專利名稱：11－(3－二甲氨基亞丙基)－6,11－二氫二苯并[b,e]噁庚英－2－乙酸用于制備治療非 ...的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及眼科用藥物制劑。更具體講，本發(fā)明涉及11-(3-二甲氨基亞丙基)-6，11-二氫二苯并[b，e]噁庚英-2-乙酸用于治療和/或預(yù)防人體眼細胞的細胞因子釋放以及形成新血管或非過敏性炎癥疾病的治療和預(yù)防用途。
美國專利US 4,871,865和4,923,892，兩者已轉(zhuǎn)讓給BurroughsWellcome公司(“Burroughs Wellcome專利”)，談到一些多塞平(Doxepin)的羧酸衍生物，包括11-(3-二甲氨基亞丙基)-6，11-二氫二苯并[b，e]噁庚英-2-甲酸和11-(3-二甲氨基亞丙基)-6，11-二氫二苯并[b，e]噁庚英-2-(E)-丙烯酸具有抗組胺和止喘活性。這兩個專利基于抗組胺作用，將多塞平羧酸衍生物分類為肥大細胞穩(wěn)定劑，因為它們能抑制來自肥大細胞的自體有效物質(zhì)(組胺，5-羥色胺等)的釋放，以及直接抑制組胺對靶組織的效應(yīng)。Burroughs Wellcome專利談到了含有多塞平羧酸衍生物的不同藥物制劑。在兩個專利中的實施例8(I)中，透露了一個眼科用的溶液制劑。
轉(zhuǎn)讓給Kyowa Hakko Kogyo有限公司的美國專利US 5,116,863(“Kyowa專利”)談到多塞平的乙酸衍生物，其中包括Z-11-(3-二甲氨基亞丙基)-6，11-二氫二苯并[b，e]噁庚英-2-乙酸，具有抗過敏和抗炎活性?？寡谆钚钥蓺w因于前列腺素生物合成的抑制作用(見欄28，51-57行)。Kyowa專利透露的多塞平衍生物用化合物I代表
其中X表示＝N-，＝CH-或-CH2-的化合物被描述為具有強的抗過敏活性，而X代表＝N-的化合物被描述為具有強的抗炎活性(見欄24，20-57行)。于是，為了抗炎應(yīng)用，Kyowa專利提出了化合物(I)的多塞平衍生物，其X為＝N-。
Kyowa專利顯示出在Wistar雄性大鼠體上的抗過敏和抗炎活性。對于多塞平乙酸衍生物，從Kyowa專利中談到的藥物劑型包括廣泛的藥用載體；可是，僅僅供口服和注射給藥的劑型被敘述到。在過敏性眼疾的治療中，例如過敏性結(jié)膜炎，這樣的給藥方法要求大劑量的藥物。
美國專利US 5,641,805透露了眼科局部用藥制劑，其含有11-(3-二甲氨基亞丙基-6，11-二氫二苯并[b，e]噁庚英-2-乙酸，用來治療過敏性眼疾。
本發(fā)明提供了治療和預(yù)防眼部新血管生成以及非過敏性炎癥疾病，包括細胞因子從人眼細胞中釋放的方法，該方法包括通過給予眼部含治療有效劑量的11-(3-二甲氨基亞丙基)-6，11-二氫二苯并[b，e]噁庚英-2-乙酸(下文中稱作“化合物A”)及其藥用鹽的眼用制劑來抑制人眼細胞中的細胞因子釋放。該制劑可以含有化合物A(Z-11-(3-二甲氨基亞丙基)-6，11-二氫二苯并[b，e]噁庚英-2-乙酸)的順式異構(gòu)體，化合物A(E-11-(3-二甲氨基亞丙基)-6，11-二氫二苯并[b，e]噁庚英-2-乙酸)的反式異構(gòu)體，或化合物A的順式和反式異構(gòu)體兩者的混合物。除非在其它特定情況下，“11-(3-二甲氨基亞丙基)-6，11-二氫二苯并[b，e]噁庚英-2-乙酸”或“化合物A”意謂著順式異構(gòu)體，反式異構(gòu)體或是兩者的混合物?！绊樖疆悩?gòu)體”意謂著實質(zhì)上不含反式異構(gòu)體的順式異構(gòu)體；“反式異構(gòu)體”意謂著實質(zhì)上不含順式異構(gòu)體的反式異構(gòu)體。此處所指的一種異構(gòu)體實質(zhì)上不含有其它異構(gòu)體，假如所存在的不需要的異構(gòu)體量少于大約2％。
