Cx4945作為制備胃癌順鉑耐藥放射耐受逆轉(zhuǎn)作用藥物的應用
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明提供了 CX4945作為制備胃癌順銷耐藥放射耐受逆轉(zhuǎn)作用藥物的用途，用于 制備胃癌順銷耐藥放射耐受逆轉(zhuǎn)的藥物，屬于醫(yī)學制藥技術領域。
【背景技術】
[0002] 胃癌是我國發(fā)病率和死亡率均居第=位的惡性腫瘤。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計，2012 年我國胃癌發(fā)病人數(shù)40萬，死亡人數(shù)32萬，胃癌患者的五年生存率不足20%。手術、化療、放 療是治療胃癌的主要手段。早期胃癌可通過手術方式切除局部腫瘤病灶，晚期胃癌由于發(fā) 生廣泛浸潤和轉(zhuǎn)移，失去手術機會，則W放化療聯(lián)合治療方案為主。而腫瘤細胞對各種放化 療措施的耐受性往往導致放化療失敗，患者死亡。順銷是胃癌化療一線用藥，主要通過誘導 DNA交聯(lián)-雙鏈斷裂損傷殺傷腫瘤細胞。腫瘤細胞可W通過發(fā)展多種耐藥機制抵抗順銷誘導 的細胞調(diào)亡，其中DNA損傷修復能力增強是最主要的機制。放療主要祀向DNA，通過誘導DNA 斷裂損傷抑制細胞增殖，引發(fā)細胞調(diào)亡。顯而易見，對順銷耐受的腫瘤細胞同時也會對放療 產(chǎn)生交叉耐受性。因此，研發(fā)針對放化療交叉耐受關鍵分子的干預措施可有效逆轉(zhuǎn)放化療 交叉耐受，從而提高胃癌治療效果。
[0003] 酪蛋白激酶2(Casein Kinase 2，CK2)，是一個多效的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶， CK2在細胞生理活動的調(diào)節(jié)中處于中屯、地位，廣泛參與細胞增殖、分化、死亡等過程，設及了 DNA修復、NF-KB、Wnt、PI3K/Akt和JAK-STAT等信號通路，其精細調(diào)節(jié)失衡，就有可能導致腫 瘤發(fā)生發(fā)展。CK2在腫瘤細胞中往往呈高表達。針對CK2活性的小分子抑制劑已經(jīng)成為抗腫 瘤分子祀向藥物研發(fā)的熱點。CX-4945是近年來研發(fā)的特異性針對CK2的抑制劑，體外研究 發(fā)現(xiàn)CX-4945能有效抑制CK2活性，逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥性，發(fā)揮抗腫瘤活性。目前，CX-4945的抗腫 瘤研究已經(jīng)進入I期臨床試驗，CX-4945有望成為針對CK2的第一個口服生物相容性小分子 抑制劑，具有廣闊的臨床應用前景。但CX-4945是否具有放療增敏作用尚無文獻報道。研究 CX-4945在放療過程中的作用將為逆轉(zhuǎn)放療耐受性，提高放療效果，拓展CX-4945臨床應用 范圍提供科學依據(jù)。
[0004] 本人所在實驗室前期研究通過濃度梯度法誘導建立了胃癌順銷耐藥細胞模型，發(fā) 現(xiàn)DNA修復蛋白XRCCl升高異常介導順銷所致DNA損傷修復過程是導致胃癌細胞產(chǎn)生順銷耐 受性的主要機制。進一步研究發(fā)現(xiàn)，順銷耐藥中CK2表達升高是導致XRCCl高表達的主要機 審IJ，順銷耐藥細胞對CX-4945的敏感性要高于順銷敏感細胞，采用CX-4945能有效殺傷耐藥 細胞，提高其對順銷敏感性，運提示CK2可W作為逆轉(zhuǎn)順銷耐藥的有效祀點。
