膳食dha-磷脂用于新生兒大腦dha和dpa積累的功效的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及包含膳食DHA的磷脂(PL?DHA)用于增加幼年哺乳動物——優(yōu)選人類嬰兒——的組織和/或器官(優(yōu)選大腦、眼睛和肝)中DPA的量或DHA和DPA的量的用途。所述PL?DHA優(yōu)選包含于嬰兒配方物中。
【專利說明】
膳食DHA-磯脂用于新生兒大腦DHA和DPA積累的功效
技術領域
[0001] 本發(fā)明設及由憐脂攜帶的DHA用于增加幼年哺乳動物的組織和/或器官中DPA的量 或DHA和DPA的量的用途。特別地，本發(fā)明設及包含由憐脂攜帶的DHA的嬰兒配方物用于增加 幼年哺乳動物的組織和/或器官中DPA的量或DHA和DPA的量的用途。
【背景技術】
[0002] 當向嬰兒提供營養(yǎng)時，母乳被稱為"黃金標準"。然而，由于各種原因，母親可能無 法充分地母乳喂養(yǎng)她的嬰兒W提供日常所需量的營養(yǎng)物質。已經開發(fā)了嬰兒配方物W在母 乳喂養(yǎng)不充足或在根本無法實現(xiàn)母乳喂養(yǎng)的情況下用作替代物。
[0003] 當今嬰兒配方物中通常所包含的成分或組分之一為長鏈多不飽和脂肪酸化C- PUFA)。所報道的LC-PUFA對嬰兒的健康益處不勝枚舉。例如，隨著發(fā)育，在出生前和出生后 的發(fā)育過程中大腦累積了大量的DHA，運在出生后的整個頭2年還將繼續(xù)，LC-PUFA(特別是 DHA)的攝入對支持大腦、眼睛和神經且特別是在該年齡段中兒童的正常生理發(fā)育是重要 的。此外，DHA在視網膜中具有結構和功能作用，并且其攝入有助于最大為12個月齡的嬰兒 的視覺發(fā)育。因此，需要在嬰兒配方物中包含LC-PUFA，并且運通常得到營養(yǎng)管理機構的提 倡（參見抓 Commission Directive 2006/141/EC)。
[0004] 食物中具有最多LC-PUFA的天然脂類為Ξ酷基甘油['TAG' ]和憐脂['化']。在成熟 的人乳中，大約85%的1(：斗冊4為；酷基甘油的形式，且15%的LC-PUFA作為憐脂存化由于 乳汁中Ξ酷基甘油比憐脂絕對優(yōu)勢的存在，因此大多數DHAW絕對的數量在Ξ酷基甘油中 發(fā)現(xiàn)。
[0005] 在攝入后，Pk結合的LC-PUFA和TAG-結合的LC-PUFA均被消化、吸收、轉運至其目 標器官并被各種組織吸收。然而，LC-PUFA的體內代謝，特別是在哺乳動物組織中設及DHA、 EPA和DPA分子及其分子之間轉化的生物合成途徑的去飽和酶和延伸酶部分的特定相互作 用尚未完全得到闡明。運使得嬰兒配方物所包含的運些營養(yǎng)化合物的全部價值目前可能無 法被完全理解和/或甚至被低估，盡管目前有可用的知識。此外，當前的立法通常禁止包含 的憐脂高于某一闊值。由于已經認識到運些LC-PUFA在維持嬰兒生長和發(fā)育方面具有重要 的作用，因此在很大程度上焦點已集中在DHA、EPA和AA上。除此之外，W純化形式、適合于嬰 兒營養(yǎng)物的類似LC-PUFA(例如，二十二碳五締酸(DPA))是昂貴的成分。鑒于運些限制，具有 關于代謝轉歸(metabolic fate) W及由憐脂所包含的LC-PUFA的組織和器官分布的知識， 可W有價值的用于相對于各個LC-PUFA含量而進一步優(yōu)化嬰兒配方物和/或提倡其使用和 益處。
[0006] W0 96/10922公開了一種脂肪混合物，W及含有所述脂肪混合物的食物，該脂肪混 合物包含W-定比例的憐脂形式存在的花生四締酸和二十二碳六締酸。特別是公開了一種 基于動物和植物的脂肪混合物，其包含任選的微生物、油和/或脂肪W及含有卵憐脂的長鏈 多不飽和脂肪酸，其特征在于W憐脂形式存在于脂肪混合物中的花生四締酸占0.2至 3. Omg/g總脂肪且W憐脂形式存在的二十二碳六締酸占0.1至2. Omg/g總脂肪，而W甘油Ξ 醋形式存在于脂肪混合物中的花生四締酸和二十二碳六締酸各自均占0.05至1.5重量％， 基于W甘油Ξ醋形式存在的脂肪酸的總和計。
[0007] Graf 等人（Prostaglandins，Leukotrienes and Essential Fatty Acids 83 (2010)89-96)的研究已表明在2-、4-和10-周齡的大鼠中口服喂食的DHA到達了大腦。此外， 在10周齡的大鼠中，與喂食^C-DHA-TAG相比，喂食Mc-DHA-PA后的組織和器官(例如，肝、大 腦、腎和前葡萄膜(視網膜））中累積了 2-3倍多的源自"C-DHA的放射性。
[000引 Nestec S.A.的EP 2 110 027 A1(W0 2009/121839 A1)公開了一種母親食品，該 母親食品可施用于懷孕期和哺乳期的母親并且增加新生兒的DHA水平，例如W支持新生兒 的大腦和視網膜發(fā)育。所述母親食品組合物不僅在直接施用于嬰兒時有效，而且還在施用 于母親時有效。所述脂類的來源包括至少一種選自花生四締酸、二十碳Ξ締酸、二十碳五締 酸和二十二碳五締酸、二十二碳六締酸化HA)的LC-PUFA，該二十二碳六締酸(DHA)可為選自 憐脂、憐脂酷膽堿、憐脂酷乙醇胺、N-酷基憐脂酷乙醇胺、憐脂酷肌醇和憐脂酷絲氨酸的形 式。
[0009] 到目前為止，雖然已知人乳中包含DPA，但本技術領域已聚焦于增加 DHA腦水平。

【發(fā)明內容】

