持續(xù)釋放遞送的組合物以及在制造過程中穩(wěn)定蛋白質(zhì)的方法
【專利說明】持續(xù)釋放遞送的組合物W及在制造過程中穩(wěn)定蛋白質(zhì)的方 法
[0001] 相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用
[0002] 本申請(qǐng)根據(jù)35U.S.C. § 119(e)要求2013年3月14日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?61/786,035的權(quán)益，該申請(qǐng)的全部?jī)?nèi)容W引用的方式并入本文。
[000引 背景
[0004] 領(lǐng)域
[0005] 本公開一般設(shè)及用于持續(xù)遞送活性劑（例如蛋白質(zhì)）的制劑。
【背景技術(shù)】
[0006] 將藥物遞送至人類動(dòng)物的身體，尤其是遞送至人類或動(dòng)物的眼睛（包括視網(wǎng)膜、 玻璃體和葡萄膜）通常是通過高劑量全身給予眼內(nèi)注射包含活性劑（如蛋白質(zhì)）的組合物 來實(shí)現(xiàn)的。
[0007] 在合適載體（如微球）中穩(wěn)定活性劑（如蛋白質(zhì)）可能出現(xiàn)挑戰(zhàn)。然而，通過一 些不同的應(yīng)力（如濃度、剪切和界面應(yīng)力）包封蛋白質(zhì)至微球制劑中的過程通常使蛋白質(zhì) 不穩(wěn)定。運(yùn)些過程應(yīng)力的影響可能造成蛋白質(zhì)變性和聚集，導(dǎo)致生物利用度降低和潛在不 利的免疫反應(yīng)。
[0008] 除了過程應(yīng)力之外，包封在聚合物基質(zhì)中的蛋白質(zhì)通常經(jīng)受來自生理環(huán)境的不利 條件W及來自聚合物基質(zhì)內(nèi)的微環(huán)境。在生理環(huán)境水平下，蛋白質(zhì)經(jīng)受高溫（如37°c及W 上）。在微環(huán)境水平下，蛋白質(zhì)還經(jīng)受初始水合階段的濃度效應(yīng)、抑改變化及基質(zhì)中所使用 聚合物的疏水效應(yīng)。通過此類事件（如聚集、化學(xué)修飾和斷裂），運(yùn)些環(huán)境條件可能對(duì)于蛋 白質(zhì)長(zhǎng)期穩(wěn)定性是不利的并且最終限制其效力和可用性。
[0009] 概述
[0010] 本文公開了制劑、制備制劑的方法和使用制劑的方法，該制劑包含包封在聚合物 網(wǎng)絡(luò)內(nèi)具有高效率和高質(zhì)量的蛋白質(zhì)W確保持續(xù)遞送很長(zhǎng)一段時(shí)間。
[0011] 在一個(gè)實(shí)施方案中，物質(zhì)組合物包含顆粒，顆粒包含蛋白質(zhì)、生物可降解的聚合物 和一種或多種賦形劑。顆?？杀慌渲糜糜谶f送蛋白質(zhì)持續(xù)不少于2個(gè)月的時(shí)間段。在一些 實(shí)施方案中，生物可降解的聚合物包含特性粘度在0.1化/g至1.0化/g的范圍內(nèi)的特性粘 度聚化^丙交醋-共-乙交醋）、聚化^丙交醋）和/或聚乙二醇共聚物。根據(jù)一些實(shí) 施方案，蛋白質(zhì)的分子量在IOkDa至ISOkDa范圍內(nèi)。在一個(gè)實(shí)施方案中，一種或多種賦形 劑包括環(huán)糊精、海藻糖、精氨酸或其組合。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，環(huán)糊精是橫下基酸-0-環(huán)糊 精。
[0012] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，水性制劑包含蛋白質(zhì)、緩沖液和選自由環(huán)糊精、海藻糖和精 氨酸組成的組的一種或多種賦形劑。該一種或多種賦形劑可W相對(duì)于蛋白質(zhì)摩爾濃度而言 在10/1至200/1范圍內(nèi)的摩爾比存在于水性制劑中。
[0013] 附圖簡(jiǎn)述
[0014] 現(xiàn)在將參照下面概述的附圖對(duì)運(yùn)些和其它特征進(jìn)行描述。提供運(yùn)些附圖和相關(guān)描 述是用來說明本發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案而不是限制本發(fā)明的范圍。