化合物A是已知化合物，且化合物A的順式和反式兩者能通過美國專利US 5,116,863披露的方法制得，其整個內(nèi)容在此插入作為參考文獻。
化合物A藥用鹽的實例，包括無機酸鹽，如鹽酸鹽，溴氫酸鹽，硫酸鹽和磷酸鹽；有機酸鹽，如乙酸鹽，馬來酸鹽，富馬酸鹽，酒石酸鹽和檸檬酸鹽；堿金屬鹽，如鈉鹽和鉀鹽；堿土金屬鹽，如鎂鹽和鈣鹽；金屬鹽，如鋁鹽和鋅鹽；以及有機胺加成鹽，如三乙胺加成鹽(已知的氨基丁三醇)，嗎啉加成鹽和哌啶加成鹽。
化合物A可以多種多樣方式給藥于眼部。最可取的方式是采用常規(guī)的眼局部制劑，如溶液，懸浮液或凝膠?；蛘?，化合物A可以經(jīng)過注射或埋入給藥。根據(jù)制劑的類型，常規(guī)的組分將與化合物A結(jié)合起來?；衔顰優(yōu)選的眼局部用制劑是滴眼劑溶液。在眼用制劑中，本發(fā)明化合物A優(yōu)選的形式是順式。本發(fā)明滴眼劑的制備通法，作為非限定的實施例被敘述于后。
化合物A和等滲劑被加到經(jīng)過滅菌的純水中，而且若有需要，防腐劑，緩沖劑，穩(wěn)定劑，粘性賦形劑等被加到溶液中，并溶于其中?；衔顰的濃度為0.0001-5w/v％，優(yōu)選為0.0001-0.001w/v％，最優(yōu)選約為0.0005w/v％，基于滅菌的純水。在溶解后，用pH調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)pH值到適用作眼用藥物的范圍內(nèi)，優(yōu)選pH4.5-8的范圍。
氯化鈉，甘油，甘露糖醇等可被用作為等滲劑；對羥基苯甲酸酯，氯化芐烷銨等作為防腐劑；磷酸氫鈉，磷酸二氫鈉，硼酸等作為緩沖劑；依地酸鈉鹽等作為穩(wěn)定劑；聚乙烯醇，聚乙烯吡咯烷酮(PVP)，聚丙烯酸等作為粘性賦形劑；還有氫氧化鈉，鹽酸等作為pH調(diào)節(jié)劑。
假如有需要，可以加入其它眼科藥物，如腎上腺素，萘甲唑林鹽酸鹽，鹽酸黃連素，奧磺酸鈉，鹽酸溶菌酶，甘草酸鹽等。
通過上述方法生產(chǎn)的滴眼劑，僅僅被典型地應(yīng)用于眼睛。每日幾次，用量為一至數(shù)滴，盡管在更嚴重的情況下，可使用滴劑，每天多次。典型的一滴為30微升。
按照本發(fā)明的方法，含有化合物A的眼科制劑，被用來抑制原炎性的細胞因子從人體眼細胞(例如人體結(jié)膜上皮細胞)分泌出來。這種類型的細胞因子分泌(例如，IL-6和IL-8)能刺激眼部新血管形成(例如，見于Yoshida et al.，IOVS，391097(1998))以及其它非過敏性炎癥的疾病，如干眼，角膜炎，瞼炎，眼色素層炎和與感染有關(guān)的炎癥。
本發(fā)明一些實施方案被敘述于以下實施例中。
實施例1 優(yōu)選的局部眼用的溶液制劑組分 濃度(w/v％)化合物A鹽酸鹽0.111*磷酸氫二鈉(無水)，USP0.5氯化鈉，USP 0.65氯化芐烷銨 0.01氫氧化鈉，NF q.s.pH＝7.0鹽酸，NF q.s.pH＝7.0純水 q.s.100*0.111％化合物A鹽酸鹽相當于0.1％化合物A。
實施例2 眼科局部使用的凝膠制劑組分 濃度(w/v％)化合物A鹽酸鹽0.11*974P0.8EDTA 二鈉 0.01吐溫80 0.05氯化芐烷銨，溶液0.01+5xs氫氧化鈉q.s.pH 7.2鹽酸q.s.pH 7.2