[0010] 本發(fā)明設及包含膳食DHA的憐脂(PkDHA)用于增加幼年哺乳動物的組織和/或器 官中的DPA的量或DHA和DPA的量的（產品的制造中的）用途。特別地，本發(fā)明設及在幼年哺乳 動物的大腦中或更特別是大腦的灰質中實現(xiàn)DPA的量或DHA和DPA的量的增加。更特別地，在 幼年哺乳動物的包含W下或由W下構成的組織和/或器官中實現(xiàn)DPA的增加或DHA和DPA的 量的增加：富膜組織、神經組織、腦組織、大腦皮層灰質、腦灰質、突觸體、視網膜、肝、大腦 和/或眼睛，優(yōu)選大腦、視網膜、肝，更優(yōu)選大腦。所述哺乳動物優(yōu)選為人類嬰兒。
[0011 ] DPA是昂貴的LC-PUFA，與其他的LC-PUFA (例如，EPA、DHA、ARA或ALA)相比，DPA被研 究的較少。但有越來越多的研究顯示DPA是引起哺乳動物體內炎癥效應、認知效應和屯、臟效 應的重要組分。考慮到目前關于化-DHA消耗量的知識，可在嬰兒的某些器官和組織中發(fā)現(xiàn) 該化合物作為DPA，由于已經知道嬰兒中的DPA水平可通過施用化-DHA來達到目標，因此現(xiàn) 在可W做出更加有意識的選擇一一不包含DPA，或降低嬰兒配方物中的DPA水平。無需昂貴 的DPA成分，仍可增加生長期嬰兒的目標器官和組織中的DPA產量。運甚至包括了在喂養(yǎng)體 系(feed regime)中不包含DPA的情況，只要配方物中存在化-DHA。選擇在嬰兒配方物中包 含有化-DHA而不是DPA使得人們制造出成本較低的嬰兒配方物。
[001^ 在整個申請中，"包含DHA的憐脂"和"PkDHA"將互換地使用并且表示一個或至少 一個DHA鏈通過化學方法連接至憐脂鏈或與憐脂鏈醋化，即所述膳食組合物含有包含DHA的 憐脂。因此，在本發(fā)明的膳食組合物中，存在于組合物中的至少一部分憐脂包含DHA。在一個 優(yōu)選的實施方案中，膳食畑A存在于憐脂載體的sn-2位。在本發(fā)明的上下文中，術語"包含膳 食畑A的憐脂"闡明了化-DHA是飲食的一部分或被補充到幼年哺乳動物的飲食中，因此與哺 乳動物的組織和器官中力求增加的DPA水平或DHA和DPA水平不同。。
[0013]在一個優(yōu)選的實施方案中，存在于所述膳食組合物中的憐脂為蛋憐脂（egg 地ospholipid)。更優(yōu)選地，所述憐脂選自憐脂酷膽堿、憐脂酷絲氨酸、憐脂酷乙醇胺、溶血 憐脂酷膽堿、銷憐脂、溶血憐脂酷乙醇胺W及憐脂酷肌醇。優(yōu)選地，所述憐脂至少包含憐脂 酷膽堿，或者所述憐脂包含含有憐脂酷膽堿的蛋憐脂的混合物，其中憐脂酷膽堿的量為憐 脂混合物的60至80重量％。更優(yōu)選地，所述憐脂為混合物的一部分，其中憐脂酷膽堿存在的 量為憐脂混合物的65至75重量％，最優(yōu)選70至75重量％。其他優(yōu)選的憐脂包括憐郵油憐脂、 魚油憐脂和源自于藻類的憐脂。
[0014]鑒于所報道的對嬰兒的健康益處，在一個優(yōu)選的實施方案中，嬰兒配方物中存在 包含膳食DHA的憐脂。優(yōu)選地，人類嬰兒的年齡為0至36個月、優(yōu)選0至24個月、更優(yōu)選0至12 個月。因此，在一個優(yōu)選的實施方案中，嬰兒配方物中含有包含膳食DHA的憐脂，該配方物適 于喂養(yǎng)年齡為0至36個月、優(yōu)選0至24個月、更優(yōu)選0至12個月或0至6個月的嬰兒。在另一個 優(yōu)選的實施方案中，所述嬰兒配方物設計用于早產兒。
[0015]在一個優(yōu)選的實施方案中，DHA的量顯示出增加到至少1.5倍、更優(yōu)選增加到約2 倍，并且DPA的量顯示出增加到至少2倍、優(yōu)選增加到2至4倍，優(yōu)選2至3倍、更優(yōu)選增加到2.8 倍。
[0016] 在一個優(yōu)選的實施方案中，在幼年哺乳動物的大腦中，DPA的量顯示出增加到至少 2倍、優(yōu)選增加到2至4倍、優(yōu)選2至3倍、更優(yōu)選增加到2.8倍。
[0017] 在一個優(yōu)選的實施方案中，在幼年哺乳動物的肝中，DPA的量顯示出增加到至少2 倍、優(yōu)選增加到2至4倍，優(yōu)選2至3倍、更優(yōu)選增加到2.6倍。
[0018] 在一個優(yōu)選的實施方案中，在幼年哺乳動物的視網膜中，DPA的量顯示出增加到至 少2倍、優(yōu)選增加到2至4倍、優(yōu)選2至3倍、更優(yōu)選增加到2.4倍。
[0019] 在一個優(yōu)選的實施方案中，在幼年哺乳動物的突觸體中，DPA的量顯示出增加到至 少2倍、優(yōu)選增加到2至4倍、優(yōu)選2至3倍、更優(yōu)選增加到2.8倍。
[0020] 在一個優(yōu)選的實施方案中，DPA的量或DHA和DPA的量的增加是通過由化-DHA轉化 而實現(xiàn)。更優(yōu)選地，DPA的量的增加與DHA的增加同時和/或相伴隨地發(fā)生，和/或由DHA的增 加所引起。
[0021] 此外，本發(fā)明設及包含DHA的憐脂作為載體用于增加幼年哺乳動物的大腦中DPA水 平或DHA和DPA水平的(產品的制造中的）用途。
[0022] 此外，本發(fā)明設及包含膳食DHA的憐脂用于通過增加幼年哺乳動物的組織和/或器 官中DPA的量或DHA和DPA的量來改善所述哺乳動物--優(yōu)選人類嬰兒一一的健康的（產品 的制造中的）用途。