[0015] 圖1示出了比較示例性實(shí)施方案的可溶性蛋白質(zhì)回收率的柱形圖。
[0016] 圖2描述了比較其它示例性實(shí)施方案的可溶性蛋白質(zhì)回收率的柱形圖。
[0017] 圖3示出了比較另外其它示例性實(shí)施方案的可溶性蛋白質(zhì)回收率的柱形圖。
[001引圖4顯示示出微球的示例性實(shí)施方案的釋放曲線的圖。
[0019]圖5描述示出微球的示例性實(shí)施方案的釋放曲線的圖。
[0020] 圖6顯示示出微球的示例性實(shí)施方案的釋放曲線的圖。
[0021] 圖7描述示出微球的示例性實(shí)施方案的釋放曲線的圖。
[0022] 圖8顯示示出微球的示例性實(shí)施方案的結(jié)合活性的圖。
[0023]圖9描述示出微球的示例性實(shí)施方案的釋放曲線的圖。
[0024] 詳述
[0025]如本文所述的，通過施用一種或多種微?？刂坪统掷m(xù)施用治療劑（如蛋白質(zhì)）可 改善病狀（如不希望的前段或后段眼部病狀）的治療。微粒包含藥學(xué)上可接受的聚合物組 合物，并且被配制成在長(zhǎng)時(shí)間段內(nèi)釋放一種或多種藥物活性劑（如蛋白質(zhì)），或其它降低眼 內(nèi)壓的或神經(jīng)保護(hù)性藥劑。對(duì)微球可進(jìn)行配制W提供蛋白質(zhì)的持續(xù)釋放，同時(shí)減少蛋白質(zhì) 聚集體的數(shù)量、獲得理想的釋放曲線W及增加微球制劑內(nèi)蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性。
[0026]W下術(shù)語(yǔ)定義如下，除非詞語(yǔ)的上下文示出不同的意思。
[0027]如本文所用，"微球"或"微粒"，可互換地用于指代顆粒、微球、微粒、超細(xì)粉末等， 其包括包封或滲入治療組分的生物相容性基質(zhì)。根據(jù)一些實(shí)施方案，微球不包括納米顆粒 或納米球。微球通?？膳c人器官（如眼睛）的生理?xiàng)l件生物相容，并且不造成不良副作用。 在不破壞眼睛視力情況下，可W安全地使用結(jié)膜下施用的微球。在一些實(shí)施方案中，微球具 有的最大尺寸（如直徑或長(zhǎng)度）小于1mm。例如，微球的最大尺寸可能小于約500ym。微 粒的最大尺寸還可不大于約200ym，或最大尺寸為約30ym至約50ymW及其它尺寸。
[0028]如本文所用，"治療組分"是指除了聚合物基質(zhì)之外包含一種或多種治療劑或用W治療眼部醫(yī)學(xué)病狀的物質(zhì)的微球部分。治療組分可W是微球的離散區(qū)域，或它可均勻分布 于整個(gè)微球。治療組分的治療劑可包含至少一種蛋白質(zhì)，通常是眼睛可接受的，并且W當(dāng)把 微球放在眼內(nèi)時(shí)不造成顯著不良反應(yīng)的形式來提供。
[0029]如本文所用，"蛋白質(zhì)"應(yīng)該具有如本領(lǐng)域中已知的通用含義，并且可指由一條或 多條氨基酸鏈組成的大的生物分子。蛋白質(zhì)可W在活性生物體內(nèi)執(zhí)行大量功能，該功能包 括催化代謝反應(yīng)、復(fù)制DNA、對(duì)刺激作出響應(yīng)W及將分子從一個(gè)位置運(yùn)輸至另一位置。蛋白 質(zhì)可W是直鏈、支鏈或環(huán)狀，并且可W是化學(xué)合成或天然或重組產(chǎn)生的。在一些實(shí)施方案 中，蛋白質(zhì)還可包括修飾的蛋白質(zhì)（如聚乙二醇化的蛋白質(zhì)或翻譯后修飾的蛋白質(zhì)）。
[0030]如本文所用，"藥物持續(xù)釋放組分"是指有效提供治療劑從微球中持續(xù)釋放的微球 部分。藥物持續(xù)釋放組分可為生物可降解的聚合物基質(zhì)，或它可為覆蓋包含治療組分的微 球核屯、區(qū)域的包衣。
[0031]如本文所用，"與……締合"是指與……混合、分散于……中、與……偶聯(lián)、覆蓋或 包圍。
[0032]術(shù)語(yǔ)"生物可降解的聚合物"是指體內(nèi)降解的一種或多種聚合物，并且其中一種或 多種聚合物隨時(shí)間的侵蝕與治療劑的釋放同時(shí)發(fā)生或在其之后發(fā)生。術(shù)語(yǔ)"生物可降解的" 與"生物可侵蝕的"為等效的且在本文可互換使用。生物可降解的聚合物可為均聚物、共聚 物或包含兩種W上不同聚合單元的聚合物。
