯二酰亞氨基過己酸。合適的漂白活化物是,例如N,N,N,,N,-四乙酰基乙二胺(TAED)、對-壬酰氧苯磺酸鈉和N-曱基嗎啉基乙腈硫酸甲酯鹽(N-methylmorpholinioacetonitrilemethylsulfate)。在洗滌組合物中優(yōu)選使用的酶是蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、纖維素酶、氧化酶和過氧化物酶。合適的染料傳遞抑制劑是l-乙烯基吡咯烷酮,1-乙烯基咪唑,4-乙烯基吡啶N-氧化物的均聚物、共聚物和接枝聚合物,或者與氯乙酸反應(yīng)過的4-乙烯吡咬的均聚物和共聚物。使用的成分的類型和量由本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)洗滌組合物的所需最終用途來確定。例如,漂白劑一般在強(qiáng)力洗滌組合物中使用,而不用于溫和洗滌組合物。洗滌組合物的組成和洗滌組合物的成分的進(jìn)一步詳述見,例如,"Waschmittel"[Washingcompositions]inR6mppChemie-Lexikon,在線編輯,2.6版,Georg-Thieme畫Verlag,Stuttgart,NewYork,Febr.2005,或者"Detergents"inUllmann,sEncyclopediaofIndustrialChemistry,第6版,2000,ElectronicRelease,Wiley陽VCH-Verlag,Weinheim,2000。實(shí)施本發(fā)明的優(yōu)選的表面活性劑是陰離子表面活性劑和/或非離子表面活性劑。根據(jù)發(fā)明使用的界面活性非i^tl蛋白質(zhì),特別是疏水蛋白,可以特別有利的與線性烷基笨璜酸鹽或脂肪醇硫酸鹽與烷基醚硫酸鹽或烷基烷氧基化物的組合一起使用??梢蕴貏e有利的使用基于Q-ds-醇和/或其烷氧基化產(chǎn)物的陰離子和/或非離子表面活性劑,任選的與其他表面活性劑混合。烷氧基優(yōu)選的是主要包含環(huán)氧乙烷單元和/或氧化丙烯單元,優(yōu)選的環(huán)氧乙烷單元。它們可以是,例如,1至25個環(huán)氧乙烷單元(優(yōu)選的3至20個,且更優(yōu)選的5至15個單元)的基團(tuán),或者包含環(huán)氧乙烷和氧化丙烯單元的基團(tuán),其中后者在各種情況下應(yīng)該包含基于所有烷氧基單位的總數(shù)的至少50摩爾%,優(yōu)選的60摩爾%的環(huán)氧乙烷單元。優(yōu)選的表面活性劑的實(shí)例包括烷氧基化Cs-ds-醇,例如脂肪醇烷氧基化物、羰基合成醇烷氧基化物、格爾伯特醇烷氧基化物、CVdr醇的硫酸鹽、硫酸化烷氧基化CVds-醇(烷基醚硫酸鹽)或線性Q-d8-烷基^t酸鹽(LAS),優(yōu)選的線性C9-C『烷基苯磺酸鹽和CVd3-烷基甲笨璜酸鹽。特別優(yōu)選的是2-丙基庚醇和十三醇的烷氧基化產(chǎn)物及其硫酸酯。洗滌組合物中的界面活性非i^l蛋白質(zhì)的量是由本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)對洗滌組合物的所需性質(zhì)判斷的。在此背景中,有利的選擇該量,使得在按照說明的洗滌組合物劑量的情況下,獲得界面活性非sm蛋白質(zhì)的上述特定的濃度。發(fā)現(xiàn)有用量是占洗滌組合物所有成分總量的0.002至2.5%(界面活性非i^l蛋白質(zhì)的重量)。該量優(yōu)選為從O.Ol至1.5%(重量),更優(yōu)選為從0.025至1.0%(重量),甚至更優(yōu)選的從0.05至0.5%(重量),例如,0.1至0.3%(重量)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中,發(fā)明的洗滌組合物包括O.Ol至1.5%(重量)的界面活性非酶促蛋白質(zhì),0.5至40%(重量)的表面活性劑,優(yōu)選為陰離子和/或非離子表面活性劑,59至99.45%(重量)的其它洗滌活性添加劑或配制助劑。使用的成分(c)可以優(yōu)選的是脂肪酶和/或無定形聚合物,例如環(huán)氧乙烷-氧化丙烯嵌段共聚物。