PIKfyve抑制劑抗輻射損傷的新用圖
【專利摘要】本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，關(guān)于PIKfyve抑制劑的抗輻射損傷新用途，主要是它在核/輻射損傷的防治以及腫瘤放射治療引起的輻射損傷防治中的醫(yī)學(xué)應(yīng)用。更明確來(lái)說(shuō)，本發(fā)明關(guān)于單獨(dú)地或結(jié)合其它治療方法，應(yīng)用PIKfyve抑制劑來(lái)預(yù)防和/或治療各種輻射損傷。
【專利說(shuō)明】
PI Kfyve抑制劑抗福射損傷的新用途
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，關(guān)于PIKfyve抑制劑的抗輻射損傷新用途，主要是它 在核/輻射損傷的防治以及腫瘤放射治療引起的輻射損傷防治中的醫(yī)學(xué)應(yīng)用。更明確來(lái) 說(shuō)，本發(fā)明關(guān)于單獨(dú)地或結(jié)合其它治療方法，應(yīng)用PIKfyve抑制劑來(lái)預(yù)防和/或治療各種輻 射損傷。
【背景技術(shù)】
[0002] 核能與核技術(shù)在工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、醫(yī)療衛(wèi)生、科學(xué)研究及國(guó)防事業(yè)等各個(gè)領(lǐng)域的應(yīng)用 日益廣泛，它們?cè)诮o人類帶來(lái)巨大利益的同時(shí)，也存在潛在威脅。核戰(zhàn)爭(zhēng)、涉核恐怖襲擊、地 震或海嘯等引起核電站發(fā)生核泄漏，以及民用放射源、醫(yī)療照射等工作中由于管理不善或 操作失誤等都可導(dǎo)致人員受到射線照射。當(dāng)機(jī)體在短時(shí)間內(nèi)受到大劑量（> IGy)電離輻 射照射時(shí)會(huì)發(fā)生急性放射?。ˋcute Radiation Sickness，ARS)，或統(tǒng)稱為急性放射損傷綜 合癥（Acute Radiation Syndrome disease，ARS)。急性放射病是一種全身性疾病，根據(jù)受 損器官的不同，分為骨髓型、腸型和腦型三型；根據(jù)受照時(shí)間長(zhǎng)短不同放射病可分為急性、 亞急性和慢性。急性放射病死亡率高，治愈困難，目前受照射劑量大于SGy的患者尚無(wú)救活 的先例。此外，腫瘤患者接受放射治療過(guò)程中，射線殺滅腫瘤細(xì)胞的同時(shí)對(duì)正常細(xì)胞也造成 損傷，常常因此而限制了放射治療的實(shí)際應(yīng)用。因此，為了對(duì)抗輻射損傷，給核能與核技術(shù) 的高效應(yīng)用提供安全保障，需要大力發(fā)展抗輻射損傷醫(yī)藥技術(shù)。
[0003] 磷脂酰肌醇-3-磷酸5-激酶（PIKfyve)是一個(gè)240kDa的脂質(zhì)激酶，能特異地以胞 內(nèi)體的磷脂酰肌醇-3-磷酸（PI3P)為底物催化產(chǎn)生磷脂酰肌醇-3, 5-磷酸（PI (3, 5) P2)。 PIKfyve及其介導(dǎo)的PI (3, 5) P2信號(hào)通路參與維持細(xì)胞內(nèi)內(nèi)體/溶酶體形態(tài)、葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)、 逆轉(zhuǎn)錄病毒出芽、自噬和離子通道活性等。近兩年的研究揭示了 PIKfyve在天然免疫反應(yīng) 中的重要作用，PIKfyve活性抑制后能夠下調(diào)TLR信號(hào)通路介導(dǎo)的多種促炎性因子表達(dá)。研 究表明，PIKfyve抑制劑STA 5326 (STA)直接結(jié)合PIKfyve抑制其磷酸轉(zhuǎn)移酶活性，進(jìn)而特 異性阻斷Toll受體（TLR)介導(dǎo)的IL-12/IL-23表達(dá)，并抑制輔助性T淋巴細(xì)胞亞群Thl型 反應(yīng)。由于免疫系統(tǒng)及炎癥反應(yīng)在急性放射病病程中的重要地位，我們推測(cè)改善炎癥免疫 反應(yīng)可能是防治輻射損傷的重要途徑?；诖?，我們研究發(fā)現(xiàn)PIKfyve特異性抑制劑STA 5326和YM201636對(duì)急性輻射損傷小鼠有顯著的防治作用。此發(fā)現(xiàn)尚屬首例，相關(guān)內(nèi)容未見(jiàn) 報(bào)道。
[0004] 綜上，本發(fā)明提供了一類化合物即PIKfyve抑制劑抗輻射損傷的新用途。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 關(guān)于PIKfyve抑制劑的抗輻射損傷新用途，主要是它在核/輻射損傷救治以及腫 瘤放射治療引起的輻射損傷防治中的醫(yī)學(xué)應(yīng)用。更明確來(lái)說(shuō)，本發(fā)明關(guān)于單獨(dú)地或結(jié)合其 它治療方法，應(yīng)用PIKfyve抑制劑來(lái)預(yù)防和/或治療各種輻射損傷。
