一種棉盲蝽成蟲腦的解剖方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于昆蟲解剖學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種棉盲蝽成蟲腦的解剖方法。
【背景技術(shù)】
[0002]棉盲蝽主要包括綠盲蝽、中黑盲蝽、三點(diǎn)盲蝽、苜蓿盲蝽等，屬于半翅目(Hemiptera)，盲蝽科(Miridae)，后麗盲蝽屬(ApoIygus)。隨著轉(zhuǎn)基因抗蟲棉的廣泛種植，以綠盲蝽、中黑盲蝽為主的棉盲蝽逐漸由次要害蟲上升為主要害蟲，成為很多關(guān)鍵農(nóng)作物和果樹上的主要害蟲。
[0003]棉盲蝽為寄主廣泛的雜食性害蟲，寄主有葡萄、棗樹、石榴、茶樹、櫻桃等果樹及棉花、三葉草、向日葵等多種作物，并隨著季節(jié)變換而轉(zhuǎn)換寄主(Hongsheng Pan et al，2015)。棉盲蝽的若蟲和成蟲以刺吸式口器刺吸寄主植物嫩芽、嫩葉、花蕾和幼果，嚴(yán)重影響了農(nóng)產(chǎn)品的質(zhì)量和產(chǎn)量。
[0004]當(dāng)前，對棉盲蝽的研究主要集中在發(fā)生分布、生物學(xué)特性、防治及抗藥性治理等方面，而對于棉盲蝽神經(jīng)系統(tǒng)的研究未見詳細(xì)報(bào)道。腦是昆蟲中樞神經(jīng)系統(tǒng)的重要組成部分，對昆蟲的生長發(fā)育行為起著控制和調(diào)節(jié)作用。對棉盲蝽腦的研究有助于理解昆蟲的行為，為棉盲蝽的生物防控提供一定的依據(jù)。
[0005]當(dāng)前，對體型較大昆蟲腦的解剖一般是切下頭部，在生理液中破壞腦殼解剖出腦。棉盲蝽體型較小，相應(yīng)地頭的體積更小，而且棉盲蝽頭部呈三角形，內(nèi)部腦不成形，難以解剖出完整的腦。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的就在于提供一種解剖棉盲蝽成蟲腦的方法，能最大程度的保證腦內(nèi)神經(jīng)細(xì)胞的活性，維持良好的組織形態(tài)，利于下一步研究。
[0007]本發(fā)明的目的是以下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的:
一種棉盲蝽成蟲腦的解剖方法，包括以下步驟:先固定蟲體，使腦組織成形，然后破壞復(fù)眼外殼，以口器為突破口，由口器沿著復(fù)眼打開腦殼，剖出腦，得到完整的腦組織。
[0008]具體包括以下步驟:
(1)將棉盲蝽放入固定液中固定；
(2)將固定后的棉盲蝽移出，滴加生理液；
(3)夾破復(fù)眼外殼，使兩側(cè)復(fù)眼露出外殼，從前胸小盾片處去除蟲體中后胸及腹部，然后固定昆蟲頭部，夾破昆蟲口器，使口器上下分開，并延伸至復(fù)眼，繼續(xù)分離，使整個(gè)腦殼上下分開，上部分腦殼沿向上方向去除，下部分沿向下方向去除，繼續(xù)去除腦上其他組織，得到完整的腦組織。
[0009]所述步驟(I)中固定液為甲醛、多聚甲醛或戊二醛固定液。
[0010]所述步驟(2)中生理液為Ringer’s生理液。
[0011]所述步驟(3)中腦組織為腦、咽下神經(jīng)和前胸。
[0012]本發(fā)明的有益效果:通過提前用固定液固定棉盲蝽，從而使腦組織成形，然后去除復(fù)眼的部分外殼，以口器為突破口，使腦殼上下分開，剖出腦，保證了腦的完整性。本發(fā)明能夠在短時(shí)間內(nèi)得到完整的棉盲蝽腦，最大程度地保持了腦內(nèi)超微結(jié)構(gòu)的原始狀態(tài)，避免了結(jié)構(gòu)損傷，利于進(jìn)行下一步的研究。