發(fā)明的洗滌組合物可以用本領(lǐng)域技術(shù)人員原則上已知的方法生產(chǎn)。洗滌組合物的生產(chǎn)方法細(xì)節(jié)在,例如,上文引用過的"RiimppChemie國Lexikon"或"UUmaim,s"文獻(xiàn)中給出??梢允褂萌芤旱幕蚬腆w的界面活性非iHl蛋白質(zhì)生產(chǎn)洗滌組合物。固得,例如噴霧千燥或冷凍干燥。在洗滌組合物的生產(chǎn)中,應(yīng)該保證對界面活性非酶促蛋白質(zhì)的熱應(yīng)力不過高。該限制當(dāng)然是由蛋白質(zhì)的類型所指導(dǎo)的。在使用疏水蛋白的情況下,已經(jīng)發(fā)現(xiàn)不超過120。C的產(chǎn)物溫度是有用的。過程溫度(即,例如噴霧干燥器中氣流的溫度)當(dāng)然也可以更高,條件是產(chǎn)物溫度不超過臨界極限。向洗滌組合物中溫和摻入成分的技術(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。例如,制備粉狀洗滌組合物可以通過,第一步,通過噴霧干燥從洗滌組合物的熱穩(wěn)定成分的含水漿中生產(chǎn)粗產(chǎn)品,將該粗產(chǎn)品在第二步中在溫和條件下與熱敏感成分混合。通常建議在上述第二步中引入根據(jù)本發(fā)明使用的界面活性非a蛋白質(zhì),但并沒有意圖將發(fā)明局限于此。根據(jù)本發(fā)明,洗滌織物材料的方法至少包括步驟將待洗的織物材料和含水洗滌液填充到洗滌用具中,對織物材料和洗滌液的混合物應(yīng)用機(jī)械力,移除含水洗滌液并任選的漂洗織物材料,干燥織物材料。所用的洗滌用具可以是任何種類的洗衣機(jī)。但是,該術(shù)語還包括那些在手洗中通常使用的容器,例如洗澡盆或洗臉盆。在步驟(a),洗滌用具首先用織物和含水洗滌液填充,填充順序不重要。以原則上已知的方式,洗滌液包括至少一種洗滌活性物質(zhì)。才艮據(jù)本發(fā)明,含水洗滌液還包括至少一種界面活性非酶促蛋白質(zhì)。已經(jīng)論述過優(yōu)選的蛋白質(zhì)。界面活性非S^蛋白質(zhì)的添加可以通過洗滌組合物進(jìn)行,或者單獨(dú)進(jìn)行。優(yōu)選的在洗滌循環(huán)開始時進(jìn)行,但是當(dāng)然也可以在隨后時間進(jìn)行。步驟(b)中的洗滌操作是通過機(jī)械力作用于織物材料和洗滌液的混合物而以已知方式進(jìn)行的??梢酝ㄟ^洗衣機(jī)輸入機(jī)械力,例如通過滾筒,或在手洗的情況下,通過手和/或其它輔助手段。在洗滌操作過程中的溫度由本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)情況選擇。例如,溫度可以是5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100。C。發(fā)明的特別優(yōu)勢非常特別體現(xiàn)在中溫或低溫洗滌的情況中。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中,洗滌操作在不超過60。C,尤其在不超過50。C的溫度下進(jìn)行。根據(jù)發(fā)明進(jìn)行洗滌過程的特別有利的溫度范風(fēng)是5至45。C,非常特別優(yōu)選的15至35。C,例如20至30。C。在洗滌操作過程中界面活性非,蛋白質(zhì)的濃度由本領(lǐng)域技術(shù)人員選擇。優(yōu)選的濃度范圍已經(jīng)在前文論述。如果添加通過發(fā)明的洗滌組合物實(shí)現(xiàn),它們通常的使用量是0.05至25g/1,優(yōu)選的0.25至15g/1,更優(yōu)選的0.5至10g/1,甚至更優(yōu)選的1至6g/1,例如1.5至4g/1,在每種情況中基于洗滌液。在實(shí)際的洗滌操作后,洗涂液以原則上已知的方法移除。一般的,織物材料隨后通過一次或多次漂洗操作漂洗,并最終干燥(步驟(d)和(e))。在漂洗過程中,織物柔軟劑(softner)可以作為添加劑使用。根據(jù)發(fā)明的方法適合于清潔所有類型的織物材料。