[0023] 本發(fā)明還設及包含膳食DHA的憐脂(PkDHA)在制造用于增加幼年哺乳動物一一優(yōu) 選人類嬰兒一一的組織和/或器官中DPA的量或DHA和DPA的量的營養(yǎng)組合物中的用途。本發(fā) 明還設及用于增加幼年哺乳動物一一優(yōu)選人類嬰兒一一的組織和/或器官中DPA的量或DHA 和DPA的量的組合物，其中所述組合物含有包含DHA的憐脂(PkDHA)。優(yōu)選地，所述人類嬰兒 為早產兒。本發(fā)明還設及通過使幼年哺乳動物消耗包含膳食DHA的憐脂(化-DHA)而增加幼 年哺乳動物一一優(yōu)選人類嬰兒一一的組織和/或器官中DPA的量或DHA和DPA的量的方法。優(yōu) 選地，所述人類嬰兒為早產兒。在一個方面，本發(fā)明設及用于支持幼年哺乳動物的健康大腦 發(fā)育的（非治療性的）方法，所述方法包括通過使幼年哺乳動物消耗包含膳食DHA的憐脂 (化-DHA)而增加幼年哺乳動物的組織和/或器官中DPA的量或DHA和DPA的量。
【具體實施方式】
[0024] 本發(fā)明設及包含膳食DHA的憐脂用于增加幼年哺乳動物一一優(yōu)選人類嬰兒一一的 組織和/或器官中DPA的量或DHA和DPA的量的（產品的制造中的）用途。特別地，本發(fā)明設及 實現(xiàn)幼年哺乳動物的大腦的灰質中DPA的量或DHA和DPA的量的增加。更特別地，在幼年哺乳 動物的包含W下或由W下構成的組織和/或器官中實現(xiàn)DPA或DHA和DPA的增加:神經組織、 腦組織、大腦皮層灰質、腦灰質、視網膜、肝、大腦和/或眼睛。本發(fā)明的發(fā)明人驚奇地發(fā)現(xiàn)， 用包含膳食DHA的憐脂補充食物導致所述生物目標組織和器官中DHA的量的增加，同時伴隨 著DPA水平的增加。
[0025] LC-PUFA是嬰兒營養(yǎng)物的重要成分。LC-PUFA在哺乳動物和人類嬰兒的嬰兒大腦的 快速發(fā)育的過程中起到重要作用。在出生前生長和出生后早期生長的過程中，大量的DHA被 沉積在發(fā)育的大腦和視網膜中，腦組織中DHA的積累在出生后早期生長的過程中持續(xù)處于 高水平直到大約2歲。DHA是哺乳動物大腦中最豐富的ω-3脂肪酸，其在包括人類的靈長類 動物的圍產期中占脂肪酸的8-14%。在人類中，DHA自妊娠中期加速累積，在出生后的頭幾 個月達到拐點，并繼續(xù)積累在經過大腦重量的平穩(wěn)期后在約18歲進入平穩(wěn)期，并且保持穩(wěn) 定至生命結束。出生后，LC-PUFA被選擇性地結合、保留和被高度集中在生物活性大腦和視 網膜神經膜的憐脂雙分子層中。DHA包含視網膜光感受器膜的約40%的總脂肪酸，運使其成 為主要的膜組分。此外，包括DHA的LC-PUFA，影響膜功能、光感受器分化、視色素視紫紅質的 活化、幾種酶的活性、離子通道的功能W及神經遞質和類花生酸類的水平和代謝。在早產兒 中，LCPUFA的供給被過早地中斷，因此早產兒因胎盤供給的中斷而處于DHA累積不足的高風 險中。因此，LC-PUFA，特別是DHA，支持幼兒的健康大腦發(fā)育，同時支持視網膜發(fā)育和免疫功 能。
[00%] DPA，另一種ω -3LC-PUFA種類(通常表示為22:5 (n-3))，因其在諸如蛋黃和憐郵油 的食品添加劑中天然的低水平W及W純化形式的更有限的利用度而不如DHA和EPA研究廣 泛。雖然DPA與抑制血小板的聚集有關，但已有證據表明DPA在傷口愈合過程中、內皮細胞遷 移能力和血栓形成的發(fā)展中是重要的。此外，DPA具有轉錄活性并且降低了脂肪生成基因的 表達、FAS和蘋果酸酶的肝酶活性。而且，DPA對降低炎癥基因的表達具有積極作用，并且還 與降低膽固醇活性(特別是降低血漿總膽固醇和非高密度脂蛋白膽固醇）W及顯著改善主 動脈功能(特別是降低主動脈張力和改善主動脈舒張)有關。然而，到目前為止，在嬰兒配方 物中特定包含DPA作為LC-PUFA的來源還未得到監(jiān)管機構的提倡。在一個優(yōu)選的實施方案 中，本發(fā)明設及包含膳食DHA的憐脂用于通過增加幼年哺乳動物的組織和/或器官中DPA的 量或DHA和DPA的量來改善所述哺乳動物--優(yōu)選人類嬰兒--的健康的用途。特別地，本 發(fā)明的改善健康包括減輕炎癥、提高免疫反應、降低血栓形成的風險、改善傷口愈合過程 和/或降低膽固醇活性(特別是降低血漿總膽固醇和非高密度脂蛋白膽固醇）W及顯著改善 主動脈功能(特別是降低主動脈張力和改善主動脈舒張）。
[0027] 本文所給出的如本文所述的包含膳食DHA的憐脂在嬰兒或未成年哺乳動物的各種 組織和器官中轉化為DPA的數據可用于提供包含膳食DHA的憐脂的有益效果的更完整描述。 此外，運樣的理解一一DHA在新生哺乳動物中轉化為DPA-一提供的優(yōu)點在于，該化合物無 需被特定包含在嬰兒配方物中W獲得已知的健康效應，因為現(xiàn)在已得到更多關于DPA水平 將會通過補充DHA而增加的知識。
[0028] 在一個優(yōu)選的實施方案中，包含膳食DHA的憐脂為蛋憐脂。更優(yōu)選地，所述憐脂選 自憐脂酷膽堿、憐脂酷絲氨酸、憐脂酷乙醇胺、溶血憐脂酷膽堿、銷憐脂、溶血憐脂酷乙醇胺 W及憐脂酷肌醇，優(yōu)選憐脂酷膽堿或所述蛋憐脂的任意混合物但其至少包含憐脂酷膽堿。 根據本發(fā)明包含膳食DHA的憐脂適于在嬰兒配方物中使用。使用蛋憐脂的優(yōu)點是其因蛋憐 脂的固有的天然乳化特性而具有優(yōu)異的可消化性。其他優(yōu)選的憐脂包括可由憐郵油、魚油 獲得的或存在于其中的憐脂，和/或由藻類分離的或可由藻類獲得的憐脂。