[0005] 晚期胃癌的放療采用直線加速器發(fā)出高能X射線福射為主。X射線對細胞的損傷W 直接DNA單鏈及雙鏈斷裂為主，觸發(fā)損傷感受器:組蛋白H2AX的憐酸化;有S個相關的激酶 MRN-ATM(MREl 1、RAD50、NBS1、ATM)、Ku-DNA-PKcS(Ku70、KuSO、DNA-PKcS)和ATRIP-ATR，能憐 酸化H2AX為巧2AX;形成焦點，多分子聚集(MDCl、53BP1、BRCA1，2、RAD51、P53、P21、BAX、 化kl/2、CDC25A/C)，運些蛋白將信號傳遞給其他一些蛋白，可W激活S條重要的效應器途 徑(細胞周期關卡點、DNA修復、細胞調(diào)亡）。其中，DNA修復途徑與腫瘤放射敏感及耐受有關。 DNA修復包括：同源重組修復皿(MRN復合物、RAD51、XRCC2、XRCC3、服CAl，2、化nconi貧血家 族）、非同源末端連接修復NHEJ化u70、Ku80、DNA-PKcs)、堿基切除修復邸R和單鏈斷裂修復 SSBR(PARP、XRCC1)、錯配修復MMR、核巧酸切除修復肥R等。
[0006]因此，我們W胃癌細胞、胃癌順銷耐藥細胞和直線加速器發(fā)出的高能X射線來研究 驗證該機制。
[0007] CX4945，為一種小分子抑制劑，分子式為：C19H12CIN3O2，結(jié)構(gòu)式為


【發(fā)明內(nèi)容】
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[000引本發(fā)明提供了 CX4945作為制備胃癌順銷耐藥放射耐受逆轉(zhuǎn)作用藥物的用途，目的 是可克服胃癌順銷耐藥細胞放射耐受，增強放射敏感性，減少放療殺滅劑量，減輕放療反 應，提高胃癌放療療效。
[0009] 本發(fā)明通過W下技術方案來實現(xiàn)：
[0010] 提供巧4945在制備腫瘤順銷耐藥放射耐受逆轉(zhuǎn)藥物中的用途。
[OOW 進一步，所述腫瘤為胃癌。
[0012]提供一種腫瘤順銷耐藥放射耐受逆轉(zhuǎn)藥物，其活性成分為CX4945，加入藥學可接 受的輔料按照常規(guī)方法制成各種劑型。
[oou]進一步，所述腫瘤為胃癌。
[0014] 進一步，CX4945加入藥學可接受的輔料按常規(guī)方法制成各種劑型，如各種規(guī)格的 液體注射液，粉針注射劑，注射用乳劑，片劑，丸劑，膠囊劑，膏劑，霜劑，貼劑，擦劑，粉劑，噴 霧劑，植入劑，滴劑，栓劑，軟膏劑，糖果劑等。
[0015] 進一步，CX4945的給藥途徑包括各種給藥途徑：口服給藥，注射給藥，植入給藥，腔 內(nèi)給藥，舌下給藥，肛口給藥，透皮給藥，內(nèi)外敷等。
[0016] 本發(fā)明設及的CX4945是近年來研發(fā)的特異性針對CK2的抑制劑，體外研究發(fā)現(xiàn)CX-4945能有效抑制CK2活性，逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥性，發(fā)揮抗腫瘤活性。其分子式為:Cl訊12C1化化，分 子量349.77。
[0017] 將CX-4945用于胃癌及胃癌耐藥細胞放射治療過程中，使其克服胃癌順銷耐藥細 胞的放射耐受，增強放射敏感性，減少放療殺滅劑量，減輕放療反應，提高胃癌放療療效，是 本發(fā)明要實現(xiàn)的任務。
[0018] 通過CX-4945對胃癌順銷耐藥細胞放射耐受逆轉(zhuǎn)作用的大量實驗，證明在胃癌順 銷耐藥細胞中，當放療聯(lián)合低劑量CX4945后便可W顯著抑制耐藥細胞增殖，促進其調(diào)亡，從 而有效降低亞致死性放療劑量;進一步研究發(fā)現(xiàn)CX-4945通過抑制XRCCl憐酸化促進其降 解，使細胞不能修復放療誘導的DM損傷，從而促進其損傷加重及調(diào)亡。
[0019] 所述腫瘤放射耐受逆轉(zhuǎn)劑劑型可為口服藥劑或注射藥劑，所述口服藥劑可為滴 丸、軟膠囊或凍干粉針等，所述注射藥劑可為注射用水劑等，注射用水劑可為靜脈注射用水 劑、肌肉注射用水劑、胸腹腔注射用水劑或皮下注射用水劑。
[0020] 本發(fā)明的積極效果在于：闡述了CX4945作為制備胃癌順銷耐藥放射耐受逆轉(zhuǎn)作用 藥物的用途，提供了 CX4945作為胃癌順銷耐藥放射耐受逆轉(zhuǎn)劑應用于臨床，可克服胃癌順 銷耐藥細胞放射耐受，增強放射敏感性，減少放療殺滅劑量，減輕放療反應，提高胃癌放療 療效，為胃癌治療提供更好的方法。
