Egr-1基因在制備抗膀胱癌藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】：
[0001] 本發(fā)明涉及EGR-I基因的新用途，具體是EGR-I基因在制備抗癌藥物特別是抗膀 胱癌藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】：
[0002] EGR-1，是早期應(yīng)答基因中的一員，別名有 zif268, NGFI-A，Krox24 和 TIS8tl-Sl， 為鋅指結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)錄因子，對(duì)細(xì)胞的早期生長起到調(diào)節(jié)作用。該基因定位于染色體5q23_31 上，mRNA全長3300bp，編碼533個(gè)氨基酸，分子量約為59000Da。EGR-I在誘導(dǎo)分化、促進(jìn)生 長、參與細(xì)胞凋亡等多個(gè)方面發(fā)揮生物學(xué)功能。EGR-I受多種因素如激素、細(xì)胞因子、生長 因子的刺激而通過蛋白激酶途徑（如raS-Raf-MEK-ERK/JNK/p38-轉(zhuǎn)錄因子）而活化，其活 化后在不同細(xì)胞中能引起不同的基因表達(dá)調(diào)控模式。在癌癥相關(guān)方面，EGR-I在包括乳腺 癌、肺癌、淋巴瘤、白血病等腫瘤細(xì)胞中常呈現(xiàn)低表達(dá)。其高表達(dá)可能促進(jìn)細(xì)胞凋亡，抑制腫 瘤細(xì)胞生長。EGR-I基因在前列腺癌、Wilms腫瘤和淋巴腫瘤高表達(dá)而促進(jìn)癌癥的發(fā)生和發(fā) 展，在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤和星狀細(xì)胞瘤中參與細(xì)胞轉(zhuǎn)移。但該基因在膀胱癌細(xì)胞中的功能還未 見報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】
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[0003] 本發(fā)明的目的在于提供EGR-I基因的一種新用途。
[0004] 本發(fā)明提供EGR-I基因在制備抗癌藥物中的應(yīng)用，特別是EGR-I基因在制備抗膀 胱癌藥物中的應(yīng)用。所述的EGR-I基因，其核苷酸序列為SEQ ID NO :1。
[0005] 本發(fā)明通過構(gòu)建EGR-I基因的超表達(dá)載體，轉(zhuǎn)染膀胱癌細(xì)胞，結(jié)果表明：轉(zhuǎn)染后的 膀胱癌細(xì)胞中EGR-I基因的mRNA水平均顯著上調(diào)，腫瘤細(xì)胞出現(xiàn)變圓，貼壁性變差，細(xì)胞活 性顯著降低，最終出現(xiàn)死亡。
[0006] 本發(fā)明篩選得到一個(gè)高效抑制膀胱癌細(xì)胞的基因，為新藥靶的發(fā)現(xiàn)及腫瘤藥物設(shè) 計(jì)提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。
【附圖說明】：
[0007] 圖I :EGR-1超表達(dá)后mRNA水平表達(dá)：qPCR結(jié)果（pcDNA3. 1為空載體； pcDNA3. 1-EGR-1為帶有EGRl基因的超表達(dá)載體
[0008] 圖2 :超表達(dá)EGR-I后腫瘤細(xì)胞形態(tài)變化：A重組質(zhì)粒pcDNA3. 1-EGR-1轉(zhuǎn)染到T24 細(xì)胞24h后細(xì)胞形態(tài)；B重組質(zhì)粒pcDNA3. 1-EGR-1轉(zhuǎn)染到T24細(xì)胞48h后細(xì)胞形態(tài)
[0009] 圖3 :EGR-1超表達(dá)后細(xì)胞活性檢測(cè)
【具體實(shí)施方式】：
[0010] 實(shí)施例1 :EGR-1基因抑制膀胱癌T24細(xì)胞
[0011] 一、重組表達(dá)載體的構(gòu)建
[0012] I、PCR產(chǎn)物的制備
[0013] 以T24細(xì)胞RNA反轉(zhuǎn)錄的cDNA為模板，基于EGR-I基因的全長cDNA序列（Gene ID: 1958)設(shè)計(jì)用帶有酶切位點(diǎn)的表達(dá)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增。反應(yīng)條件為：94°C預(yù)變性3min，94°〇變性3〇8,60°0退火4〇8,72°0延伸31^11，共35個(gè)循環(huán)，72°0保溫1〇1^11，引物序列見表 1。PCR產(chǎn)物回收過程嚴(yán)格按照OMEGA公司的Gel Extraction Kit的說明書進(jìn)行。
[0014] 表 1EGR-1PCR 引物
[0015]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. EGR-I基因在制備抗癌藥物中的應(yīng)用；所述的EGR-I基因，其核苷酸序列為SEQ ID NO :1〇 2. EGR-I基因在制備抗膀胱癌藥物中的應(yīng)用；所述的EGR-I基因，其核苷酸序列為SEQ ID NO :1〇
【專利摘要】本發(fā)明提供EGR-1基因在制備抗癌藥物中的應(yīng)用，特別是EGR-1基因在制備抗膀胱癌藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明通過構(gòu)建EGR-1基因的超表達(dá)載體，轉(zhuǎn)染腫瘤細(xì)胞，結(jié)果表明：轉(zhuǎn)染后的腫瘤細(xì)胞中EGR-1基因的mRNA顯著上調(diào)，腫瘤細(xì)胞出現(xiàn)變圓，貼壁性變差，細(xì)胞活性下降66.2％，最終出現(xiàn)死亡。本發(fā)明篩選得到一個(gè)高效抑制腫瘤細(xì)胞的基因，為新藥靶的發(fā)現(xiàn)及腫瘤藥物設(shè)計(jì)提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。
【IPC分類】A61K48-00, A61P35-00
【公開號(hào)】CN104857529
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510259508
【發(fā)明人】張建珍, 任璐, 張婷婷, 馬恩波, 鄭耀武, 任連生
【申請(qǐng)人】山西大學(xué)
【公開日】2015年8月26日
【申請(qǐng)日】2015年5月20日