一種吸附有益生菌的防臭抗菌墊及其制備方法與應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種吸附有益生菌的防臭抗菌墊及其制備方法與應(yīng)用。一種吸附有益生菌的防臭抗菌墊，包括防臭抗菌層，所述的防臭抗菌層由吸附有枯草芽孢桿菌和短小芽孢桿菌的載體顆粒構(gòu)成，每克載體顆粒吸附的芽孢總數(shù)為106～1010CFU。本發(fā)明所述吸附有益生菌的防臭抗菌墊，采用枯草芽孢桿菌和短小芽孢桿菌吸附于載體上用于去除含氮和含硫臭氣達(dá)到消除異味的作用，同時(shí)上述菌在代謝過程中產(chǎn)生抗菌活性物質(zhì)，對(duì)引起腳氣病的致病性真菌的生長(zhǎng)繁殖也有抑制作用，可以顯著預(yù)防腳汗人群患足癬病的概率。
【專利說明】
一種吸附有益生菌的防臭抗菌墊及其制備方法與應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及一種吸附有益生菌的防臭抗菌墊及其制備方法與應(yīng)用，屬于日用品技 術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 足癬是由致病性真菌引起的足部皮膚病，常見的誘發(fā)因素為足部多汗潮濕或鞋襪 不透氣，具有傳染性。足癬在全世界廣為流行，在熱帶和亞熱帶地區(qū)更為普遍。在我國(guó)，足癬 的發(fā)病率也相當(dāng)高。人的足底和趾間沒有皮脂腺，從而缺乏抑制皮膚絲狀真菌的脂肪酸，生 理防御機(jī)能較差，而這些部位的皮膚汗腺卻很豐富，出汗比較多，加之空氣流通性差、局部 潮濕溫暖，有利于絲狀真菌的生長(zhǎng)。此外，足底部位皮膚角質(zhì)層較厚，角質(zhì)層中的角蛋白是 真菌的豐富營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，有利于真菌的生長(zhǎng)。足癬患者的臨床表現(xiàn)常為奇癢和腳臭，不但給患 者帶來了反反復(fù)復(fù)的傷害與煩惱。而且對(duì)家人的正常生活也受到了影響，降低了居住環(huán)境 的空氣質(zhì)量。
[0003] 枯草芽孢桿菌與短小芽孢桿菌是自然界中廣泛存在的一種非致病性細(xì)菌，在生長(zhǎng) 代謝過程中能夠產(chǎn)生多種抗菌物質(zhì)，如枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素、短桿菌肽等活性物 質(zhì)，這些活性物質(zhì)對(duì)致病菌或內(nèi)源性感染的條件致病菌有明顯的抑制作用。這些抗菌物質(zhì) 可以抑制細(xì)菌、真菌和酵母，同時(shí)，枯草芽孢桿菌在生理代謝過程中可以產(chǎn)生氨基氧化酶及 分解硫化物的酶類，將臭源據(jù)氨類等化合物氧化成無臭、無毒害、無污染的物質(zhì)，減少空氣 中NH 3、H2S濃度。樊杰等研究表明，枯草芽孢桿菌好氧發(fā)酵一段時(shí)間內(nèi)，枯草芽孢桿菌對(duì)NH4 +-1勵(lì)2，、勵(lì)34的總削減率達(dá)到了98.51%、84.90%、96.51%。而且具有溫度、？田直、儲(chǔ)藏 穩(wěn)定性好等特點(diǎn)。因此，其在食品、醫(yī)藥、化工和防病等方面有重要的應(yīng)用價(jià)值。
[0004] 本發(fā)明擬采用枯草芽孢桿菌與短小芽孢桿菌以休眠狀態(tài)用吸附劑吸附并均勻固 定在棉布中，在運(yùn)輸、貨架等干燥的環(huán)境中以休眠狀態(tài)存在，一旦使用，借助于人體的體溫、 腳汗進(jìn)行萌發(fā)，大量繁殖，進(jìn)行代謝，分解其中的NH 3、H2S、等臭味物質(zhì)，從而達(dá)到防臭的作 用，同時(shí)，在代謝過程中產(chǎn)生抗菌活性物質(zhì)，對(duì)致病性真菌的生長(zhǎng)繁殖也有抑制作用。從而 達(dá)到除臭抗菌的作用。
