δ188. 10 (s), 183. 71 (s), 154. 37 (s), 147. 57 (s), 140. 19 (s), 136. 41 (s), 134. 73 (s),131. 25 (s), 128. 38 (s),118. 82(s), 69. 23(s), 54. 54 (d,J= 16. 6Hz),45. 51 (s),37. 54 (s),33. 56 (s),26. 16 (s),25. 19 (d,J= 10. 3Hz),24. 73 (s),23. 5 8(s), 23. 24(s), 22. 69 (s).
[0031]HRMS(ESI) :m/z[M+H]+calcdforC26H36N03:4 1 0 . 26 9 5 ;found:410. 2693。
[0032]
[0033] 實施例4SalviskinoneA的0-(哌啶基）乙基衍生物（IV)的合成
[0034] 將化合物II(209mg，0. 5mmol)溶于20mL乙腈當(dāng)中，向其中加入無水碳酸鉀 (345mg，2. 5mmol)，鵬化鉀（84mg，0. 5mmol)和哌啶（852mg，lOmmol)，混合物加熱回流 10h。 反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液倒入25mL冰水中，用等量二氯甲烷萃取2次，合并有機(jī)相。依次用水 和飽和食鹽水洗滌合并之后的有機(jī)相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物 粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化（流動相為：石油醚/丙酮=100:0. 5,v/v)，收集黃色 集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物IV的黃色粉末（116. 3mg，55% )。
[0035]NMR(500MHz,Chloroform-dl)δ6. 44(d,J= 95. 3Ηζ, 1Η), 6. 31(s,1Η), 5. 73(s ,1H), 4. 20(s,2H), 3. 74(s,1H), 3. 01(s,2H), 2. 39(s,4H), 2. 07(s,1H), 1. 96(s,1H), 1. 86(s ,1H),1. 60(s,1H),1. 44(s,4H),1. 33(d,J= 15. 0Hz, 5H),1. 00(s,6H),0. 91(s,6H).
[0036] 13C匪R(125MHz, DMS0-d6)δ188. 16 (s),183. 79 (s),154. 48 (s),147. 63 (s), 140. 27 (s), 136. 51 (s), 134. 79 (s),131. 33 (s), 128. 47 (s),118. 88(s), 69. 31 (s),54. 6 9 (d,J=16. 2Hz), 45. 56 (s), 37. 61 (s), 33. 62 (s), 26. 21 (s), 25. 21 (s), 24. 65 (d,J= 19. 1Hz),23. 50 (d,J=17. 2Hz),23. 23 (s),22. 68 (s).
[0037] HRMS(ESI) :m/z[M+H]+calcdforC27H3SN03:424. 28 5 2;found:424. 2856。
[0038]
[0039] 實施例5組合物抗人體真菌活性
[0040] 組合物的制備：將研磨之后過200目網(wǎng)的75mg化合物III的粉末和研磨之后過 200目網(wǎng)的25mg化合物IV的粉末裝入帶蓋的小管中并用渦輪攪拌儀混合即得到100mg組 合物，使用時用水溶解這l〇〇mg的組合物即得到組合物的溶液。
[0041] 抗人體真菌活性實驗是采用濃度稀釋的方法，每次測定重復(fù)三次，測試的病原菌 有紅色毛癬菌、羊毛狀小孢子菌和斷發(fā)癬菌，菌液濃度為1〇5個/mL。藥物的起始濃度為 50. 00μg/mL(5%二甲基亞砜DMS0)，梯度稀釋至0. 10μg/mL，等量體積的菌液和測試樣品 混合培養(yǎng)在96孔板中（形成的最終濃度有：25· 00、12· 50、6· 25、3·13、1·56、0·78、0· 39、 0. 20、0. 10和0. 05μg/mL)，人體真菌培養(yǎng)溫度分別為28°C，培養(yǎng)時間24h后觀察，若發(fā)現(xiàn)沒 有菌落形成的處理孔中最低的那個濃度為樣品最低抗菌濃度，即MIC值。該實驗陽性對照 為酮康唑，組合物抗人體真菌結(jié)果見表1。
[0042] 表1組合物抗人體真菌MIC值（μg/mL)
[0043]
[0045] 結(jié)論：組合物具有很強(qiáng)的抗人體真菌活性，因此本發(fā)明的組合物有望被用于制備 新型抗人體真菌藥物?；衔颕II和化合物IV無抗人體真菌活性，因此不能用于制備新型 抗人體真菌藥物。