[0006] 發(fā)明人經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)：PIKfyve抑制劑對(duì)電離輻射所引起的骨髓抑制及與之相關(guān)的 疾病具有預(yù)防及/或治療作用。本發(fā)明據(jù)此產(chǎn)生。
[0007] 根據(jù)本發(fā)明的具體發(fā)現(xiàn)，提供了
[0008] 1.治療各種原因引起的急性放射病例如輕度骨髓型急性放射病、中度骨髓型急性 放射病、重度骨髓型急性放射病、極重度骨髓型急性放射病和腸型放射病的方法，該方法包 括照射前至少1天內(nèi)及/或照射后至少1天內(nèi)施用治療有效量的PIKfyve抑制劑、例如下 文所定義的化合物1至化合物24。
[0009] 2.治療射線照射引起的骨髓抑制的方法，該方法包括照射前至少1天內(nèi)及/或照 射后至少1天內(nèi)施用治療有效量的PIKfyve抑制劑、例如下文所定義的1至24的化合物。
[0010] 3.治療腫瘤放射治療所引起的骨髓抑制的方法，該方法包括照射前至少1天、放 射治療期間及/或照射后至少1天施用治療有效量的PIKfyve抑制劑、例如下文所定義的 1至24的化合物。
[0011] 4.治療與化學(xué)治療或外科手術(shù)結(jié)合進(jìn)行的放射治療所引起的骨髓抑制的方法，該 方法包括照射前至少1天、放射治療期間及/或照射后至少1天施用治療有效量的PIKfyve 抑制劑、例如下文所定義的化合物1至化合物24。
[0012] 此等骨髓抑制是，大體而言，以PIKfyve抑制劑作治療而可得益的個(gè)體包括，排定 要開始或正在接受放射治療?？勺赃@種治療中特別得益的個(gè)體包括，有骨髓抑制者或可能 易發(fā)生骨髓抑制者。例如，這些個(gè)體可能正要接受、可能正在接受，或已經(jīng)接受放射治療。
[0013] 根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方而，治療因放射所引起的骨髓抑制的方法包括，對(duì)需要此等 治療的個(gè)體給藥治療有效量的PIKfyve抑制劑。
[0014] 在某些具體實(shí)例中，將PIKfyve抑制劑在個(gè)體放射治療首劑之前至少一天內(nèi)給 藥。
[0015] 在一些其它具體實(shí)例中，PIKfyve抑制劑在個(gè)體的放射治療首劑之前至少一天到 放射治療停止后至少一天的期間內(nèi)給藥。
[0016] 在某些具體實(shí)例中，將PIKfyve抑制劑在個(gè)體放射治療、化學(xué)治療的首劑之前至 少一天內(nèi)給藥。
[0017] 其它具體實(shí)例包括，將PIKfyve抑制劑在放射治療、化學(xué)治療期間內(nèi)給藥。
[0018] PIKfyve抑制劑通常為氨基嘧啶類化合物，例如結(jié)構(gòu)式（I)的化合物。
[0019]
[0020] 其中：X和Y分別是含有1-5個(gè)雜原子取代的C6-C20的烷基，芳基，烷氧基，芳氧 基，或取代的氨基；W為取代的氨基，與X可以連接成環(huán)，也可以不存在；Z為烷氧基，取代的 氨基或取代的巰基，Z可以與Y連接成環(huán)，也可以不與Y連接；U為氧原子或亞甲基。
[0021] 另一方面，其中：X和Y也可以分別是含有1-5個(gè)雜原子取代的烷基，芳基，烷氧 基，芳氧基，或取代的氨基；W為取代的氨基，與X可以連接成環(huán)，也可以不存在；Z為烷氧 基，取代的氨基或取代的巰基；U為氧原子，亞甲基。
[0022] 再一方面，其中X和Y分別是含有1-5個(gè)雜原子取代的C10-C16的烷基，烷氧基， 芳基，或取代的氨基；W為取代的氨基，與X可以連接成環(huán)，也可以不存在；Z為氫原子；U為 氧原子。
[0023] 或者，其中X和Y分別是含有1-5個(gè)雜原子取代的C10-C16的烷氧基，芳基，或取 代的氨基；W為取代的氨基，與X可以連接成環(huán)，也可以不存在；Z為氫原子；U為氧原子。
[0024] 包括但不限于以下化合物1至化合物24的化合物。
[0025] (E) -4- (6- (2- (3-氯苯烯肼基）-2- (2-(吡啶-2-基）乙氧基）嘧啶-4-基）嗎啉 (化合物1)
[0026]
[0027] (E) -4- (6- (2- (3-氟苯烯肼基）-2- (2-(吡啶-2-基）乙氧基）嘧啶-4-基）嗎啉 (化合物2)
[0028]
[0029] (E) -4- (6- (2- (3-碘苯烯肼基）-2- (2-(吡啶-2-基）乙氧基）嘧啶-4-基）嗎啉 (化合物3)
[0030]
[0031] (E)-4-(6-(2-(3-甲基苯烯肼基）-2-(2-(吡啶-2-基）乙氧基）嘧啶-4-基）嗎 啉（化合物4)
[0032]
