用于預(yù)防和/或治療人中的hiv疾病的藥物組合物的制作方法
【專利說明】
[00011 本申請是申請?zhí)枮?01280026590.4,申請日為2012年4月6日，發(fā)明名稱為"用于預(yù) 防和/或治療人中的HIV疾病的藥物組合物"的中國專利申請的分案申請。
技術(shù)領(lǐng)域
[0002] 本發(fā)明涉及含有特異性HIV抗原和非致病細(xì)菌的混合物的藥物組合物。所述特異 性HIV抗原包括一個或多個來自Gag和/或Pol蛋白的表位，且優(yōu)選其在顆粒(particulate) 的形式下。所述細(xì)菌優(yōu)選是植物乳桿菌(Lactobaci Ilus plantarum)。這些組合物對預(yù)防 和/或治療人中的HIV疾病是有用的。
【背景技術(shù)】
[0003] 在發(fā)現(xiàn)人免疫缺陷病毒(HIV)后超過25年，來自世界衛(wèi)生組織和HIV/AIDS的聯(lián)合 國聯(lián)合計劃的最新預(yù)測(projection)表明，如果大流行以目前的速度進(jìn)展，到2011年將有 超過3千萬人感染。
[0004] 但是，盡管為了發(fā)現(xiàn)對預(yù)防HIV感染有效的治療作出大量的研究努力，目前兩種測 試的預(yù)防性疫苗或者失敗(Me Elrath等人，2008)或者產(chǎn)生中度效果(Rerks-Ngarm等人， 2009) 〇
[0005] Jae-Sung Yu 等人（Clinical and Vaccine Immunology ,2006 十一月，13 卷， No. 11，1204-1211)描述了重組包皮垢分枝桿菌(Mycobacterium smegmatis)載體，其構(gòu)建 用于表達(dá)作為表面、細(xì)胞內(nèi)或分泌蛋白的M組HI V-1共有env基因⑶N6。作者能證明在小鼠 中，重組包皮垢分枝桿菌(M. smegmatis)對在粘膜表面誘導(dǎo)HIV-I T細(xì)胞反應(yīng)是免疫原性 的。
[0006] Ke-Qin Xin等人(Blood,2003六月1,102卷，No. 1,223-228)描述了在其細(xì)胞表面 表達(dá)HIV-I Env V2-V4環(huán)的重組乳酸乳球菌(Lactococcus Iactis)載體。用該載體口服免 疫小鼠誘導(dǎo)：
[0007] -粘膜和體液免疫反應(yīng)，如通過檢測到高水平的HIV特異性血清IgG和排泄物IgA抗 體所表明的;和
[0008] -細(xì)胞免疫反應(yīng)，如通過HIV特異性IFN γ分泌細(xì)胞的數(shù)量增加所表明的。
[0009] 為了在乳酸乳球菌(L. Iactis)細(xì)胞表面正確表達(dá)，可以使用Ikb或小于Ikb的基因 片段（segment)。
[0010] 大多數(shù)參與HIV發(fā)病機(jī)理和預(yù)防的科學(xué)家感覺在測試用于預(yù)防或治療人類HIV感 染的HIV預(yù)防性疫苗或其它生物組合物之前，在非人的靈長目中測試其對應(yīng)物將更有建設(shè) 性意義(Morgan C，等人，2008)。選擇的非人靈長目是恒河猴(macaques rhesus)，在獼猴 (macaques)中，現(xiàn)在已經(jīng)確鑿地表明感染猴免疫缺陷病毒(SIV)239的中國來源的獼猴是模 擬多數(shù)人中HIV感染演化的臨床、病毒學(xué)和免疫方面最好的模型(Marcondes MC等人，2006; Stahl-Hennig C等人，2007;Chen S等人，2008)。
[0011]最后，現(xiàn)在科學(xué)界認(rèn)同，一旦在獼猴中發(fā)現(xiàn)抗SIV239有效的預(yù)防性生物組合物或 疫苗，其應(yīng)當(dāng)完全可能成功地適用于人來保護(hù)其免受AIDS。
[0012] 盡管科學(xué)界持久的研究努力，仍然期待預(yù)防性和治療性有效的策略戰(zhàn)勝全世界的 AIDS流行。
