益智精油作為促透劑在藥物透皮傳輸和化妝品領(lǐng)域的應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種以益智的精油為主要研究對(duì)象，考察其對(duì)藥物經(jīng)皮滲透的促進(jìn)作用。經(jīng)系統(tǒng)考察后，益智果實(shí)精油和葉子精油具有較強(qiáng)的促透作用，濃度為3％時(shí)兩者對(duì)藥物的促透作用明顯優(yōu)于常用皮膚促透劑氮酮。且經(jīng)GC-MS分析兩種精油的主要成分區(qū)別在于烷烴萜烯類和含氧萜烯類的成分含量具有一定的差別，導(dǎo)致其對(duì)藥物的促透作用具有一定的差異。此外，皮膚刺激性試驗(yàn)結(jié)果證明兩種精油在適當(dāng)?shù)臐舛任磳?duì)動(dòng)物皮膚引起任何紅斑或水腫。因此，顯著的促透作用和對(duì)皮膚的安全性使益智精油在藥物傳輸領(lǐng)域和化妝品領(lǐng)域具有廣闊的開發(fā)應(yīng)用前景。
【專利說明】
益智精油作為促透劑在藥物透皮傳輸和化妝品領(lǐng)域的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及一種海南道地藥材益智的精油作為皮膚滲透促進(jìn)劑的研究方法，采用 水蒸氣蒸餾法分別提取益智果實(shí)和葉子精油，以健康大鼠背部離體皮膚為滲透屏障，吲哚 美辛為被促藥物模型，體外Franz擴(kuò)散池為滲透裝置，UPLC-PDA為檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行含量分析， 以GC-MS分析比較兩種精油成分，以新西蘭大耳白兔進(jìn)行皮膚刺激性試驗(yàn)考察精油的安全 性，其屬于醫(yī)藥以及化妝品技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 皮膚角質(zhì)層的屏障作用使多數(shù)藥物的透皮滲透速率難以滿足治療需要。透皮吸 收促進(jìn)劑（促透劑），能夠可逆的改變皮膚角質(zhì)層屏障功能而又不損傷任何活性細(xì)胞，能 夠增強(qiáng)藥物的透皮能力提高藥物透皮量。化妝品中的透皮吸收，指的是化妝品中的營(yíng)養(yǎng)活 性成分能夠按照產(chǎn)品的有效性作用于皮膚表面或進(jìn)入表皮或真皮，并在該部位積聚和發(fā)揮 作用；若營(yíng)養(yǎng)成分不能被皮膚完全吸收，則會(huì)造成皮膚表面營(yíng)養(yǎng)成分過剩，寄生細(xì)菌大量繁 殖，從而導(dǎo)致皮膚感染，由此可見促透劑在化妝品中的重要性，常用促透劑主要有天然促透 劑和合成促透劑。然而，某些合成促透劑（如：二甲基亞砜）的毒性及刺激性限制了其臨床 應(yīng)用。因此，天然促透劑受到研究者的廣泛關(guān)注，尤其是富含萜烯類成分的揮發(fā)油。研究表 明，川考、干姜、當(dāng)歸、蛇床子等傳統(tǒng)中草藥的揮發(fā)油具有顯著的促透作用。
[0003] 益智（Alpinia oxyphylla Miq.)為姜科山姜屬多年生草本植物，主要分布在海 南，廣東，廣西等地，為我國(guó)四大南藥和海南省道地藥材之一。揮發(fā)油是益智的重要成分，含 量約為1-2%，由多種萜類化合物構(gòu)成。本發(fā)明重點(diǎn)考察了益智果實(shí)和葉子精油對(duì)藥物的促 透作用及對(duì)皮膚的安全性，對(duì)益智藥材的開發(fā)利用及其在藥物傳輸和化妝品領(lǐng)域的應(yīng)用具 有重要的指導(dǎo)意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明旨在研究益智果實(shí)和葉子精油作為皮膚滲透促進(jìn)劑在藥物傳輸和化妝品 中的應(yīng)用。以吲哚美辛為藥物模型，健康大鼠背部離體皮膚為滲透屏障，體外Franz擴(kuò)散池 為滲透裝置，UPLC-PDA分析技術(shù)檢測(cè)藥物滲透含量；以新西蘭大耳白兔為動(dòng)物模型進(jìn)行皮 膚刺激性試驗(yàn)驗(yàn)證精油的皮膚安全性。高效合理的促透作用及皮膚安全性使得益智精油在 藥物傳輸領(lǐng)域和化妝品有效成分吸收方面具有廣闊的應(yīng)用前景。