【附圖說明】
[0013]圖1是綠盲蝽成蟲完整的腦前面觀(面對昆蟲眼睛)視圖(VHX-600E數(shù)碼顯微鏡)； 圖2是綠盲蝽成蟲完整的腦后面觀(從昆蟲頭殼方向觀)視圖。
【具體實(shí)施方式】
[0014]實(shí)施例1
本發(fā)明提供的棉盲蝽成蟲腦的解剖方法，先用固定液固定棉盲蝽蟲體，使腦組織成形，然后破壞復(fù)眼外殼，以口器為突破口，由口器沿著復(fù)眼打開腦殼，剖出腦，得到完整的腦組織，保證了腦的完整性，具體包括以下步驟:
1.將冷凍致死且腦未損傷的棉盲蝽成蟲，用鑷子夾破棉盲蝽腹部，加入固定液浸泡棉盲蝽成蟲，浸泡時(shí)間約lh，使腦組織成形；固定液可選用甲醛、多聚甲醛或戊二醛固定液;冷凍致死的棉盲蝽成蟲能最大限度的保持腦組織的活性;夾破腹部可使固定液進(jìn)入棉盲蝽體內(nèi)，加快固定時(shí)間;保持構(gòu)成神經(jīng)組織的蛋白質(zhì)仍然具有活性；
2.將固定后的棉盲蝽轉(zhuǎn)移至玻璃培養(yǎng)皿上，在培養(yǎng)皿底上滴I滴Ringer’s生理液，用以保濕并保持腦的活性；
3.左手用鑷子固定棉盲蝽身體，右手拿鑷子輕輕夾破復(fù)眼外殼，使兩側(cè)復(fù)眼露出外殼；
4.從前胸小盾片處去除蟲體中后胸及腹部;將昆蟲腹面朝上，左手拿鑷子擋住昆蟲頭部不動(dòng)，右手拿鑷子夾破昆蟲口器，使口器上下分開，并延伸至復(fù)眼，繼續(xù)分離，使整個(gè)腦殼上下分開;上部分腦殼沿向上方向去除；下部分沿向下的方向去除；繼續(xù)去除肌肉及腦上其他組織，最終得到完整的腦組織，此腦組織不但包括腦，還包括咽下神經(jīng)節(jié)和前胸神經(jīng)器官，本發(fā)明獲得的腦組織不但包括腦，還包括咽下神經(jīng)節(jié)和前胸神經(jīng)器官，是因?yàn)槊廾を淼倪@幾部分結(jié)構(gòu)愈合程度很高，成為一體，若從頸部切開，只取腦，很可能造成結(jié)構(gòu)不完整，因此，本發(fā)明最大限度的保證了棉盲蝽神經(jīng)系統(tǒng)的完整性。
[0015]實(shí)施例2
1.用鑷子夾破冷凍致死且腦未損傷的綠盲蝽腹部，加入甲醛固定液浸泡綠盲蝽成蟲，浸泡時(shí)間Ih左右，使腦組織成形；
2.將固定后的綠盲蝽轉(zhuǎn)移至玻璃培養(yǎng)皿上，在培養(yǎng)皿底上滴I滴Ringer’s生理液；用于維持生物體的正常滲透壓；
3.左手用鑷子固定綠盲蝽身體，右手拿鑷子輕輕夾破復(fù)眼外殼，使兩側(cè)復(fù)眼露出外殼；
4.從前胸小盾片處去除蟲體中后胸及腹部;將昆蟲腹面朝上，左手拿鑷子擋住昆蟲頭部不動(dòng)，右手拿鑷子夾破昆蟲口器，使口器上下分開，并延伸至復(fù)眼，繼續(xù)分離，使整個(gè)腦殼上下分開;上部分腦殼沿向上方向去除；下部分沿向下的方向去除；繼續(xù)去除肌肉及腦上其他組織，最終得到完整的腦組織;如圖1和圖2所示，綠盲蝽腦組織狀態(tài)良好，內(nèi)部結(jié)構(gòu)完整。
[0016]實(shí)施例3 1.用鑷子夾破冷凍致死且腦未損傷的黑盲蝽腹部，加入多聚甲醛固定液浸泡黑盲蝽成蟲約Ih，使腦組織成形；
2.將固定后的黑盲蝽轉(zhuǎn)移至玻璃培養(yǎng)皿上，在培養(yǎng)皿底上滴I滴Ringer’s生理液；
3.左手用鑷子固定黑盲蝽身體，右手拿鑷子輕輕夾破復(fù)眼外殼，使兩側(cè)復(fù)眼露出外殼；
