野芋抗癌環(huán)烯醚萜苷提取物的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種野芋抗癌環(huán)烯醚萜苷提取物的制備方法，其特征在于，其包括如下步驟：步驟一：以野芋為原料，采用溶劑提取法、溶劑萃取法、樹(shù)脂吸附法、正相柱層析法中的一種或者多種工藝；步驟二：結(jié)合濃縮干燥、冷凍干燥，噴霧干燥等常用干燥方法制備成尖尾芋木脂素酰胺提取物；步驟三：將制成的提取物作為抗癌活性成分，使之與適宜的賦彤劑相結(jié)合；步驟四：按常規(guī)方法制成的口服給藥的內(nèi)用劑型及非口服給藥的注射荊和外用劑型在癌癥治療中進(jìn)行應(yīng)用。本發(fā)明工藝簡(jiǎn)單實(shí)用，抗癌療效好，并且無(wú)毒副作用，為野芋應(yīng)用提供了廣泛的途徑。
【專利說(shuō)明】
野芋抗癌環(huán)稀離瞄昔提取物的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種提取物的制備方法，特別是設(shè)及一種野芋抗癌環(huán)締酸祗巧提取物 的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 野芋（Colocasia antiquorum Schott et Endl)為天南星科植物野芋，其葉為中 藥，生于山澗陰濕處，或樹(shù)旁溝邊、河邊。分布于廣東、廣西、四川等地。該植物能清熱、解毒、 活血、消腫，治療瘡、癡腫、丹毒，跌打損傷，慢性氣管炎、鉤端螺旋體病等疾病[有毒中藥藥 性藥理及臨床研究應(yīng)用實(shí)用手冊(cè)，（1977年，上海人民出版社），pp.302-303]。迄今為止， 對(duì)海芋的研究很少，多見(jiàn)于一般藥效學(xué)報(bào)道。有關(guān)野芋的抗癌藥理活性很少報(bào)道，僅見(jiàn)侯學(xué) 文從中分離得到一個(gè)凝集素，其對(duì)肺腺癌細(xì)胞株P(guān)18僅有很少殺傷能力。癌癥是當(dāng)今社會(huì)發(fā) 病率高、死亡率高的一種頑疲，目前尚無(wú)治愈率較高的藥物的報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種野芋抗癌環(huán)締酸祗巧提取物的制備方法， 其工藝簡(jiǎn)單實(shí)用，抗癌療效好，并且無(wú)毒副作用，為野芋應(yīng)用提供了廣泛的途徑。
[0004] 本發(fā)明是通過(guò)下述技術(shù)方案來(lái)解決上述技術(shù)問(wèn)題的：一種野芋抗癌環(huán)締酸祗巧提 取物的制備方法，其特征在于，其包括如下步驟： 步驟一 野芋為原料，采用溶劑提取法、溶劑萃取法、樹(shù)脂吸附法、正相柱層析法中的 一種或者多種工藝； 步驟二:結(jié)合濃縮干燥、冷凍干燥，噴霧干燥等常用干燥方法制備成尖尾芋木脂素酷胺 提取物； 步驟Ξ:將制成的提取物作為抗癌活性成分，使之與適宜的賦形劑相結(jié)合； 步驟四：按常規(guī)方法制成的口服給藥的內(nèi)用劑型及非口服給藥的注射荊和外用劑型 在癌癥治療中進(jìn)行應(yīng)用。
[0005] 優(yōu)選地，所述野芋是根莖或是枝葉的任一部位、果實(shí)的任一部位，野芋是新鮮采集 的或是經(jīng)過(guò)炮制的。
[0006] 優(yōu)選地，所述野芋環(huán)締酸祗巧提取物包括其中主要所含的各種類型的環(huán)締酸祗巧 類的化合物。
[0007] 優(yōu)選地，所述溶劑提取法選用水、甲醇、乙醇、正下醇或者其他低級(jí)脂肪醇中的一 種溶媒，在室溫下漫潤(rùn)提取或者用超聲波振蕩儀超聲振蕩提取，或者在加熱狀態(tài)下漫潤(rùn)提 取或回流提取，提取次數(shù)是一次獲是多次。