[0013] 已經(jīng)描述了各種細(xì)菌具有施用于受試者時的令人感興趣的佐劑性和免疫調(diào)節(jié)性 的特性。尤其是，報道了乳酸細(xì)菌促進(jìn)對免疫系統(tǒng)的耐受作用。
[0014] 例如，公布于2006年 11 月23 日，在Stallergenes S.A名下的W02006/123230,描述 了選自雙歧桿菌(Bifidobacteria)和乳酸細(xì)菌的細(xì)菌作為免疫原性組合物中的佐劑的用 途，其能夠在舌下、經(jīng)舌、或口服施用于受試者時誘導(dǎo)抗原特異性耐受。建議免疫原性組合 物用于治療過敏、自體免疫性疾病、或用于預(yù)防移植排斥。
[0015] 然而，例如公布于2009年7月30日，在食品和營養(yǎng)高級研究所（Stichting Top Institute Food and Nutrition)名下的W02009/093900,描述了含有大量對數(shù)中期乳酸細(xì) 菌的致耐受性組合物。當(dāng)施用于受試者時，該組合物誘導(dǎo)非抗原特異性免疫耐受。建議該組 合物用于預(yù)防、延緩和/或治療與導(dǎo)致組織損傷的炎癥反應(yīng)相關(guān)的病癥或疾病，例如，過敏、 自體免疫性疾病、以及腸的炎癥疾病。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0016] 令人驚奇地，發(fā)明人能夠表明如以下實(shí)施例中描述的原始藥物組合物在獼猴中誘 導(dǎo)有效的對SIV的抗原特異性免疫保護(hù)。而且，當(dāng)所述SIV特異性免疫保護(hù)被誘導(dǎo)時，發(fā)明人 表明其預(yù)防了 SIV復(fù)制/傳播以及隨后的體內(nèi)感染的建立。
[0017] 實(shí)際上，發(fā)明人驚奇地表明將文中公開的藥物組合物粘膜地或由皮內(nèi)或上皮內(nèi)途 徑施用時，顯著地抑制或甚至消除或防止病毒復(fù)制。
[0018] 實(shí)際上，發(fā)明人第一次觀察到在獼猴中非細(xì)胞毒CD8+T細(xì)胞反應(yīng)抑制SIV抗原提呈 的CD4+T細(xì)胞的早期激活。因而，不希望束縛于理論，當(dāng)粘膜或皮內(nèi)或上皮內(nèi)施用于受試者 時，根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物誘導(dǎo)意想不到的新型病毒特異性免疫耐受。該免疫耐受看起 來是HIV Gag和/或Pol抗原特異性抑制性CD8+T細(xì)胞誘導(dǎo)的免疫耐受(文中也命名為";制 性"免疫耐受的"Ts"免疫耐受），其是MHC(為"主要組織相容性復(fù)合物"）-lb/E限制的和非細(xì) 胞毒的。
[0019] 鑒于文中所報道的結(jié)果，本發(fā)明提供了一種能夠?qū)崿F(xiàn)如上所定義的"Ts"免疫耐受 的新型藥物組合物，其用于預(yù)防和/或治療人的HIV疾病。
[0020] 因而，本發(fā)明的一個目的是提供含有抗原和非致病活細(xì)菌的混合物的藥物組合 物，其中，優(yōu)選所述抗原是顆粒的和/或其具有一個或多個來自HIV Gag和/或Pol蛋白的表 位，且其中所述細(xì)菌優(yōu)選是植物乳桿菌。
[0021] 本發(fā)明的另一個目的是提供文中所述的藥物組合物，用作疫苗。
[0022] 本發(fā)明的另一個目的是提供用于預(yù)防和/或治療有需要的人的HIV疾病的方法，其 包括至少粘膜地(優(yōu)選口服)或皮內(nèi)地或上皮內(nèi)地將有效量的上述藥物組合物施用于所述 人的步驟。
[0023]本發(fā)明的又一個目的是提供用于保護(hù)人免受HIV的方法，其包括至少粘膜地(優(yōu)選 口服)或皮內(nèi)地或上皮內(nèi)地將有效量的上述藥物組合物施用于所述人的步驟。
