Rxr在制備用于治療感染水泡型口炎病毒的藥物中的用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，特別是涉及RXR在篩選用于治療感染水泡型口炎病毒的藥物中的用途。
【背景技術(shù)】
[0002]在病毒感染期間免疫激活導(dǎo)致視黃醇X受體下調(diào)，后簡(jiǎn)稱(RXR)，RXR屬于核受體，在細(xì)胞以及整個(gè)機(jī)體代謝中都是必不可少的。然而，RXR在抵御病毒感染的宿主防御中的作用仍然是未知的。核受體(NRs)代表一個(gè)大家族的轉(zhuǎn)錄因子參與的廣譜生物學(xué)時(shí)間，例如發(fā)育、生殖以及代謝。(Robinson-Rechavi等2003)許多NR的超家族成員已經(jīng)成為炎癥和免疫反應(yīng)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子(Daynes和Jones, 2002 ; Joseph等2003 ;0gawa等2005),它們使巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞感受其脂質(zhì)環(huán)境并塑造其免疫反應(yīng)。(Nagy等2012) RXR占據(jù)在核受體的中心位置，因?yàn)樗麄兛梢耘c其他家族成員一起形成異二聚體，因此參與多種生理過程包括細(xì)胞分化，免疫反應(yīng)以及脂質(zhì)代謝和糖代謝(kefebvre等2010 ；Roszer等2013)。RXR也能夠形成同二聚體激活其靶基因(A等人2004 ;Zhang等1992)最近研究進(jìn)展表明，RXR是巨噬細(xì)胞的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，在免疫和代謝性紊亂中起到關(guān)鍵作用。RXR有三種同型異構(gòu)體，RXR (NR2BDRXR (NR2B2), RXR (NR2B3)。每個(gè)同型異構(gòu)體存在于特定的幾個(gè)亞型中，在發(fā)育過程中具有特異的組織分布和表達(dá)模式。(Roszer等2013)以往的研究表明，在骨髓細(xì)胞中最豐富的受體，或者說至少是功能最重要的受體是RXR (Mangelsdorf等1992)。維生素A衍生物9順維甲酸(9cRA)是第一個(gè)發(fā)現(xiàn)的RXR的天然配體(Perez等2012)內(nèi)源性脂肪酸如二十二碳六烯酸(DHA)、油酸和植烷酸也是RXR的配體(Dawson和Xia, 2012)，許多RXR特異性合成配體例如LG100268 (LG268), AGN194204和貝沙羅汀也被稱為視黃醇，被用于研究和臨床應(yīng)用(Perez等2012)。
巨噬細(xì)胞在固有免疫中起到關(guān)鍵作用，不僅僅在宿主防御病原體，細(xì)胞碎片清除，組織損傷后重塑，組織脂質(zhì)代謝的整合器作用，但也可以產(chǎn)生一些列分泌產(chǎn)物，這些分泌產(chǎn)物可以影響其他免疫細(xì)胞的活性以及其遷移(Glass和01efsky2012 ;Nagy等2012)。在組織中巨噬細(xì)胞的長(zhǎng)期活化狀態(tài)以及其病原體的保留可以創(chuàng)造一種炎癥微環(huán)境，這反過來又有助于動(dòng)脈粥樣硬化、胰島素抵抗和神經(jīng)退行性疾病。(Glass和01efsky2012 ；Roszer等2013).因此，在巨噬細(xì)胞的免疫和代謝過程的精密調(diào)節(jié)是非常重要的。在巨噬細(xì)胞中，諸如Toll樣受體的模式識(shí)別受體活化可以激發(fā)快速的炎癥或通過產(chǎn)生前炎性因子I型干擾素來激發(fā)抗病毒反應(yīng)。(Newton和Dixit2012;Takeuchi和Akira, 2010)多個(gè)核受體家族成員已被證實(shí)可以抑制TLR誘導(dǎo)的體內(nèi)和體外的炎癥反應(yīng)，其中包括維生素D受體VDRs,過氧化物酶增值激活受體PPARs，肝臟X受體LXRs和糖皮質(zhì)激素受體(Castrillo和Tontonoz2004;Nagpal 等 2001 ；Nagy 等 2012;Ogawa 等 2005),同時(shí)，由病原體激活的 TLRs也可以調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞核受體靶基因。