一種含蘆薈的植物組合物提取方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及中藥制劑技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種含蘆薈的植物組合物提取方法及應(yīng) 用。
【背景技術(shù)】
[0002] 含蘆薈的植物組合物由蘆薈100份，牛耳巖白菜40份、毛葉輪環(huán)藤50份、蘆子蘭 40份作為原料藥制成，目前的提取方法是加水煎煮二次，每次2-3小時(shí)，合并煎液，濾過，濃 縮成稠膏，制粒，干燥，壓制成1000片，包糖衣，即得。
[0003] 現(xiàn)有技術(shù)中，尚未有含蘆薈的植物組合物在提取制備方面采用微波技術(shù)的報(bào)道， 而采用水煎煮的方法，工藝粗糙、落后，雜質(zhì)多，導(dǎo)致患者用量過大，不方便服用，嚴(yán)重影響 了本品在臨床上應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 發(fā)明目的：為了解決上述問題，本發(fā)明的目的在于提供一種含蘆薈的植物組合物 提取方法。
[0005] 本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種含蘆薈的植物組合物在制備抑制大鼠垂體瘤 GH3細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。
[0006] 技術(shù)方案：本發(fā)明的目的是通過如下的方案實(shí)現(xiàn)的：
[0007] -種含蘆薈的植物組合物提取方法，植物組合物由蘆薈100份，牛耳巖白菜40份、 毛葉輪環(huán)藤50份、蘆子蘭40份作為原料藥制成，制備方法由下列步驟組成：取上述原料藥， 粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取 2次，每次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5 倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成片劑、膠 囊或顆粒劑。
[0008] 上述一種含蘆薈的植物組合物提取方法，制備方法中微波萃取功率為500W，每次 萃取6分鐘。
[0009] -種含蘆薈的植物組合物在制備抑制大鼠垂體瘤GH3細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用，含 蘆薈的植物組合物由蘆薈100份，牛耳巖白菜40份、毛葉輪環(huán)藤50份、蘆子蘭40份作為原 料藥制成，制備方法由下列步驟組成：取上述原料藥，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波 萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8分鐘，合并萃取液，濃 縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇， 濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成片劑、膠囊或顆粒劑。
[0010] 上述一種含蘆薈的植物組合物在制備抑制大鼠垂體瘤GH3細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng) 用，制備方法中所述微波萃取功率為500W，每次萃取6分鐘。
[0011] 現(xiàn)有技術(shù)中，含蘆薈的植物組合物每片0. 4g，每次4片，一日3次，采用本發(fā)明制備 成的含蘆薈的植物組合物每片〇. 4g，但含有的藥材量是原來的2倍，因此每次僅需2片，一 日服用3次，在具有更多活性成分的條件下大大減少了服用量。
【具體實(shí)施方式】
[0012] 以下通過實(shí)施例形式，對本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說明，但不應(yīng)將此 理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例，凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均 屬于本發(fā)明的范圍。
[0013] 實(shí)施例1
[0014] 取蘆薈100份，牛耳巖白菜40份、毛葉輪環(huán)藤50份、蘆子蘭40份，粉碎，加入2L 的70 %乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8 分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗 脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成片劑，每片〇. 4g。
[0015] 實(shí)施例2
[0016] 取蘆薈100份，牛耳巖白菜40份、毛葉輪環(huán)藤50份、蘆子蘭40份，粉碎，加入2L 的70 %乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8 分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗 脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成膠囊。
[0017] 實(shí)施例3