[0033] (E) -4- (6- (2- (3-溴苯烯肼基）-2- (2-(吡啶-2-基）乙氧基）嘧啶-4-基）嗎啉 (化合物5)
[0034]
[0035] 3-溴-N' -(6-嗎啉基-2-(2-(吡啶-2-基）乙氧基）嘧啶-4-基）苯甲酰肼 (化合物6)
[0036]
[0037] 3-甲基W -(6-嗎啉基-2-(2-(吡啶-2-基）乙氧基）嘧啶-4-基）苯甲酰肼 (化合物7)
[0038]
[0039] 3-甲基-N' -(6-嗎啉基-2-(2-(吡啶-2-基）乙胺基）嘧啶-4-基）苯甲酰肼 (化合物8)
[0040]
[0041] 3-甲基W -(6-嗎啉基-2-(苯乙胺基）嘧啶-4-基）苯甲酰肼（化合物9)
[0042]
[0043] f -(6-嗎啉基-2-(苯乙胺基）嘧啶-4-基）-3-吡啶甲酰肼（化合物10)
[0044]
[0045] K -(6-嗎啉基-2-(苯乙胺基）嘧啶-4-基）-4_吡啶甲酰肼（化合物11)
[0046]
[0047] 4-嗎啉基-N-苯乙基-吡啶[3'上：4, 5]呋喃[3, 2-d]并嘧啶-2-胺（化合 物12)
[0048]
[0049] N-(3-(4-嗎啉基-吡啶C ^ :4,5]呋喃[3,2-d]并嘧啶-2-基）苯基）尼 可酰胺（化合物13)
[0050]
[0051] 6-氨基-N-(3-(4-嗎啉基-吡啶[3'，2\4,5]呋喃[3,2-d]并嘧啶-2-基）苯 基）尼可酰胺（化合物14)
[0052]
[0053] (E)-4-(5-(2-(3-甲基苯甲烯基）肼基）-2-苯基吡唑并[l，5-a]嘧啶-7-基）嗎 啉（化合物15)
[0054]
[0055] (E) -4- (5- (2- (3-甲基苯甲烯基）肼基）-2- (4-吡啶基）吡唑并[I，5-a]嘧 啶-7-基）嗎啉（化合物16)
[0056]
[0057] 3-甲基W -(7-嗎啉基-2-(吡啶-4-基）吡唑[1，5-a]嘧啶-5-基）苯甲酰 肼（化合物17)
[0058]
[0059] 3-氯W - (7-嗎啉基-2-(吡啶-4-基）吡唑[I，5-a]嘧啶-5-基）苯甲酰肼 (化合物18)
[0060]
[0061 ] (E) -4- (5- (2- (3-氯苯甲烯基）肼基）-2- (4-吡啶基）吡唑并[I，5-a]嘧 啶-7-基）嗎啉（化合物19)
[0062]
[0063] 3-氟-N' - (7-嗎啉基-2-(吡啶-4-基）吡唑[I，5-a]嘧啶-5-基）苯甲酰肼 (化合物20)
[0064]
[0065] (E)-5_(2-(3-甲基苯甲烯基）肼）-7-(哌啶-1-基）-2-(吡啶-4-基）吡唑[1， 5-a]嘧啶（化合物21)
[0066]
[0067] 3-甲基-N' -(7-哌啶-1-基-2-(吡啶-4-基）吡唑[l，5_a]嘧啶-5-基）苯 甲酰肼（化合物22)
[0068]
[0069] (E)-4-(6-(2-(3-甲基苯烯肼基）-2-(2-(吡啶-2-基）乙氧基）嘧啶-4-基）哌 啶（化合物23)
[0070]
[0071] 6-氨基-N-(3-(4-哌啶-1-基-吡啶 C，2\4,5]呋喃[3,2-d]并嘧啶-2-基） 苯基）尼可酰胺（化合物24)
[0072]
[0073] 應(yīng)當(dāng)理解，本文所述化合物可以是直接活性物質(zhì)，或者可以是前藥。例如，化合物 可以為磷酸化的形式。
[0074] 在給出引用專利申請(qǐng)或科學(xué)出版物的每種情況下，與化合物相關(guān)的主題在此處被 并入本申請(qǐng)作為參考。還包括其可藥用鹽、相應(yīng)的外消旋物、非對(duì)映異構(gòu)體、對(duì)映異構(gòu)體、互 變異構(gòu)體以及上述化合物的相應(yīng)晶體變體（存在時(shí)），例如其中公開的溶劑合物、水合物和 多晶型物?？梢匀缢梦墨I(xiàn)中的描述分別制備和施用用作本發(fā)明組合中活性成分的化合 物。本發(fā)明范圍內(nèi)還包括如上所示的兩種以上的單獨(dú)的活性成分的組合，即本發(fā)明范圍內(nèi) 的藥物組合可包括三種或更多的活性成分。此外，第一種活性劑和活性助劑不是相同的成 分。如本文所用，給藥優(yōu)選屬于口服、注射給藥。
【具體實(shí)施方式】
[0075] 本說(shuō)明書揭露預(yù)防和/或治療電離輻射損傷的方法。
[0076] 有此需要的群體包括可能即將受到輻射暴露，例如核武器襲擊、核臟彈恐怖襲擊， 或即將進(jìn)入放射污染區(qū)域，于（可能）輻射暴露前數(shù)小時(shí)或至少1天接受有效量的PIKfyve 抑制劑預(yù)防治療。
[0077] 有此需要的個(gè)體包括已經(jīng)受到可能會(huì)引起造血損傷的照射劑量的傷員或事故病 人，于受照后即刻、數(shù)小時(shí)或至少1天內(nèi)接受有效量的PIKfyve抑制劑治療。
[0078] 本說(shuō)明書還揭露治療因放射療法所引起的骨髓抑制的方法。