這些可以是織物纖維、半成品的和成品的織物及用其生產(chǎn)的成品衣服。這些可以是慣用的衣服織物,或者家庭紡織品,例如地趙、窗簾、桌布和作為技術(shù)目的起作用的織物結(jié)構(gòu)。這些還包括不定型的結(jié)構(gòu)例如羊毛狀物(fleece),線狀結(jié)構(gòu)例如細(xì)繩(twine)、線、紗線、線(line)、繩(string)、飾帶、編織物(knit)、繩索,還有三維結(jié)構(gòu)例如氈、機(jī)織織物、非機(jī)織織物和填絮??椢锊牧峡梢杂商烊粊碓吹牟牧辖M成,例如棉花、羊毛或亞麻,或由合成材料組成,例如聚丙烯腈、聚酰胺或聚酯??梢岳斫馑鼈冞€可以是混合織物,例如棉/聚酯或棉/聚酰胺。下列實(shí)施例意在進(jìn)一步舉例說明本發(fā)明A部分制備和檢測根據(jù)發(fā)明使用的疏7jc蛋白實(shí)施例1克隆yaad-His6/yaaE-His6的制備借助于寡核苷酸Hal570和Hal571(Hal572/Hal573)進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。使用的模版DNA是細(xì)菌枯草芽孢桿菌的基因組DNA。得到的PCR片段包括枯草芽胞桿菌yaaD/yaaE基因的編碼序列,在每一端上分別都有Ncol和Bglll限制性切割位點(diǎn)。將PCR片段純化并用限制性內(nèi)切酶Ncol和Bglll切割。將該DNA片段用作插入片段并克隆到Qiagen的載體pQE60中,所述載體已經(jīng)用限制性內(nèi)切酶Ncol和Bglll預(yù)先線性化。因此形成的載體pQE60YAAD#2/pQE60YaaE#5可以用于表達(dá)由YAAD::HIS6或YAAE::HIS6組成的蛋白質(zhì)。Hal670:g鄰鄰coGatggGtcaaat^gQtactgaHal571:gcagatctasagopgcgttcttgcatac;Ha,572:gfgccatgggattaacaaitaggtgtactaggHa,573:gcagatdttacaagtg:ccttttgcttatattee實(shí)施例2yaad疏水蛋白DewA-His6的克隆借助于寡核苷酸KaM416和KaM417進(jìn)行聚合膝漣式反應(yīng)。使用的模版DNA是霉菌構(gòu)巢曲霉的基因組DNA。得到的PCR片段包括疏水蛋白基因dewA的編碼序列以及N端的因子Xa蛋白酶切割位點(diǎn)。將PCR片段純化并用限制性內(nèi)切酶BamHI切割。將該DNA片段用作插入片段并克隆到已經(jīng)用限制性內(nèi)切酶BglII預(yù)先線性化的栽體pQE60YAAD弁2中。由此形成的載體#508可以用于表達(dá)由YAAD::Xa::dewA::HIS6組成的融合蛋白。KaM416;GCAGCCC馬AGGGATCCCTGAGCCTTGGTACCAGCGCKa國7:GCCGTAGCTAGTGGATCeATTGAAGGGCGGAT-GAAGTTCTCCGTCTCCGC實(shí)施例3yaad疏水蛋白RodA-His6的克隆1吏用寡核苷酸KaM434和KaM435,與質(zhì)粒#508類似的克隆質(zhì)粒#513。隨434:GCTAAGCGGATCCATTGAAGGCCGCATGAAGTTCTCCATTGCTGCKaM435:CCAATGGGGATCCGAGGATGGAGCCAAGG(S實(shí)施例4yaad疏水蛋白HypA-His6的克隆在pQE60(#522)中HypA的克隆使用寡核苷酸KaM449/KaM450進(jìn)行PCR。使用的才莫版DNA是Nadicom生產(chǎn)的質(zhì)粒pCR2.1中的HypA。得到的片段包括疏水蛋白HypA基因的沒有起始和終止密碼子的編碼序列。將PCR片段用凝膠電泳純化并用限制性內(nèi)切酶Ncol和BamHI切割。將該片段用作插入片段并連接到用Ncol和BglII預(yù)先切割的載體pQE60中。KsM機(jī)GTTACCCCATGGCGATGTCTCGCGTCCTTGTCGCT<image>imageseeoriginaldocumentpage28</image>在pQE60+YAAD(#523)中的HypA的克隆用寡核苦酸KaM451/KaM452進(jìn)行PCR。