[0005] 中國(guó)專利文獻(xiàn)CN102247611A(申請(qǐng)?zhí)?01110189038.4)公開了一種微生物除臭劑 及其制備方法，其菌種組成為:嗜酸乳桿菌IO 6~IO9個(gè)/mL、短小芽孢桿菌IO6~IO9個(gè)/mL、枯 草芽孢桿菌IO 6~IO9個(gè)/mL、熒光假單胞菌IO5~IO7個(gè)/mL、沼澤紅假單胞菌IO 5~IO7個(gè)/mL、 班圖酒香酵母菌IO4~IO6個(gè)/mL、平常假絲酵母菌IO 4~IO6個(gè)/mL、擴(kuò)張青霉IO4~IOiMVmU 米根霉IO4~IO6個(gè)/mL、綠色木霉IO4~IO6個(gè)/mL、細(xì)黃鏈霉菌IO 4~IO6個(gè)/mL和灰色鏈霉菌 IO4 ~IOfMVmL13
[0006] 中國(guó)專利文獻(xiàn)CN104371959A(申請(qǐng)?zhí)?01410657323.8)公開了生物除臭滅蠅復(fù)合 菌劑包括酵母菌、乳酸菌、功能芽孢桿菌、光合細(xì)菌和白僵菌，按順序各菌種的質(zhì)量比為〇. 5 ~2:0.5~2.5 :1.5~3.5 :1.5~2.5:1;微生物活菌總數(shù)彡109CFU/g。所述功能芽孢桿菌為 包括巨大芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、短小芽 孢桿菌和蘇云金芽孢桿菌的混合菌劑。以及生物除臭滅蠅復(fù)合菌劑在垃圾回收過程中除臭 與滅蠅的應(yīng)用。
[0007] 中國(guó)專利文獻(xiàn)CN104126515A(申請(qǐng)?zhí)?01410345580.8)公開了一種畜禽生物降解 墊，由載體和混合菌劑混合后粉碎制成，所述混合菌劑由以下短小芽孢桿菌、枯草芽孢桿 菌、地衣芽孢桿菌、乙酸鈣不動(dòng)桿菌、脫氮副球菌、糞球產(chǎn)堿菌混合后經(jīng)發(fā)酵、干燥制成。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種吸附有益生菌的防臭抗菌墊及其制備方法 與應(yīng)用。
[0009] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：
[0010] -種吸附有益生菌的防臭抗菌墊，包括防臭抗菌層，所述的防臭抗菌層由吸附有 枯草芽孢桿菌和短小芽孢桿菌的載體顆粒構(gòu)成，枯草芽孢桿菌與短小芽孢桿菌的芽孢數(shù)量 之比為1: (0.5~2)，每克載體顆粒吸附的芽孢總數(shù)為IO6~101()CFU。
[0011] 根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述載體顆粒是將芽孢懸浮于pH6.0~7.2的磷酸緩沖液后進(jìn) 行吸附制得。
[0012] 根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述枯草芽孢桿菌為來源于中國(guó)普通微生物菌種保藏管理中 心(CGMCC)的保藏編號(hào)為1.933的枯草芽孢桿菌。
[0013] 根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述短小芽孢桿菌為來源于中國(guó)普通微生物菌種保藏管理中 心(CGMCC)的保藏編號(hào)為1.937的短小芽孢桿菌。
[0014] 根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述枯草芽孢桿菌與短小芽孢桿菌的活菌數(shù)之比為1:1。
[0015] 根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述的載體為活性炭纖維。活性炭纖維具有微孔分布均勻，比 表面積大，透氣性良好、吸附速度快等特點(diǎn)，可根據(jù)不同尺碼制作不同的形狀。
[0016] 根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述吸附有益生菌的防臭抗菌墊還包括設(shè)置有包覆防臭抗菌 層的透氣層;進(jìn)一步優(yōu)選的，透氣層材質(zhì)為棉布。