[0018] 取蘆薈100份，牛耳巖白菜40份、毛葉輪環(huán)藤50份、蘆子蘭40份，粉碎，加入2L 的70 %乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8 分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗 脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成顆粒劑。
[0019]青蛇藤為蘿蘑科杜柳屬植物美葉杜柳PeriplocaCalophylla(Wight)Falc.，以莖 入藥，祛風(fēng)散寒，活血散寒。用于風(fēng)濕麻木，腰痛，跌打損傷，月經(jīng)不調(diào)。
[0020] 刺齒貫眾是鱗毛蕨科貫眾屬植物，拉丁名：Cyrtomiumcaryotideum(Wall.ex Hook,etGrev.)Presl，清熱解毒，活血散瘀，利水。用于瘰疬，疔毒ffJ腫，感冒，崩漏，跌打損 傷，水腫。本發(fā)明以全草入藥。
[0021] 金絲草，拉丁文名Pogonatherumcrinitum(Thunb.)Kunth?金絲草屬，禾本科，單 子葉植物綱，被子植物門。生長在生于河邊、墻隙、山坡和潮濕田圩。：清熱，解暑，利尿。用 于感冒高熱，中暑，尿路感染，腎炎水腫，黃疸型肝炎，糖尿病，小兒久熱不退。
[0022] 實(shí)施例4 :含蘆薈的植物組合物抑制大鼠垂體瘤GH3細(xì)胞增殖的實(shí)驗(yàn)研究資料1 實(shí)驗(yàn)材料
[0023] I. 1實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞株
[0024] 大鼠垂體瘤GH3細(xì)胞，南京醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞庫，DMEM+10%FBS 常規(guī)培養(yǎng)。
[0025] 1. 2實(shí)驗(yàn)藥物
[0026] 研究藥物：本發(fā)明含蘆薈的植物組合物：按實(shí)施例1方法制備。
[0027] 藥液儲液：稱取IOOmg含蘆薈的植物組合物，溶于5ml無水乙醇中，0. 2ym濾器過 濾，500yIdoff管分裝，-20°C存儲，同時(shí)0. 2ym濾器過濾無水乙醇以備對照組之用。
[0028]1. 3實(shí)驗(yàn)試劑
[0029] DMEM(GIBC0 公司Cat.No. 12100-061Lot.No. 758137);胎牛血清（浙江天 杭生物科技有限公司Lot.No. 100419) ;NaHC03 (上海久億化學(xué)試劑有限公司Cat. No.11810-033Lot.No. 1088387)Jrypsin(AMRESC0 公司批號：2010/04) ;EDTA(AMRESC0 公司批號：2009/10)!PenicillinGSodiumSalt(AMRESC0公司批號：2010242); Str印tomycinSulfate(AMRESC0公司批號：2010382);無水乙醇（南京化學(xué)試劑有限公司 批號：080310182) ;MTT(Biosharp批號：0793);PBS(實(shí)驗(yàn)室自配）；
[0030] L 4實(shí)驗(yàn)器材
[0031] 萊卡倒置顯微鏡（德國Leica型號：DMlL);可見-紫外光微孔板檢測儀（美國MD 公司型號：SPECTRA MAX 190) ;C02培養(yǎng)箱（FORMA型號：3111);超凈臺（蘇凈集團(tuán)安泰公 司制造型號：SW-CJ-ZFD);純水儀（美國Spring公司型號：S/N 020579);精密移液器（法 國吉爾森公司型號：P2);電子天平（德國賽多利斯有限公司型號：BT323S);全自動(dòng)高壓滅 菌鍋（日本SANYO公司型號：MLS-3020);臺式電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海精密實(shí)驗(yàn)設(shè)備公司型 號：DHG9123A);冰箱（西門子公司型號：KG18V21TI);液氮罐（CBS型號：2001);低速離心 機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠型號：KA-1000) ;0? 2ym濾器（MILLIP0RE型號：SLGP033RB) ;10cm 培養(yǎng)皿（NEST公司）、96孔培養(yǎng)板（NEST公司）；細(xì)胞計(jì)數(shù)板；離心管、移液管、Tips若干。
[0032] 2實(shí)驗(yàn)方法
[0033] 1)大鼠垂體瘤GH3細(xì)胞用DMEM+10% FBS于37°C、5% C02進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)（10cm培 養(yǎng)皿），當(dāng)細(xì)胞生長至對數(shù)期時(shí)，收集細(xì)胞，棄去培養(yǎng)液，PBS輕洗3遍，加入3ml 0. 25 %胰 蛋白酶-0. 04% EDTA，37°C消化2min后，向其中加入5ml完全培養(yǎng)基中和反應(yīng)，吹打細(xì)胞后 將其轉(zhuǎn)入離心管中，1000 rpm離心5min，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度3 X IO4個(gè)/ml。
[0034]2)將細(xì)胞種入96孔培養(yǎng)板中，每孔加入細(xì)胞懸液180 y 1，培養(yǎng)板放入細(xì)胞培養(yǎng)箱 中（37°C，5% C02)常規(guī)培養(yǎng)。