4.從前胸小盾片處去除蟲體中后胸及腹部;將昆蟲腹面朝上，左手拿鑷子擋住昆蟲頭部不動(dòng)，右手拿鑷子夾破昆蟲口器，使口器上下分開，并延伸至復(fù)眼，繼續(xù)分離，使整個(gè)腦殼上下分開;上部分腦殼沿向上方向去除；下部分沿向下的方向去除；繼續(xù)去除肌肉及腦上其他組織，最終得到完整的腦組織。
[0017]實(shí)施例4
1.用鑷子夾破冷凍致死且腦未損傷的三點(diǎn)盲蝽腹部，加入戊二醛固定液浸泡三點(diǎn)盲蝽成蟲約Ih，使腦組織成形；
2.將固定后的三點(diǎn)盲蝽轉(zhuǎn)移至玻璃培養(yǎng)皿上，在培養(yǎng)皿底上滴I滴Ringer’s生理液；
3.左手用鑷子固定三點(diǎn)盲蝽身體，右手拿鑷子輕輕夾破復(fù)眼外殼，使兩側(cè)復(fù)眼露出外殼；
4.從前胸小盾片處去除蟲體中后胸及腹部;將昆蟲腹面朝上，左手拿鑷子擋住昆蟲頭部不動(dòng)，右手拿鑷子夾破昆蟲口器，使口器上下分開，并延伸至復(fù)眼，繼續(xù)分離，使整個(gè)腦殼上下分開;上部分腦殼沿向上方向去除；下部分沿向下的方向去除；繼續(xù)去除肌肉及腦上其他組織，最終得到完整的腦組織。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種棉盲蝽成蟲腦的解剖方法，其特征在于包括以下步驟:先固定蟲體，使腦組織成形，然后破壞復(fù)眼外殼，以口器為突破口，由口器沿著復(fù)眼打開腦殼，剖出腦，得到完整的腦組織。2.如權(quán)利要求1所述的棉盲蝽成蟲腦的解剖方法，其特征在于包括以下步驟: (1)將棉盲蝽放入固定液中固定； (2)將固定后的棉盲蝽移出，滴加生理液； (3)夾破復(fù)眼外殼，使兩側(cè)復(fù)眼露出外殼，從前胸小盾片處去除蟲體中后胸及腹部，然后固定昆蟲頭部，夾破昆蟲口器，使口器上下分開，并延伸至復(fù)眼，繼續(xù)分離，使整個(gè)腦殼上下分開，上部分腦殼沿向上方向去除，下部分沿向下方向去除，繼續(xù)去除腦上其他組織，得到完整的腦組織。3.如權(quán)利要求2所述的棉盲蝽成蟲腦的解剖方法，其特征在于所述步驟(I)中固定液為甲醛、多聚甲醛或戊二醛固定液。4.如權(quán)利要求2所述的棉盲蝽成蟲腦的解剖方法，其特征在于所述步驟(2)中生理液為Ringer’s生理液。5.如權(quán)利要求2所述的棉盲蝽成蟲腦的解剖方法，其特征在于所述步驟(3)中腦組織為腦、咽下神經(jīng)和前胸。
【專利摘要】一種棉盲蝽成蟲腦的解剖方法，包括以下步驟：先固定蟲體，使腦組織成形，然后破壞復(fù)眼外殼，以口器為突破口，由口器沿著復(fù)眼打開腦殼，剖出腦，得到完整的腦組織。本發(fā)明通過提前用固定液固定棉盲蝽，從而使腦組織成形，然后去除復(fù)眼的部分外殼，以口器為突破口，使腦殼上下分開，剖出腦，保證了腦的完整性。本發(fā)明能夠在短時(shí)間內(nèi)得到完整的棉盲蝽腦，最大程度地保持了腦內(nèi)超微結(jié)構(gòu)的原始狀態(tài)，避免了結(jié)構(gòu)損傷，利于進(jìn)行下一步的研究。
【IPC分類】A61B16/00, A61D1/00
【公開號(hào)】CN105616029
【申請?zhí)枴緾N201511011561
【發(fā)明人】謝桂英, 趙新成, 林愛麗, 邵凱敏, 郭培
【申請人】河南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【公開日】2016年6月1日
【申請日】2015年12月30日