[0017] 上述吸附有益生菌的防臭抗菌墊的制備方法，包括如下步驟：
[0018] (1)取枯草芽孢桿菌，經(jīng)活化培養(yǎng)、發(fā)酵培養(yǎng)，制得活菌濃度為100~150億/毫升、 芽孢形成率達(dá)95%以上的枯草芽孢桿菌發(fā)酵液，固液分離，制得枯草芽孢桿菌；
[0019] (2)取短小芽孢桿菌，經(jīng)活化培養(yǎng)、發(fā)酵培養(yǎng)，制得活菌濃度為25~35億/毫升、芽 孢形成率達(dá)95%以上的短小芽孢桿菌發(fā)酵液，固液分離，制得短小芽孢桿菌；
[0020] (3)將步驟（1)制得的枯草芽孢桿菌、步驟(2)制得的短小芽孢桿菌按芽孢數(shù)量比 1: (0.5~2)的比例混合，然后用pH6.0~7.2的磷酸緩沖液配制濃度為IO6~IOiqCFU的芽孢 液;按照每克載體含有IO 8~IO9CFU的芽孢數(shù)將芽孢液與載體混合，吸附均勻，制得吸附載 體；
[0021 ] (4)將步驟(3)制得的吸附載體在37~60°C條件下，干燥4~6h，制得吸附有益生菌 的載體;經(jīng)包覆透氣層，制得吸附有益生菌的防臭抗菌墊。
[0022] 根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述步驟(1)中的活化培養(yǎng)為將菌株接種于活化培養(yǎng)基中，在 37°C活化培養(yǎng)28~32h;
[0023] 上述活化培養(yǎng)基，組分如下，均為質(zhì)量百分比：
[0024] 葡萄糖1~2.5%，蛋白胨0.1~0.5%，酵母粉0.5~1.0%，氯化鈉0.1~0.3%，余 量水，ρΗ6·7~7.2;
[0025] 根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述步驟(1)中的發(fā)酵培養(yǎng)，步驟如下：
[0026] 將活化后的枯草芽孢桿菌接種于枯草芽孢桿菌發(fā)酵培養(yǎng)基，在37°C發(fā)酵培養(yǎng)30h， 制得枯草芽孢桿菌發(fā)酵液；
[0027]上述枯草芽孢桿菌發(fā)酵培養(yǎng)基，組分如下，均為質(zhì)量百分比：
[0028] 葡萄糖2%~5%，酵母粉0 · 1 %~0 · 5%，玉米漿0 · 5%~1 ·0%，玉米粉0 · 5%~ 0.8%，磷酸二氫鉀0.1 %~0.3%，硫酸鎂0.01 %~0.05%，氯化鈉0.1 %~0.3%，硫酸錳 0.01%~0.03%，余量水4冊(cè).8~7.2。
[0029] 根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述步驟(2)中的活化培養(yǎng)為將菌株接種于活化培養(yǎng)基中，在 37°C活化培養(yǎng)28~32h;
[0030] 上述活化培養(yǎng)基，組分如下，均為質(zhì)量百分比：
[0031] 葡萄糖0 · 5~2 · 0，硫酸銨0 · 1~0 · 7 %，酵母粉0 · 1~0 · 8 %，硫酸鎂0 · 01~0 · 05 %， 玉米衆(zhòng)〇.1~1%，余量水4冊(cè).5~7.3。
[0032]根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述步驟(2)中的發(fā)酵培養(yǎng)，步驟如下：
[0033] 將活化后的短小芽孢桿菌接種于短小芽孢桿菌發(fā)酵培養(yǎng)基，在37°C發(fā)酵培養(yǎng)28h， 制得短小芽孢桿菌發(fā)酵液；
[0034] 上述短小芽孢桿菌發(fā)酵培養(yǎng)基，組分如下，均為質(zhì)量百分比：
[0035] 葡萄糖0.5~2% %、玉米淀粉1~2%、蛋白胨0.5~1.5%、硫酸銨0.3~0.7%、 ΚΗ2Ρ〇4〇·1 ~0.5%、MgS〇4 · 7H20 0.1 ~0.2%，余量水，ρΗ6·7~7.0。
[0036]上述吸附有益生菌的防臭抗菌墊在制備防臭抗菌功能鞋墊或制備治療致病性真 菌引起的腳氣病的鞋墊中的應(yīng)用。