使用的模版DNA是Nadicom生產(chǎn)的質(zhì)粒pCR2.1中的HypA。得到的片段包括疏水蛋白HypA基因的沒有起始和終止密碼子的編碼序列。將PCR片段用凝膠電泳純化并用限制性內(nèi)切酶BglII和BamHI切割。將該片段用作插入片段并連接到已經(jīng)用BglII預(yù)先切割的載體pQE60+YAAD中。KaM451:CGTAGTAGATCTATCATCTCTCGCGTCCTTGTCGCTGCKaM452:CGACTA(3GATCCGAGGTTGACATTGACAGGAGAGCT5啟動子/laclMil元件實(shí)施例5yaad疏水蛋白HypA-His6的克隆在pQE60(#524)中的HypB的克隆用寡核苷酸KaM453/KaM454進(jìn)行PCR。使用的模版DNA是Nadicom生產(chǎn)的質(zhì)粒puC19中的HypB。得到的片段包括疏7jC蛋白HypB基因的沒有起始和終止密碼子的編碼序列。將PCR片段用凝膠電泳純化并用限制性內(nèi)切酶Ncol和BamHI切割。將該片段用作插入片段并連接到已經(jīng)用Ncol和BglII預(yù)先切割的載體pQE60中。Ka453:GCTTATCCATGGCGGTCAGCAC(3TTGATCACTGTCG醒454:GCTATAGGATCCCACATTGGCATTAATGGGAGPGC<image>imageseeoriginaldocumentpage30</image>pQE60+YAAD(#525)中的HypB的克隆用寡核苷酸KaM455/KaM456進(jìn)行PCR。使用的模版DNA是Nadicom生產(chǎn)的質(zhì)粒puC19中的HypB。得到的片段包括疏水蛋白HypB基因的沒有起始和終止密碼子的編碼序列。將PCR片段用凝膠電泳純化并用限制性內(nèi)切酶BglII和BamHI切割。將該片段用作插入片段并連接到已經(jīng)用BglII預(yù)先切割的載體pQE60+YAAD中。Ka簡5:GCTAACAGATOTATG(3TCAC3CACGTTeATCACTGTCKaM456:CTATGAGGATCCCACATTGGGATTAATG(3GAGTGCT5啟動子/lac操縱元件實(shí)施例6yaad疏水蛋白BASF1-His6的克隆4吏用寡核苷酸KaM417和KaM418,與質(zhì)粒#508類似的克隆質(zhì)粒#507。使用的模版DNA是合成的DNA序列-疏水蛋白BASF1(見附錄)。KaM417:CCCGTA3eTAGTGGATCCATTGAAGGGCGCAT-GAAGTTCTCCGTCTCCGCKa關(guān)8:CTGCCATTCA(3GGGATCCCM7VrGQAG(MGGGAGACAG實(shí)施例7yaad疏水蛋白BASF2-His6的克隆寸吏用寡核苷酸KaM417和KaM418,與質(zhì)粒#508類似的克隆質(zhì)粒#506,。使用的模版DNA是合成的DNA序列-疏水蛋白BASF2(見附錄)。Ka國7:CCCGTAGCTAGTGGATCCATTGAAGGCGGCAT"GAAGTTCTGCGTGTCCGCKa薩8:CTGCCATTGAGGGGATCCCAmTGGAGGAGGGAGACAG實(shí)施例8yaad疏水蛋白SC3-Hiss的克隆使用寡核苷酸KaM464和KaM465,與質(zhì)粒#508類似的克隆質(zhì)粒#526。使用的模版DNA是來自裂褶菌的cDNA(見附錄)。K錢IVW64:CGTTAAGGATCCGAGGATGTTGATGGGGGTGCKa聽5:GCTMCAGATCTATC3TTCGCCCGTCTCCCCGTCGT實(shí)施例9重組大腸桿菌菌林yaad疏水蛋白DewA-His6的發(fā)酵用表達(dá)yaad疏水蛋白DewA-His6的大腸桿菌菌林在15mlGreiner管中接種3mlLB液體培養(yǎng)基。在200轉(zhuǎn)/分鐘搖動器上,37。C孵育8小時。