【附圖說明】
[0021] 圖1中A為福射后胃癌細胞SGC7901、耐藥細胞SGC7901/DDP的時間-存活曲線;B為 福射后Western blot檢測胃癌細胞SGC7901、耐藥細胞SGC7901/DDP中隨時間各DNA損傷修 復及調(diào)亡分子的變化，圖中UV照射劑量為100J/M 2;
[0022] 圖2為放療后胃癌細胞SG 口 901、耐藥細胞SG 口 901/DDP的劑量-存活曲線，放療劑 量范圍O-SGy;
[0023] 圖3為放療后胃癌細胞BGC823、耐藥細胞BGC823/DDP的劑量-存活曲線，放療劑量 范圍O-SGy;
[0024] 圖4為放療后Western blot檢測胃癌細胞SGC7901、耐藥細胞SGC7901/DDP中隨時 間各DNA損傷修復分子的變化，圖中放療劑量為4Gy;
[00巧]圖5為放療后Western blot分別檢測胃癌耐藥細胞SGC7901/DDP中轉(zhuǎn)染低表達 XRCCl、普通細胞SGC7901中轉(zhuǎn)染高表達XRCCl后細胞損傷變化，圖中放療劑量為4Gy;
[0026] 圖6為UVC福射、CX-4945及聯(lián)合處理過程示意圖，圖中UV照射劑量為100J/M2,圖中 CX-494巧日藥濃度為化g/ml;
[0027] 圖7為胃癌耐藥細胞SG 口901/DDP分別經(jīng)UVC福射、CX-4945及聯(lián)合處理后2地時間-存活曲線，圖中UV照射劑量為100J/M2，圖中CX-494巧日藥濃度為化g/ml;
[0028] 圖8中C為胃癌耐藥細胞SG口 901/孤P分別經(jīng)UNC福射、CX-4945及聯(lián)合處理后化nel 實驗檢測細胞調(diào)亡，W及D為調(diào)亡計數(shù)統(tǒng)計；圖中UV照射劑量為100J/M2，圖中CX-4945加藥 濃度為化g/ml;
[0029] 圖9為UVC福射、CX-4945及聯(lián)合處理過程示意圖；圖中UV照射劑量為100J/M2,圖中 CX-494巧日藥濃度為化g/ml;
[0030] 圖10為胃癌耐藥細胞SGC7901/DDP分別經(jīng)UVC福射、CX-4945及聯(lián)合處理后化免疫 巧光實驗檢測損傷分子rH2ax;圖中UV照射劑量為100J/M2，圖中CX-494巧日藥濃度為化g/ ml;
[0031] 圖11為胃癌耐藥細胞SGC7901/DDP分別經(jīng)UVC嬌射、CX-4945及聯(lián)合處理后9h對應 的Western blot檢測各DNA損傷修復及調(diào)亡分子變化；圖中UV照射劑量為100J/M2，圖中CX-4945加藥濃度為化g/ml;
[0032] 圖12為CX4945處理胃癌細胞SGC7901、耐藥細胞SGC7901/DDP的劑量-存活曲線， CX4945濃度范圍為0-8ug/ml，處理時間為4她；
[0033] 圖13為CX4945處理胃癌細胞BGC823、耐藥細胞BGC823/抓P的劑量-存活曲線， CX4945濃度范圍為0-8ug/ml，處理時間為4她；
[0034] 圖14中A為放療后胃癌細胞SGC7901、耐藥細胞SG 口 901/DDP及加 CX4945處理后克 隆形成情況;B為劑量-存活曲線；C為放療后BGC823、耐藥細胞BGC823/DDP及加 CX4945處理 后克隆形成情況;D為劑量-存活曲線;放療劑量范圍O-SGy; CX-4945加藥濃度為化g/ml;
[0035] 圖15為胃癌耐藥細胞SGC7901/DDP分別經(jīng)放療、CX-4945及聯(lián)合處理后免疫巧光實 驗檢測損傷分子r肥ax;圖中放療劑量為4Gy，圖中CX-494巧日藥濃度為化g/ml;
[0036] 圖16為胃癌耐藥細胞SGC7901/DDP、BGC823/DDP分別經(jīng)放療、CX-4945及聯(lián)合處理 后Western blot檢測DNA損