一種白頭翁與蠐螬有效部位配伍后抗rsv病毒的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于中藥活性成分提取工藝及抗病毒有效部位的分離，主要涉及白頭翁與蠐螬提取物配伍后抗RSV病毒有效成分的分離方法，具體步驟為采用蒸餾水回流提取白頭翁、蠐螬，醇沉，抗病毒，溶解沉淀，采用X?5型號的大孔吸附樹脂對白頭翁提取物進行分離效果較好，采用D101型號的大孔吸附樹脂對蠐螬提取物進行分離效果較好，確定抗病毒有效部位。然后將兩種藥物的有效部位，分別按9:1、8:2、7:3、6：4、5：5、4：6、3：7、2：8、1：9比例配伍，再次進行抗EV?71病毒研究。本發(fā)明采用抗病毒追蹤的方法發(fā)現(xiàn)了藿香與蠐螬抗病毒有效部位經(jīng)過配伍后，抗病毒效果較好，并且找到最佳配伍比例。
【專利說明】一種白頭翁與蠐螬有效部位配伍后抗RSV病毒的制備方法
[0001]
技術(shù)領(lǐng)域
[0002]本發(fā)明涉及中藥活性成分生產(chǎn)提取工藝，涉及白頭翁、蠐螬抗病毒有效部位提取的新思路新方法以及在制藥領(lǐng)域的新用途，具體涉及利用抗病毒追蹤的方式提取分離純化白頭翁、蠐螬抗呼吸道合胞病毒的有效成分，以及有效成分進行配伍后的抗病毒研究。
【背景技術(shù)】
[0003]近年來由于各種病毒的突然入侵，比如SARS病毒，甲型HlNl等，每一次病毒的爆發(fā)都會導(dǎo)致人類的恐慌甚至死亡，所以找到合適的抗病毒藥物至關(guān)重要。
[0004]白頭翁為毛莫科植物白頭翁的干燥根，又名老翁花、白頭草、粉草、老冠花，生于山野、荒坡及田野間，分布于東北、華北、西北、華東等地。
[0005]白頭翁始載于《本經(jīng)》，具有清熱解毒、涼血止痢的功效，可用于治療熱毒血痢、陰癢帶下、阿米巴痢等。
[0006]呼吸道合胞病毒是導(dǎo)致嬰幼兒急性下呼吸道感染最重要的病原體之一，還可引起間質(zhì)性肺炎及毛細支氣管炎等同時也可以引起老年人和免疫缺陷病人住院和肺炎死亡。
[0007]利巴韋林是廣譜的對呼吸道合胞病毒有一定療效的抗病毒藥物。然而，研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過呼吸道合胞病毒感染的棉鼠模型出現(xiàn)了利巴韋林的抵抗株，并且對患者和醫(yī)務(wù)人員有潛在毒性，所以只有出現(xiàn)嚴重的RSV感染患者是才使用此藥物，因此探索對呼吸道合胞病毒具有抑制作用的新物質(zhì)為時代所必需。
[0008]蠐螬在祖國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中有著悠久的使用歷史。有破血、行瘀、散結(jié)、通乳等功效，用于治療折損瘀痛、破傷風(fēng)、喉痹、目翳等病癥。
[0009]在藥理學(xué)方面，蠐螬提取物具有抗腫瘤、治療口瘡和眼部疾病等多種生物活性，是一種極具研究和開發(fā)價值的動物藥。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0010]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是明確了白頭翁和蠐螬抗RSV病毒的有效部位，為該有效部位的分離提取提供了一種利用抗病毒追蹤的方式制備白頭翁、蠐螬抗病毒有效部位的新方法，并且找到兩者的最佳配伍比例。
[0011]本發(fā)明的優(yōu)點是，本發(fā)明首次分離出了白頭翁、蠐螬中具有抗RSV病毒的一種有效部位，并發(fā)明了一種抗病毒追蹤的方法對該有效部位進行了制備，此分離方法目的性強，簡單節(jié)省了大量的人力物力，優(yōu)于傳統(tǒng)的系統(tǒng)分離。制備得到的有效部位對RSV病毒具有較好的治療作用。
[0012]本發(fā)明白頭翁與蠐螬有效部位抗病毒的最佳配伍比例為2:3部位及最佳配伍比例的制備方法，包括如下步驟:
(I)取一定量的白頭翁、蠐螬藥材分別用10倍的水加熱回流提取2次，第一次2小時第二次1.5小時。
[0013](2)合并兩次的提取液減壓濃縮，濃縮至每毫升藥液含有I克的藥材，然后加乙醇調(diào)節(jié)乙醇的濃度為70%，靜置24小時。過濾得到沉淀和上清液。
[0014](3)將上清液回收乙醇，將沉淀用水溶解，分別進行抗病毒實驗。實驗顯示沉淀的抗病毒效果較好。
[0015](4)取一定的D101、X—5、HPD100、DM130、AB-8型號大孔吸附樹脂分別用95%的乙醇浸泡24小時，之后裝柱，用蒸餾水洗至無醇味，然后用5倍柱體積5%的鹽酸水溶液進行沖洗浸泡3個小時，之后用蒸餾水沖至PH等于7，再用5倍柱體積的5%的NaOH水溶液進行沖洗浸泡3個小時，之后用蒸餾水沖至PH等于7，備用。