[0035] 3)根據(jù)細(xì)胞生長情況，一般長至50 % -70 %，加入含蘆薈的植物組合物溶液，繼續(xù) 培養(yǎng)24h。
[0036] 4) 24h 后加入 20 y I MTT 溶液（5mg/ml，即 0? 5 % MTT)，繼續(xù)培養(yǎng) 4h。
[0037] 5)4h后扣板法倒去上清，用吸水紙輕輕拍干，每孔加入200 y 1二甲基亞砜，置搖 床上低速振蕩l〇min，使結(jié)晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測儀490nm處測量各孔的吸光值。
[0038] 6)同時(shí)設(shè)置本底（不加細(xì)胞，只加培養(yǎng)液），對照孔（細(xì)胞、相同濃度的藥物溶解 介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜），每組設(shè)定6個(gè)復(fù)孔。
[0039] 7)結(jié)果以藥物對細(xì)胞的抑制率表示：
[0040] 細(xì)胞增值抑制率（％ )=(對照孔OD值-給藥孔OD值）/對照孔OD值X100 %。 實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。
[0041] 3統(tǒng)計(jì)處理
[0042] 采用MicrosoftExcel2003軟件中的相關(guān)分析和Studentt檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)以 meaniS.D.表不。
[0043] 4實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0044] MTT法實(shí)驗(yàn)后統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，與對照組比較，當(dāng)劑量達(dá)到5mg/ml時(shí)，對大鼠垂體瘤 GH3細(xì)胞增殖抑制有差異（P〈0. 05)，劑量在lOmg/ml時(shí)該差異具有顯著性（P〈0. 01)，當(dāng)劑量 達(dá)到15-20mg/ml時(shí)有極顯著性差異（P〈0. 001)。
[0045] 表1含蘆薈的植物組合物對大鼠垂體瘤GH3細(xì)胞增殖抑制影響研究p：土SI))
[0046]
[0047] 注：與對照組比較，*P〈0. 01 ;#P〈0. 001
[0048] 5實(shí)驗(yàn)結(jié)論
[0049] 含蘆薈的植物組合物可以抑制大鼠垂體瘤GH3細(xì)胞增殖，減少大鼠垂體瘤GH3細(xì) 胞的細(xì)胞生長數(shù)目，該作用呈劑量依賴性。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種含蘆薈的植物組合物提取方法，其特征在于植物組合物由蘆薈100份，青蛇 藤50份、刺齒貫眾30份、金絲草40份份作為原料藥制成，制備方法由下列步驟組成：取 上述原料藥，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為 400-600W，萃取2次，每次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50 % 乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔 料制備成片劑、膠囊或顆粒劑。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種含蘆薈的植物組合物提取方法，其特征在于制備方法中微 波萃取功率為500W，每次萃取6分鐘。3. -種含蘆薈的植物組合物在抑制大鼠垂體瘤GH3細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用，其特征在 于含蘆薈的植物組合物由蘆薈100份，青蛇藤50份、刺齒貫眾30份、金絲草40份作為原料 藥制成，制備方法由下列步驟組成：取上述原料藥，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃 取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮， 加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃 縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成片劑、膠囊或顆粒劑。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述一種含蘆薈的植物組合物在抑制大鼠垂體瘤GH3細(xì)胞增殖藥物 中的應(yīng)用，其特征在于制備方法中所述微波萃取功率為500W，每次萃取6分鐘。
【專利摘要】本發(fā)明提供一種含蘆薈的植物組合物提取方法，由蘆薈100份，牛耳巖白菜40份、毛葉輪環(huán)藤50份、蘆子蘭40份作為原料藥制成，采用微波提取方法制備而成，使得含量有很大提高，用量減少，本發(fā)明還提供了含蘆薈的植物組合物在制備抑制大鼠垂體瘤GH3細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。
【IPC分類】A61K36/896, A61P35/00, A61K36/899, A61K36/886
【公開號】CN105079569
【申請?zhí)枴緾N201510595729
【發(fā)明人】趙明亮
【申請人】南京正亮醫(yī)藥科技有限公司
【公開日】2015年11月25日
【申請日】2015年9月17日