在每種情形下,用lml預(yù)培養(yǎng)物分別接種兩個帶擋板的1l錐形瓶和250mlLB培養(yǎng)基(+100pg/ml氨千青霉素),并在180轉(zhuǎn)/分鐘搖動器上37。C孵育9小時。在201發(fā)酵罐中用0.51預(yù)培養(yǎng)物(OD6。。nm1:10,對H20測量的)接種13.51LB培養(yǎng)基(+100jug/ml氨千青霉素)。在OD60nm約3.5時,加入140mll00mMIPTG。3小時后,冷卻發(fā)酵罐到l(TC并離心去掉發(fā)酵肉湯。使用細(xì)胞粒狀沉淀進(jìn)行進(jìn)一步的純化。實(shí)施例10重組疏水蛋白融合蛋白的純化(帶有C端His6標(biāo)簽的疏水蛋白融合蛋白的純化)100g細(xì)胞粒狀沉淀(100-500mg疏水蛋白)加入50mMpH7.5的磷酸鈉緩沖液至總體積200ml,并且重懸。懸液用Ultraturrax型T25(Janke和Kunkel;IKA-Labortechnik)處理10分鐘,然后與500單位的Benzonase(Merck,Darmstadt;貨號1.01697.0001)—起在室溫下孵育1小時,以降解核酸。在細(xì)胞破壞前,用玻璃柱(cartridge)(PI)實(shí)現(xiàn)過濾。為了破壞細(xì)胞和剪切剩余的基因組DNA,在1500bar(MicrofluidizerM-110EH;MicrofluidicsCorp.)進(jìn)行兩個勻漿器循環(huán)。離心勻漿(SorvallRC-5B、GSA轉(zhuǎn)子、250ml離心杯、60分鐘、4。C、12000轉(zhuǎn)/分鐘、23000g),將上清氣改置在冰上并且將粒狀沉淀重懸在100mlpH7.5的磷酸鈉緩沖液中。離心和重懸重復(fù)3次,在第三次重復(fù)中磷酸鈉緩沖液包含1%的SDS。重懸后,將混合物攪拌1小時并進(jìn)行最終離心(SorvallRC-5B,GSA轉(zhuǎn)子,250ml離心杯,60分鐘,4°C,12000轉(zhuǎn)/分鐘,23000g)。根據(jù)SDS-PAGE分析,在最終離心后疏水蛋白存在于上清液中(圖1)。實(shí)驗(yàn)顯示了疏水蛋白可能以內(nèi)含體的形式存在于相應(yīng)的大腸桿菌細(xì)胞中。將50ml含有疏水蛋白的上清液用于50ml鎳瓊脂糖高精確性(nickelSepharoseHighPerformance)17-5268-02柱(Amersham)上,所述柱已經(jīng)用50mMTris-ClpH8.0緩沖液平衡。用50mMTris-ClpH8.0緩沖液洗滌柱子,然后用含有200mM咪唑的50mMTris-ClpH8.0緩沖液洗脫疏水蛋白。為了移除掉咪唑,溶液用50mMTris-ClpH8.0緩沖液透才斤。圖1顯示了制備的疏水蛋白的純化泳道l:應(yīng)用于鎳-瓊脂糖柱(l:IO稀釋)泳道2:流通液(Flow-through)-洗滌步驟洗脫物泳道3-5:OD280最大值的分級級分圖1的疏水蛋白分子量是約53kD。一些更小的條帶代表疏7jc蛋白的降解產(chǎn)物。實(shí)施例11性能檢測;通過水滴在玻璃上的接觸角改變表征疏水蛋白底物玻璃(窗玻璃,StiddeutscheGlas,Mannheim)使用實(shí)施例10中的融合疏水蛋白。疏水蛋白濃度在水溶液中100照/ml;添加劑50mM乙酸鈉pH4+0.1%聚氧乙烯(20)-失水山梨糖醇單月桂酸酯(Tween⑧20)。-孵育玻璃板過夜(溫度80。C),然后在蒸餾水中洗滌包被,-然后孵育10分鐘/80。C/在蒸餾水中的l。/o十二烷基硫酸鈉(SDS)溶液,-在蒸餾水中洗滌樣品在空氣中干燥,在室溫下測定5pl水的水滴的接觸角(以角度)。在DataphysicsOCA15+接觸角系統(tǒng)上、軟件SCA20.2.0.(2002年11月)測量接觸角。測量是根據(jù)制造商的說明實(shí)現(xiàn)的。未處理的玻璃產(chǎn)生的接觸角是30士5。;用根據(jù)實(shí)施例8的功能性疏水蛋白(yaad-dewA-his6)包被的玻璃產(chǎn)生的接觸角為75±5。。B部分界面活性非齊&蛋白質(zhì)用于織物洗滌的應(yīng)用一般檢測描述為了檢測作用,在商業(yè)購買的檢測裝置(Launder-o-meter,,來自Atlas,美國)中進(jìn)行洗滌檢測。