0903,安琪酵母股份有限公司生產(chǎn)。大腸桿菌內(nèi)毒素，109k4076, sigma公司產(chǎn)品。
[0038] 檢測(cè)儀器MC-246歐姆龍電子體溫計(jì)，歐姆龍工貿(mào)有限公司生產(chǎn)。
[0039] 2.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)SD大鼠80只，雌雄各半，重體180-200g，北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司 生產(chǎn)，許可證號(hào)：SCXK (京)2012-0001。普通級(jí)日本大耳白家兔60只，購自北京隆安實(shí)驗(yàn)動(dòng) 物養(yǎng)殖中心，許可證號(hào)：SCXK (京）2009-0005。動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK (晉）2012-0001。 實(shí)驗(yàn)室溫度21°C ±1°C，相對(duì)濕度40%-60%，換氣次數(shù)10-15次/h，光照時(shí)間12h/12h明暗 交替。實(shí)驗(yàn)期間各組動(dòng)物自由采食飲水，由同一實(shí)驗(yàn)人員管理動(dòng)物。
[0040] 3.實(shí)驗(yàn)方法 3. 1給藥劑量 大鼠實(shí)驗(yàn)設(shè)定高、中、低三個(gè)劑量組，給藥量按生藥含量計(jì)算分別為20g/kg、10g/kg、 5g/kg ;家兔實(shí)驗(yàn)設(shè)定高、中、低三個(gè)劑量組，給藥量按生藥含量計(jì)算分別為10g/kg、5g/kg、 2. 5g/kg〇
[0041] 3. 2對(duì)酵母致大鼠發(fā)熱的影響 SD大鼠實(shí)驗(yàn)前多次測(cè)量基礎(chǔ)體溫，使大鼠對(duì)體溫測(cè)定操作習(xí)慣。選取體溫變化幅度小 的大鼠60只，平均分為6組，分別為對(duì)照組、模型組、陽性組(阿斯匹林組)、清熱灌腸劑高劑 量、中劑量、低劑量組。以最后一次測(cè)量的基礎(chǔ)體溫的平均數(shù)為基礎(chǔ)，觀察各組大鼠體溫的 變化。
[0042] 各組大鼠試驗(yàn)第Oh測(cè)量基礎(chǔ)體溫后，除對(duì)照組外，其余各組大鼠均皮下注射5%的 生理鹽水酵母溶液lml/100g體重造模。造模后監(jiān)測(cè)大鼠的體溫變化。造模后5h，各劑量組 大鼠分別灌腸給予相應(yīng)劑量的清熱灌腸液，阿斯匹林組灌胃給予125mg/kg阿斯匹林水溶 液，對(duì)照組、模型組灌腸給予相同體積的生理鹽水。所有灌腸給予的藥液均在給藥前將藥液 預(yù)熱到38°C。分別于給藥后l、2、3、4、5h時(shí)測(cè)量動(dòng)物的體溫，計(jì)算給藥后各時(shí)間點(diǎn)各組大鼠 體溫與基礎(chǔ)體溫的差值及各給藥組大鼠的降溫率：降溫率=模型組平均值-給藥組平均值 /模型組平均值。
[0043] 3. 3對(duì)內(nèi)毒素致家兔發(fā)熱的影響 40只家兔實(shí)驗(yàn)前多次測(cè)量基礎(chǔ)體溫，使動(dòng)物習(xí)慣肛溫測(cè)量操作。分組當(dāng)天測(cè)定家兔基 礎(chǔ)體溫，選擇體溫適中、體溫變化幅度小的36只家兔隨機(jī)平均分為6組，每組6只。分別為 對(duì)照組、模型組、陽性組(阿斯匹林組)以及清熱灌腸劑高劑量、中劑量、低劑量組。各組動(dòng)物 于實(shí)驗(yàn)當(dāng)天測(cè)量基礎(chǔ)體溫后，分別給予相應(yīng)的藥物。實(shí)驗(yàn)高、中、低劑量組灌腸給予相應(yīng)劑 量的清熱灌腸液，對(duì)照組和模型組灌腸給予等量生理鹽水，阿斯匹林組灌胃給予62. 5mg/kg 藥液。除對(duì)照組外，其余各組家兔同時(shí)耳緣靜脈注射250ng/kg大腸桿菌內(nèi)毒素。測(cè)量造模 后1、2、3、4、5h時(shí)各組動(dòng)物的體溫，計(jì)算給藥后各時(shí)間點(diǎn)動(dòng)物體溫與基礎(chǔ)體溫的差值及各 給藥組降溫率。
