基于施用小rna片段的治療性治療的制作方法
【專利說明】基于施用小RNA片段的治療性治療
[0001] 本申請(qǐng)是申請(qǐng)日為2007年10月26日的中國(guó)專利申請(qǐng)200780039754. 6的分案申 請(qǐng)。 發(fā)明領(lǐng)域
[0002] 本發(fā)明通常涉及預(yù)防或改善血小板減少癥的治療性治療。更具體地，本發(fā)明提供 預(yù)防或改善由抗癌藥引發(fā)的骨髓抑制且特別是血小板減少癥的改良化療方案。本發(fā)明還提 供用于與免疫病癥相關(guān)的血小板減少癥的治療性治療，所述血小板減少癥稱為免疫性血小 板減少性紫癜。更特別地，本發(fā)明提供的治療性治療包括施用小RNA片段。
[0003] 發(fā)明背景
[0004] 化療是用于大部分癌癥的主要治療。盡管腫瘤學(xué)家已經(jīng)利用多種藥物組合和利用 具有減少的副作用的更新藥物改善了治療標(biāo)準(zhǔn)，但是仍然存在這樣的事實(shí)，即，化療通常與 最不舒適的和最壞破壞性的并發(fā)癥相關(guān)。在對(duì)治療存在耐受性的晚期癌癥、轉(zhuǎn)移、或腫瘤的 情形中，可以以特別侵入性形式使用化療，其通常導(dǎo)致骨髓抑制、降低的免疫性、低血小板 計(jì)數(shù)和因此發(fā)生的患者的死亡。許多輔助支持白血細(xì)胞計(jì)數(shù)的藥劑已經(jīng)與這些治療聯(lián)合使 用，但是這些藥劑不是總是有效的，并且在任何事件中，它們不刺激血小板的產(chǎn)生。由化療 引起的血小板水平的嚴(yán)重下降，即稱為血小板減少癥的病癥，通常是患者死亡的主要因素， 因?yàn)樗麄兊难翰辉倌軌蛴行У啬Y(jié)，所述患者易受不可控的內(nèi)出血以及外出血的影響。
[0005] 由化療引發(fā)的血小板減少癥也是目標(biāo)是縮小患者的腫瘤并且減緩癌癥進(jìn)展的臨 床腫瘤學(xué)家的主要障礙。因?yàn)榛颊叩难“逵?jì)數(shù)如此關(guān)鍵，所以在化療治療的整個(gè)過程中 仔細(xì)監(jiān)測(cè)這一數(shù)字，并且當(dāng)所述數(shù)目下降至低于安全閾值時(shí)，減少劑量，或者暫停治療，直 到血小板計(jì)數(shù)有機(jī)會(huì)回升。在已經(jīng)經(jīng)歷了前幾輪化療且其骨髓已經(jīng)受到永久損傷的患者 中，血小板計(jì)數(shù)的恢復(fù)可能需要相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間，并且可能完全不會(huì)發(fā)生。結(jié)果，目前，由抗癌 藥引發(fā)的血小板喪失是化療中的限速步驟。當(dāng)達(dá)到血小板減少癥（3級(jí)，10, 000-50, 000個(gè) 血小板/毫升血液；4級(jí)，< 10, 000個(gè)血小板/毫升血液）時(shí)，致死性出血的危險(xiǎn)是急性的， 并且許多癌癥患者已經(jīng)死于不可控的出血。另外，對(duì)于4級(jí)血小板減少癥患者，治療必須減 少或暫停，直到血小板水平升高至高于閾值。
[0006] 通常以持續(xù)數(shù)周的多個(gè)周期周期性給與化療。周期之間的間隔使得大部分處于治 療開始時(shí)的患者能夠在他們進(jìn)行下一個(gè)化療周期之前----通常以數(shù)天的形式----更新他 們的血小板群。隨著治療進(jìn)展，在化療之后的血小板數(shù)目的減少（最低點(diǎn)）變得更加嚴(yán)重， 并且更新的過程需要更長(zhǎng)時(shí)間。典型地，患者恢復(fù)安全的血小板計(jì)數(shù)的能力逐漸減小，如在 圖1中所示。通常是血小板計(jì)數(shù)的減少和/或隨后的增殖延誤或失敗迫使腫瘤學(xué)家暫停治 療。這是血小板減少癥成為癌癥化療中的速度限制的時(shí)刻，并且是這種病癥為何突然停止 治療的最主要的原因，這意味著縮小或破壞患者的腫瘤的目標(biāo)沒有實(shí)現(xiàn)。
[0007] 這種基本的問題在化療的所有階段過程中都存在。癌癥治療可能需要多個(gè)化療周 期，并且許多腫瘤學(xué)家認(rèn)為血小板減少癥在早期治療階段以及后期階段具有重要的影響。 在早期階段，腫瘤學(xué)家通常選擇在患者中引發(fā)最佳響應(yīng)的藥物的最佳混合。當(dāng)治療由于血 小板減少癥而暫停時(shí)，這種使治療與個(gè)體癌癥相匹配從而獲得最佳治療效果的重要階段被 中斷。僅當(dāng)治療應(yīng)該是最佳的，并且癌癥可以促進(jìn)可能的轉(zhuǎn)移并且變得更難以受到進(jìn)一步 治療的控制時(shí)，腫瘤得到緩解。對(duì)于這些患者的成功治療需要保持血小板計(jì)數(shù)的新方案。