[0029] 在一個優(yōu)選的實施方案中，膳食DHA包含于兩種W上、Ξ種W上、四種W上或五種 W上不同憐脂的混合物中。所述憐脂混合物優(yōu)選包含至少60重量％、更優(yōu)選至少65重量％、 最優(yōu)選至少70重量％的憐脂酷膽堿，基于憐脂的總重量計。優(yōu)選地，所述(包含DHA的）憐脂 的混合物包含至少70-75重量％的憐脂酷膽堿。其可還包含W下W指定量的額外憐脂：15- 20重量％的憐脂酷乙醇胺；3-4重量％的溶血憐脂酷膽堿;2-3重量％的銷憐脂；1-2重量％ 的溶血憐脂酷乙醇胺W及2-3重量％的憐脂酷肌醇。在一個可替代的實施方案中，所述憐脂 的混合物包含至少70-75重量％的憐脂酷膽堿且還包含W下指定量的額外憐脂：20-25重 量％的憐脂酷乙醇胺、0.5-2重量％的憐脂酷肌醇和2-8重量％的屯、憐脂。
[0030] 在一個優(yōu)選的實施方案中，膳食DHA包含于憐脂中，意指其結合到憐脂上。在一個 更優(yōu)選的實施方案中，膳食DHA存在于本發(fā)明憐脂載體的sn-2位。
[0031] 一旦從其醋化的分子憐脂載體中水解出，DHA就可通過正常的代謝過程進行同樣 地處理。膜脂肪酶在sn-1和sn-3位水解Ξ酷基甘油，與母乳吸收后主要的飽和sn-2脂肪酸 的留存一致，而大鼠中的腸憐脂酶水解sn-2位，留下主要的飽和sn-1位不變。腸甘油脂水解 的位置特異性確保了吸收后重組的憐脂將具有非隨機分布的脂肪酸，即使水解的脂肪酸中 發(fā)生了混亂。對于隨后的代謝，位置特異性可為代謝相關的，因為脂肪酸被納入膜中、被氧 化或被分泌到皮膚上。在重組為甘油Ξ醋、憐脂W及腸上皮細胞中的膽固醇和脂溶性維生 素醋之后，所吸收的脂類形成脂蛋白顆粒，使其在血液中輸送用于分配到各種組織中。
[0032] 在一個優(yōu)選的實施方案中，幼年哺乳動物大腦中，DHA的量顯示出增加到約2倍、優(yōu) 選增加到1.9倍。另外地或可選地，在幼年哺乳動物的大腦中，DPA的量顯示出增加到2至4 倍、優(yōu)選2至3倍、更優(yōu)選增加到2.8倍。
[0033] 在一個優(yōu)選的實施方案中，在幼年哺乳動物的大腦中，當使用化-結合的DHA相比 于(相應量的）TAG-結合的DHA時，DPA的量顯示出增加到至少2倍、更優(yōu)選增加到2至4倍、優(yōu) 選2至3倍、更優(yōu)選增加到2.8倍。在一個優(yōu)選的實施方案中，在幼年哺乳動物的肝中，當使用 Pk結合的DHA相比于(相應量的)TAG-結合的DHA時，DPA的量顯示出增加到至少2倍、更優(yōu)選 增加到2至4倍、優(yōu)選2至3倍、更優(yōu)選增加到2.6倍。在一個優(yōu)選的實施方案中，在幼年哺乳動 物的視網膜中，當使用?心結合的DHA相比于（相應量的）TAG-結合的DHA時，DPA的量顯示出 增加到至少2倍、更優(yōu)選增加到2至4倍、優(yōu)選2至3倍、更優(yōu)選增加到2.4倍。在一個優(yōu)選的實 施方案中，在幼年哺乳動物的突觸體中，當使用？心結合的DHA相比于(相應量的）TAG-結合 的DHA時，DPA的量顯示出增加到至少2倍、更優(yōu)選增加到2至4倍、優(yōu)選2至3倍、更優(yōu)選增加到 2.8 倍。
[0034] 在一個優(yōu)選的實施方案中，DPA的量的增加通過由膳食DHA轉化而實現(xiàn)。更優(yōu)選地， DPA的量的增加與DHA的增加同時和/或相伴隨地發(fā)生，和/或由DHA的增加所引起。
[0035] 在一個優(yōu)選的實施方案中，包含膳食DHA的憐脂在w-6PUFA充足的組合物中存在， 其包含ω -3和ω -6多不飽和脂肪酸，優(yōu)選ω -3: ω -6PUFA重量比為至少2:1。
[0036] 所述含有包含膳食畑A的憐脂的組合物優(yōu)選包含亞油酸(LA)和α-亞麻酸(ALA),優(yōu) 選LA: ALA的重量比為至少2:1，更優(yōu)選6:1至16:1。
[0037] 所述含有包含膳食DHA的憐脂的組合物優(yōu)選包含至少0.1重量％、優(yōu)選至少0.2重 量％、更優(yōu)選至少0.25重量％、甚至更優(yōu)選至少0.50重量％的ω-3PUFA，基于總的脂肪計。 該ω-3含量優(yōu)選不超過總的脂肪的10重量％、更優(yōu)選不超過5重量％。在一個優(yōu)選的實施方 案中，所述組合物中全部DHA的至少50重量％、更優(yōu)選至少75重量％、最優(yōu)選至少90重量％ W化-DHA的形式提供。
[0038] 在一個優(yōu)選的實施方案中，包含膳食DHA的憐脂存在于嬰兒配方物中。在一個實施 方案中，所述嬰兒配方物補充有包含DHA的憐脂。優(yōu)選地，人類嬰兒的年齡為0至36個月、優(yōu) 選0至24個月、更優(yōu)選0至12個月。因此，在一個優(yōu)選的實施方案中，嬰兒配方物中含有包含 膳食DHA的憐脂，該嬰兒配方物用于喂養(yǎng)年齡為0至36個月、優(yōu)選0至24個月、更優(yōu)選0至12個 月或甚至0至6個月的嬰兒。在另一個優(yōu)選的實施方案中，所述嬰兒配方物特別地為早產兒 設計和/或適合于早產兒。在一個實施方案中，在如上所述的組織和/或器官中，嬰兒需要增 加的DPA水平。在一個實施方案中，在運些組織和/或器官中，嬰兒表現(xiàn)出生理上可接受的 DHA水平。在一個實施方案中，在如上所述的組織和/或器官中，嬰兒存在DPA水平降低的風 險或遭受到DPA水平降低。