[0005] 技術(shù)解決方案
[0006] 本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：水蒸氣蒸餾法分別提取益智果實(shí)和葉子的精油；以健 康Wistar大鼠離體皮膚為滲透屏障，以吲哚美辛為被促藥物模型，應(yīng)用Franz擴(kuò)散池滲透 裝置，聯(lián)合UPLC-PDA分析儀器檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)接收液中藥物的含量；通過GC-MS分析果實(shí) 精油與葉子精油的成分，并用新西蘭大耳白兔進(jìn)行皮膚刺激性試驗(yàn)。
[0007] 技術(shù)路線圖見圖1
[0008] 技術(shù)要點(diǎn)：
[0009] (1)藥物滲透實(shí)驗(yàn)方法，按照下述步驟進(jìn)行：
[0010] a.大鼠離體皮膚制備：選擇健康Wistar大鼠，10%水合氯醛溶液，腹腔注射麻醉， 固定四肢后，用手術(shù)剪刀小心剪去背部毛發(fā)，然后將該部分皮膚小心剝離，去除皮下脂肪和 組織；保證皮膚無受損，用生理鹽水反復(fù)沖洗干凈后，剪取大小適宜的小塊，用錫箱紙包裹 之后置于_20°C冰箱保存?zhèn)溆?，于一周?nèi)使用；
[0011] b.供給相和接收液制備：供給相為2% (w/v)羧甲基纖維素鈉在水中充分溶脹之 后，室溫靜置過夜，吲哚美辛（3mg/ml)用乙醇（10%，v/v)溶解后，加入到所得凝膠中，攪拌 均勻，陽(yáng)性對(duì)照組加入不同濃度的氮酮（Azone)，實(shí)驗(yàn)組加入不同濃度的精油；接收液為乙 醇 /pH 7. 4PBS(1 : 1，v/v);
[0012] c.實(shí)驗(yàn)組皮膚的處理方式：皮膚分別用不同濃度的精油和Azone處理2h后除去， 清洗干凈后，添加含滲透藥物吲哚美辛的凝膠；
[0013] (2)皮膚刺激性試驗(yàn)方法，按照下述步驟進(jìn)行：
[0014] a.選取新西蘭大耳白兔，每組四只，雌雄各半，實(shí)驗(yàn)前24h在背部?jī)蓚?cè)脫毛，脫毛 劑為8g硫化鈉，7g淀粉溶解在IOOmL水中（先剪短毛，再用脫毛劑2-3min)，去毛范圍為 3 X 3cm2,脫毛后用適量溫水清洗脫毛區(qū)域；
[0015] b.以清水為空白對(duì)照，稀釋精油的基礎(chǔ)油為陰性對(duì)照，每次用量為0. 5mL，涂抹四 小時(shí)后用溫水清洗干凈，一周內(nèi)連續(xù)在同一部位給藥，每次給藥時(shí)間相同，觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
[0016] 該研究考察了精油的有效性和安全性，對(duì)于益智藥材的進(jìn)一步開發(fā)利用及其在藥 物傳輸和化妝品領(lǐng)域的應(yīng)用提供可靠的保障。
【具體實(shí)施方式】
[0017] 通過以下實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步說明。以下所列舉的實(shí)施例不以任何方式構(gòu)成限 制。
[0018] 溶液配制：0· ImoL/L，pH 7. 4 的 PBS 緩沖溶液：8g NaCl，I. 2g Na2HP04,0. 2g KH2PO4,0· 2g KCl 溶解于 1000 mL 水中；
[0019] 實(shí)施例1 :滲透試驗(yàn)
[0020] (1)精油制備：