[0079] 放射療法（radiation therapy)及放射治療（radiotherapy)于本文可交換使用， 且包括外照射（external irradiation)和內(nèi)照射（internal irradiation)，亦指稱為近 接治療（brachytherapy)、腔內(nèi)近接治療（intracavitary brachytherapy)，或組織間近接 治療（interstitial brachytherapy)?？蓱]及的放射源包括純伽馬（pure Gamma)、純貝塔 (pure Beta)，及混合放射。
[0080] 在本文中使用，術(shù)語(yǔ)"化學(xué)治療"及"化學(xué)治療劑"可交換使用，以及意指顯現(xiàn)抗癌 效果且用在惡性腫瘤的治療中的化學(xué)治療劑或藥。
[0081] 在本文中使用，放射所引起的骨髓抑制包括全身照射或胸肺部、骨盆、軀干部等局 部照射所引起的放射損傷。照射常造成急性放射病或骨髓造血抑制。癥狀可包括嘔吐、造血 細(xì)胞減少、貧血、血小板減少癥、白細(xì)胞減少癥、造血細(xì)胞增殖障礙、血小板減少性出血等。
[0082] 本發(fā)明又另外方面關(guān)于以PIKfyve抑制劑治療有此需要的個(gè)體（例如，哺乳類、人 類、馬、狗、貓）的方法。確認(rèn)個(gè)體是否有此等治療的需求，可依個(gè)體本身或健康照射防護(hù)專 業(yè)人員的評(píng)判，且可為主觀的（例如，看法）或客觀的（例如，藉由試驗(yàn)或診斷方法而可量 測(cè)）。
[0083] 有此需要的個(gè)體包括將要接受放射治療的個(gè)體，不論是單獨(dú)接受放射治療或組合 其它可導(dǎo)致骨髓抑制的化學(xué)藥物治療。此需要可能顯現(xiàn)于個(gè)體接受放射治療、化學(xué)治療、或 (數(shù)種）治療的結(jié)合之前；個(gè)體正在接受放射治療、化學(xué)治療或（數(shù)種）治療的結(jié)合；個(gè)體正 在接受放射治療、化學(xué)治療、或（數(shù)種）治療的結(jié)合之后。例如，個(gè)體可能正要、可能正在， 或已經(jīng)接受，放射治療組合化學(xué)治療。
[0084] 在本文中使用，治療有效量意指，當(dāng)給藥人類或非人類的個(gè)體時(shí)，有效提供治療益 處（比如，對(duì)癥狀的改良）的量，例如，有效改善貧血癥狀的量。
[0085] 根據(jù)某些具體實(shí)例，PIKfyve抑制劑可用于各種治療方案，此等方案可根據(jù)個(gè)體及 治療類型而變化。
[0086] PIKfyve抑制劑可在治療之前、期間，及/或之后給藥。例如，可在個(gè)體的放射治療 首劑之前至少一天內(nèi)給藥、在放射治療期間給藥、在放射治療停止后至少一天內(nèi)給藥。
[0087] 較佳地在骨髓抑制治療之前、治療期間、以及治療之后給藥PIKfyve抑制劑。例 如，從放射治療、化學(xué)治療的首劑及結(jié)合治療之前的至少一天到放射治療停止后、化學(xué)治療 停止后的至少一天的期間內(nèi)給藥。
[0088] 根據(jù)特定具體實(shí)例，PIKfyve抑制劑可結(jié)合其它化合物一起給藥，例如，化 學(xué)治療劑、抗發(fā)炎劑、解熱劑、放射增敏劑、放射防護(hù)劑、泌尿道用劑、抗吐劑，及/或 止瀉劑。例如，順鉬（cisplatin)、卡鉬（carboplatin)、多西紫杉醇（docetaxel)、太 平洋紫杉醇（paclitaxel)、氟尿啼啶（flurouracil)、卡培他濱（capecitabine)、吉 西他濱（gelncitabine)、伊立替康（irinotecan)、托泊替康（topotecan)、依托泊苷 (etoposide)、絲裂霉素（mitomycin)、吉非替尼（geftinib)、長(zhǎng)春新堿（vincristine)、長(zhǎng) 春堿（vinblastine)、阿霉素（doxorubicin)、環(huán)磷酰胺（cyclophosphamide)、塞來(lái)昔布 (celecoxib)、羅非昔布（rofecoxib)、伐地考昔（valdccoxib)、布洛芬（ibuprofen)、萘普 生（naproxen)、酮洛芬（ketoprofen)、地塞米松（dexamethasone)、潑尼松（prednisone)、 潑尼松龍（prednisolone)、氫化可的松（hydrocortisone)、醋氨酸（acetaminophen)、 米索石肖唑（misonidazole)、氨磷?。╝mifostine)、坦索羅辛（tamsulosin)、非那 P比啶（phenazopyridine)、昂丹司瓊（ondansetron)、格拉司瓊（granisetron)、阿洛 司瓊（alosctron)、帕洛諾司瓊（palonosetron)、異丙嗪（promethazine)、丙氯拉嗪 (prochlorperazine)、三甲氧苯釀胺（trimethobenzamide)、阿瑞吡坦（aprcpitant)、地芬 諾酯加阿托品（diphenoxylate with atropine)，巴柳氮（balsalizide)，及 / 或洛哌丁胺 (loperamide)〇