[0033] 如本文所用的術(shù)語(yǔ)"治療有效量"是指治療病狀（如眼睛病狀）或減少或預(yù)防眼睛 損傷或損害而對(duì)眼或眼區(qū)域沒有造成顯著的消極或不良副作用所需的藥劑的水平或數(shù)量。 鑒于上文，治療劑（如蛋白質(zhì)）的治療有效量為有效減輕眼睛病狀的至少一種癥狀的數(shù)量。
[0034] 本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì)理解本文使用的程度的各個(gè)術(shù)語(yǔ)的含義。例如，如本文在提 及數(shù)量（例如"約6%")的上下文中使用的，術(shù)語(yǔ)"約"表示接近并包括仍執(zhí)行所需功能或 獲得所需結(jié)果的所述量的量，例如"約6 % "可包括6%W及仍執(zhí)行所需功能或獲得所需結(jié) 果的接近6%的量。例如，術(shù)語(yǔ)"約"可指小于所述量的10%W內(nèi)、小于所述量的5%W內(nèi)、 小于所述量的0. 1%W內(nèi)或小于所述量的0. 01%W內(nèi)的量。
[00巧]巧白質(zhì)
[0036] 根據(jù)一些實(shí)施方案，制劑或微球制劑含有蛋白質(zhì)，本文中也稱之為蛋白質(zhì)組分。蛋 白質(zhì)可W是直鏈、支鏈或環(huán)狀的。蛋白質(zhì)可W是融合蛋白。在一些實(shí)施方案中，相對(duì)于蛋白 質(zhì)天然存在的形式，可W將其截短。蛋白質(zhì)可包括不超過單條氨基酸鏈或兩條或更多條氨 基酸鏈。如果蛋白質(zhì)含有兩條W上氨基酸鏈，則兩條或更多條鏈可W共價(jià)地或非共價(jià)地相 互締合。例如，氨基酸鏈可W通過二硫鍵締合，或兩條或更多條鏈可W僅通過非共價(jià)力相互 締合。根據(jù)一些實(shí)施方案，蛋白質(zhì)不含有合成的或翻譯后修飾的氨基酸。蛋白質(zhì)可W重組 (例如通過哺乳動(dòng)物或原核細(xì)胞培養(yǎng)物）、合成（例如通過固相合成）、或可W從天然來源 (例如哺乳動(dòng)物或細(xì)菌細(xì)胞培養(yǎng)物、血漿、血清、植物、真菌等）分離而產(chǎn)生。
[0037] 可被包括在制劑和微球制劑中并且因此被遞送的蛋白質(zhì)的非限制性實(shí)例包括單 克隆或多克隆抗體、雙特異性抗體、雙特異性抗體、抗體片段、抗巧素（anticalin)、DARPin 和酶。其它實(shí)例包括糖蛋白和血清白蛋白。如果使用的話，單克隆或多克隆抗體可WW其天 然形式（如例如通過細(xì)胞產(chǎn)生的）使用，并且可含有或可不含有翻譯后修飾，或可WW化學(xué) 或酶促修飾的形式使用，該形式是在將其從細(xì)胞培養(yǎng)物或其它生物樣品中分離出來之后產(chǎn) 生的。如果使用的話，抗體可W是嵌合的。在一些實(shí)施方案中，抗體可W是IgA、I曲、I姐、 IgG或IgM?？贵w片段包括通過抗體的木瓜蛋白酶（例如F油片段）或胃蛋白酶裂解產(chǎn)生 的那些。更通常的是，有用的抗體片段包含F(xiàn)油'、F(油)2、F油C和Fv片段。在一些實(shí)施方 案中，可W使用補(bǔ)體抗體片段?？贵w片段可W通過修飾全抗體或用重組DNA方法重新合成 而產(chǎn)生，并且還包括通過現(xiàn)在的常規(guī)技術(shù)制成的"人源化"抗體。"抗體片段"包括全長(zhǎng)抗體 的一部分，通常是其抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域或可變結(jié)構(gòu)域。
[0038] 一些實(shí)施方案提供包含抗VEGF抗體或蛋白質(zhì)（即，特異性結(jié)合血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng) 因子蛋白質(zhì)或VEGF-A的抗體或蛋白質(zhì)）的制劑和微球制劑。有用的抗VEGF抗體包括但不 限于雷珠單抗(LUCENTIS?)和貝伐單抗(AVASTIN?)。有用的抗VEGF蛋白質(zhì)包括阿 柏西普（AfIiberc巧t)(Eylea膨H也稱為VEGF捕獲劑）、VEGF結(jié)合DARPin和VEGF結(jié)合 抗巧素。VEGF捕獲劑GtegeneronPharmaceuticals,化￥Yor