[0021] a.準(zhǔn)確稱取300g粉碎后過二號(hào)篩的益智果實(shí)和葉子粉末置于5L圓底燒瓶，加10 倍量水，浸泡6個(gè)小時(shí)；將圓底燒瓶在加熱套中加熱，保持微沸，用水蒸氣蒸餾法提取6個(gè)小 時(shí)；停止加熱后靜置片刻，開啟測(cè)定器下端的活塞將水緩緩放出，至油層上端到達(dá)刻度5_ 處為止；放置Ih以上，開啟活塞使油層下降至其上端恰與刻度0平齊，讀取揮發(fā)油量，計(jì)算 揮發(fā)油得率；
[0022] b.精油儲(chǔ)存：將提取得到的精油置于離心管，加入適量無水硫酸鈉干燥；置于離 心機(jī)中以13000rpm，離心5min ;用移液槍將揮發(fā)油轉(zhuǎn)移至棕色進(jìn)樣瓶中，放置在-4°C冰箱 中，待用；
[0023] (2)皮膚制備：
[0024] a.選取健康Wistar大鼠，給予10%水合氯醛溶液，腹腔注射麻醉，用手術(shù)剪刀小 心剔除背部毛發(fā)，然后將該部分皮膚小心剝離，去除皮下脂肪和組織；
[0025] b.皮膚用生理鹽水反復(fù)沖洗干凈，剪取大小適宜的小塊，置于_20°C冰箱保存，于 一周內(nèi)使用；
[0026] c.滲透實(shí)驗(yàn)開始前，自冰箱取出皮膚，于室溫生理鹽水中自然解凍；
[0027] (3)供給相和接收液的制備：
[0028] a.供給相：取0. 2g羧甲基纖維素鈉，邊攪拌邊溶解在9mL PBS中，充分溶脹之后， 室溫靜置過夜，準(zhǔn)確稱取30.0 mg吲哚美辛，溶解在ImL乙醇中，邊攪拌邊將溶液加入至所得 凝膠中；
[0029] b.接收液：為乙醇/pH7.4PBS(l : 1，v/v);
[0030] (4)滲透試驗(yàn)：
[0031] 將自然解凍之后的皮膚用濾紙輕輕擦干，角質(zhì)層面朝上固定在擴(kuò)散池和接收池之 間，保證皮膚與接收液之間無氣泡；接收液的溫度為37±0. 1°C，磁子轉(zhuǎn)速為600rpm ;取樣 時(shí)間點(diǎn)為1，2,4,6,8，10，12,2處，每次取樣1!^，取樣后立即加入同等體積同等溫度的接收 液；樣品經(jīng)0. 22 μ m濾膜過濾之后即可用UPLC-PDA檢測(cè)藥物含量。
[0032] (5)色譜條件：Waters ACQUITY UPLC? H-Class超高效液相色譜儀，PDA檢測(cè) 器；Waters ACQUITY UPLC? BEH Shield RP 18(50X2. 1mm，L 7 μ m)色譜柱；檢測(cè)波長(zhǎng)： 268nm ;進(jìn)樣量：1 yL ;柱溫：30°C;流動(dòng)相：甲醇/0. 05%乙酸水（65/35，v/v);流速：0. 2mL/ min〇
[0033] 果實(shí)、葉子精油與Azone (3% )對(duì)藥物促透作用對(duì)比圖見圖2
[0034] 實(shí)施例2 :GC-MS分析果實(shí)和葉子精油的成分
[0035] 1.樣品處理：采用水蒸汽蒸餾分別得到果實(shí)和葉子精油，精密量取10 μ L精油，置 于ImL容量瓶中，用乙酸乙酯（色譜級(jí)）稀釋至刻度，搖勻。
[0036] 2.色譜條件：Thermo GC-MS氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀，AI/AS3000進(jìn)樣塔；載氣：氮?dú)?(純度 99.99%);6(：色譜柱了1?-515(3〇11^0.25臟^，0.32以111);進(jìn)樣口溫度：250°(： ;進(jìn) 樣量：I. 0 μ L ;不分流進(jìn)樣；程序升溫，初始溫度50°C，保持3min，以6°C /min升溫至90°C， 保持5min，再以6°C /min升溫至140°C，然后以0. 2°C /min升溫至145°C，保持2min，再 以15°C/min升溫至260°C，保持6min。電離方式（EI)，掃描時(shí)間0. 2s/Scan，掃描范圍： 40. 0-500.0 u0
[0037] 果實(shí)精油與葉子精油的GC-MS譜圖見圖3
[0038] 實(shí)施例3 :果實(shí)精油與葉子精油對(duì)兔子皮膚的安全性試驗(yàn)