例如TLR3/4配體可以強(qiáng)烈抑制包括ABCAl和ABCGl的LXR靶基因從而阻斷來著巨噬細(xì)胞膽固醇外流。(Castrillo等2003).越來越多的證據(jù)表明，核受體與過氧化物酶增值激活受體之間的相互作用可以調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)和細(xì)胞代謝(Castrillo等2003 ; Nagy等2012 ;Roszer等2013)。然而，核受體與宿主抗病毒反應(yīng)之間的相互作用還需要進(jìn)一步的研究。
細(xì)胞抗病毒反應(yīng)的活化涉及許多信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑可以產(chǎn)生I型干擾素。簡(jiǎn)單的說，病毒核酸激活TLR3、TLR7/8、TLR9或細(xì)胞內(nèi)受體如維甲酸誘導(dǎo)基因I樣受體家族、黑色素瘤分化相關(guān)抗原5，可以激活通路導(dǎo)致人TANK結(jié)合激酶I的激活，磷酸化，人干擾素調(diào)節(jié)因子3的遷移進(jìn)入細(xì)胞核以及干擾素的轉(zhuǎn)錄等一系列變化。(Newton和Dixit2012 ；Takeuchi和Akira, 2009, 2010).干擾素誘導(dǎo)多種抗病毒基因表達(dá)。許多基因比如說干擾素刺激基因
15、干擾素誘導(dǎo)的鳥苷酸結(jié)合蛋白I寡腺苷酸合成酶2可以直接抑制病毒的生長(zhǎng)周期過程(Sadler和Williams2008)。其他諸如人干擾素調(diào)節(jié)因子1、人干擾素調(diào)節(jié)因子7、以及病毒核酸感受器(RIG-1和MDA5)進(jìn)一步健全了干擾素反應(yīng)。(Takeuchi和Akira，2009)。我們以前研究發(fā)現(xiàn)，RXR在病毒干擾過程中通過干擾素調(diào)節(jié)因子3依賴性但干擾素非依賴性通路表達(dá)下調(diào)。(Chow等2006)進(jìn)一步的證據(jù)表明:病毒感染的小鼠在諸如阿司匹林的藥物刺激下對(duì)肝毒性更加敏感，會(huì)產(chǎn)生一種類似于人類雷氏綜合癥的癥狀，這可能是因?yàn)樗幬锎x導(dǎo)致RXR下游的酶表達(dá)抑制的原因。(Chow等2006)盡管有這些有趣的研究現(xiàn)象，為什么在固有免疫反應(yīng)病毒感染中RXR的表達(dá)下降，還有RXR的下調(diào)是否會(huì)影響病毒感染過程中的宿主防御，這些都尚不清楚。
環(huán)氧合酶I和環(huán)氧合酶2 (C0X1和C0X2)是前列腺素生物合成的關(guān)鍵酶。COXl在許多組織中持續(xù)表達(dá)，C0X2是可誘導(dǎo)的酶，二者均可以促使前列腺素E2產(chǎn)生(Vane等1998)。PGE2的產(chǎn)生增加會(huì)導(dǎo)致大多數(shù)檢測(cè)病毒的復(fù)制增加(巨細(xì)胞病毒、水泡型口炎病毒、牛白細(xì)胞增多病毒、單純皰疹病毒-1、人類皰疹病毒_6、偽狂犬病毒、小鼠肝炎病毒-68) (Ray等2004 ；Steer和Corbett, 2003; Symensma等2003)。最近的研究表明前列腺素E2通過激活前列腺素E2受體EP2和EP4受體來激活PI3K - Akt- GSK3通路從而抑制干擾素α和干擾素β。(Fabricius等2010 ；Xu等2008)。盡管前列腺素E2的產(chǎn)生增加主要是由于病毒感染過程中環(huán)氧合酶2的產(chǎn)生增加(Steer和Corbett2003)。藥理學(xué)以及遺傳相關(guān)證據(jù)也表明，由環(huán)氧合酶I調(diào)節(jié)產(chǎn)生的前列腺素E2在調(diào)節(jié)I型干擾素產(chǎn)生和宿主抗病毒反應(yīng)中起到關(guān)鍵作用。(Carey等2005 ；Chen等2012 ；Ray等2004)。