[000引優(yōu)選地，所述溶劑萃取法將經(jīng)水或者低級(jí)脂肪醇中的一種溶媒或者混合溶媒提取 并經(jīng)所獲得的提取物混懸于水中，經(jīng)低極性溶媒脫脂。
[0009]優(yōu)選地，所所述正相柱屢析法選用常壓或加壓硅膠柱層析或者氧化侶柱層析，正 相柱屢析法的所用柱填料可選柱層析用硅膠或氧化侶，或者薄層層析用硅膠或氧化侶，洗 脫選用苯：丙酬、二氯甲燒：丙酬、苯：甲醇、二氯甲燒：甲醇、Ξ氯甲燒：甲醇.乙酸乙醋：甲 醇，苯:丙酬:水、二氯甲燒:丙酬:水、Ξ氯甲燒:丙酬:水、二氯甲燒：甲醇：水、Ξ氯甲燒：甲 醇：水或者乙酸乙醋：甲醇：水等溶媒中的一種或者多種，正相柱屢析法的洗脫是等濃度洗 脫或梯度洗脫。
[0010]本發(fā)明的積極進(jìn)步效果在于：本發(fā)明工藝簡(jiǎn)單實(shí)用，抗癌療效好，并且無(wú)毒副作 用，為野芋應(yīng)用提供了廣泛的途徑。本發(fā)明制備的野芋抗癌環(huán)締酸祗巧提取物具有很好的 抗腫瘤活性。
【具體實(shí)施方式】
[0011 ]下面結(jié)合給出本發(fā)明較佳實(shí)施例，W詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案。
[0012] 本發(fā)明野芋抗癌環(huán)締酸祗巧提取物的制備方法，主要包括如下步驟： 步驟一 野芋為原料，采用溶劑提取法、溶劑萃取法、樹(shù)脂吸附法、正相柱層析法等工 藝中的一種或者多種工藝； 步驟二:結(jié)合濃縮干燥、冷凍干燥，噴霧干燥等常用干燥方法制備成尖尾芋木脂素酷胺 提取物； 步驟Ξ:將制成的提取物作為抗癌活性成分，使之與適宜的賦形劑相結(jié)合； 步驟四：按常規(guī)方法制成的口服給藥的內(nèi)用劑型及非口服給藥的注射荊和外用劑型 在癌癥治療中進(jìn)行應(yīng)用。
[0013] 所述抗癌新藥尖尾芋提取物的制備方法:植物原料野芋(Co 10caSia antiquorum Schott et Endl)可W是根莖，也可W是枝葉、果實(shí)等全草的任一部位，原辮可W是新鮮采 集的，也可W是經(jīng)過(guò)炮制的。
[0014] 所述抗癌新藥野芋提取物的制備方法:作為抗癌活性成分的野芋環(huán)締酸祗巧提取 物包括其中主要所含的各種類型的環(huán)締酸祗巧類的化合物。
[0015] 所述抗癌新藥野芋環(huán)締酸祗巧提取物制備方法:所采用的溶劑提取法中，可選用 水、甲醇、乙醇、正下醇或者其他低級(jí)脂肪醇中的一種溶媒，在室溫下漫潤(rùn)提取或者用超聲 波振蕩儀超聲振蕩提取，或者在加熱狀態(tài)下漫潤(rùn)提取或回流提取，提取次數(shù)可W是一次，也 可W是多次。
[0016] 所述抗癌新藥野芋環(huán)締酸祗巧提取物制備方法:所采用的溶劑萃取法中，可將經(jīng) 水或者低級(jí)脂肪醇中的一種溶媒或者混合溶媒提取并經(jīng)所獲得的提取物混懸于水中，經(jīng)低 極性溶媒(如石油酸、乙酸等中的一種或兩種)脫脂。
[0017] 所述抗癌新藥野芋提取物的制備方法:所采用的樹(shù)脂吸附法中，樹(shù)脂可選用AB-8 型吸附樹(shù)脂，D-101型吸附樹(shù)脂或者皿P-100型吸附樹(shù)脂W及其他類型的吸附樹(shù)脂，洗脫溶 媒用水、甲醇、乙醇、丙酬、含水甲醇、含水乙醇或者含水丙酬中的一種或多種，洗脫是可W 等濃度洗脫，也可W梯度洗脫。
[0018] 所述抗癌新藥野芋環(huán)締酸祗巧提取物的制備方法:所采用的正相柱屢析法中，可 選用常壓或加壓硅膠柱層析或者氧化侶柱層析，所用柱填料可選柱層析用硅膠或氧化侶， 或者薄層層析用硅膠或氧化侶，洗脫可選用苯:丙酬、二氯甲燒:丙酬、苯：甲醇、二氯甲燒： 甲醇、Ξ氯甲燒：甲醇.乙酸乙醋：甲醇，苯：丙酬：水、二氯甲燒：丙酬：水、Ξ氯甲燒：丙酬： 水、二氯甲燒：甲醇：水、Ξ氯甲燒：甲醇：水或者乙酸乙醋：甲醇：水等溶媒中的一種或者多 種，洗脫是可w等濃度洗脫，也可w梯度洗脫。