在洗滌液中添加和未添加蛋白質(zhì)的各種情況下進(jìn)行檢測。檢測4吏用了可商業(yè)購買的檢測織物和家庭產(chǎn)生的檢測織物。<table>tableseeoriginaldocumentpage34</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table>從上述每種檢測織物上截下30x30mm的片,并縫在編織的未染色的漂白棉布上。對于商業(yè)的檢測織物的情形中,每種情形中將2條(50mmx200mm)與5g白色棉/聚酯混合織物一起在給定條件下洗滌,所述白色棉/聚酯混合織物上帶有4塊(對于織物1-4)(每種情形中),或2塊(在織物5和6的情形中)(每種情形中)不同的縫好的檢測織物。在自產(chǎn)的檢測織物的情形中,在O.lg染色的脂肪或油的每個情形中的2個污點(diǎn)滴在棉條上(50mmx200mm編織的未染色的漂白棉布),并在50。C處理30分鐘。用蘇丹紅染色。在洗滌后,織物在250ml自來水中漂洗5分鐘,然后干燥。通過洗滌前后在420nm處的反射度測量評估洗滌作用。每種情況進(jìn)行一次添加界面活性非IH^蛋白質(zhì)的檢測,以及在相當(dāng)?shù)臈l件下,進(jìn)行沒有此類添加劑但條件完全相同的檢測。在結(jié)果表格中列出的百分比表明,與沒有蛋白質(zhì)添加的檢測相比,有蛋白質(zhì)添加的檢測中洗滌作用增加,根據(jù)下列公式計(jì)算洗滌作用的增加[%]=(1£國1犯)/(1白-Ia)xIOO在各種情況下,lE在此表示檢測織物在檢測洗滌后的反射度,Ia表示在檢測洗滌進(jìn)行前的反射度。O表示沒有添加發(fā)明的蛋白質(zhì)的比較檢測。I白表示沒有著色的干凈織物的反射度。在添加和未添加蛋白質(zhì)檢測的各種情況中,污垢的再沉積也相應(yīng)的通過比較沒有著色的干凈白色織物在洗滌前后的反射度來評估。實(shí)施例12檢測參數(shù)使用的蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)的濃度洗滌組合物洗滌液的量洗滌組合物的劑疏水蛋白融合蛋白質(zhì)yaad-Xa-dewA-his(SEQIDNO:19)見表l可商業(yè)購買的粉狀洗滌組合物(WhiteCat(白貓),中國,2003)每罐250ml2.0g/1'液體比例水狄洗滌溫度洗滌時間20:12.5mmol/1(摩爾Ca:Mg比=3:1)25°C30分鐘蛋白質(zhì)作為稀釋水溶液添加。根據(jù)上文給出的一般描述進(jìn)行并評估檢測洗滌。結(jié)果匯集在表l中。實(shí)施例13檢測參數(shù)使用的蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)的濃度:洗滌組合物洗滌液的量洗滌組合物的劑疏水蛋白融合蛋白質(zhì)yaad-Xa-dewA-his(SEQIDNO:19)見表l可商業(yè)購買的粉狀洗滌組合物(Ariel,中國,2004,來自Procter&Gamble)每罐250ml2.0g/1液體比例20:1水硬度2.5mmol/1(摩爾比Ca:Mg=3:1)洗滌溫度25°C洗滌時間30分鐘根據(jù)上文給出的一般描述進(jìn)行并評估檢測洗滌。結(jié)果匯集在表1中。表l:檢測洗滌的結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>在所有檢測中,都實(shí)現(xiàn)了洗滌作用的顯著增強(qiáng)。實(shí)施例14:對于下列檢測洗滌,每種情況下使用由陰離子表面活性劑、非離子表面活性劑和助洗劑組成的洗滌組合物的模式配方。檢測參數(shù)j吏用的蛋白質(zhì)疏水蛋白融合蛋白yaad40-Xa-dewAhis(SEQIDNO:26)蛋白質(zhì)的濃度見表2陰離子表面活性劑非離子輔助表面活性劑助洗劑400ppm的<:12/14一脂肪醇硫酸鈉在每種情況下30ppm的C13/15-羰基合成醇乙氧基化物,烷氧基(alkoxylateradical)類型見表2250ppm的碳酸鈉洗涂液的:、液體比例-級洗滌溫度洗滌時間每罐250ml20:12.5mmol/1(摩爾比Ca:Mg=3:1)25°C30分鐘根據(jù)上文給出的一般描述進(jìn)行并評估檢測洗滌。