；比如環(huán)氧合酶I特異性抑制劑增加偽狂犬病毒PFV的復(fù)制(Ray等2004)給予環(huán)氧合酶I敲除但未給予環(huán)氧合酶2敲除的小鼠更能抵抗流感病毒的侵襲(Carey等2005)環(huán)氧合酶I啟動(dòng)子通過高度乙酰化在組蛋白去乙?；毕莸木奘杉?xì)胞中產(chǎn)生干擾素抑制(Chen等2012)盡管多個(gè)研究表明，環(huán)氧合酶I調(diào)節(jié)I型干擾素的抑制，但是通過宿主抗病毒反應(yīng)調(diào)節(jié)環(huán)氧合酶I的研究仍然極少。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]水泡型口炎病毒常呈現(xiàn)季節(jié)性暴發(fā)，常大面積流行，造成嚴(yán)重?fù)p失，但免疫系統(tǒng)如何識(shí)別水泡型口炎病毒依然不得而知。視黃醇X受體(Retinoid X rec印tor),后簡(jiǎn)稱(RXR), RXR屬于核受體(nuclear receptors),在細(xì)胞以及整個(gè)機(jī)體代謝中都是必不可少的。然而，RXR在抵御病毒感染的宿主防御中的作用仍然是未知的。
鑒于以上所述現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明第一方面提供RXR在篩選用于治療感染水泡型口炎病毒(vesicular stomatitis virus)(登錄號(hào))的藥物中的用途。 優(yōu)選的，所述用途為水泡型口炎病毒易感細(xì)胞模型構(gòu)建中的用途，具體為RXR過度表達(dá)所引起的水泡型口炎病毒易感。
更優(yōu)選的，所述易感細(xì)胞模型為胚胎癌細(xì)胞模型。
進(jìn)一步優(yōu)選的，所述細(xì)胞模型為癌細(xì)胞模型。
所述篩選藥物可理解為，將待篩選的藥物分別給予構(gòu)建后的水泡型口炎病毒易感細(xì)胞模型與正常細(xì)胞模型，并對(duì)細(xì)胞模型進(jìn)行比較，從而對(duì)所述待篩選的藥物進(jìn)行生物活性、藥理作用及藥用價(jià)值的評(píng)估。
由于RXR過度表達(dá)對(duì)于水泡型口炎病毒易感，且RXR表達(dá)水平可能調(diào)控水泡型口炎病毒感染的宿主易感性，并阻礙細(xì)菌廓清，所以RXR過度表達(dá)可用于構(gòu)建水泡型口炎病毒易感胚胎癌細(xì)胞模型，在篩選用于治療感染水泡型口炎病毒的藥物中具有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。
本發(fā)明進(jìn)一步提供RXR過度表達(dá)所引起的水泡型口炎病毒易感胚胎癌細(xì)胞金模型的構(gòu)建方法，所述方法具體為:對(duì)野生型RXR和缺乏F9胚胎癌細(xì)胞預(yù)處理，給予注射水泡型口炎病毒，再通過菌斑實(shí)驗(yàn)計(jì)數(shù)上清液中不同特定時(shí)間點(diǎn)的病毒滴度。
所述注射水泡型口炎病毒的具體方法為:給予骨髓源性巨嗷細(xì)胞lg/ml poly 1:C病毒轉(zhuǎn)染，或給予骨髓源性巨噬細(xì)胞感染poly dA:dT4小時(shí)QRT-PCR檢測(cè)RXR mRNA表達(dá)。
本發(fā)明證實(shí)了 RXR表達(dá)水平可調(diào)控水泡型口炎病毒感染的宿主易感性并進(jìn)一步闡述了相關(guān)免疫機(jī)理。
本發(fā)明發(fā)明人發(fā)現(xiàn)RXR介導(dǎo)的固有免疫響應(yīng)在水泡型口炎病毒感染過程中的的宿主防御中不可或缺；并率先證明了在水泡型口炎病毒感染的宿主防御中，RXR依賴性COX感受通路有著關(guān)鍵性的作用。
本發(fā)明第二方面提供RXR在篩選用于治療感染鼠Y皰疹病毒68 (mousegamma-herpessvirus 68)(登錄號(hào))的藥物中的用途。
優(yōu)選的，所述用途為鼠Y皰疹病毒68易感細(xì)胞模型構(gòu)建中的用途，具體為RXR+/+所引起的感染鼠Y皰疹病毒68易感。
更優(yōu)選的，所述易感細(xì)胞模型為胚胎癌細(xì)胞模型。
進(jìn)一步優(yōu)選的，所述細(xì)胞模型為癌細(xì)胞模型。
本發(fā)明進(jìn)一步提供RXR過度表達(dá)所引起的感染鼠Y皰疹病毒68易感細(xì)胞模型的構(gòu)建方