[0044] 3. 4數(shù)據(jù)處理 采用SPSS11. 5軟件，單因素方差分析對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，組間t檢驗(yàn)。
[0045] 4.結(jié)果 4.1對(duì)酵母致大鼠發(fā)熱模型的影響 給藥高劑量組從lh開始一直持續(xù)到5h均產(chǎn)生明顯的降溫作用，與模型組比較，降溫作 用顯著；中劑量組在4h、5h時(shí)了產(chǎn)生了顯著的降溫作用。低劑量組動(dòng)物體溫也表現(xiàn)出降低 的趨勢(shì)，但與模型組比較無顯著性差異。阿斯匹林組與模型組比較，給藥后lh即產(chǎn)生明顯 的降溫作用，但從2h開始，降溫作用就出現(xiàn)逐漸減弱的趨勢(shì)，而清熱灌腸劑高劑量組則從 2h開始到5h，降溫作用呈現(xiàn)出明顯的增強(qiáng)趨勢(shì)，在5h時(shí)降溫率達(dá)到58. 5%，表現(xiàn)出持續(xù)良好 的降溫效果，說明清熱灌腸劑對(duì)酵母所致大鼠體溫升高具有顯著的抑制作用。結(jié)果見表1、 表2。
[0046] 4.2對(duì)內(nèi)毒素致家兔發(fā)熱的影響 與對(duì)照組比較，模型組動(dòng)物在給予內(nèi)毒素后體溫明顯升高，并在lh、3h時(shí)出現(xiàn)峰值，較 好地體現(xiàn)出該模型2個(gè)峰值的特點(diǎn)。與模型組比較，清熱灌腸劑高劑量組給藥后lh即產(chǎn)生 了顯著的降溫作用，并在5h時(shí)達(dá)到最大降溫效果，顯示出良好的抑制內(nèi)毒素所致家兔體溫 升高的作用；中、低劑量清熱灌腸劑組也表現(xiàn)出一定的降溫趨勢(shì)，但與模型組比較無顯著性 差異，僅中劑量組在5h時(shí)產(chǎn)生出顯著性差異。阿斯匹林組動(dòng)物僅在給藥后lh動(dòng)物體溫的 顯著性降低，從2h開始直到觀察結(jié)束未見到顯著的降溫作用?？梢娗鍩峁嗄c劑高劑量組可 顯著抑制內(nèi)毒素所致家兔體溫升高，并在5h時(shí)達(dá)到85. 4%的降溫率，產(chǎn)生出良好的降溫效 果。結(jié)果見表3、表4。
[0047] 實(shí)驗(yàn)用發(fā)熱動(dòng)物模型均為技術(shù)成熟的經(jīng)典模型，酵母菌所致發(fā)熱是由于注射部位 菌體的炎癥反應(yīng)而引起的全身發(fā)熱，能較好地模擬病理狀態(tài)下的發(fā)熱癥狀。模型動(dòng)物所表 現(xiàn)出的癥狀與臨床癥狀相似，適合用來驗(yàn)證清熱藥的解熱作用。細(xì)菌內(nèi)毒素作用于動(dòng)物體 或人體，可以誘導(dǎo)單核巨噬細(xì)胞釋放內(nèi)源性致熱源TNF-a和IL-1等，TNF-a通過直接刺激 下丘腦體溫調(diào)節(jié)中樞和巨噬細(xì)胞釋放IL-1，IL-1再促進(jìn)單核巨噬細(xì)胞釋放PGE2,從而刺激 下丘腦體溫調(diào)節(jié)中樞引起發(fā)熱。實(shí)驗(yàn)過程中各模型均表現(xiàn)出特有的發(fā)熱特征，表明實(shí)驗(yàn)所 使用的動(dòng)物發(fā)熱模型達(dá)到了實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的要求。