[0039] 1.選取健康新西蘭大耳白兔，每組四只，雌雄各半，實(shí)驗(yàn)前24h在背部?jī)蓚?cè)脫毛， 脫毛劑為Sg硫化鈉，7g淀粉溶解在IOOmL水中（先剪短毛，再用脫毛劑2-3min)，去毛范圍 為3X 3cm2,脫毛后用適量溫水清洗脫毛區(qū)域。
[0040] 2.以清水為空白對(duì)照，稀釋精油的基礎(chǔ)油為陰性對(duì)照，每次用量為0. 5mL，涂抹四 小時(shí)后用溫水清洗干凈，一周內(nèi)連續(xù)在同一部位給藥，每次給藥時(shí)間相同，觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
[0041] 皮膚刺激性試驗(yàn)結(jié)果圖見圖4
【附圖說明】：
[0042] 圖1為本發(fā)明技術(shù)路線圖
[0043] 圖2為果實(shí)、葉子精油與Azone (3% )對(duì)藥物促透作用對(duì)比圖
[0044] 圖3為果實(shí)精油與葉子精油的GC-MS譜圖
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 益智精油作為促透劑在藥物透皮傳輸和化妝品領(lǐng)域的應(yīng)用，其特征在于： (1) 水蒸氣蒸餾法提取益智果實(shí)和葉子精油； (2) 以健康雄性Wistar大鼠背部皮膚為滲透屏障，體外Franz擴(kuò)散池進(jìn)行試驗(yàn)； (3) 以吲哚美辛為藥物模型，UPLC-PDA為檢測(cè)技術(shù)建立藥物檢測(cè)方法； (4) 以GC-MS比較和辨析果實(shí)精油與葉子精油的成分； (5) 以新西蘭大耳白兔為動(dòng)物模型，進(jìn)行皮膚刺激性試驗(yàn)。2. 根據(jù)權(quán)利要求1益智精油作為促透劑在藥物透皮傳輸和化妝品領(lǐng)域的應(yīng)用，其特征 在于該方法包括下列步驟： (1) 益智果實(shí)和葉子精油的制備步驟： 分別稱取益智果實(shí)和葉片300g (粉碎，過2號(hào)篩）置于5L圓底燒瓶中，提取揮發(fā)油，提 取方法：10倍水量，浸泡8h，提取6h。精油加入適量無水硫酸鈉除水，存儲(chǔ)于-4°C冰箱中， 備用； (2) 大鼠皮膚的制備步驟： a. 選用健康Wistar大鼠經(jīng)10%水合氯醛腹腔注射麻醉，用手術(shù)剪刀小心剔除背部毛 發(fā)，然后將該部分皮膚小心剝離，仔細(xì)去除皮下脂肪和組織； b. 用生理鹽水反復(fù)沖洗干凈皮膚，剪取適宜面積，用錫箱紙包裹之后置于-20°C冰箱 保存，于一周內(nèi)使用； (3) 滲透試驗(yàn)步驟： a. 體外滲透試驗(yàn)開始前，自冰箱取出皮膚，于室溫生理鹽水中自然解凍；角質(zhì)層面朝 上，固定在供給池和擴(kuò)散池之間，接收液為乙醇/PBS (pH = 7. 4) (1 : 1，v/v)，排出皮膚與 接收液之間的氣泡，擴(kuò)散裝置中水的溫度保持在37±0. 1°C，轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)速600rpm ; b. 不同濃度的益智精油與陽(yáng)性對(duì)照氮酮（Azone)分別處理皮膚2個(gè)小時(shí)后除去，加入 lg含吲哚美辛的供給相，接收液取樣時(shí)間點(diǎn)為lh，2h，4h，6h，8h，10h，12h，24h，取樣后立即 加入等量等溫的新鮮接收液； c. 接受液過0. 22 μ m濾膜，UPLC-PDA進(jìn)行含量分析。
【文檔編號(hào)】A61K8/97GK105983101SQ201510057924
【公開日】2016年10月5日
【申請(qǐng)日】2015年2月3日
【發(fā)明人】楊美華, 馮歡歡, 趙祥升, 魏建和
【申請(qǐng)人】中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所海南分所, 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所