[0037]有益效果
[0038] 1、本發(fā)明所述吸附有益生菌的防臭抗菌墊，采用枯草芽孢桿菌和短小芽孢桿菌吸 附于載體上用于去除含氮和含硫臭氣達(dá)到消除異味的作用，同時(shí)上述菌在代謝過程中產(chǎn)生 抗菌活性物質(zhì)，對(duì)引起腳氣病的致病性真菌的生長(zhǎng)繁殖也有抑制作用，可以顯著預(yù)防腳汗 人群患足癬病的概率；
[0039] 2、本發(fā)明選用特定的枯草芽孢桿菌和短小芽孢桿菌按照特定比例吸附于活性炭 纖維上，進(jìn)一步提高了枯草芽孢桿菌和短小芽孢桿菌的協(xié)同作用，使得吸附有益生菌的防 臭抗菌墊在除臭抗菌方面的效果更佳突出；
[0040] 3、本發(fā)明所述的吸附有益生菌的防臭抗菌墊，采用的活性炭纖維作為載體，其具 有微孔發(fā)達(dá)、比表面積大、超強(qiáng)吸附的功能，可以起到吸附臭味、致病菌及汗液的作用，對(duì)除 臭抗菌達(dá)到輔助增強(qiáng)的效果；
[0041] 4、本發(fā)明所述的吸附有益生菌的防臭抗菌墊的制備方法，采用特殊的緩沖液懸浮 后吸附于載體上，一旦遇有富含氮源和硫源的環(huán)境，芽孢能夠較為快速的萌發(fā)并吸收消耗 氮源和硫源，不僅增強(qiáng)了防臭抗菌的功能，而且更有利于延長(zhǎng)本產(chǎn)品的有效期，降低了對(duì)該 產(chǎn)品存放條件和運(yùn)輸條件的要求。
【附圖說明】
[0042] 圖1為本發(fā)明所述的吸附有益生菌的防臭抗菌墊的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0043]圖中：I、防臭抗菌層，2、活性炭纖維，3、透氣層。
【具體實(shí)施方式】
[0044]下面結(jié)合實(shí)施例及說明書附圖對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步的詳細(xì)說明，但本發(fā) 明所保護(hù)范圍不限于此。
[0045]實(shí)施例1~2中所述枯草芽孢桿菌購(gòu)自中國(guó)普通微生物菌種保藏管理中心 (CGMCC)，保藏編號(hào)為1.933;實(shí)施例3中所述枯草芽孢桿菌購(gòu)自中國(guó)普通微生物菌種保藏管 理中心(CGMCC)，保藏編號(hào)為1.1413。
[0046]實(shí)施例1~2中所述短小芽孢桿菌購(gòu)自中國(guó)普通微生物菌種保藏管理中心 (CGMCC)，保藏編號(hào)為1.937;實(shí)施例3中所述短小芽孢桿菌購(gòu)自中國(guó)普通微生物菌種保藏管 理中心(CGMCC)，保藏編號(hào)為1.940。
[0047] 實(shí)施例1
[0048] -種吸附有益生菌的防臭抗菌墊的制備方法，包括如下步驟：
[0049] (1)取枯草芽孢桿菌，在37 °C活化培養(yǎng)18h，然后在37 °C發(fā)酵培養(yǎng)30h，制得活菌濃 度為110億/毫升，芽孢形成率達(dá)95 %以上的枯草芽孢桿菌發(fā)酵液，5000rpm離心20min，取沉 淀，制得枯草芽孢桿菌；
[0050]上述枯草芽孢桿菌活化培養(yǎng)基，組分如下，均為質(zhì)量百分比：
[0051 ] 葡萄糖1.5 %，蛋白胨0.3 %，酵母粉0.5 %，氯化鈉0.1 %，余量水，pH6.8。
[0052]上述枯草芽孢桿菌發(fā)酵培養(yǎng)基，組分如下，均為質(zhì)量百分比：
[0053] 葡萄糖2 %，蛋白胨0.1 %，玉米漿0.5 %，酵母膏0.4 %，玉米粉0.5 %，糊精0.6 %， 磷酸二氫鉀〇. 1 %，硫酸鎂〇. 〇 1 %，氯化鉀〇. 05 %，氯化鈉0.1 %，硫酸錳0.01 %，余量水， pH6.8 〇
[0054] (2)取短小芽孢桿菌，在37°C活化培養(yǎng)16h，然后在37°C發(fā)酵培養(yǎng)28h，制得活菌濃 度為31億/毫升的短小芽孢桿菌發(fā)酵液，5000rpm離心20min，取沉淀，制得短小芽孢桿菌；