注：與對(duì)照組比較，##P〈〇. 01;與模型組比較，*P〈〇. 05，#P〈0. 01。
[0049] 表2清熱灌腸劑對(duì)酵母致大鼠發(fā)熱降溫率的影響（X土S，n=10)
注：與對(duì)照組比較，#P〈〇. 05，##P〈0. 01;與模型組比較，*P〈0. 05。
[0050] 表4清熱灌腸劑對(duì)內(nèi)毒素致家兔發(fā)熱降溫率的影響（X土S，n=6)
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種用于降溫的中藥清熱灌腸劑，其特征在于：由以下質(zhì)量比的原料制成，黃連 5-10份、黃芩5-10份、黃柏5-10份、麥冬5-10份、竹葉5-10份、紫花地丁 5-10份、金銀花 5-10份、生石膏10-20份、柴胡10-20份。2. 制備如權(quán)利要求1所述的用于降溫的中藥清熱灌腸劑的方法，其特征在于：包括步 驟 先用水蒸餾提取柴胡，收集柴胡蒸餾液和柴胡殘?jiān)? 然后將柴胡殘?jiān)c黃連、黃岑、黃柏、麥冬、竹葉、紫花地丁、金銀花和生石膏合并，用水 煮沸提取，收集提取液； 最后將提取液與柴胡蒸餾液合并。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于：步驟（1)中，柴胡加水浸泡，每克柴胡加 水6-8ml，然后置于蒸餾收集裝置中加熱蒸餾，收集柴胡蒸餾液的體積相當(dāng)于原料總質(zhì)量的 100% 〇4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于：步驟（2)中，先在黃連、黃岑、黃柏、麥冬、 竹葉、紫花地丁、金銀花和生石膏中加水浸泡，每克以上原料加水5-10ml，浸泡后，加入柴胡 殘?jiān)?，加熱煮沸提取，收集提取液的體積相當(dāng)于原料總質(zhì)量的100%。5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于：加水浸泡2小時(shí)。6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于：加水浸泡2小時(shí)。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于：加熱煮沸提取2次，每次120分鐘。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種用于降溫的中藥清熱灌腸劑，由以下質(zhì)量比的原料制成，黃連5-10份、黃芩5-10份、黃柏5-10份、麥冬5-10份、竹葉5-10份、紫花地丁5-10份、金銀花5-10份、生石膏10-20份、柴胡10-20份。采用蒸餾提取法先將柴胡中易于揮發(fā)的主要有效成分提取出來，然后再按照傳統(tǒng)中藥煎煮法對(duì)柴胡進(jìn)行二次提取，充分利用了該藥的全部有效部位。該制劑具有效果顯著，安全性好，對(duì)動(dòng)物損傷小的特點(diǎn)?？刹捎弥蹦c給藥的方式，使藥物有效成分能直接經(jīng)腸壁吸收入血，具有起效快，對(duì)動(dòng)物刺激性小，操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)。
【IPC分類】A61K9/08, A61K33/06, A61P29/00, A61K36/899
【公開號(hào)】CN105233073
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510805727
【發(fā)明人】楊喜花, 任連生, 張?zhí)O
【申請(qǐng)人】山西省腫瘤研究所
【公開日】2016年1月13日
【申請(qǐng)日】2015年11月20日