[0024]本發(fā)明的又一個目的是提供用于保護(hù)人免受HIV血清轉(zhuǎn)化的方法，其包括至少粘 膜地(優(yōu)選口服)或皮內(nèi)地或上皮內(nèi)地將有效量的上述藥物組合物施用于所述人的步驟。
[0025] 本發(fā)明的又一個目的是提供用于預(yù)防和/或治療有需要的人的HIV疾病的藥物試 劑盒，其包含
[0026] -在第一容器中的抗原;和 [0027]-在第二容器中的非致病細(xì)菌，
[0028] 其中所述抗原和所述細(xì)菌在用于粘膜或皮內(nèi)或上皮內(nèi)施用的藥學(xué)上可接受的載 體中，其中優(yōu)選所述抗原是顆粒的和/或其具有一個或多個來自HIV Gag和/或Pol蛋白的表 位，且其中所述細(xì)菌優(yōu)選植物乳桿菌。
【附圖說明】
[0029] 通過以下的【附圖說明】本發(fā)明，其可參照以下非限制的實(shí)施例。
[0030] 圖1:用陰道內(nèi)iSIV/BCG預(yù)處理的恒河猴的靜脈內(nèi)（i · V ·)SIVmac239挑戰(zhàn)。
[0031]圖2:用陰道內(nèi)iSIV/BCG預(yù)處理的恒河猴的直腸內(nèi)（i .r. )SIVmac239挑戰(zhàn)。
[0032] 圖3:用陰道內(nèi)iSIV/BCG預(yù)處理的恒河猴的重復(fù)SIVmac239挑戰(zhàn)（3次由i.v.和2次 由 i .r ·) 〇
[0033]圖4:用陰道內(nèi)iSIV/BCG加皮內(nèi)加強(qiáng)預(yù)處理的恒河猴的靜脈內(nèi)SIVmac239挑戰(zhàn)。 [0034]圖5:用陰道內(nèi)iSIV/BCG加皮內(nèi)加強(qiáng)預(yù)處理的恒河猴的直腸內(nèi)SIVmac239挑戰(zhàn)。 [0035] 圖6:用口服iSIV/BCG預(yù)處理的恒河猴的直腸內(nèi)SIVmac239挑戰(zhàn)。
[0036]圖7:從用陰道內(nèi)iSIV/BCG預(yù)處理的恒河猴獲得的⑶8+T細(xì)胞體外抗病毒活性。 [0037]圖8:從用口服iSIV/BCG預(yù)處理的4只恒河猴獲得的CD8+T細(xì)胞體外抗病毒活性。 [0038]圖9:通過從用口服iSIV/BCG預(yù)處理的4只恒河猴獲得的自體同源（autologous) ⑶8+T細(xì)胞的⑶4+T細(xì)胞激活的SIV特異性抑制。
[0039]圖IOa:取自用iSIV/LP、iSIV或LP預(yù)處理的恒河猴的血漿樣品中的抗SIV IgG抗體 滴度。
[0040] 圖IOb:取自用iSIV/LP、iSIV或LP預(yù)處理的恒河猴的PBMC樣品中的SIV特異性T細(xì) 胞增殖。
[0041 ] 圖IOc:在存在或不存在⑶8或⑶25T細(xì)胞時在體外刺激下SIV特異性IFN γ分泌T細(xì) 胞。
[0042] 圖IOd:與用口服LP(n = 4)或iSIV(n = 3)預(yù)處理的動物相比，通過用口服iSIV/LP 預(yù)處理的8只恒河猴獲得的自體同源CD8+T細(xì)胞的CD4+T細(xì)胞激活的SIV特異性抑制。
[0043] 圖IOe:胃內(nèi)施用iSIV/LP制劑后60天的SIV特異性CD8+T細(xì)胞:在CD8+T細(xì)胞或存在 人自然殺傷細(xì)胞(hNK)(對照）的K562存在時，在具有或不具有SEB和抗CD3/CD28刺激時，AT-2SIV脈沖的⑶4+T細(xì)胞的細(xì)胞毒性。
[0044] 圖Ila:與用口服LP(n = 4)或iSIV(n = 3)預(yù)處理的動物相比，通過用口服iSIV/LP 預(yù)處理的8只恒河猴獲得的自體同源CD8+T細(xì)胞的體外抗病毒活性(在CD4細(xì)胞中）。
[0045]圖lib:從口服iSIV/LP處理后80天的8只恒河猴中的4只獲得的異種 (heterologous)或同種異體(allogenic)Q)8+T細(xì)胞的體外抗病毒活性(在⑶4細(xì)胞中）。 [0046]圖Ilc-1 Ig: 口服免疫后60天⑶8+T細(xì)胞的抗SIV活性，在延緩的（圖IIc)、插入（圖 I Id)、同種異體（圖11e)的培養(yǎng)系統(tǒng)中，在抗MHC-la/ABC或抗MHC-lb/E抗體（圖11f)存在時、 以及在去除TCR γ δ+或νβ8+亞群的CD8+T細(xì)胞中（圖Ilg)。
