如意珍寶制劑在制備神經(jīng)損傷保護(hù)和/或再生藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及如意珍寶制劑在制備神經(jīng)損傷保護(hù)和/或促進(jìn)再生藥物中的應(yīng)用，屬 于醫(yī)藥領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 神經(jīng)損傷是指神經(jīng)傳導(dǎo)功能障礙、神經(jīng)軸索中斷或神經(jīng)斷裂，導(dǎo)致軀干和四肢感 覺、運(yùn)動(dòng)及交感神經(jīng)功能障礙的一種臨床病癥，可嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。由于神經(jīng)損傷 后病理改變復(fù)雜，神經(jīng)再生能力弱，再生速度緩慢，再生神經(jīng)與周圍組織粘連，神經(jīng)肌肉萎 縮，運(yùn)動(dòng)終板退化變性等，多種因素制約常使治療結(jié)果不能令人滿意。
[0003] 目前，臨床上治療神經(jīng)損傷的藥物主要有神經(jīng)生長(zhǎng)因子、成纖維生長(zhǎng)因子、神經(jīng)節(jié) 巧醋、甲鉆胺、依達(dá)拉奉、激素等，缺乏促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)的特效藥物。應(yīng)用外源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng) 因子（NTFs)雖可促進(jìn)軸突的再生和神經(jīng)功能的恢復(fù)，但其半衰期短、不能透過血腦屏障； 長(zhǎng)春西汀、天麻素等藥物對(duì)于神經(jīng)損傷后的修復(fù)療效仍不夠理想。
[0004] 如意珍寶丸收載于衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)藏藥第一冊(cè)中，標(biāo)準(zhǔn)號(hào)WS3-BC-0314-95,由珍 珠母、沉香、紅花等30味藥材組成，是傳統(tǒng)的藏醫(yī)古驗(yàn)方，可清熱，醒腦開資，舒經(jīng)通絡(luò)，干 黃水。用于攝熱、陳舊熱癥、白脈病，四肢麻木，擁痕，日眼歪斜，神志不清，搏癥，痛風(fēng)，肢體 強(qiáng)直，關(guān)節(jié)不利對(duì)白脈病有良效?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)主要將如意珍寶丸用于治療神經(jīng)性疼痛、骨性疼 痛等，臨床療效確切。根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)，如意珍寶丸的藥理作用主要體現(xiàn)在促進(jìn)血液循環(huán)、抗 炎鎮(zhèn)痛、抗缺氧、促進(jìn)軟骨細(xì)胞分化，W及宏觀方面的鎮(zhèn)痛、改善中風(fēng)后遺癥等作用，未見有 關(guān)如意珍寶丸對(duì)于神經(jīng)損傷的保護(hù)及促進(jìn)損傷神經(jīng)再生方面的報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供如意珍寶制劑在制備神經(jīng)損傷保護(hù)和/或促進(jìn)再生藥物中 的應(yīng)用。
[0006] 術(shù)語(yǔ)說(shuō)明：
[0007] 如意珍寶丸：收載于衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)藏藥第一冊(cè)中，標(biāo)準(zhǔn)號(hào)WS3-BC-0314-95,市 場(chǎng)可購(gòu)。
[0008] 本發(fā)明的技術(shù)方案如下：
[0009] 如意珍寶制劑在制備神經(jīng)損傷保護(hù)和/或促進(jìn)再生藥物中的應(yīng)用。
[0010] 根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述的神經(jīng)損傷保護(hù)，是指對(duì)中樞神經(jīng)損傷和/或外周運(yùn)動(dòng) 神經(jīng)損傷的保護(hù)；
[0011] 根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述的神經(jīng)損傷促進(jìn)再生，是指對(duì)外周運(yùn)動(dòng)神經(jīng)損傷的促進(jìn) 再生。
[0012] 進(jìn)一步優(yōu)選的，所述的神經(jīng)損傷促進(jìn)再生，是指外周運(yùn)動(dòng)神經(jīng)的軸索和/或髓銷 的促進(jìn)再生。