[0089] 本文揭露的方法，對(duì)有此需要的個(gè)體給藥治療有效量的PIKfyve抑制劑，以保護(hù) 個(gè)體對(duì)抗放射所引起的全身性損傷也是有用的。例如，預(yù)防性的服用可在患者接受放射之 前給藥。
【附圖說(shuō)明】
[0090] 圖I. STA照射前Ih灌胃對(duì)8. 5Gy γ射線全身照射C57小鼠存活的影響
[0091] 結(jié)果表明，照射對(duì)照組小鼠于照射后第10天開始出現(xiàn)死亡，兩周內(nèi)無(wú)一存活，而 STA組小鼠則自第14天才開始出現(xiàn)死亡，30天時(shí)存活40%。
[0092] 圖2. STA照射前Ih灌胃對(duì)6. 5Gy γ射線全身照射C57小鼠外周血細(xì)胞數(shù)的影響
[0093] 結(jié)果顯示，與照射對(duì)照組相比，照射前Ih給小鼠單次灌胃STA5326 10、20和30mg/ kg均能夠促進(jìn)外周血血小板數(shù)、紅細(xì)胞數(shù)恢復(fù)；而且隨著用藥劑量增加，該效應(yīng)呈現(xiàn)增強(qiáng) 的趨勢(shì)，以30mg/kg組促恢復(fù)效果最為明顯
[0094] 圖3.不同劑量STA照射前Ih灌胃對(duì)6. 5Gy γ射線全身照射C57小鼠外周血細(xì)胞 數(shù)的影響
[0095] 與照射對(duì)照組相比，照射前Ih分別給C57小鼠灌胃20mg/kg、30mg/kg、40mg/kg 和50mg/kg STA5326時(shí)，各組小鼠外周白細(xì)胞恢復(fù)趨勢(shì)無(wú)顯著差異，但是30和40mg/kg給 藥組小鼠外周血血小板和紅細(xì)胞的恢復(fù)趨勢(shì)基本一致而明顯優(yōu)于照射對(duì)照組，20mg/kg和 50mg/kg組與照射對(duì)照組的差異不明顯。
[0096] 圖4. STA照射前不同時(shí)間灌胃對(duì)6. 5Gy γ射線全身照射C57小鼠外周血細(xì)胞數(shù)的 影響
[0097] 照射前24h內(nèi)單次灌胃STA 30mg/kg均能促進(jìn)6. 5Gy γ射線全身照射小鼠的造血 細(xì)胞恢復(fù)，其中以照射前3h給藥的作用效果最明顯。
[0098] 圖5. STA照射前3h灌胃對(duì)8. 5Gy γ射線全身照射C57小鼠存活的影響
[0099] 與照射對(duì)照組比較，STA5326 20mg/kg組小鼠存活率無(wú)明顯提高，但小鼠開始死亡 時(shí)間推遲；而STA 30mg/kg和40mg/kg給藥不僅延長(zhǎng)了死亡鼠的存活時(shí)間，而且30天存活 率提高50% (照射對(duì)照組為0)。
[0100] 圖6. STA照射前3h灌胃對(duì)6. 5Gy γ射線全身照射C57小鼠骨髓造血干細(xì)胞的影 響
[0101] STA組小鼠在照射后3h骨髓中活的的單個(gè)有核細(xì)胞數(shù)量明顯高于照射對(duì)照組；分 析Lin c_kit+Sca_l細(xì)胞和Lin c-kit+Sca_l+含量顯示，照射后14天STA組該兩種細(xì)胞的 數(shù)量均高于照射對(duì)照組。
[0102] 圖7. STA照射后不同時(shí)間灌胃對(duì)6. 5Gyy射線全身照射C57小鼠外周血細(xì)胞數(shù)的 影響
[0103] 結(jié)果表明，照射后24h內(nèi)單次灌胃STA 30mg/kg均能促進(jìn)6. 5Gy γ射線全身照射 小鼠的造血細(xì)胞恢復(fù)，尤其是對(duì)血小板和紅細(xì)胞數(shù)的促恢復(fù)作用顯著，其中以照射后24h 給藥組作用效果最明顯。
[0104] 圖8. STA照射前3h腹腔注射對(duì)6. 5Gy γ射線全身照射C57小鼠外周血細(xì)胞數(shù)的 影響
[0105] 結(jié)果發(fā)現(xiàn)，6. 5Gy全身照射前3h給C57小鼠腹腔注射STA5326 30mg/kg可以提高 小鼠外周血白細(xì)胞的最低值，并促進(jìn)血小板和紅細(xì)胞數(shù)的恢復(fù)。
[0106] 圖9. STA照射前3h腹腔注射對(duì)8. 5Gy 丫射線全身照射C57小鼠存活的影響
[0107] 8. 5Gy全身照射C57小鼠在照射后30天內(nèi)全部死亡（照射對(duì)照組），而在照射前 3h單次腹腔注射STA5326 30mg/kg可使小鼠的活存率提高90 %。 具體實(shí)施例
[0108] 1，STA5326照射前1小時(shí)單次灌胃即可提高致死性照射小鼠存活率。