[0019] 實(shí)施例1:溶劑提取法/溶劑萃取法提取制備海芋生物堿提取物 野芋化g用70%乙醇在90°C下回流，合并提取液，濃縮得到130g乙醇提取物。將乙醇提 取物混懸于水中，用石油酸萃取脫脂，脫脂后經(jīng)濃縮干燥即可得到尖尾芋提取物，收率為 70% 實(shí)施例2:溶劑提取法/樹(shù)脂吸附法合用提取制備尖尾芋提取物 野芋1.0 kg用70%乙醇在90°C下回流，合并提取液，濃縮得到130g乙醇提取物。乙醇提 取物上AB-8型吸附樹(shù)脂柱，先用水、5%乙醇-水洗脫W除去色素和雜質(zhì)，而后用60%乙醇- 水洗脫。其中60%乙醇-水洗脫部分減壓濃縮除乙醇，再經(jīng)冷凍干燥可得到尖尾芋提取物， 收率為30 %。
[0020] 實(shí)施例3:野芋提取物的體外抑瘤實(shí)驗(yàn) 3.1細(xì)胞株、試劑及儀器 人結(jié)腸癌肥T-8細(xì)胞株購(gòu)自中科院細(xì)胞庫(kù);DMEM培養(yǎng)液，Gibco產(chǎn)品；胎牛血清，G化CO產(chǎn) 品；膜蛋白酶，G化CO產(chǎn)品；DMS0溶液，Sigma公司；96孔板，Corning公司；Revco 3000培養(yǎng)箱， Thermo公司；Multishkan MK3 酶標(biāo)儀，Thermo公司。
[0021] 3.2腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)方法 人結(jié)腸癌肥T-8細(xì)胞株用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為37°C，5%C02 濃度及飽和濕度。當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí)，用25%膜酶消化細(xì)胞，洗涂吹散細(xì)胞稀釋至 106/ml，每孔10化L接種于96孔板，W備MTT實(shí)驗(yàn)。
[0022] 3.3細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)(MTT法） 野芋環(huán)締酸祗巧提取物溶于DMS0溶液，取含1%〇DMSO的野芋提取物溶液，用含10%胎牛 血清的DMEM溶液配成濃度分別為100、50、20、化g/mL的野芋提取物溶液，每孔10化L接種于 96孔板，混勻，使野芋提取物每孔終濃度分別達(dá)到50、25、10、化肖/1^，放入培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng) 16、32、4她。每孔加入5mg/mLMTT溶液扣L，繼續(xù)培養(yǎng)化，測(cè)定各孔吸光度。W不加任何處理的 培養(yǎng)細(xì)胞為空白對(duì)照，W單用培養(yǎng)細(xì)胞作為陰性對(duì)照。每個(gè)濃度梯度均設(shè)置12個(gè)平行組，分 別計(jì)算細(xì)胞抑制率。按照W下公式(1)計(jì)算抑制率： 抑制率=1-(實(shí)驗(yàn)組吸光度平均值/對(duì)照組吸光度平均值）X 100%……（1) 結(jié)果見(jiàn)表1: 表1野芋環(huán)締酸祗巧提取物對(duì)化la細(xì)胞體外增殖的抑制作用
t檢驗(yàn)，*p<0.05，**p<0. ο 1，結(jié)果表明：不同濃度，不同培養(yǎng)時(shí)間的海芋生物堿提取物可 顯著抑制人結(jié)腸癌HCT-8細(xì)胞的增殖，提示其可能有一定的抗癌效果。