[0008] 如上文所述，在已經(jīng)經(jīng)歷了前幾輪化療的患有晚期階段癌癥的患者中，對(duì)骨髓中 干細(xì)胞的永久損傷危及到白血細(xì)胞且特別是血小板的再增加。這些患者的成功治療需要保 護(hù)骨髓干細(xì)胞并甚至在骨髓損傷的情形中能夠刺激血小板產(chǎn)生的新方案。本發(fā)明提供實(shí)現(xiàn) 這些重要的需要且因此具有改革癌癥化療潛力的化療方案。
[0009] 血小板減少癥也是患有與稱為免疫性血小板減少性紫癜（ITP)的疾病相關(guān)的血 小板產(chǎn)生和處理缺陷的個(gè)體的重要問題?；加羞@種疾病的個(gè)體兒童和成人都可能患 病一一由于血小板的加速破壞和不足的血小板產(chǎn)生而不能維持正常的血小板計(jì)數(shù)。在ITP 中，產(chǎn)生抗血小板抗體，其作為可能受遺傳因素影響的自體免疫響應(yīng)的一部分。盡管ITP的 詳細(xì)病因?qū)W仍是未知的，但是正是這些抗體的存在引起血小板的嚴(yán)重?fù)p失，并且還似乎是 減少骨髓中的血小板生產(chǎn)的因素。結(jié)果，這些個(gè)體面臨與患有由化療引發(fā)的骨髓抑制的患 者相同的臨床癥狀，包括增加的內(nèi)出血和外出血的危險(xiǎn)，并且在極端情形中，包括威脅生命 的出血。據(jù)估計(jì)，在美國(guó)每年有大約200, 000個(gè)體被診斷患有這種病癥。與在經(jīng)歷骨髓抑 制治療的患者中發(fā)現(xiàn)的血小板減少癥的發(fā)生頻率相比，ITP相對(duì)罕見，并且歸類為罕見疾病 (orphan disease)。但是盡管原因不同，ITP的基礎(chǔ)病理學(xué)和臨床癥狀和藥物-引發(fā)的血 小板減少癥是一致的，并且本發(fā)明描述有效刺激血小板產(chǎn)生并且因此在兩種患者群體中成 功治療血小板減少癥的藥劑。
[0010] 發(fā)明概述
[0011] 本發(fā)明提供基于施用小RNA片段來(lái)預(yù)防或改善血小板減少癥的治療性治療。適用 于按照本發(fā)明的治療的血小板減少癥包括由化療方案中的抗癌藥引發(fā)的血小板減少癥和 先天性免疫性血小板減少性紫癜（ITP)。
[0012] 在一個(gè)實(shí)施方案中，對(duì)正在經(jīng)歷化療方案的癌癥患者應(yīng)用本發(fā)明的治療性治療， 以預(yù)防或改善骨髓抑制，和特別地，由抗癌藥引發(fā)的血小板減少癥。
[0013] 本發(fā)明提供由同步化抗癌藥的施用和小RNA片段制劑的施用限定的化療方案。據(jù) 信小RNA片段制劑通過刺激白血細(xì)胞和血小板的增殖而對(duì)骨髓具有保護(hù)作用。對(duì)骨髓的這 種保護(hù)作用能夠使患者維持他們的白血細(xì)胞計(jì)數(shù)和他們的血小板計(jì)數(shù)，因此防止感染和出 血?，F(xiàn)在，開出本發(fā)明所述方案的處方的腫瘤學(xué)家可以最優(yōu)化化療，所述化療在不中斷的條 件下完成，以獲得化療的全部益處。采用這種方案的患者免受骨髓抑制的影響，并且可以完 成治療且活得更久。
[0014] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供通過施用小RNA片段制劑用于患有ITP的患者 的治療。所述小RNA片段制劑刺激血小板產(chǎn)生，由此改善與該病相關(guān)的癥狀。施用RNA片 段的患有ITP的個(gè)體在他們的血小板計(jì)數(shù)中表現(xiàn)出顯著提高，不再處于流血的危險(xiǎn)中，并 且經(jīng)歷更好的生活質(zhì)量。
[0015] 附圖簡(jiǎn)述
[0016] 圖1舉例說明在不接受ReaLBuild?產(chǎn)品作為他們的治療成分的典型患者中血 小板恢復(fù)的發(fā)展性失敗。
[0017] 圖2顯示關(guān)于血小板受到施用ReaLBuild?產(chǎn)品保護(hù)的患者的結(jié)果。
[0018] 圖3顯示在已經(jīng)經(jīng)歷了 6次在先化療的患者中ReaLBuild?產(chǎn)品對(duì)血小板的保 護(hù)作用。
[0019] 圖4顯示關(guān)于經(jīng)歷包括施用ReaLBuild?產(chǎn)品的化療方案的患者的結(jié)果。
[0020] 圖5顯示關(guān)于經(jīng)歷包括施用ReaLBuild?產(chǎn)品的化療方案的患者的結(jié)果。