[0109] 為初步觀察STA5326的輻射防護(hù)作用，將健康的雄性成年C57小鼠分為照射對(duì)照 組和STA給藥組，每組10只。STA組小鼠于照射前Ih單次灌胃20mg/kg的STA5326 (0. 2ml/ 鼠），照射對(duì)照組灌胃PEG400 0.2ml/鼠。小鼠受照射劑量為6°C〇y射線全身一次照射 8. 5Gy，照射劑量率為61. 6cGy/min，照射后每天兩次觀察小鼠的存活情況，連續(xù)觀察30天。 結(jié)果表明，照射對(duì)照組小鼠于照射后第10天開始出現(xiàn)死亡，兩周內(nèi)無(wú)一存活，而STA組小鼠 則自第14天才開始出現(xiàn)死亡，30天時(shí)存活40% (圖1)。
[0110] 2, STA5326在照射前1小時(shí)單次灌胃可促進(jìn)受照射小鼠造血細(xì)胞恢復(fù)
[0111] 射線照射后，機(jī)體造血功能受到損傷，血細(xì)胞數(shù)迅速減少，而白細(xì)胞、血小板數(shù)量 銳減導(dǎo)致的感染和出血并發(fā)癥常常引起病人死亡，紅細(xì)胞數(shù)量和血紅蛋白含量的減少引發(fā) 貧血也不容忽視。為了觀察STA對(duì)受照射機(jī)體造血功能的影響，我們用6. 5Gy6°C〇y射線一 次全身照射（照射劑量率61. 6cGy/min)C57小鼠建立急性照射引起的造血系統(tǒng)損傷模型。 小鼠分為照射對(duì)照和STA 10mg/kg、20mg/kg和30mg/kg共四組，每組8只。STA三個(gè)給藥 組小鼠分別在照射前Ih單次灌胃10mg/kg、20mg/kg和30mg/kgSTA5326,照射對(duì)照組灌胃 0.2ml/鼠的PEG400。于照射后不同時(shí)間取尾靜脈血檢測(cè)外周血細(xì)胞數(shù)。結(jié)果顯示，與照射 對(duì)照組相比，照射前Ih給小鼠單次灌胃STA532610、20和30mg/kg均能夠促進(jìn)小鼠外周血 細(xì)胞的恢復(fù)，尤其是對(duì)外周血血小板數(shù)、紅細(xì)胞數(shù)的促恢復(fù)作用顯著；而且隨著用藥劑量增 加，該效應(yīng)呈現(xiàn)增強(qiáng)的趨勢(shì)，以30mg/kg組促血細(xì)胞恢復(fù)效果最為明顯（圖2)。
[0112] 3,不同劑量的STA5326在照射前1小時(shí)單次灌胃對(duì)受照射小鼠造血恢復(fù)的影響
[0113] 進(jìn)一步觀察不同劑量的STA5326于照射前單次灌胃給藥對(duì)6. 5Gy6°C〇 γ身線全身 照射（照射劑量率60.0 cGy/min)小鼠造血細(xì)胞恢復(fù)的影響。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，與照射對(duì)照組相 比，照射前111分別給057小鼠（11 = 8)灌胃2〇11^/1^、3〇11^/1^、4〇11^/1^和5〇11^/1^51厶5326 時(shí)，各組小鼠外周白細(xì)胞恢復(fù)趨勢(shì)無(wú)顯著差異，但是30和40mg/kg給藥組小鼠外周血血小 板和紅細(xì)胞的恢復(fù)趨勢(shì)基本一致而明顯優(yōu)于照射對(duì)照組，20mg/kg和50mg/kg組與照射對(duì) 照組的差異不明顯（圖3)。
[0114] 4, STA5326在照射前不同時(shí)間預(yù)防給藥對(duì)受照射小鼠造血恢復(fù)的影響
[0115] 在上述實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，以6. 5Gy6°C〇 γ射線全身照射（照射劑量率60.0 cGy/min) 小鼠為模型，觀察了 STA在照射前不同時(shí)間給藥對(duì)輻射損傷小鼠造血恢復(fù)的影響。C57小 鼠分為照射對(duì)照和STA給藥組，其中STA的給藥時(shí)間分別設(shè)為照射前24h(-24h)、照射前 12h (_12h)、照射前3h (_3h)和照射前Ih (-Ih)共4組，每組8只。STA給藥組分別在照射 前相應(yīng)時(shí)間單次灌胃STA5326 30mg/kg(0. 2ml/鼠），照射對(duì)照組灌胃0. 2ml/鼠的PEG400。 檢測(cè)小鼠外周血細(xì)胞，結(jié)果表明，照射前24h內(nèi)單次灌胃STA 30mg/kg均能促進(jìn)6. 5Gyy射 線全身照射小鼠的造血細(xì)胞恢復(fù)，其中以照射前3h給藥的作用效果最明顯（圖4)。
[0116] 5, STA5326在照射前3h單次灌胃給藥顯著提高致死劑量照射小鼠存活率
[0117] 上述實(shí)驗(yàn)中觀察到STA在照射前給藥時(shí)以照射3h給約對(duì)輻射損傷小鼠造血系統(tǒng) 恢復(fù)的促進(jìn)作用最為明顯，為了確證STA的輻射防護(hù)作用，本實(shí)驗(yàn)觀察了 8. 5Gy6°C〇 γ射線 (照射劑量率60.0 cGy/min)全身照射前3h給C57小鼠分別灌服STA5326 20mg/kg、30mg/ kg和40mg/kg(η = 10)，觀察小鼠30天的存活情況。如圖5所示，與照射對(duì)照組比較， STA532620mg/kg組小鼠存活率無(wú)明顯提高，但小鼠開始死亡時(shí)間推遲；而STA 30mg/kg和 40mg/kg給藥不僅延長(zhǎng)了死亡鼠的存活時(shí)間，而且30天存活率提高50% (照射對(duì)照組為 0) 〇