[0023] W上所述的具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明的解決的技術(shù)問(wèn)題、技術(shù)方案和有益效果進(jìn)行 了進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明，所應(yīng)理解的是，W上所述僅為本發(fā)明的具體實(shí)施例而已，并不用于限制 本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所做的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本 發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種野芋抗癌環(huán)烯醚萜苷提取物的制備方法，其特征在于，其包括如下步驟： 步驟一：以野芋為原料，采用溶劑提取法、溶劑萃取法、樹(shù)脂吸附法、正相柱層析法中的 一種或者多種工藝； 步驟二:結(jié)合濃縮干燥、冷凍干燥，噴霧干燥等常用干燥方法制備成野芋環(huán)烯醚萜苷提 取物； 步驟三:將制成的提取物作為抗癌活性成分，使之與適宜的賦彤劑相結(jié)合； 步驟四：按常規(guī)方法制成的口服給藥的內(nèi)用劑型及非口服給藥的注射荊和外用劑型 在癌癥治療中進(jìn)行應(yīng)用。2. 如權(quán)利要求1所述的野芋抗癌環(huán)烯醚萜苷提取物的制備方法，其特征在于，所述野芋 是根莖或是枝葉的任一部位、果實(shí)的任一部位，野芋是新鮮采集的或是經(jīng)過(guò)炮制的。3. 如權(quán)利要求1所述的野芋抗癌環(huán)烯醚萜苷提取物的制備方法，其特征在于，所述野芋 環(huán)烯醚萜苷提取物包括其中主要所含的各種類型的環(huán)烯醚萜苷類的化合物。4. 如權(quán)利要求1所述的野芋抗癌環(huán)烯醚萜苷提取物的制備方法，其特征在于，所述溶劑 提取法選用水、甲醇、乙醇、正丁醇或者其他低級(jí)脂肪醇中的一種溶媒，在室溫下漫潤(rùn)提取 或者用超聲波振蕩儀超聲振蕩提取，或者在加熱狀態(tài)下漫潤(rùn)提取或回流提取，提取次數(shù)是 一次獲是多次。5. 如權(quán)利要求1所述的野芋抗癌環(huán)烯醚萜苷提取物的制備方法，其特征在于，所述溶劑 萃取法將經(jīng)水或者低級(jí)脂肪醇中的一種溶媒或者混合溶媒提取并經(jīng)所獲得的提取物混懸 于水中，經(jīng)低極性溶媒脫脂。6. 如權(quán)利要求1所述的野芋抗癌環(huán)烯醚萜苷提取物的制備方法，其特征在于，所述樹(shù)脂 吸附法采用樹(shù)脂，樹(shù)脂選用AB-8型吸附樹(shù)脂、D-IOl型吸附樹(shù)脂或者HDP-IOO型吸附樹(shù)脂，洗 脫溶媒用水、甲醇、乙醇、丙酮、含水甲醇、含水乙醇或者含水丙酮中的一種或多種，樹(shù)脂吸 附法的洗脫是等濃度洗脫或梯度洗脫。7. 如權(quán)利要求1所述的野芋抗癌環(huán)烯醚萜苷提取物的制備方法，其特征在于，所述正相 柱屢析法選用常壓或加壓硅膠柱層析或者氧化鋁柱層析，正相柱屢析法的所用柱填料可選 柱層析用硅膠或氧化鋁，或者薄層層析用硅膠或氧化鋁，洗脫選用苯：丙酮、二氯甲烷：丙 酮、苯：甲醇、二氯甲烷：甲醇、三氯甲烷：甲醇.乙酸乙酯：甲醇，苯：丙酮：水、二氯甲烷：丙 酮:水、三氯甲烷:丙酮:水、二氯甲烷：甲醇:水、三氯甲烷：甲醇：水或者乙酸乙酯：甲醇：水 等溶媒中的一種或者多種，正相柱屢析法的洗脫是等濃度洗脫或梯度洗脫。
【文檔編號(hào)】A61K36/888GK105878622SQ201610223090
【公開(kāi)日】2016年8月24日
【申請(qǐng)日】2016年4月12日
【發(fā)明人】陳國(guó)瑞
【申請(qǐng)人】上海歷鼎生物技術(shù)有限公司