[0055] 上述短小芽孢桿菌活化培養(yǎng)基，組分如下，均為質(zhì)量百分比：
[0056] 葡萄糖2.0 %，硫酸銨0.5 %，酵母粉0.8 %，硫酸鎂0.03 %，玉米漿0.3 %，余量水， ρΗ7·0〇
[0057] 上述短小芽孢桿菌發(fā)酵培養(yǎng)基，組分如下，均為質(zhì)量百分比：
[0058] 葡萄糖0 · 5 %、玉米淀粉1 · 2 %、蛋白胨 1 %、硫酸銨0 · 3 %、KH2PO4O · 2 %、MgS〇4 · 7H20 0.1%，余量水，ρΗ6·8。
[0059] (3)將步驟（1)制得的枯草芽孢桿菌、步驟(2)制得的短小芽孢桿菌按芽孢數(shù)量比 1:1的比例混合，然后用PH6.8的磷酸緩沖液配制濃度為IO 9CFUAiI的芽孢液;按照每克載體 含有IO8CFU的芽孢數(shù)將芽孢液與活性炭纖維混合，吸附均勻，制得吸附活性炭纖維；
[0060] (4)將步驟(3)制得的吸附活性炭纖維在60°C條件下，干燥5h，制得吸附有益生菌 的活性炭纖維;經(jīng)包覆棉布材質(zhì)的透氣層，制得吸附有益生菌的防臭抗菌墊。
[0061] 上述制得的吸附有益生菌的防臭抗菌墊，包括防臭抗菌層1，所述的防臭抗菌層1 由吸附有枯草芽孢桿菌和短小芽孢桿菌的吸附有益生菌的活性炭纖維2構(gòu)成，枯草芽孢桿 菌與短小芽孢桿菌的芽孢數(shù)量之比為1:1，每克吸附有益生菌的活性炭纖維2吸附的芽孢總 數(shù)為 IO6 ~IOiqCFU;
[0062] 所述吸附有益生菌的防臭抗菌墊還包括設(shè)置有包覆防臭抗菌層1的透氣層3。
[0063] 實(shí)施例2
[0064] -種吸附有益生菌的防臭抗菌墊的制備方法，包括如下步驟：
[0065] (1)取枯草芽孢桿菌，在37 °C活化培養(yǎng)20h，然后在37 °C發(fā)酵培養(yǎng)28h，制得活菌濃 度為105億/毫升，芽孢形成率達(dá)95 %以上的枯草芽孢桿菌發(fā)酵液，5000rpm離心20min，取沉 淀，制得枯草芽孢桿菌；
[0066]上述枯草芽孢桿菌活化培養(yǎng)基，組分如下，均為質(zhì)量百分比：
[0067] 葡萄糖1 %，蛋白胨0.5%，酵母粉0.8%，氯化鈉0.3%，余量水，pH7.2;
[0068]上述枯草芽孢桿菌發(fā)酵培養(yǎng)基，組分如下，均為質(zhì)量百分比：
[0069] 葡萄糖3 %，蛋白胨0 · 2 %，玉米漿0 · 6 %，酵母膏0 · 5 %，玉米粉0 · 8 %，糊精0 · 3 %， 磷酸二氫鉀0.2 %硫酸鎂0.03 %，氯化鉀0.01 %，氯化鈉 0.2 %硫酸錳0.02 %，余量水， ρΗ7·0〇
[0070] (2)取短小芽孢桿菌，在37°C活化培養(yǎng)17h，然后在37°C發(fā)酵培養(yǎng)32h，制得活菌濃 度為31億/毫升的短小芽孢桿菌發(fā)酵液，5000rpm離心20min，取沉淀，制得短小芽孢桿菌； [0071 ]上述短小芽孢桿菌活化培養(yǎng)基，組分如下，均為質(zhì)量百分比：
[0072] 葡萄糖1.8,硫酸銨0.6%，酵母粉0.5%，硫酸鎂0.03%，玉米漿1%，余量水， pH7.0；
[0073]上述短小芽孢桿菌發(fā)酵培養(yǎng)基，組分如下，均為質(zhì)量百分比：
[0074]葡萄糖 1 %、玉米淀粉1 · 5 %、蛋白胨0 · 8 %、硫酸銨0 · 5 %、KH2PO4O · 3 %、MgS〇4 · 7H20 0.2%，余量水，ρΗ6·8。
[0075] (3)將步驟（1)制得的枯草芽孢桿菌、步驟(2)制得的短小芽孢桿菌按芽孢數(shù)量比 1:2的比例混合，然后用pH7.0的磷酸緩沖液配制濃度為IO9的芽孢液;按照每克載體含有 IO8CFU的芽孢數(shù)將芽孢液與活性炭纖維混合，吸附均勻，制得吸附活性炭纖維；
[0076] (4)將步驟(3)制得的吸附活性炭纖維在55°C條件下，干燥6h，制得吸附有益生菌 的活性炭纖維;經(jīng)包覆棉布材質(zhì)的透氣層，制得吸附有益生菌的防臭抗菌墊。