結(jié)果匯集在表2中。<table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>表2檢測洗滌的結(jié)果EO-環(huán)氧乙烷,PO-氧化丙烯實(shí)施例15對于下列洗滌檢測,各種情況中使用由陰離子表面活性劑,非離子表面活性劑和助洗劑組成的洗滌組合物的沖莫式配方。檢測參數(shù)使用的蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)A:疏水蛋白融合蛋白質(zhì)yaad-Xa-dewA-his(SEQIDNO:19)蛋白質(zhì)B:疏水蛋白融合蛋白質(zhì)yaad40-Xa-dewA-his(SEQIDNO:26)蛋白質(zhì)濃度見表3陰離子表面活性400ppm的N-十二烷基輛酸鈉輔助表面活性劑在各種情況下30ppm,類型見表3助洗劑250ppm的碳酸鈉洗滌液的量250ml液體比例20:17K石嫂2.5mmo1/1(摩爾比Ca:Mg=3:1)洗涂溫度25°C洗滌時間30分鐘根據(jù)上文給出的一般描述進(jìn)行并評估檢測洗滌。結(jié)果總結(jié)在表3中。<table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table>表3檢測洗滌的結(jié)果EO-環(huán)氧乙烷,PO-氧化丙烯在所有的檢測中,每種情形中都實(shí)現(xiàn)了洗滌作用的增強(qiáng)。在每種情形中,帶有截短的yaad融合配偶體(B)(40個^i^酸)的融合疏水蛋白比帶有全長yaad融合配偶體(294個M酸)的融合疏水蛋白(A)獲得了更好的結(jié)果。序列表中DNA和多肽序列的序列名稱的排列<table>tableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage42</column></row><table>權(quán)利要求1.界面活性非酶促蛋白質(zhì)用于織物洗滌的應(yīng)用。2.根據(jù)權(quán)利要求l的應(yīng)用,其中所述蛋白質(zhì)的特征在于以下性質(zhì)與水滴和未包被的玻璃表面的接觸角相比,所述蛋白質(zhì)在室溫下應(yīng)用到玻璃表面后使得等大水滴的接觸角增加至少20。。3.根據(jù)權(quán)利要求2的應(yīng)用,其中蛋白質(zhì)是疏水蛋白。4.根據(jù)權(quán)利要求3的應(yīng)用,其中蛋白質(zhì)是融合疏水蛋白,其中融合配偶體包括20至500個氨基酸。5.根據(jù)權(quán)利要求3的應(yīng)用,其中疏水蛋白是至少一個選自yaad畫Xa-dewA畫his(SEQIDNO:20)、yaad-Xa陽rodA-his(SEQIDNO:22)或yaad-Xa-basfl-his(SEQIDNO:24)的疏水蛋白,其中的限制性條件是在每種情形中yaad也可以是具有20至293個氛基酸的截短的yaad融合配偶體。6.根據(jù)權(quán)利要求1至5的任一項(xiàng)的應(yīng)用,其中所述蛋白質(zhì)在洗滌液中以0.05至50ppm的濃度j吏用。7.根據(jù)權(quán)利要求1至6的任一項(xiàng)的應(yīng)用,其中所述蛋白質(zhì)與陰離子和/或非離子表面活性劑聯(lián)合使用,所i^面活性劑包括線性烷基M酸鹽或脂肪醇硫酸鹽與烷基醚硫酸鹽或烷基烷氧基化物的組合。8.用于織物洗滌的洗滌組合物,其包含至少一種洗滌活性物質(zhì),其中洗滌組合物還包含至少一種界面活性非降&蛋白質(zhì)。9.根據(jù)權(quán)利要求8的洗滌組合物,其中蛋白質(zhì)的特征在于以下性質(zhì)與水滴和未包被的玻璃表面的接觸角相比,所述蛋白質(zhì)在室溫下應(yīng)用到玻璃表面后使得等大水滴的接觸角增加至少20。。10.