[0047]圖12a:與用口服LP或iSIV預(yù)處理的動物相比，用口服iSIV/LP預(yù)處理的恒河猴中 直腸內(nèi)和靜脈內(nèi)SIVmac239挑戰(zhàn)后，血漿的病毒載量水平(每ml血漿的SIV RNA拷貝）。
[0048]圖12b:與用口服LP或iSIV預(yù)處理的動物相比，用口服iSIV/LP預(yù)處理的恒河猴中 直腸內(nèi)和靜脈內(nèi)SIVmac239挑戰(zhàn)后，細(xì)胞的病毒載量水平(每100萬PBMC的SIV DNA拷貝）。 [0049] 圖13a-13e:通過輸注抗CD8抗體CMT807,去除8只iSIV/LP處理的獼猴的外周血和 淋巴結(jié)⑶8+T細(xì)胞。圖13a，在接受三次CMT807注射之前和之后的外周血⑶8+T細(xì)胞計數(shù)；圖 13b，在接受三次CMT807注射之前和之后的淋巴結(jié)CD8+T細(xì)胞％ ;圖13c，在接受三次CMT807 注射之前和之后的血漿病毒載量；圖13d，在接受三次CMT807注射之前之后的PMBC DNA SIV 載量；圖13e，在接受三次CMT807注射之前和之后的淋巴結(jié)SIV DNA載量。
[0050]圖14a-14b:在8只用由iSIV和LP制成的口服制劑免疫的恒河猴和2只另外的未處 理(na'ive)的猴子中用SIVB670直腸內(nèi)進(jìn)行第三次直腸內(nèi)挑戰(zhàn)后，血漿（圖14a)和PBMC (圖 14b)的病毒載量。
[0051 ] 圖15a-15c:用iSIV和LP胃內(nèi)免疫后（iSIV/LP免疫如.2)，在體外和體內(nèi)008 +1'細(xì)胞 介導(dǎo)的抗病毒活性。圖15a，在將被直腸內(nèi)挑戰(zhàn)的8只恒河猴中，在免疫后的60-420天期間， CD8+T細(xì)胞的抗SIV活性(病毒抑制的倍數(shù)）；圖15b和圖15c，用口服iSIV/LP免疫的那8只恒 河猴和僅用LP(n = 4)或僅用iSIV(n = 4)處理的8只對照猴中，直腸內(nèi)SIVmac239挑戰(zhàn)后，血 衆(zhòng)和細(xì)胞的病毒載量。
[0052] 圖16a-16e:在8只獼猴（iSIV/LP免疫如.2)中，在31￥1^〇239直腸內(nèi)挑戰(zhàn)后，直腸粘 膜上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞（IPL)中（圖16a-圖16b)，固有層（lamina propria)細(xì)胞中（LPC)(圖 16c-圖16d)和盆腔淋巴結(jié)中（PLN)(圖16e)的SIV DNA和RNA載量。
【具體實(shí)施方式】
[0053]發(fā)明的詳細(xì)描述
[0054]本發(fā)明涉及包含抗原和非致病活細(xì)菌的混合物的藥物組合物。
[0055] 抗原
[0056]由于HIV基因組中突變、重組、插入和/或缺失所致的高度變異性，HI V被分類為組、 亞組、型、亞型和基因型。有兩個主要的HIV組(HIV-1和HIV-2)和許多亞組，原因是HIV基因 組不斷地突變。組和亞組間的主要不同與病毒包膜(envelope)相關(guān)。HIV-I被分類為主要的 亞組(M)，所述亞組M被分類為命名為A到J的9個亞型（分支（clade)或亞型）（Hu等人，JAMA 275:210-216,1996;Korber等人，Science 280:1868-1871,1998)，以及第 10個之外的亞組 (0)。還存在來自于前一個的體內(nèi)重組的許多其它亞組(Papathanasopoulos MA等人，Virus Genes 2003,26:151-163)。優(yōu)選，HIV病毒是HIV-I或HIV-2,包括所有已知的和至今未知的 其分支。然而，優(yōu)選的是HIV-I。