[0039] 在一個優(yōu)選的實施方案中，包含膳食DHA的憐脂存在于嬰兒配方物中，該嬰兒配方 物包含60-70kcal/100ml的能量水平，還包含適量的蛋白質、脂肪和碳水化合物。
[0040] 優(yōu)選地，嬰兒營養(yǎng)物的每lOOkcal營養(yǎng)物質包含W下的大量營養(yǎng)素和微量營養(yǎng)素： 1.8至3 . Og蛋白質，總脂肪含量優(yōu)選在4.4至6. Og之間，其中亞油酸優(yōu)選為至少300mg或在 300至1200mg之間，并且其中α-亞麻酸優(yōu)選為至少50mg，優(yōu)選亞油酸/α-亞麻酸的比例在5:1 至15:1之間，優(yōu)選總脂肪含量中月桂酸和肉豆違酸的總和在10至30重量％之間、優(yōu)選約20 重量％，優(yōu)選反式脂肪酸的水平為總脂肪含量的約2-4重量％，并且芥酸優(yōu)選存在的量為嬰 兒配方物中總脂肪含量的約0.5至2重量％或約1重量％。
[0041] 嬰兒配方物中的乳清蛋白與其余蛋白質的總和的重量比為優(yōu)選等于60:40或高于 0.6。乳清蛋白可W完整的或水解的形式存在。
[0042] 在一個優(yōu)選的實施方案中，嬰兒配方物的碳水化合物含量為9至14g/100kcal營養(yǎng) 物質，其中優(yōu)選乳糖的存在量為至少4.5g/升即食型配方物或可替代地為大于85重量％的 總碳水化合物。
[0043] 在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的嬰兒配方物包含憐脂的量為最多2g/l即食型 配方物或最多300mg/100kcal。
[0044] 此外，本發(fā)明設及憐脂作為膳食DHA的載體用于在幼年哺乳動物的大腦中增加 DPA 水平或增加 DHA和DPA水平的用途，其中所述幼年哺乳動物優(yōu)選為在組織和/或器官中存在 DPA水平降低的風險或遭受DPA水平降低的嬰兒。
[0045] 此外，本發(fā)明設及包含膳食DHA的憐脂用于通過增加幼年哺乳動物的組織和/或器 官中DPA的量或DHA和DPA的量來改善所述幼年哺乳動物一一優(yōu)選人類嬰兒一一的健康或維 持其生長和發(fā)育的用途。
[0046] 本發(fā)明還設及包含膳食DHA的憐脂作為食品補充劑用于增加幼年哺乳動物一一優(yōu) 選人類嬰兒一一的組織和/或器官中DPA的量或DHA和DPA的量的用途。
[0047] 定義
[0048] 本文中的術語"蛋憐脂"是指天然存在于蛋中一一特別是蛋黃中一一的憐脂。運些 憐脂使用溫和的基于乙醇的提取方法很容易地從蛋或蛋黃中分離出來，且市售可得用于嬰 兒營養(yǎng)物中。優(yōu)選的源于蛋的憐脂包括憐脂酷膽堿、憐脂酷絲氨酸、憐脂酷乙醇胺、溶血憐 脂酷膽堿、銷憐脂、溶血憐脂酷乙醇胺W及憐脂酷肌醇。蛋憐脂優(yōu)選是指包含大量的憐脂酷 膽堿(地OS地at i cy 1 cho 1 ine) (PC)的憐脂混合物。
[0049] 術語"DHA"，二十二碳六締酸的簡稱，在本文中是指其中存在有22個原子的碳鏈和 6個雙鍵的膳食長鏈多不飽和ω-3脂肪酸LC-PUFA，其在脂肪酸命名法中的簡寫名稱為22:6 (η_3)。
[0050] 術語"DPA"，二十二碳五締酸的簡稱，在本文中是指其中存在有22個原子的碳鏈和 5個雙鍵的膳食長鏈多不飽和ω-3脂肪酸LC-PUFA，其在脂肪酸命名法中的簡寫名稱為22:5 (η_3)。
[0051] 本文中的術語"人類嬰兒"是指年齡為0至36個月、優(yōu)選0至24個月、更優(yōu)選0至12個 月、最優(yōu)選0至個月的人類。在一個實施方案中，所述人類嬰兒優(yōu)選為早產兒。
[0052] 實施例
[0053] 化學
[0054]我們使用公開的方法化e，Ρ.Μ.，et al. 2007 .Biosynthetic production of univers曰lly(13)C-l曰belled polyuns曰tur曰ted f曰tty 曰cids 曰s reference m曰teri曰Is for natural health product research.Anal Bioanal 化em 389:241-249)來制備"C- 畑A并且通過Avanti化lar Lipids(Alabaster，AL，US)將其醋化為脂類。TAG示蹤劑（TAG- "C-DHA)在sn-2位具有"C-DHA，在sn-1和sn-3位具有未標記的16:0。代表化的示蹤劑為在 sn-2位具有"C-DHA且在sn-1位具有未標記的16:0的憐脂酷膽堿(PC) (PC-UC-DHA)。用于組 織脂類提取的溶劑是購自 Sigma-Aldr i ch (St.Louis，M0，US)或Burdick&Jackson (Muskegon，MI，US)的HPLC級。
[00巧]動物和飲食
[0056] 設及活豬盧的全部研究和所有操作均得到Cornell University的Institutional Animal (^ire and Use Committee(IACUC)的批準。母豬（約克夏豬（Yorkshire)與長白豬 化an化ace)雜交種）與漢普郡(Hampshire)公豬一起飼養(yǎng)。出生后，將豬盧留給母豬喂奶持 續(xù)至少48小時。基于W下標準選擇二十只豬盧、2至4日齡用于研究：重量（約2.0kg)，性別 (10雄和10雌），健康(活躍的和明顯正常的，且非該窩中最小的動物）W及母豬。給予豬盧一 個唯一的編號/顏色組合標識符，然后運送到Cornel 1 University的Large Animal Research and Teaching Unit(LARTU)。
