齊墩果酸在制備治療肥胖癥藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，具體地說，是涉及一種齊墩果酸在制備治療肥胖癥藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]最新研宄將膽汁酸信號分子作為治療代謝紊亂的新靶標(biāo)加以強(qiáng)調(diào)，包括肥胖與2型糖尿病的治療?，F(xiàn)已確定兩種主要的膽汁酸信號調(diào)節(jié)分子:FXR與GPBAR-1/TGR5。FXR是轉(zhuǎn)錄因子，能直接調(diào)節(jié)基因表達(dá)。相反，TGR5為膽汁酸膜受體，能啟動下游信號通路從而間接影響基因表達(dá)。TGR5在不同組織中表達(dá)廣泛而又不盡相同。疏水性膽汁酸，如LCA和DCA，是TGR5強(qiáng)效內(nèi)源性激動劑。從功能上講，TGR5能夠調(diào)節(jié)膽汁酸代謝、糖代謝、褐色脂肪組織能量代謝及炎癥。近來，TGR5在調(diào)節(jié)肥胖及糖尿病中的作用備受關(guān)注，但機(jī)制尚不清楚。
[0003]肥胖及其合并癥一一糖尿病，因缺乏有效治療而達(dá)到驚人的流行程度，尋找新的醫(yī)學(xué)治療措施迫在眉睫。近來，miRNAs作為人類疾病潛在的治療新靶標(biāo)得到了大量的關(guān)注，包括治療肥胖與糖尿病。其中，miR-26a在眾多生物效應(yīng)中發(fā)揮多種功能，包括調(diào)節(jié)代謝。最近，我們發(fā)現(xiàn)miR-26a能夠阻止肥胖誘導(dǎo)的胰島素抵抗及肝臟過多合成脂質(zhì)，表明miR_26a可作為提高胰島素敏感性及抑制脂質(zhì)、糖合成的潛在新靶標(biāo)。然而，miR-26a表達(dá)的調(diào)節(jié)仍不清楚，發(fā)展增加miR-26a表達(dá)的技術(shù)仍有挑戰(zhàn)。而齊墩果酸(OA)是從橄欖葉中提取的三萜類化合物，其是否能在體外激活TGR5，從而控制小鼠體重及降低高血糖，是本發(fā)明下述研宄的目的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供齊墩果酸在制備治療肥胖癥藥物中的應(yīng)用。
[0005]本發(fā)明所述的齊墩果酸(OA)是從橄欖葉中提取的三萜類化合物，能在體外激活TGR5，從而控制小鼠體重及降低高血糖，能在制備治療肥胖癥藥物中的應(yīng)用。
[0006]本發(fā)明的特點和優(yōu)點為:GPBAR1/TGR5是膽汁酸膜G蛋白偶聯(lián)受體。TGR5因能夠調(diào)節(jié)膽汁酸穩(wěn)態(tài)及能量代謝為大家所知。最新研宄特別強(qiáng)調(diào)了 TGR5在減肥及調(diào)節(jié)糖代謝中的作用，但是，這兩種作用機(jī)制尚不明了。這里我們將探討天然化合物齊墩果酸(OA)治療肥胖及降低血糖過程中TGR5的必要性。通過對比齊墩果酸(OA)治療后野生型小鼠與TGR5+小鼠肝臟miRNAs譜的表達(dá)，我們認(rèn)為miR_26a為TGR5激活的新型下游靶基因。膽汁酸喂養(yǎng)小鼠誘導(dǎo)miR-26a的表達(dá)依賴TGR5而非FXR。TGR5的激活能大大增加巨噬細(xì)胞及Kupffer細(xì)胞中miR-26a的表達(dá)。此外，我們認(rèn)為TGR5激活誘導(dǎo)miR_26a的表達(dá)需要通過JNK信號通路。值得注意的是，我們還把TGR5反應(yīng)的DNA元件定位在miR_26a前體的近側(cè)端，此處與宿主基因的轉(zhuǎn)錄無關(guān)。這些結(jié)果將首次闡述TGR5調(diào)節(jié)miR-26a表達(dá)的新機(jī)制，同時將膽汁酸信號調(diào)節(jié)代謝作用與miRNAs調(diào)節(jié)通路聯(lián)系起來。實驗表明:TGR5作為天然化合物齊墩果酸(OA)的主要受體(而非唯一受體)對抗肥胖及降低血糖的作用。I)齊墩果酸(OA)能夠減少野生型小鼠體脂的聚積，但這種作用在TGR5+小鼠身上不能得以體現(xiàn)。這些結(jié)果明確指出TGR5能夠調(diào)節(jié)OA誘導(dǎo)的減肥效應(yīng)。2)齊墩果酸(OA)對TGR5+也有些微功效，這歸因于OA對FXR或其他蛋白質(zhì)有著輕微的激活作用。經(jīng)過OA治療，可顯著提高野生組小鼠、而非TGR5+的糖耐量，表明OA提高糖耐具有TGR5依賴性。
【附圖說明】
[0007]圖1-A為野生型小鼠各組每周體重變化圖，以說明TGR5介導(dǎo)OA對肥胖的抑制效應(yīng)。
[0008]圖1-B為TGR5-/-小鼠各組每周體重變化圖，以說明TGR5介導(dǎo)OA對肥胖的抑制效應(yīng)。