[0057]在本發(fā)明的上下文中，"抗原"來自HIV來源，這意味著其與特異性HIV組、亞組、型、 亞型或一些亞型的組合相關(guān)。優(yōu)選地，所述HIV抗原是HIV-I或HIV-2抗原。
[0058]所述抗原是非感染性的。
[0059] 很長時間科學(xué)界懷疑CD4+T細(xì)胞(既是HIV-I又是SIV的主要靶點(diǎn)）的激活直接導(dǎo)致 病毒復(fù)制(Andrieu和Lu，1995; Korin和Zack，1999)。但是，僅僅在最近，才澄清了CD4+T細(xì)胞 激活和SIV或HIV感染過程的連續(xù)步驟之間的相互作用。在靜態(tài)的⑶4+T細(xì)胞中，在進(jìn)入后2 小時內(nèi)，跟隨病毒穿透之后的是在質(zhì)膜上提呈來自進(jìn)入的病毒粒子的Gag和Pol蛋白表位， 而Env和Nef蛋白需要重新合成（Sacha等人，2007)。但是，感染過程隨后的階段，即，病毒整 合之后的逆轉(zhuǎn)錄，在靜態(tài)細(xì)胞中發(fā)展得非常沒有效率(Vatakis等人，2009a和2009b)。相反 地，當(dāng)在質(zhì)膜上提呈Gag和Pol表位之前或之后的48小時之內(nèi)激活⑶4+T細(xì)胞，HIV/SIV逆轉(zhuǎn) 錄和DNA整合完全活化，其允許非常有效的病毒復(fù)制和釋放(Vatakis等人，2009a和2009b)。
[0060]因而，發(fā)明人假定，在HIV/SIV暴露后，體內(nèi)特異性阻斷早期發(fā)生的HIV/SIV Gag或 Pol特異性CD4+T細(xì)胞的激活，將導(dǎo)致防止活化的病毒復(fù)制。
[0061 ] 考慮到這一點(diǎn)，為了誘導(dǎo)HIV Gag和/或Pol抗原提呈⑶4+T細(xì)胞激活的抑制，繼而 在病毒暴露的人中防止體內(nèi)HIV復(fù)制和傳播，本發(fā)明的藥物組合物包含HIV抗原，其優(yōu)選具 有一個或多個來自HIV Gag和/或Pol蛋白的表位。這樣的抗原有利地或含有或衍生自HIV Gag 和/或 Pol。
[0062]因而，術(shù)語"含有或衍生自HIV病毒的Gag和/或Pol的抗原"指HIV抗原：
[0063]-包含至少一個Gag和/或Pol (作為"含有Gag和/或Pol的抗原"或
[0064]-包含一個或多個由GAG，例如衣殼蛋白（p24)和基質(zhì)蛋白（pl7)，編碼的蛋白，和/ 或一個或多個由P0L，例如整合酶、逆轉(zhuǎn)錄酶和蛋白酶，編碼的蛋白（作為"衍生自Gag和/或 Pol的抗原"）；或
[0065]-包含一個或多個來自這些蛋白的表位(也作為"衍生自Gag和/或Pol的抗原"）。
[0066] 特別地，選自如下的任何其它病毒蛋白或其表位不是包含于文中公開的藥物組合 物的必要組分4附、￥1?、￥?1?、!11￥-1的￥?1]、!11￥-2的￥?乂、1^￥、陬？、了41'等等。如果存在，這些 蛋白的任一個僅僅是用于文中公開的藥物組合物中的任選組分。
[0067] 優(yōu)選抗原是顆?？乖?。這意味著其優(yōu)選選自病毒顆粒、重組病毒顆粒、病毒樣顆 粒、表達(dá)Gag和/或Pol的重組細(xì)菌或真菌、在其表面提呈一個或多個病毒蛋白或肽或表位 (含有或衍生自HIV Gag和/或Pol)的聚合微顆粒。優(yōu)選地，一個或多個來自Gag和/或Po 1的 表位由所述抗原產(chǎn)生或表達(dá)或包含于所述抗原。當(dāng)使用重組病毒顆?；虿《绢w粒或表達(dá) Gag和/或Pol的重組細(xì)菌或真菌時，其優(yōu)選是失活的微生物。
[0068] 抗原可以是病毒顆粒、重組病毒顆粒、病毒樣顆?；虮磉_(dá)Gag和/或Pol的重組細(xì)菌 或真菌。其還可以是一個或多個病毒蛋白或肽(含有或衍生自HIV的Gag和/或Pol)、重組的 或非重組的、可以是綴合物(con jugate)或多聯(lián)體(concatemer)的形式。然后，抗原是病毒 核酸非依賴的，即，其是非病毒DNA或非病毒RNA依賴的。