根據(jù)權(quán)利要求9的洗滌組合物,其中蛋白質(zhì)是疏水蛋白。11.根據(jù)權(quán)利要求10的洗滌組合物,其中蛋白質(zhì)是融合疏水蛋白,其中融合配偶體包含20至500個氨基酸。12.根據(jù)權(quán)利要求11的洗滌組合物,其中疏水蛋白是至少一個選自yaad曙Xa-dewA畫his(SEQIDNO:20)、yaad-Xa-rodA-his(SEQIDNO:22)或yaad-Xa-basfl-his(SEQIDNO:24)的疏水蛋白,其中的限制性條件是在每種情形中yaad也可以是具有20至293個氨基酸的截短的yaad融合酉己^f禹^。13.根據(jù)權(quán)利要求8至12的任一項(xiàng)的洗滌組合物,其中界面活性非酶促蛋白質(zhì)的量為洗滌組合物所有成分的0.002至2.5%(重量)。14.根據(jù)權(quán)利要求13的洗滌組合物,其包含(a)0.01至1.5%(重量)的界面活性非iHl蛋白質(zhì),(b)0.5至40%(重量)的表面活性劑,和(c)59至99.45%(重量)的其它洗滌活性添加劑或配制助劑。15.根據(jù)權(quán)利要求14的洗滌組合物,其中所^A面活性劑是陰離子和/或非離子表面活性劑。16.根據(jù)權(quán)利要求15的洗滌組合物,其中表面活性劑是線性烷基苯磺酸鹽或脂肪醇硫酸鹽與烷基醚硫酸鹽或垸基烷氧基化物的組合。17.用于洗滌織物材料的方法,其至少包括以下步驟(a)用待洗的織物材料和含水洗滌液裝填洗滌用具,(b)將機(jī)械力用于織物材料和洗滌液的混合物,(c)移除含水洗滌液以及任選的漂洗織物材料,以及(d)干燥織物材料,其中,含水的洗滌液包含至少一種界面活性非酶促蛋白質(zhì)。18.根據(jù)權(quán)利要求17的方法,其中蛋白質(zhì)的特征在于以下性質(zhì)與水滴和未包被的玻璃表面的接觸角相比,所述蛋白質(zhì)在室溫下應(yīng)用到玻璃表面后使等大水滴的接觸角增加至少20°。19.根據(jù)權(quán)利要求18的方法,其中蛋白質(zhì)是疏水蛋白。20.根據(jù)權(quán)利要求19的方法,其中蛋白質(zhì)是融合疏7K蛋白,其中融合配偶體包括20至500個氨基酸。21.根據(jù)權(quán)利要求20的方法,其中疏水蛋白是至少一個選自yaad-Xa-dewA-his(SEQIDNO:20)、yaad-Xa-rodA-his(SEQIDNO:22)或yaad-Xa-basfl-his(SEQIDNO:24)的疏水蛋白,其中的限制性^^是在每種情形中yaad也可以是具有20至293個氨基酸的截短的yaad融合配偶體o22.根據(jù)權(quán)利要求17至21的任一項(xiàng)的方法,其中蛋白質(zhì)與陰離子和/或非離子表面活性劑聯(lián)合使用,所W面活性劑包括線性烷基M酸鹽或脂肪醇硫酸鹽與烷基醚硫酸鹽或烷基烷氧基化物的組合。23.根據(jù)權(quán)利要求17至22的任一項(xiàng)的方法,其中洗滌操作在不超過60。C的溫度下進(jìn)行。24.根據(jù)權(quán)利要求17至22的任一項(xiàng)的方法,其中洗滌操作在5至45。C的溫度下進(jìn)4亍。25.根據(jù)權(quán)利要求17至22的任一項(xiàng)的方法,其中洗滌操作在15至35。C的溫度下進(jìn)行。26.根據(jù)權(quán)利要求17至15的任一項(xiàng)的方法,其中所述蛋白質(zhì)在洗滌液中以0.05至50ppm的濃度4吏用。全文摘要本發(fā)明涉及表面活性非酶促蛋白質(zhì)在織物洗滌中的用途、用于織物洗滌的包括界面活性非酶促蛋白質(zhì)的去污劑,以及使用所述蛋白質(zhì)的洗滌方法。文檔編號C11D3/00GK101233220SQ200680028317公開日2008年7月30日申請日期2006年7月27日優(yōu)先權(quán)日2005年8月1日發(fā)明者C·博爾施韋勒,D·伯克,H-G·勒邁爾,M·考羅什,T·薩布科夫斯基,T·蒙塔格,U·鮑斯,V·施文德曼申請人:巴斯福股份公司
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