[0009]圖1-C為喂養(yǎng)第16周時各組平均體重比較圖，與普通飲食組比較，* P < 0.05,,以說明TGR5介導(dǎo)OA對肥胖的抑制效應(yīng)。
[0010]圖2-A為野生型小鼠各組GTT結(jié)果圖，以說明TGR5介導(dǎo)OA提高糖耐受效。
[0011]圖2-B為TGR5-/-小鼠各組GT結(jié)果圖，以說明TGR5介導(dǎo)OA提高糖耐受。
[0012]圖3-A為野生型與TGR5K0小鼠肝臟miR_26a表達(dá)水平圖，以說明TGR5對小鼠肝臟表達(dá)miR-26a的激活效應(yīng)。
[0013]圖3-B為野生型與TGR5K0小鼠肝臟miR-16表達(dá)水平圖，以說明TGR5對小鼠肝臟表達(dá)miR-26a的激活效應(yīng)。
[0014]圖3-C為野生型小鼠各組肝臟表達(dá)miR_26a相對水平圖，以說明TGR5對小鼠肝臟表達(dá)miR-26a的激活效應(yīng)。
[0015]圖3-D為野生型與TGR5-/-小鼠肝臟表達(dá)miR_26a相對水圖，以說明TGR5對小鼠肝臟表達(dá)miR-26a的激活效應(yīng)。
[0016]圖4-A為Kupffer細(xì)胞中4種miRNA表達(dá)的倍數(shù)變化圖，與CON組比較，* P < 0.05，以說明TGR5激活對巨噬細(xì)胞表達(dá)miR-26a的誘導(dǎo)效應(yīng)。
[0017]圖4-B為1uMOA作用于骨髓巨噬細(xì)胞后miR-26表達(dá)結(jié)果圖；與CON組比較，* P
<0.05，以說明TGR5激活對巨噬細(xì)胞表達(dá)miR-26a的誘導(dǎo)效應(yīng)。
[0018]圖4-C為不同劑量OA作用于RAW264.7細(xì)胞后miR_26a表達(dá)結(jié)果圖，與DMSO組比較，* P < 0.05，以說明TGR5激活對巨噬細(xì)胞表達(dá)miR-26a的誘導(dǎo)效應(yīng)。
[0019]圖4-D為OA作用不同時間RAW264.7細(xì)胞miR_26a表達(dá)結(jié)果圖，以說明TGR5激活對巨噬細(xì)胞表達(dá)miR-26a的誘導(dǎo)效應(yīng)。
[0020]圖5-A為OA作用不同時間及是否加H89對RAW264.7表達(dá)miR_26a的影響圖，以說明JNK信號通路參與TGR5介導(dǎo)的miR-26a表達(dá)誘導(dǎo)效應(yīng)。
[0021]圖5-B為RAW264.7細(xì)胞中不同抑制劑對OA誘導(dǎo)miR_26a表達(dá)的影響圖；與BMS、PD組比較，* P < 0.05，以說明JNK信號通路參與TGR5介導(dǎo)的miR_26a表達(dá)誘導(dǎo)效應(yīng)。
[0022]圖5-C為Kupffer細(xì)胞中不同抑制劑對OA誘導(dǎo)miR_26a表達(dá)的影響圖；與BMS、PD組比較，* P < 0.05，以說明JNK信號通路參與TGR5介導(dǎo)的miR_26a表達(dá)誘導(dǎo)效應(yīng)。
[0023]圖5-D為骨髓巨噬細(xì)胞中不同抑制劑對OA誘導(dǎo)miR_26a表達(dá)的影響圖，與DMS0、對照組比較，* P < 0.05，以說明JNK信號通路參與TGR5介導(dǎo)的miR_26a表達(dá)誘導(dǎo)效應(yīng)。
[0024]圖5-E為Kupffer細(xì)胞中JNK對OA誘導(dǎo)miR_26a表達(dá)的影響圖，與JNK-/-比較，*P < 0.05，以說明JNK信號通路參與TGR5介導(dǎo)的miR_26a表達(dá)誘導(dǎo)效應(yīng)。
[0025]圖6-A為RAW 264.7細(xì)胞中OA作用不同時間對前體miR_26a表達(dá)的影響圖，以說明OA反應(yīng)元件位于miR-26a啟動子近側(cè)端。
[0026]圖6-B為RAW 264.7細(xì)胞中OA作用對宿主基因miR_26a表達(dá)的影響圖，以說明OA反應(yīng)元件位于miR-26a啟動子近側(cè)端。
[0027]圖6-C為miR-26a不同調(diào)控區(qū)域PGL-3熒光素酶載體轉(zhuǎn)染OA作用后，RAW264.7細(xì)胞中相對熒光素酶活性的鑒定圖，以說明OA反應(yīng)元件位于miR-26a啟動子近側(cè)端。
[0028]圖6-D為以PGL3熒光素酶為載體克隆miR-26a_2上游調(diào)控區(qū)圖，以說明OA反應(yīng)元件位于miR-26a啟動子近側(cè)端。
[0029]圖6-E為不同載體轉(zhuǎn)染OA作用后RAW264.7細(xì)胞中相對熒光素酶活性的鑒定圖，以說明OA反應(yīng)元件位于miR-26a啟動子近側(cè)端。
【具體實施方式】
[0030]本發(fā)明將討論TGR5作為天然化合物OA的主要受體(而非唯一受體)對抗肥胖及降低血糖的作用。TGR5可通過JNK依賴信號通路增加巨噬細(xì)胞中m