[0016](5 )取(3 )中的沉淀上樣于處理好的大孔樹脂柱，分別用水，25%乙醇，50%乙醇，75%乙醇進行沖洗，每個洗脫液中每200ml接一瓶，并且沖洗到?jīng)]有顏色之后再換下一個洗脫液。
[0017](6)將上述接到的樣品進行抗病毒實驗。實驗顯示經(jīng)過大孔樹脂的篩選，白頭翁對X-5大孔樹脂的效果較好，蠐螬對DlOl大孔吸附樹脂效果較好白頭翁與蠐螬水部位抗病毒效果很好。
[0018](7)將白頭翁與蠐螬的水部位分別以9:1、8:2、7:3、6:4、5:5、4:6、3:7、2:8、1:9的比例進行配伍，結(jié)果顯示比例2:3為最佳配伍比例。
【具體實施方式】
[0019]
實例I (I)稱取一定量的白頭翁、蠐螬分別加10倍量加熱回流提取兩次，第一次2小時，第二次1.5小時，合并兩次提取液，減壓濃縮至每毫升藥液含有I克的藥材，加乙醇調(diào)節(jié)溶液乙醇的濃度為70%，靜置24小時。
[0020](2)將(I)得到的醇沉液減壓抽濾，得到沉淀，將沉淀用蒸餾水超聲溶解。
[0021](3)將(2)得到的溶液上樣于處理好的X_5、D101大孔吸附樹脂，用水進行沖洗，每200ml接一瓶，沖洗至無色。
[0022](4)合并(3)中水洗脫部位，濃縮至一定體積，分別進行抗病毒研究。
[0023](5)將(4)中得到的經(jīng)過X-5樹脂篩選的白頭翁水洗脫部位與經(jīng)過DlOl樹脂篩選的蠐螬水洗脫部位水洗脫部位分別以9:1、8:2、7:3、6:4、5:5、4:6、3:7、2:8、1:9的比例進行配伍，再次進行抗病毒實驗，結(jié)果顯示白頭翁與蠐螬配伍后抗病毒效果較好，并且比例2:3為最佳配伍比例。
【主權(quán)項】
1.白頭翁與蠐螬提取物經(jīng)配伍后具有抗RSV病毒作用的有效成分以及一種利用抗病毒追蹤的方式提取分離純化該有效成分的工藝方法，其特征在于白頭翁、蠐螬的水提醇沉的沉淀部位具有抑制RSV病毒的效果，首先利用水提醇沉，其次利用X-5、D101型號的大孔樹脂分離，在每一步的提取分離之后要進行抗病毒追蹤出有效部位的所在，再將有抗病毒作用的部位進行配伍，最后進行抗病毒實驗研究，得出最佳的配伍方案。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的有效部位其特征在于該有效部位為水提醇沉的沉淀部位，經(jīng)大孔樹脂分離后，水部位為白頭翁與蠐螬抗病毒的有效部位，水部位的最佳配伍比例為2:3。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述提取分離方法，其特征在于水回流提取的料液比為1:10，提取次數(shù)兩次，提取時間為第一次2小時，第二次1.5小時。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述提取分離方法，其特征在于水提液的濃縮液濃度為lg/ml，醇沉濃度為70%，醇沉?xí)r間為24小時。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述提取分離方法，其特征在于醇沉之后進行減壓抽濾，得到沉淀和上清液，然后進行抗病毒實驗得到沉淀為抗病毒有效部位。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述提取分離方法，其特征在于所用的大孔樹脂型號為X_5、D101，洗脫液為水，25%乙醇，50%乙醇，75%乙醇每200ml接一瓶，每個梯度沖至無色。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述提取分離方法，其特征在于將白頭翁提取物的洗脫液進行抗病毒實驗，得到水部位為有效部位。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述提取分離方法，其特征在于將蠐螬提取物的洗脫液進行抗病毒實驗，得到水部位為有效部位。9.根據(jù)權(quán)利要求1所述提取分離方法，其特征在于將白頭翁水部位與蠐螬水部位按一定比例配伍，配伍比例分別為9:1、8:2、7:3、6:4、5:5、4:6、3:7、2:8、1:9。10.根據(jù)權(quán)利要求1所述提取分離方法，其特征在于最佳抗病毒配伍比例為2: 3。
【文檔編號】A61K35/64GK106038725SQ201610558451
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年7月16日
【發(fā)明人】周長征, 牛文斐, 侯寶山, 張加澤, 王清
【申請人】周長征