[0077] 上述制得的吸附有益生菌的防臭抗菌墊，包括防臭抗菌層1，所述的防臭抗菌層1 由吸附有枯草芽孢桿菌和短小芽孢桿菌的吸附有益生菌的活性炭纖維2構(gòu)成，枯草芽孢桿 菌與短小芽孢桿菌的芽孢數(shù)量之比為2:1，每克吸附有益生菌的活性炭纖維吸附的芽孢總 數(shù)為 IO6 ~IOiqCFU;
[0078] 所述吸附有益生菌的防臭抗菌墊還包括設(shè)置有包覆防臭抗菌層1的透氣層3。
[0079] 實(shí)施例3
[0080] 一種吸附有益生菌的防臭抗菌墊的制備方法，包括如下步驟：
[0081 ] (1)取枯草芽孢桿菌，在37 °C活化培養(yǎng)22h，然后在37 °C發(fā)酵培養(yǎng)30h，制得活菌濃 度為140億/毫升，芽孢形成率達(dá)95 %以上的枯草芽孢桿菌發(fā)酵液，5000rpm離心20min，取沉 淀，制得枯草芽孢桿菌；
[0082]上述枯草芽孢桿菌活化培養(yǎng)基，組分如下，均為質(zhì)量百分比：
[0083] 葡萄糖1 ·8%，蛋白胨0·5%，酵母粉0·7%，氯化鈉0· 15%，余量水，pH7·0;
[0084]上述枯草芽孢桿菌發(fā)酵培養(yǎng)基，組分如下，均為質(zhì)量百分比：
[0085] 葡萄糖2.5 %，酵母粉0.5 %，玉米漿0.8 %，玉米粉0.5 %，磷酸二氫鉀0.3 %，硫酸 鎂O. OI %，氯化鈉 O. I %，硫酸錳0.03 %，余量水，pH6.8。
[0086] (2)取短小芽孢桿菌，在37°C活化培養(yǎng)20h，然后在37°C發(fā)酵培養(yǎng)28h，制得活菌濃 度為28億/毫升的短小芽孢桿菌發(fā)酵液，5000rpm離心20min，取沉淀，制得短小芽孢桿菌；
[0087]上述短小芽孢桿菌活化培養(yǎng)基，組分如下，均為質(zhì)量百分比：
[0088] 葡萄糖1 · 2，硫酸銨0 · 3 %，酵母粉0 · 5 %，硫酸鎂0 · 05 %，玉米漿0 · 6 %，余量水， pH6.5；
[0089] 上述短小芽孢桿菌發(fā)酵培養(yǎng)基，組分如下，均為質(zhì)量百分比：
[0090] 葡萄糖2%、玉米淀粉1 %、蛋白胨0.5%、硫酸銨0.3%、KH2P〇4〇. 1 %、MgS〇4 · 7H20 0.1%，余量水，ρΗ6·7。
[0091] (3)將步驟（1)制得的枯草芽孢桿菌、步驟(2)制得的短小芽孢桿菌按芽孢數(shù)量比 1:0.5的比例混合，然后用pH7.0的磷酸緩沖液配制濃度為IO 9的芽孢液;按照每克載體含有 IO8CFU的芽孢數(shù)將芽孢液與活性炭纖維混合，吸附均勻，制得吸附活性炭纖維；
[0092] (4)將步驟(3)制得的吸附活性炭纖維在58°C條件下，干燥5h，制得吸附有益生菌 的活性炭纖維;經(jīng)包覆棉布材質(zhì)的透氣層，制得吸附有益生菌的防臭抗菌墊。
[0093] 上述制得的吸附有益生菌的防臭抗菌墊，包括防臭抗菌層1，所述的防臭抗菌層1 由吸附有枯草芽孢桿菌和短小芽孢桿菌的吸附有益生菌的活性炭纖維2構(gòu)成，枯草芽孢桿 菌與短小芽孢桿菌的芽孢數(shù)量之比為1:0.5,每克吸附有益生菌的活性炭纖維2吸附的芽孢 總數(shù)為IO 6~IOiqCFU;
[0094] 所述吸附有益生菌的防臭抗菌墊還包括設(shè)置有包覆防臭抗菌層1的透氣層3。
[0095] 對(duì)比例1
[0096] 按實(shí)施例3所述制備方法制得的吸附有益生菌的防臭抗菌墊，不同之處在于，步驟 (3)采用水配制濃度為109的芽孢液。
[0097] 對(duì)比例2
[0098] 按實(shí)施例1所述制備方法制得的吸附有益生菌的防臭抗菌墊，不同之處在于，步驟 (3)中將枯草芽孢桿菌、短小芽孢桿菌按芽孢數(shù)量比1:5的比例混合。
[0099] 實(shí)驗(yàn)例1
[0100] 芽孢萌發(fā)試驗(yàn):將實(shí)施例3和對(duì)比例1制得的防臭抗菌墊在室溫干燥條件下放置半 年，然后取出吸附活性炭纖維進(jìn)行無菌操作，在lwt%葡萄糖溶液中進(jìn)行萌發(fā)試驗(yàn)，用稀釋 平板法計(jì)數(shù)，結(jié)果如下：