[0046] 實施例6組合物抗幽門螺桿菌活性
[0047] 1)供試菌株
[0048] 幽門螺桿菌（Helicobacterpylori，Hp)標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC43504購于美國菌種保 存中心（AmericanTypeCultureCollection，ATCC)。13株Hp臨床菌株米自南京市鼓樓 醫(yī)院胃鏡室接受胃鏡檢查的患者；在連續(xù)胃鏡檢查中對消化性潰瘍、十二指腸球炎或疣狀 胃炎的患者，先經(jīng)快速尿素酶實驗確定為Hp陽性者，再取胃竇黏膜1-2塊，切碎后接種于含 8%馬血清、三甲氧節(jié)氨啼啶（trimethropin，TMP)l. 25g/L、多粘菌素（polymyxin)B2500U/ L、萬古霉素（vancomycin) 10mg/L的Columbia選擇性瓊脂培養(yǎng)基中，于37°C在微氧環(huán)境下 (5% 02, 10% 0)2和85%N2)培養(yǎng)72小時。收集細(xì)菌，經(jīng)涂片革蘭氏染色，氧化酶、觸酶和 尿素酶鑒定為陽性后，傳代純培養(yǎng)，所得菌株作為實驗菌株。
[0049] 2)菌株培養(yǎng)
[0050] 我們采用微需氧袋（購自上海醫(yī)科大學(xué)）進(jìn)行HP的菌株培養(yǎng)，它可通過化學(xué)反應(yīng) 產(chǎn)生Hp所需要的微需氧環(huán)境。
[0051] 3)生物活性測定
[0052] 采用紙片法（Microbiologicalpapermethod)測定藥物對幽門螺桿菌 的抑制作用，用瓊脂稀釋法來測定供試樣品的最低抑菌濃度（minimalinhibitory concentration,MIC)〇
[0053] I·紙片法實驗
[0054](A)準(zhǔn)備培養(yǎng)基將配制好的Columbia培養(yǎng)基經(jīng)高壓蒸汽滅菌后，冷卻至50_60°C， 加8 %馬血清或綿羊血，混勻傾注于已經(jīng)滅菌的培養(yǎng)皿中，每皿7-10ml，培養(yǎng)基厚度為 1. 5mm(無菌操作）。
[0055] (B)轉(zhuǎn)接實驗菌（涂菌）用微量取樣器取稀釋好的10sCFU/ml(10D66Q= 10sCFU/ml) Hp的菌懸液0.lml均勻地涂抹在適宜的培養(yǎng)皿表面。倒置于37°C烘干箱中15min后取出， 目的使瓊脂表面干燥，備用。
[0056] (C)貼樣品紙片用微量取樣器取6μ1待測樣品（質(zhì)量濃度2mg/ml)注入已經(jīng)滅菌 的圓濾紙片上。用無菌鑷子鑷取含樣品的紙片和對照空白紙片，按無菌操作分別紙片緊貼 于含菌瓊脂表面，每隔一定距離貼一張紙片。每種菌做3皿，所得結(jié)果求其平均值。
[0057] (D)培養(yǎng)將各平皿置于微需氧袋中，封口，打開氣體發(fā)生器，再置于37°C培養(yǎng)箱中 培養(yǎng)72h。
[0058] (E)測抑菌圈直徑取出平板后，分別測量各紙片周圍抑菌圈直徑的大小。參照對照 組的結(jié)果，可得出待測樣品敏感實驗的結(jié)果。重復(fù)三次。
[0059] II.瓊脂稀釋法測定MIC
[0060] ㈧藥物平板的制備首先將測試的藥物用二甲基亞砜（DMS0)溶液配制成0. 5mg/ ml的母液，再用無菌水稀釋，最終配成 100. 0,80. 0,60. 0,45. 0,40. 0, 35. 0, 30. 0, 25. 0， 20. 0，15. 0，10. 0,5. 0和2. 5yg/ml的濃度系列，DMS0在介質(zhì)中的濃度小于1%。將lml配 制好的測試藥物溶液與保溫于50°C的8ml哥倫比亞培養(yǎng)基，另加lml保溫于50°C的馬血清 充分混勻，澆制入培養(yǎng)皿中冷卻即成（培養(yǎng)皿中藥物的終濃度為10.ο，8.Ο，6.Ο，4. 5,4. 0， 3. 5, 3. 0, 2. 5, 2. 0,1. 5,1. 0,0. 5和0. 25μg/ml，如果有抑菌作用，則MIC值即這些值當(dāng)中的 一個）。
[0061] (B)轉(zhuǎn)接實驗菌（涂菌）用微量取樣器吸取稀釋好的1X10sCFU/mlHp的菌懸液 0.1ml均勻地涂抹在培養(yǎng)皿表面，倒置于37°C烘干箱中15min后取出，目的使瓊脂表面干 燥，備用。
[0062] (C)確定MIC將待測培養(yǎng)皿在微需氧袋（含：85%N2, 10% 0)2和5% 02)中，保 溫37°C培養(yǎng)72小時，觀察Hp生長情況，與空白組相對照，以完全沒有菌生長的樣品最低濃 度為最低抑菌濃度（minimalinhibitoryconcentration,MIC)值。陽性對照為氨節(jié)西林 (Ampicillin)〇
[0063] 實驗結(jié)果
[0064]