[0057] 在研究地點，一旦抵達就立即將豬盧安置在各個不誘鋼籠中并且置于單個完全均 衡的、市售可得的幼年農場動物代乳配方物上。
[0058] 該配方物的脂肪酸分布示于表1中。存在DHA(0.02%w/w)并且化中略微更高但仍 為低水平(0.11%w/w)。當對所用的500ml喂養(yǎng)劑量制成適當的表格時，TAG、PLW及相關DHA 的測量示于表2中。與人乳和人類嬰兒配方物一樣，來自脂肪的總能量為約47%，且在該總 量中，絕大多數來自TAG(94%)。盡管在TAG和化中的DHA濃度均較低，但與27%來自化相比， 主要質量的TAG相對于化輸送了 73%的DHA，運同樣與人乳和其他哺乳動物乳汁一致。
[0059] 表1.豬盧乳配方物(替代品）的脂肪酸分布，Ww/w%表示。
[0060]
[0061] *表示反當動物脂肪。FA =脂肪酸。
[0062] 表2.豬盧代乳品中脂類和DHA分布。
[0063]
[0064] 第一周每6小時向各個槽中提供新鮮的配方物，隨后為每8小時。所有豬盧可自由I 獲取淡水。第一周每天記錄各組的配方物消耗量W確保其巧壯成長，并且隨后改為每Ξ天。 在第一周每隔一天收集并記錄豬盧的體重，并且隨后改為每Ξ天。均提供了豐富的用品 化nrichment)包括寢具、與其它豬盧的接觸、積極的人類接觸W及橡膠玩具。代乳品（豬盧 乳配方物)的脂肪酸組成示于表1中。
[0065] 喂食和采樣
[0066] 在出生的第16天，將16只健壯的豬盧分配成兩個喂食組，相對于性別、重量和年齡 保持平衡，但其他方面隨機分布。PC組口服喂食PC-13C-DHA ; TG組喂食TG-UC-DHA。四只最小 的豬盧用作天然豐度同位素對照組且不接受喂食劑，但除此之外與其他組進行同樣地處 理。
[0067] 喂食劑通過W下進行制備:將PC-UC-DHA或TG-UC-DHA的C肥13溶液溶于約1血的精 煉橄攬油中，并且通過在流動的干燥化下緩慢加熱4小時來除去CHC13。將所得的橄攬油仔細 地置于幾 mL重構的豬盧配方物的表面上并進行超聲處理直至均勻。在喂養(yǎng)開始時，將所得 的標記配方物通過重量分析法分成1至2血等份并經口服喂食給豬盧，隨后將含有標記配方 物的小瓶洗涂幾次。小屯、操作W確保所有的標記配方物和洗液（由總量最高達lOmL組成)均 被豬盧吞食。隨后向豬盧提供其日常完全消耗的500mL代乳品的正常餐食。豬盧的喂食劑量 對應于在PC中輸送的約20mgUC-DHA且在TAG中輸送的86mgi3C-冊A。
[0068] 喂食6天后且在喂食配方物20天后的一天，將所有豬盧通過在麻醉下放血安樂死。 將用于脂肪酸分析的血液收集在含有抓TA的試管中并離屯、來制備紅細胞。在尸體解剖時迅 速收集大腦皮層上表面上的表面幾 mm的灰質。將一片立即用于制備突觸體，并且將剩余的 灰質快速冷凍用于脂肪酸分析。還收集了視網膜、屯、臟、肝、化二頭肌肌肉W及腎，并將所有 組織快速冷凍并在-80°C下保存直到準備用于分析。
[0069] 使用Syn-PER突觸蛋白提取試劑（Synaptic Protein Extraction Reagent) (Thermo Scientific，Waltham，MA，US)根據制造商的說明書來制備突觸體。簡言之，將ImL 的Syn-P邸試劑加入至~lOOmg的腦組織樣品中。使樣品均化并且將均化物在l，200g下離屯、 10分鐘。收集上清液并進一步在15,000g下離屯、20分鐘。回收小球狀的突觸體，并且立即提 取脂類。
[0070] 脂類提取和分析
[0071] 從大腦灰質和白質的樣品中提取總脂類，將突觸體小球、肝、屯、臟和整個視網膜同 時消化，并使用如先前詳述的一步法來制備FAME(Zhou，Y.，et al 2008.The influence of maternal early to mid-gestation nutrient restriction on long chain polyunsaturated fatty acids in fetal she邱.Lipids 43:525-531)。對于血漿和紅細 胞，采用Bligh-Dyer法來提取總脂類，并且使用14%BF3于甲醇來制備FAME(Bli曲，E.，and W.Dyer.1959.A rapid method of total lipid extraction and purification.Can J Biochem Physiol 37:911-917)。恰好在提取之前，將已知量的新鮮制備的十屯燒酸于氯仿 中的溶液(99%純，Sigma Chemical)作為內標物加入至組織樣品中。將FAME溶解在庚燒中 并且在-2(TC下保存直到進行分析。
[0072] 使用具有BPX 70柱（60m 0.32mm內徑0.25μπι膜;Hewlett PackarcUPalo Alto,CA， U.S.A.)及出作為載氣的化wlett化ckard 5890系列II GC-FID來分析FAME。使用內標物和 等重量的FAME混合物來計算定量分布，W推導出各個脂肪酸的響應因子。
[007引 130 DHA分析