[0069] 抗原可以來自有利地包含于適當(dāng)?shù)闹亟M微生物中的病毒核酸序列的表達(dá)。
[0070] 如果包含于本發(fā)明藥物組合物中的抗原是表達(dá)Gag和/或Pol的重組細(xì)菌，那么所 述重組細(xì)菌優(yōu)選不同于也包含在組合物中的非致病活細(xì)菌。
[0071] 當(dāng)根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物中的抗原是一個或多個病毒蛋白或肽(含有或衍生自 HIV的Gag和/或Pol)時，其優(yōu)選是顆粒的形式。實(shí)踐中，適當(dāng)?shù)念w粒抗原，可由活的微生物 (例如，酵母），以與重組DNA B型肝炎疫苗相同的方式生產(chǎn)，在重組DNA B型肝炎疫苗的情況 中，表達(dá)的HBsAg多肽自我組裝成免疫原性球形顆粒，其非常類似慢性HBV感染患者血清中 發(fā)現(xiàn)的天然22-nm顆粒(Plotkin等人，2008)。
[0072] 或者，當(dāng)根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物中的抗原是一個或多個病毒蛋白或肽(含有或 衍生自HI V Gag和/或Po I)時，其是綴合物的形式。在這樣的實(shí)施方式中，如本領(lǐng)域公知的， 感興趣的蛋白或肽共價綴合于適當(dāng)?shù)妮d體?？缮虡I(yè)獲得的常規(guī)載體尤其是蛋白，如KLH(鑰 孔戚血藍(lán)蛋白）蛋白、BSA(牛血清白蛋白）蛋白、OVA(卵清蛋白）蛋白等(優(yōu)選其可以安全地 口服施用于人類）。生產(chǎn)適當(dāng)?shù)木Y合物的方法對本領(lǐng)域技術(shù)人員是熟悉的。
[0073]但是，或者，當(dāng)根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物中的抗原是一個或多個病毒蛋白或肽(含 有或衍生自HIV Gag和/或Po 1)時，其是多聯(lián)體的形式。如本領(lǐng)域中公知的，多聯(lián)體由感興趣 蛋白或肽的多個拷貝形成，其在一個大分子中物理連接在一起。在多聯(lián)體中，感興趣蛋白或 肽的一個拷貝可以直接地或被合成手臂分隔而連接至其它拷貝。因而，多聯(lián)體包含至少兩 個拷貝，優(yōu)選多至10個拷貝或更多，的感興趣蛋白或肽。生產(chǎn)適當(dāng)多聯(lián)體的方法屬于本領(lǐng)域 技術(shù)人員的普通常識。
[0074] 如文中使用的，"病毒樣顆粒"（VLP)指非常類似成熟病毒粒子的顆粒，但是其不含 有所述病毒的病毒基因組物質(zhì)。更準(zhǔn)確地，VLP，也稱為假病毒粒子，代表由病毒衣殼和/或 其它病毒蛋白的多個拷貝組成的亞單元結(jié)構(gòu)。這些病毒蛋白能夠在體內(nèi)自我組裝成明確的 球形對稱的VLP。這些VLP不包含編碼病毒蛋白的任何核酸分子，更準(zhǔn)確地，其不包含任何核 酸分子。因而，VLP在自然中是非復(fù)制且非感染的，這使得其安全地以藥物組合物的形式施 用。用于生產(chǎn)VLP的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的（參見，例如，Liew等人，2010 !Plummer和 Manchester,2010)。用于生產(chǎn)VLP的適當(dāng)方法的非限制的例子在US 5,919，458、EP 386882、 TO 91/07425、US 5,861,282和WO 91/05864中描述了，其公開了不包含HIV基因組也不包含 任何核酸分子的HIV VLP(假病毒粒子）。
[0075] 如文中所述的，"重組病毒顆粒"指包含來自不同病毒的蛋白、或在其表面暴露來 自不同病毒的蛋白的病毒顆粒。而且，重組病毒顆粒