[0118] 6, STA5326在照射前3h單次灌胃給藥對(duì)受照射小鼠骨髓造血干細(xì)胞的影響
[0119] 現(xiàn)已證明STA5326在照射前3h單次灌胃給藥可以顯著促進(jìn)受照射小鼠造血細(xì)胞 恢復(fù)，并能提高致死劑量照射小鼠的存活率?；诖?，我們進(jìn)一步觀察了 STA5326預(yù)防給藥 對(duì)受照射小鼠造血干細(xì)胞的影響。將40只健康成年的雄性C57分為照射對(duì)照組和STA組， 每組20只。STA組小鼠于照射前3h單次灌胃STA5326 30mg/kg (0. 2ml/鼠），照射對(duì)照組灌 服PEG400 0. 2ml/鼠。小鼠均接受6. 5Gy 6°C〇y射線全身照射。分別在照射后3小對(duì)、1、 10和14天每組處死5只小鼠，收集股骨骨髓細(xì)胞，以LinFITC、c-kit APC和Sca-I PE-Cy7 標(biāo)記細(xì)胞后用流式細(xì)胞儀檢測(cè)骨髓細(xì)胞中造血干祖細(xì)胞的含量。如圖6所示，STA組小鼠在 照射后3h骨髓中活的的單個(gè)有核細(xì)胞數(shù)量明顯高于照射對(duì)照組；分析Lin c-kit+Sca-l細(xì) 胞和Lin c-ki/Sca-Γ含量顯示，照射后14天STA組該兩種細(xì)胞的數(shù)量均高于照射對(duì)照組。 該結(jié)果表明，STA照射前給藥不僅能保護(hù)受照射小鼠骨髓細(xì)胞，還能刺激恢復(fù)期造血干細(xì)胞 生成。
[0120] 7, STA5326在照射后不同時(shí)間單次灌胃給藥對(duì)受照射小鼠造血恢復(fù)的影響
[0121] 明確了 STA在照射前給藥對(duì)急性輻射損傷小鼠有明顯的防護(hù)作用后，為進(jìn)一步研 究STA在照射后給藥對(duì)急性輻射損傷有無(wú)治療作用，將6. 5Gy 6°Co γ射線全身照射（照 射劑量率60.0 cGy/min)C57小鼠分為照射對(duì)照組和STA治療組，其中STA組分為照射后 Ih (+Ih)、照射后3h (+3h)、照射后12h (+12h)、照射后24h (+24h)。STA給藥組分別在照射后 相應(yīng)時(shí)間單次灌胃STA5326 30mg/kg (0. 2ml/鼠），照射對(duì)照組灌胃0. 2ml/鼠的PEG400。檢 測(cè)小鼠外周血象結(jié)果表明，照射后24h內(nèi)單次灌胃STA 30mg/kg均能促進(jìn)6.5Gyy射線全 身照射小鼠的造血細(xì)胞恢復(fù)，尤其是對(duì)血小板和紅細(xì)胞數(shù)的促恢復(fù)作用顯著，其中以照射 后24h給藥組作用效果最明顯（圖7)。
[0122] 8, STA5326在照射前3小時(shí)單次腹腔注射給藥可促進(jìn)受照射小鼠造血恢復(fù)，并使 致死劑量照射小鼠活存率提高90 %。
[0123] 上述研究發(fā)現(xiàn)STA在照射前及照射后灌胃給藥不僅可以促進(jìn)輻照小鼠造血功能 恢復(fù)，還顯著提高致死劑量照射小鼠的存活率，延長(zhǎng)存活時(shí)間。本實(shí)驗(yàn)中將STA的給藥方 式改為腹腔注射進(jìn)一步觀察其對(duì)小鼠的輻射防護(hù)效果。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，6. 5Gy全身照射前3h給 C57小鼠腹腔注射STA5326 30mg/kg可以提高小鼠外周血白細(xì)胞的最低值，并促進(jìn)血小板 和紅細(xì)胞數(shù)的恢復(fù)（圖8)。提示，STA腹腔注射給藥對(duì)小鼠的造血系統(tǒng)同樣有輻射防護(hù)作 用。以8. 5Gy致死劑量照射小鼠為模型的研究結(jié)果顯示，照射前3h單次腹腔注射STA5326 30mg/kg可使小鼠的活存率提高90% (圖9)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. PIKfyve抑制劑如結(jié)構(gòu)式（I)的氨基喀晚類化合物的抗福射損傷的醫(yī)藥用途，用于 在有其需要的個(gè)體內(nèi)預(yù)防和/或治療電離福射所引起的損傷的方法。其中：X和Y分別是含有1-5個(gè)雜原子取代的C6-C20的烷基，芳基，烷氧基，芳氧基，或 取代的氨基；W為取代的氨基，與X可W連接成環(huán)，也可W不存在；Z為烷氧基，取代的氨基 或取代的琉基，Z可W與Y連接成環(huán)，也可W不與Y連接；U為氧原子或亞甲基。