[0021] 圖6顯示關(guān)于經(jīng)歷包括施用ReaLBuild?產(chǎn)品的化療方案的患者的結(jié)果。
[0022] 圖7顯示關(guān)于使ReaLBuild?產(chǎn)品劑量與對(duì)血小板最低點(diǎn)和恢復(fù)水平的作用相 關(guān)聯(lián)的臨床試驗(yàn)（實(shí)施例1所述）中的所有患者的結(jié)果總結(jié)。
[0023] 圖8顯示關(guān)于3名患有ITP的患者在施用ReaLBuild?產(chǎn)品之前和之后的結(jié)果。 [0024] 發(fā)明詳述
[0025] 本發(fā)明提供基于施用小RNA片段的治療性治療，其預(yù)防或改善血小板減少癥。
[0026] "血小板減少癥"意指以血小板產(chǎn)生和處理缺陷為特征的病癥，并且包括由抗癌藥 引發(fā)的血小板減少癥和先天性血小板減少癥如ITP。
[0027] "治療（treating) "或"治療（treatment) "意指預(yù)防或減少疾病或病癥發(fā)生的危 險(xiǎn)，或抑制或改善疾病或病癥的癥狀，或加速疾病或病癥的恢復(fù)。
[0028] 已知化學(xué)治療通常引起大量的骨髓抑制和血小板減少癥。本發(fā)明提供一種新的化 療方案，其在施用抗癌藥之前、之中和/或之后引入小RNA片段的施用，其具有控制骨髓抑 制的結(jié)果，可以全效完成所述治療，并且延長(zhǎng)患者的生命。在關(guān)于正在經(jīng)歷通常引起大量骨 髓抑制和血小板減少癥的化療的癌癥患者的人類臨床試驗(yàn)中證實(shí)了該方案的成功。所有患 者在沒有藥物的任何劑量減少的條件下完成了治療的全過程。發(fā)現(xiàn)該方案甚至在已經(jīng)經(jīng)歷 了多次先前化療治療并經(jīng)受骨髓損傷的患者中有效預(yù)防血小板減少癥。本發(fā)明人首次證明 了施用小RNA片段在化療中具有廣泛的應(yīng)用，并且可以在患有一定范圍的癌癥和經(jīng)歷多種 抗癌藥或藥物組合治療的患者中有效控制和/或預(yù)防骨髓抑制和血小板減少癥。
[0029] 另外，本發(fā)明人已經(jīng)證明施用小RNA片段成功地增加了患有ITP的患者中的血小 板計(jì)數(shù)。
[0030] 不希望受到任何具體的理論的束縛，據(jù)信所述小RNA片段起到骨髓干細(xì)胞中DNA 合成引物的作用。通過這種作用，所述小RNA片段刺激多種白血細(xì)胞譜系的增殖，由此維持 和/或恢復(fù)淋巴細(xì)胞和血小板（凝血細(xì)胞）的正常水平。備選地或另外地，干細(xì)胞吸收的 RNAs可能被RNA酶降解，并且所得到的核糖核苷通過核糖核苷酸還原酶轉(zhuǎn)化為脫氧核糖核 苷，由此富集修復(fù)被抗癌藥損傷的基因組DNA的細(xì)胞資源。在對(duì)動(dòng)物施用后關(guān)于RNA片段 的定位（localization)分析揭示所述片段在骨髓以及在肝臟、腎上腺、和其它幾種器官中 迅速濃縮。在骨髓中的定位與所述RNA片段刺激多種白血細(xì)胞譜系的增殖的觀點(diǎn)一致。此 外，所述RNAs在腎上腺中的定位表明所述RNAs保護(hù)和/或刺激這些腺體，其可以導(dǎo)致激素 (例如腎上腺素）釋放，所述激素增加活力并且還可以刺激免疫系統(tǒng)。這樣的刺激將解釋在 臨床試驗(yàn)中許多患者所經(jīng)歷的生命力的增強(qiáng)。
[0031] 基于本發(fā)明的發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明提供基于施用小RNA片段預(yù)防或改善血小板減少癥的 治療性治療。
[0032] 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種化療方案，其包括對(duì)癌癥患者施用小RNA片 段制劑和抗癌藥。
[0033] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供通過對(duì)癌癥患者施用小RNA片段制劑而在經(jīng)歷 使用抗癌藥的化療的癌癥患者中預(yù)防骨髓抑制或血小板減少癥的方法。
[0034] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供用于在經(jīng)歷使用抗癌藥的化療的癌癥患者中加 速血小板再生的方法，其通過向所述癌癥患者施用小RNA片段制劑而進(jìn)行。血小板，還稱為 凝血細(xì)胞，是在血液中循環(huán)并且能夠形成血液凝