[0101] 表1
L〇1 〇3」由表1中可以看出，用緩沖液懸浮的芽孢液制得的吸附活性炭纖維，芽孢萌發(fā)率 高，這說明芽孢在合適的PH環(huán)境下更容易萌發(fā)從而發(fā)揮作用。
[0104] 實(shí)驗(yàn)例2
[0105]除臭試驗(yàn):將實(shí)施例1和對(duì)比例2制得的防臭抗菌墊在室溫干燥條件下放置一段時(shí) 間，然后取出吸附活性炭纖維進(jìn)行無菌操作進(jìn)行下列除臭試驗(yàn)：
[0? 06]在2L大燒杯中加入無菌的培養(yǎng)基100毫升(鹿糖50g，氨水IOmL，L-半胱氨酸IOOmg， KH2P〇42g，MgS〇4.7H2〇 0.5g，F(xiàn)eS〇4.7H20 0.1g，l%ZnS〇45mL，NaCl 2g，水 1000mL，pH自 然），加入定量的吸附活性炭纖維一塊，以等量無菌水作為空白對(duì)照，再往大燒杯中放入裝 有20mL 0.005N硫酸吸收液的50mL小燒杯，再放入裝有20mL 0.2%堿性鋅氨絡(luò)鹽Zn(NH3)4 · (OH)2的50mL小燒杯，大燒杯上用3層保鮮膜覆蓋，密封。置于30°C的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。24h后， 取出小燒杯檢測(cè)氨和硫化氫的濃度，計(jì)算氨和硫化氫的脫除率，結(jié)果如表2:
[0107]表2
[0109] 由表2中可以看出，實(shí)施例1的除臭效果要好于對(duì)比例2,這說明兩種菌的混合比例 影響除臭效果。
[0110] 實(shí)驗(yàn)例3
[0111] 抑菌試驗(yàn):將實(shí)施例1和對(duì)比例2制得的防臭抗菌墊在室溫干燥條件下放置一段時(shí) 間，然后取出吸附活性炭纖維進(jìn)行無菌操作進(jìn)行下列抑菌試驗(yàn)：
[0112] 將兩塊大小相同的吸附活性炭纖維無菌操作分別加入盛有100毫升LB培養(yǎng)基的液 體發(fā)酵培養(yǎng)液中，然后分別按3%接種量接種大腸桿菌和葡萄球菌(濃度IO 8個(gè)/毫升），以沒 有放吸附活性炭纖維的作為空白對(duì)照，培養(yǎng)16小時(shí)，分別平板計(jì)數(shù)，計(jì)算抑菌率，結(jié)果如表 3：
[0113] 表3
[0115]由表3中可以看出，實(shí)施例1的抑菌效果要好于對(duì)比例2，這說明兩種菌的混合比例 影響抑菌效果。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種吸附有益生菌的防臭抗菌墊，其特征在于，包括防臭抗菌層，所述的防臭抗菌層 由吸附有枯草芽孢桿菌和短小芽孢桿菌的載體顆粒構(gòu)成，枯草芽孢桿菌與短小芽孢桿菌的 芽孢數(shù)量之比為1: (〇.5~2)，每克載體顆粒吸附的芽孢總數(shù)為IO6~101()CFU。2. 如權(quán)利要求1所述的防臭抗菌墊，其特征在于，所述載體顆粒為將芽孢懸浮于pH6.0 ~7.2的磷酸緩沖液后進(jìn)行吸附制得。3. 如權(quán)利要求1所述的防臭抗菌墊，其特征在于，所述枯草芽孢桿菌為來源于中國(guó)普通 微生物菌種保藏管理中心的保藏編號(hào)為1.933的枯草芽孢桿菌； 優(yōu)選的，所述短小芽孢桿菌為來源于中國(guó)普通微生物菌種保藏管理中心的保藏編號(hào)為 1.937的短小芽孢桿菌。4. 如權(quán)利要求1所述的防臭抗菌墊，其特征在于，所述枯草芽孢桿菌與短小芽孢桿菌的 活菌數(shù)之比為1:1。5. 如權(quán)利要求1所述的防臭抗菌墊，其特征在于，所述的載體為活性炭纖維； 優(yōu)選的，所述吸附有益生菌的防臭抗菌墊還包括設(shè)置有包覆防臭抗菌層的透氣層;進(jìn) 一步優(yōu)選的，透氣層材質(zhì)為棉布。6. 