2. 如權(quán)利1所述的化合物的抗福射損傷的藥物用途，其中X和Y分別是含有1-5個(gè)雜 原子取代的烷基，芳基，烷氧基，芳氧基，或取代的氨基；W為取代的氨基，與X可W連接成 環(huán)，也可W不存在；Z為烷氧基，取代的氨基或取代的琉基；U為氧原子，亞甲基。3. 如權(quán)利2所述的化合物的抗福射損傷的藥物用途，其中X和Y分別是含有1-5個(gè)雜 原子取代的C10-C16的烷基，烷氧基，芳基，或取代的氨基；W為取代的氨基，與X可W連接 成環(huán)，也可W不存在；Z為氨原子；U為氧原子。4. 如權(quán)利3所述的化合物的抗福射損傷的藥物用途，其中X和Y分別是含有1-5個(gè)雜 原子取代的C10-C16的烷氧基，芳基，或取代的氨基；W為取代的氨基，與X可W連接成環(huán)， 也可W不存在；Z為氨原子；U為氧原子。5. 如權(quán)利4所述的化合物的抗福射損傷的藥物用途，包括但不限于W下化合物。 巧)-4- (6- (2- (3-氯苯締阱基）-2- (2-(化晚-2-基）乙氧基）喀晚-4-基）嗎嘟（化 合物1)巧)-4- (6- (2- (3-氣苯締阱基）-2- (2-(化晚-2-基）乙氧基）喀晚-4-基）嗎嘟（化 合物2)巧)-4- (6- (2- (3-艦苯締阱基）-2- (2-(化晚-2-基）乙氧基）喀晚-4-基）嗎嘟（化 合物3)巧)-4-(6-(2-(3-甲基苯締阱基）-2-(2-(化晚-2-基）乙氧基）喀晚-4-基）嗎嘟 (化合物4)巧)-4- (6- (2- (3-漠苯締阱基）-2- (2-(化晚-2-基）乙氧基）喀晚-4-基）嗎嘟（化 合物5)3-漠-Ν' -(6-嗎嘟基-2-(2-(化晚-2-基）乙氧基）喀晚-4-基）苯甲酯阱（化合 物6)3-甲基-Ν' -(6-嗎嘟基-2-(2-(化晚-2-基）乙氧基）喀晚-4-基）苯甲酯阱（化 合物7)3-甲基-Ν' -(6-嗎嘟基-2-(2-(化晚-2-基）乙胺基）喀晚-4-基）苯甲酯阱（化 合物8)N-(3-(4-嗎嘟基-化晚巧'，2' :4,5]巧喃[3,2-d]并喀晚-2-基）苯基）尼可酷 胺（化合物13)6-氨基-N-(3-(4-嗎嘟基-化晚巧'，2' :4, 5]巧喃[3, 2-d]并喀晚-2-基）苯基） 尼可酷胺（化合物14)巧)-4-(5-(2-(3-甲基苯甲締基）阱基）-2-苯基化挫并[l，5-a]喀晚-7-基）嗎嘟 (化合物15)巧)-4-(5-(2-(3-甲基苯甲締基）阱基）-2-(4-化晚基）化挫并[l，5-a]喀晚-7-基） 嗎嘟（化合物16)3-甲基-Ν' -(7-嗎嘟基-2-(化晚-4-基）化挫[l，5-a]喀晚-5-基）苯甲酯阱（化 合物17)3-氯-Ν' -(7-嗎嘟基-2-(化晚-4-基）化挫[l，5-a]喀晚-5-基）苯甲酯阱（化 合物18)η 巧)-4-(5-(2-(3-氯苯甲締基）阱基）-2-(4-化晚基）化挫并[l，5-a]喀晚-7-基） 嗎嘟（化合物19)3-氣-Ν' -(7-嗎嘟基-2-(化晚-4-基）化挫[l，5-a]喀晚-5-基）苯甲酯阱（化 合物20)巧)-5-(2-(3-甲基苯甲締基）阱）-7-(贓晚-1-基）-2-(化晚-4-基）化挫[l，5-a] 喀晚（化合物21)3-甲基-Ν' -(7-贓晚-1-基-2-(化晚-4-基）化挫[l，5-a]喀晚-5-基）苯甲酯 阱（化合物22)巧)-4-(6-(2-(3-甲基苯締阱基）-2-(2-(化晚-2-基）乙氧基）喀晚-4-基）贓晚 (化合物23)6-氨基-N-(3-(4-贓晚-1-基-化晚巧'，2' :4,引巧喃[3, 2-d]并喀晚-2-基）苯 基）尼可酷胺（化合物24)應(yīng)當(dāng)理解，本文所述化合物可W是直接活性物質(zhì)，或者可W是前藥。例如，化合物可W 為憐酸化的形式。 在給出引用專利申請(qǐng)或科學(xué)出版物的每種情況下，與化合物相關(guān)的主題在此處被并入 本申請(qǐng)作為參考。還包括其可藥用鹽、相應(yīng)的外消旋物、非對(duì)映異構(gòu)體、對(duì)映異構(gòu)體、互變異 構(gòu)體W及上述化合物的相應(yīng)晶體變體（存在時(shí)），例如其中公開的溶劑合物、水合物和多晶 型物?？蒞如所引用文獻(xiàn)中的描述分別制備和施用用作本發(fā)明組合中活性成分的化合物。 本發(fā)明范圍內(nèi)還包括如上所示的兩種W上的單獨(dú)的活性成分的組合，即本發(fā)明范圍內(nèi)的藥 物組合可包括Ξ種或更多的活性成分。此外，第一種活性劑和活性助劑不是相同的成分。如 本文所用，給藥優(yōu)選屬于口服、注射給藥。
【文檔編號(hào)】A61P39/00GK105963300SQ201510109560
【公開日】2016年9月28日
【申請(qǐng)日】2015年3月13日
【發(fā)明人】余祖胤, 邢爽, 熊國(guó)林, 何新華, 從玉文, 羅慶良
【申請(qǐng)人】中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所