[0013] 上述的如意珍寶制劑，包括如意珍寶丸及按照其配方組成提取或不提取后進(jìn)一步 制成的藥劑學(xué)上可接受的的任何藥學(xué)制劑。
[0014] 有益效果
[0015] 本發(fā)明擴(kuò)展了如意珍寶制劑的用途，公開了其對(duì)中樞神經(jīng)損傷、軸索損傷具有顯 著的保護(hù)作用，對(duì)神經(jīng)必要組成的髓銷損傷具有顯著的促再生作用，可顯著促進(jìn)外周運(yùn)動(dòng) 神經(jīng)損傷的再生作用，為臨床治療神經(jīng)損傷性疾病提供了一種新的治療選擇，彌補(bǔ)了目前 神經(jīng)損傷和促進(jìn)再生方面的不足。
【附圖說(shuō)明】
[0016] 圖1為如意珍寶丸的濃度-致死曲線；
[0017] 圖2為各實(shí)驗(yàn)組對(duì)中樞神經(jīng)損傷的保護(hù)作用表型圖；
[0018] 圖3為各實(shí)驗(yàn)組對(duì)中樞神經(jīng)損傷保護(hù)作用的巧光強(qiáng)度總和定量評(píng)價(jià)對(duì)比圖；
[0019] 圖4為各實(shí)驗(yàn)組對(duì)中樞神經(jīng)損傷的保護(hù)率對(duì)比圖；
[0020] 圖5為各實(shí)驗(yàn)組對(duì)軸索損傷的保護(hù)作用表型圖；
[0021] 圖6為各實(shí)驗(yàn)組對(duì)軸索損傷的保護(hù)作用的巧光強(qiáng)度總和定量評(píng)價(jià)對(duì)比圖；
[0022] 圖7為各實(shí)驗(yàn)組對(duì)軸索損傷的保護(hù)率對(duì)比圖；
[0023] 圖8為各實(shí)驗(yàn)組對(duì)髓銷再生的促進(jìn)作用表型圖；
[0024] 圖9為各實(shí)驗(yàn)組對(duì)髓銷再生促進(jìn)作用的巧光強(qiáng)度總和定量評(píng)價(jià)對(duì)比圖；
[0025] 圖10為各實(shí)驗(yàn)組對(duì)髓銷再生的促進(jìn)率對(duì)比圖；
[00%] 圖11為各實(shí)驗(yàn)組對(duì)外周運(yùn)動(dòng)神經(jīng)再生的促進(jìn)作用表型圖；
[0027] 圖12為各實(shí)驗(yàn)組對(duì)外周運(yùn)動(dòng)神經(jīng)再生長(zhǎng)度影響對(duì)比圖； 陽(yáng)02引 圖13為各實(shí)驗(yàn)組對(duì)外周運(yùn)動(dòng)神經(jīng)再生的促進(jìn)率對(duì)比圖；
[0029] 其中，
[0030] 圖1中，橫、縱坐標(biāo)分別為如意珍寶丸的劑量濃度和致死率，單位分別為yg/mL 和％ ;
[0031] 圖2、圖5、圖8、圖11中，1、2、3或3A、4、5、6依次表示正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、谷 脫甘膚組或T3/T4 組、10μg/mL組、33. 3μg/mL組、100μg/mL組；
[0032] 圖3、圖4、圖6、圖7、圖9、圖10、圖12、圖13中，橫坐標(biāo)為各實(shí)驗(yàn)組，1、2、3或3A、 4、5、6依次表示正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、谷脫甘膚組或T3/T4組、10μgAiL組、33. 3μg/ 血組、100μg/mL組，*表示與模型對(duì)照組相比，P< 0. 05 ;**表示與模型對(duì)照組相比，P < 0. 01 ;***表不與板型對(duì)照組相比，P< 0. 001 ; 陽(yáng)03引 圖3、圖6、圖9中，縱坐標(biāo)為巧光強(qiáng)度總和，單位：X10000AU;
[0034] 圖4中，縱坐標(biāo)為神經(jīng)保護(hù)率，單位：％ ;
[0035] 圖7中，縱坐標(biāo)為軸索保護(hù)率，單位：％ ;
[0036] 圖10中，縱坐標(biāo)為髓銷再生促進(jìn)率，單位：％。
[0037] 圖12中，縱坐標(biāo)為外周神經(jīng)長(zhǎng)度，單位：像素（PixeU。 陽(yáng)03引圖13中，縱坐標(biāo)為外周神經(jīng)再生促進(jìn)率，單位：％。
【具體實(shí)施方式】
[0039] 下述實(shí)施例和實(shí)驗(yàn)例用于進(jìn)一步說(shuō)明但不限于本發(fā)明。
[0040] 實(shí)驗(yàn)例1、對(duì)斑馬魚神經(jīng)損傷的保護(hù)和促再生作用
[0041] 1實(shí)驗(yàn)材料
[0042] 1. 1藥物及試劑