[0074] 在FAME混合物上使用類似于定量分析的GC柱條件對FAME混合物進行1化畑A的示 蹤劑分析，其如已在先前詳述的（Goodman,K.J.，and J.T.&renna. 1992.Hi曲 sensitivity tracer detection using high-precision gas chromatography-combustion isotope ratio mass spectrometry and highly enriched[U-13C]-labeled precursors.Anal Chem 64:1088-1095)。示蹤劑分析的儀器為連接至燃燒爐接口和Thermo Scientific 253 同位素比例質譜儀（IRMS)的Agilent 6890氣相色譜儀。從GC洗脫的FAME被燃燒成C〇2、干燥 并進入至IRMS。數據處理如先前所述(Wijen化an，V.，et al.2002.Effica巧of dietaiT 曰r曰chidonic 曰cid provided 曰s triglyceride or phospholipid 曰s substrates for brain arachidonic acid accretion in baboon neonates.Pediatr Res 51:265-272)。 將先前(6〇〇血日11，1(.1，日11(111'.化日冊日.1992)所定義的常規(guī)高精度符號同位素比例61化轉 化為13201C的分數。對于每一種脂肪酸，從富集組的平均的同位素比例中減去對照組的平 均同位素比例W得到原子分數富集(atom打action enrichment)，隨后將其轉化為反映特 定源（pool)中示蹤劑表現(xiàn)的％劑量（％ Dose)。主要結果是分別表現(xiàn)大腦灰質中TAG和化 的％劑量的相對比較。肝和視網膜中所發(fā)現(xiàn)的總％劑量由其相應的重量直接計算出。在腦 灰質和RBC中估計總的標記DHA。由人體成像數據所估算的大腦中灰質的相對量被認為是 60%(Miller,Α.Κ.,R.L.Alston,and J.A.Corsellis.1980.Variation with age in the volumes of grey and white matter in the cerebral hemispheres of man： measurements with an image analyser.Neuropathol Appl Neurobiol 6:119-132)。對 于RBC,血液體積估計為體重的8.5%且血細胞比容為約35%。對于灰質突觸體，不試圖估計 總量且將％劑量歸一化為所發(fā)現(xiàn)的最高數值。在所有情況下，所估計的質量應用于實驗組 且在主要和次要結果計算中抵消，因此不會影響最終結果。
[0075] 歷
[0076] 主要結果，來自PC和TAG的相對DHA%劑量。主要結果為"C-DHA喂食組與TAG-UC- 畑A喂食組相比在大腦皮層的灰質中所發(fā)現(xiàn)的1化-畑A的相對％劑量。兩個喂食組的％劑量 通過利用單向方差分析法進行等效性測試，其中P<〇.05被認為是顯著的。
[0077] 次要結果
[0078] 將各種源中的總的未標記脂肪酸通過W成對的方式在兩個喂食組中比較且沒有 顯著的不同，因此被合并(pooled)。因為運兩個組被喂養(yǎng)相同的配方物并且除幾 mg劑量外 均進行同樣地處理，因此希望基于該處理沒有差異。
[0079] 將突觸體、視網膜和肝的相對"C-DHA%劑量進行類似于主要結果的比較。TAG和化 中所輸送的總DHA的相對逐餐(meal-wi se)量由確定出的500mL餐食的配方物中冷DHA的相 對量來進行計算。
[0080] 緝里
[0081] ^因其與人類的代謝類似而長期被用作用于嬰兒營養(yǎng)品的公認模型，并且在許 多研究中已被用于研究由TAG相較于化的LC-PUFA輸送的方面。此外，豬通常被認為是用于 研究人類大腦發(fā)育的良好的模型，因為它是為數不多的實驗動物中具有類似于人類的腦迅 猛發(fā)育過程，并且其為一種大型非反當類雜食動物。
[0082] 兩個喂食組的豬盧均W相同的速度生長并且獲得無明顯不同的最終重量，對于憐 脂酷膽堿(PC)和甘油立醋巧46)喂食組分別為9.4±0.3kg和9.1±0.4kg。同位素對照組特 意選擇最小的動物并且與其他組平行生長，開始低約6%的體重且最終低約12%的體重。希 望運些動物產生對基線同位素比例的精確估計，運同樣地應用于兩個實驗組。
[0083] 僅在所有的脂肪酸中檢測到DHA和22:5n-3(DPAn-3)的1化標記。在"C-DHA-PC喂食 動物的大腦皮層灰質中檢測到最高％劑量，為約0.4%。來自TAG喂食的UC-DHA為該值的約 一半，因此，膳食PC向發(fā)育的豬盧大腦提供DHA的有效性是TAG的1.9倍。灰質突觸體中的結 果與該相對值一致。PC的標記DHA的相對積累比例是TAG的1.7倍。
[0084] 對于PC喂食，轉化的DPA n-3產物被標記為低于0.05 %劑量，并且小于TAG喂食的 一半。出人意料地，PC相對于TAG的相對功效明顯不同，對于大腦皮層灰質和灰質突觸體而 言比例為約2.8，PC相對于TAG的優(yōu)越性同樣為2.8倍。