權(quán)利要求1所述吸附有益生菌的防臭抗菌墊的制備方法，其特征在于，包括如下步 驟： (1) 取枯草芽孢桿菌，經(jīng)活化培養(yǎng)、發(fā)酵培養(yǎng)，制得活菌濃度為100~150億/毫升、芽孢 形成率達(dá)95%以上的枯草芽孢桿菌發(fā)酵液，固液分離，制得枯草芽孢桿菌； (2) 取短小芽孢桿菌，經(jīng)活化培養(yǎng)、發(fā)酵培養(yǎng)，制得活菌濃度為25~35億/毫升、芽孢形 成率達(dá)95%以上的短小芽孢桿菌發(fā)酵液，固液分離，制得短小芽孢桿菌； (3) 將步驟（1)制得的枯草芽孢桿菌、步驟（2)制得的短小芽孢桿菌按芽孢數(shù)量比1: (0.5~2)的比例混合，然后用pH6.0~7.2的磷酸緩沖液配制濃度為IO 6~IOiqCFU的芽孢液； 按照每克載體含有IO8~IO9CFU的芽孢數(shù)將芽孢液與載體混合，吸附均勻，制得吸附載體； (4) 將步驟(3)制得的吸附載體在37~60°C條件下，干燥4~6h，制得吸附有益生菌的載 體;經(jīng)包覆透氣層，制得吸附有益生菌的防臭抗菌墊。7. 如權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述步驟（1)中的活化培養(yǎng)為將菌株接 種于活化培養(yǎng)基中，在37 °C活化培養(yǎng)28~32h; 上述活化培養(yǎng)基，組分如下，均為質(zhì)量百分比： 葡萄糖1~2.5%，蛋白胨0.1~0.5%，酵母粉0.5~1.0%，氯化鈉0.1~0.3%，余量水， ρΗ6·7~7·2; 優(yōu)選的，所述步驟(1)中的發(fā)酵培養(yǎng)，步驟如下： 將活化后的枯草芽孢桿菌接種于枯草芽孢桿菌發(fā)酵培養(yǎng)基，在37°C發(fā)酵培養(yǎng)30h，制得 枯草芽孢桿菌發(fā)酵液； 上述枯草芽孢桿菌發(fā)酵培養(yǎng)基，組分如下，均為質(zhì)量百分比： 葡萄糖2%~5%，酵母粉0.1%~0.5%，玉米漿0.5%~1.0%，玉米粉0.5%~0.8%， 磷酸二氫鉀〇 · 1 %~〇 · 3%，硫酸鎂0 · 01 %~0 · 05 %，氯化鈉0 · 1 %~0 · 3 %，硫酸錳0 · 01 %~ 0.03%，余量水4冊(cè).8~7.2。8. 如權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(2)中的活化培養(yǎng)為將菌株接 種于活化培養(yǎng)基中，在37 °C活化培養(yǎng)28~32h; 上述活化培養(yǎng)基，組分如下，均為質(zhì)量百分比： 葡萄糖O · 5~2 · O，硫酸銨O · 1~O · 7%，酵母粉O · 1~O · 8%，硫酸鎂O · Ol~O · 05%，玉米 漿0.1~1%，余量水，？?jī)?cè).5~7.3。9. 如權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(2)中的發(fā)酵培養(yǎng)，步驟如下： 將活化后的短小芽孢桿菌接種于短小芽孢桿菌發(fā)酵培養(yǎng)基，在37°C發(fā)酵培養(yǎng)28h，制得 短小芽孢桿菌發(fā)酵液； 上述短小芽孢桿菌發(fā)酵培養(yǎng)基，組分如下，均為質(zhì)量百分比： 葡萄糖0 · 5~2 % %、玉米淀粉1~2 %、蛋白胨0 · 5~1 · 5 %、硫酸銨0 · 3~0 · 7 %、KH2PO4 0.1 ~0.5%、MgS〇4 · 7H20 0.1 ~0.2%，余量水，ρΗ6·7~7.0。10. 權(quán)利要求1所述吸附有益生菌的防臭抗菌墊在制備防臭抗菌功能鞋墊或制備治療 致病性真菌引起的腳氣病的鞋墊中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】B01D53/48GK105944130SQ201610352966
【公開日】2016年9月21日
【申請(qǐng)日】2016年5月24日
【發(fā)明人】楚杰, 劉可春, 韓利文, 何秋霞, 韓建, 陳錫強(qiáng), 王榮春, 侯海榮, 陳維云
【申請(qǐng)人】山東省科學(xué)院生物研究所