[0043] 如意珍寶丸（0. 5g/丸，金河藏藥股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)為20150129)，嗎替麥考 酪醋（上海晶純實(shí)業(yè)有限公司，批號(hào)為128794-94-5)，還原型谷脫甘膚（上海晶純實(shí)業(yè)有 限公司，批號(hào)為70-18-8)，k甲狀腺素鋼T3/T4 (白色粉末，上海晶純實(shí)業(yè)有限公司，批號(hào)為 55-03-8)，乙醇（無(wú)色液體，杭州龍山精細(xì)化工有限公司，批號(hào)為64-17-5)，阿司匹林（阿拉 下，批號(hào)為G1220028)。
[0044] 1. 2 儀器
[0045] 解剖顯微鏡（SZX7，OLYMPUS，Japan);電動(dòng)聚焦連續(xù)變倍巧光顯微鏡（AZ100， 化kon公司）；6孔板（NestBiotech);甲基纖維素（Aladdin,Shan曲ai,Qiina)，行為分析 儀（V3,ViewpointLifeSciences公司）。
[0046] 1. 3 動(dòng)物
[0047] AB系斑馬魚，年齡為受精后1天（1化f)，2天（2化f);轉(zhuǎn)基因外周運(yùn)動(dòng)神經(jīng) 元巧光系斑馬魚，年齡為受精后1天（1化f);轉(zhuǎn)基因中性粒細(xì)胞巧光系斑馬魚，年齡為 受精后3天（3化f)。來(lái)源：杭州環(huán)特生物科技有限公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)為： 8￥乂1((浙）2012-0171。飼養(yǎng)于28°(：的養(yǎng)魚用水中（水質(zhì)：每比反滲透水中加入200111邑速 溶海鹽，電導(dǎo)率為480~510μS/cm ;抑為6. 9~7. 2;硬度為53. 7~71.6mg/L CaC03)，飼 養(yǎng)管理符合國(guó)際AAALAC認(rèn)證的要求。
[0048] 2 方法
[0049] 2. 1確定最大非致死濃度（MMX)
[0050] 210尾野生型AB系斑馬魚隨機(jī)分為7組：如意珍寶丸100μg/mL組、250μg/mL組、 500μg/mL組、1000μg/mL組、1500μg/mL組、2000μg/mL組和正常對(duì)照組，每組30尾。除 正常對(duì)照組之外，所有實(shí)驗(yàn)組均用0. 25μΜ嗎替麥考酪醋處理3化f斑馬魚2地，建立中樞神 經(jīng)損傷模型。造模成功后，正常對(duì)照組采用養(yǎng)魚用水，試驗(yàn)組分別給予相應(yīng)濃度的藥物，實(shí) 驗(yàn)過程中，每天對(duì)死亡的斑馬魚計(jì)數(shù)并移除死亡的斑馬魚，如意珍寶丸處理結(jié)束后，統(tǒng)計(jì)各 實(shí)驗(yàn)組的斑馬魚死亡數(shù)量，使用化igin8. 0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件繪制最佳的濃度效應(yīng)曲線，并計(jì)算 MNLCo
[0051] 根據(jù)如意珍寶丸濃度-致死數(shù)據(jù)表，用化iginPro8.0軟件擬合濃度-致死曲 線，經(jīng)過曲線擬合，求得如意珍寶丸的MNLC為444μg/mU但在444μg/mL濃度時(shí)斑馬魚 出現(xiàn)明顯的屯、血管毒性，因此降低如意珍寶丸濃度至無(wú)可見有害作用劑量水平（N0AEL) 約為 100μg/mL，藥效學(xué)評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)選取 10μg/mL(l/10N0AEL)、33. 3μg/mL(l/3N0AEL)和 100yg/mL(N0AEL)Ξ個(gè)濃度。詳見表1、圖1。
[0052] 表1如意珍寶丸濃度-致死數(shù)據(jù)表
[0053]
[0054] 2.2神經(jīng)損傷?呆護(hù)作用 '
' ' 陽(yáng)化5] 2. 2. 1對(duì)中樞神經(jīng)損傷的保護(hù)作用
[0056] 180尾野生型ΑΒ系斑馬魚隨機(jī)分為6組：如意珍寶丸低劑量組、中劑量組、高劑 量組、模型組、陽(yáng)性對(duì)照組和正常對(duì)照組。除正常對(duì)照組外，其余實(shí)驗(yàn)組均用0. 25μΜ濃度 的嗎替麥考酪醋處理3化f斑馬魚2地，建立斑馬魚中樞神經(jīng)損傷模型。陽(yáng)性對(duì)照組給予 500μΜ還原型谷脫甘膚，正常對(duì)照組給予養(yǎng)魚用水，試驗(yàn)組分別給予如意珍寶丸10 (低劑 量組）、33. 3 (中劑量組）和100μg/血（高劑量組）處理。處理結(jié)束后，用日丫晚澄（Α0)對(duì) 斑馬魚進(jìn)行染色，然后，每組隨機(jī)取15尾斑馬魚在顯微鏡下觀察并拍照，利用圖像處理軟 件進(jìn)行圖像分析，定量中樞神經(jīng)巧光強(qiáng)度（S)，統(tǒng)計(jì)