[0085] 在喂食后6天，肝保留了6.8%的PCi3C-劑量，相比于TAG喂食的3.5%。相對功效為 1.9,類似于灰質和突觸體。肝的"C-DHA總體是灰質的約20倍。出人意料地，DPAn-3顯著增 加，其在肝中的量對于PC而言是TAG的2.6倍。在灰質中，"C-DHA是13C-DPA的約8倍，而在肝 中 13C-DHA 是 13C-DPA 的 40 倍。
[0086] 對于視網膜，對于DHA而言P討目對于TAG的相對功效為2.2倍，并且出人意料地，對 于DPAn-3而言明顯不同，為約2.4倍，均類似于且與所檢測的其他組織的結果一致。與大腦 的一致但與肝的相反，13〔-〇齡是〇口411-3的6.3倍，再次表明在肝的外部且可能在視網膜中進 行了轉化。此外，作為視網膜DHA的來源，TAG占主要地位。
[0087] 本文所給出的數據表明畑A向1化-22:5-3的轉化，W及使用Pk結合的DHA的平行優(yōu) 勢。沒有在20:5n-3中發(fā)現(xiàn)若用標記的乙酸醋延長18:3n-3則將被預料到的標記，并且沒有 在其他的脂肪酸中發(fā)現(xiàn)標記的證據，表明乙酸醋源不是畑A向DPA的轉化過程中的因素。運 些考慮均表明22:5中的標記不是通過乙酸醋進行的。
【主權項】
1. 包含膳食DHA的磷脂(PL-DHA)在制造用于增加幼年哺乳動物的組織和/或器官中DPA 的量或DHA和DPA的量的產品中的用途。2. 根據權利要求1的用途，其中所述幼年哺乳動物為在組織和/或器官中存在DPA水平 降低的風險或遭受DPA水平降低的人類嬰兒。3. 根據權利要求1或2的用途，其中DPA的量或DHA和DPA的量在幼年哺乳動物--優(yōu)選 人類嬰兒一一的大腦、眼睛和肝中增加。4. 根據權利要求1-3的用途，其中所述組織和/或器官包含以下或由以下所構成：幼年 哺乳動物的神經組織、腦組織、大腦皮層灰質、腦灰質、突觸體、視網膜或肝。5. 根據權利要求1-4的用途，其中所述磷脂為蛋磷脂。6. 根據權利要求1-5的用途，其中所述磷脂選自磷脂酰膽堿、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰乙 醇胺、溶血磷脂酰膽堿、鞘磷脂、溶血磷脂酰乙醇胺以及磷脂酰肌醇，優(yōu)選磷脂酰膽堿或含 有磷脂酰膽堿的蛋磷脂的混合物，且其中磷脂酰膽堿的量為磷脂混合物的60至80重量％。7. 根據權利要求1-6的用途，其中所述膳食DHA存在于磷脂載體的sn-2位。8. 根據權利要求1-7的用途，其中所述包含膳食DHA的磷脂(PL-DHA)存在于嬰兒配方物 中。9. 根據權利要求1-8的用途，其中所述幼年哺乳動物為年齡為0至36個月、優(yōu)選0至24個 月、更優(yōu)選〇至12個月的人類嬰兒。10. 根據權利要求1-9的用途，其中在幼年哺乳動物的大腦中，所述DPA的量顯示出增加 到2至4倍、優(yōu)選2至3倍、更優(yōu)選增加到2.8倍。11. 根據權利要求1-10的用途，其中在幼年哺乳動物的肝中，所述DPA的量顯示出增加 到2至4倍、優(yōu)選2至3倍、更優(yōu)選增加到2.6倍。12. 根據權利要求1-11的用途，其中在幼年哺乳動物的視網膜中，所述DPA的量顯示出 增加到2至4倍、優(yōu)選2至3倍、更優(yōu)選增加到2.4倍。13. 根據權利要求1-12的用途，其中所述DPA的量的增加通過由膳食DHA轉化而實現(xiàn)。14. 根據權利要求1-13的用途，其中所述DPA的量的增加與DHA的增加同時和/或相伴隨 地發(fā)生，和/或由DHA的增加所引起。15. 包含DHA的磷脂(PL-DHA)作為載體在制造用于增加幼年哺乳動物的組織和/或器官 中DPA或DHA和DPA的產品中的用途，其中所述幼年哺乳動物優(yōu)選為在組織和/或器官中存在 DPA水平降低的風險或遭受DPA水平降低的人類嬰兒。16. 包含膳食DHA的磷脂(PL-DHA)在制造用于通過增加幼年哺乳動物的組織和/或器官 中DPA的量或DHA和DPA的量來改善幼年哺乳動物一一優(yōu)選人類嬰兒一一的健康的產品中的 用途，其中所述幼年哺乳動物優(yōu)選為在組織和/或器官中存在DPA水平降低的風險或遭受 DPA水平降低的人類嬰兒。17. 包含膳食DHA的磷脂（PL-DHA)在制造用于增加幼年哺乳動物一一優(yōu)選人類嬰 兒--的組織和/或器官中DPA的量或DHA和DPA的量的食品補充劑中的用途，其中所述幼年 哺乳動物優(yōu)選為在組織和/或器官中存在DPA水平降低的風險或遭受DPA水平降低的人類嬰 兒。18. 根據權利要求17的用途，其中所述食品為嬰兒配方物。19. 用于支持幼年哺乳動物的健康大腦發(fā)育的方法，所述方法包括通過使幼體哺乳動 物消耗包含膳食DHA的磷脂(PL-DHA)而增加幼年哺乳動物的組織和/或器官中DPA的量或 DHA和DPA的量，所述幼年哺乳動物優(yōu)選為人類嬰兒。20. 用于增加幼年哺乳動物的組織和/或器官中DPA的量或DHA和DPA的量的組合物，其 中所述組合物含有包含DHA的磷脂(PL-DHA)，所述幼年哺乳動物優(yōu)選為人類嬰兒。21. 根據權利要求20的用于所述用途的組合物，其中所述幼年哺乳動物為在組織和/或 器官中存在DPA水平降低的風險或遭受DPA水平降低的人類嬰兒。
【文檔編號】A23L33/00GK105899204SQ201480072597
【公開日】2016年8月24日
【申請日】2014年11月7日
【發(fā)明人】N·巴特克, B·沃布斯
【申請人】N·V·努特里奇亞