注射用水 q.s.100*0.11％化合物A鹽酸鹽相當于0.1％化合物A。
實施例3細胞因子釋放的抑制作用A.人結(jié)膜上皮細胞(HCE)培養(yǎng)詳述原始上皮細胞培養(yǎng)物的制備方法，以及利用這些細胞作細胞因子釋放的研究已被描述。參見Gamache et al.，“原炎性細胞素通過人結(jié)膜上皮細胞的分泌”O(jiān)cul.Immunol.Inflamm.，5117-128(1997)。簡言之，人結(jié)膜上皮細胞的培養(yǎng)物是通過各種眼庫從在尸體解剖8小時內(nèi)得到的供體組織引入的。該組織經(jīng)酶消化過夜。上皮細胞和緩地從組織表面刮去，解離進入單一的細胞懸浮液中，并在角質(zhì)化細胞生長培養(yǎng)基(Clonetics注冊商標，圣迭戈，加州)中培養(yǎng)。所用細胞只是經(jīng)過通道6。培養(yǎng)維持在預(yù)先的匯合狀態(tài)，以防止分化。細胞經(jīng)過陽性角蛋白染色法被鑒定為上皮細胞。B.細胞因子分析幾種具有組胺H1-拮抗活性的化合物在對組胺刺激的反應(yīng)中，評價其抑制細胞因子(IL-6和IL-8)從培養(yǎng)的人結(jié)膜上皮細胞的分泌的能力。細胞被置于平皿(2×104個細胞/孔)，并在5％CO237℃下培養(yǎng)過夜。次日，將含有被測試化合物的新鮮培養(yǎng)基直接加到孔內(nèi)，并且在用組胺(30μM)24小時刺激之前，將細胞孵育30分鐘。三個單個的培養(yǎng)孔用于每個治療組。在實驗結(jié)束時，收集上清液，在200xg時離心，在-20℃下保存。樣品通過該說明書的酶標記免疫測定法(ELISA，研究和發(fā)展系統(tǒng)，明尼阿波利斯，明尼蘇達州)分析IL-6和IL-8，每個ELISA的靈敏度如下IL-6 0.7pg/ml；IL-8 3.0pg/ml。C.數(shù)據(jù)分析拮抗劑強度(IC50)定義為對激動劑刺激功能性反應(yīng)產(chǎn)生50％抑制時所需的藥物濃度。從細胞得來的數(shù)據(jù)以平均標準誤(SEM)的值作計算，該值代表了經(jīng)過同樣處理的培養(yǎng)孔之間的有變性。藥劑的劑量依賴效應(yīng)和IC50值通過線性回歸測定，數(shù)據(jù)取平均值±SEM，來自3-5個獨立的實驗。D.結(jié)果人結(jié)膜上皮細胞(HCE)暴露于30μM組胺，增加了IL-6和IL-8的分泌，其量分別為1.59±0.19和1.80±0.28倍于基線水平。(細胞因子的基線水平是153±42pg/ml，n＝4(IL-6)；197±48pg/ml，n＝6(IL-8)。
用具有抗組胺活性，并且可用于眼局部給藥(先于組胺暴露)的藥物治療HCE，導致IL-6和IL-8分泌濃度依賴的抑制作用。結(jié)果見如下表1所示。
依美斯汀在完整細胞中的強度，與應(yīng)用組織勻漿在受體結(jié)合分析中所測得的活性是一致的。左卡巴斯汀也能在與H1-受體結(jié)合親和力一致的水平上抑制IL-6和IL-8的分泌。安他心和抗感明(兩個第一代的眼科局部使用的抗組胺化合物)作為IL-6和IL-8分泌的抑制劑，比起所預(yù)測的它們的與組胺H1-受體結(jié)合的親和力來(20-140倍)講，強度大大地減低。然而，奧洛派他定比上預(yù)測的，已被公布的組胺H1-受體結(jié)合親和力(36nM)要強。奧洛派他定、安他心和抗感明顯示出相似的H1-受體結(jié)合親和力(32-39nM)。，到目前為止，奧洛派他定作為細胞因子分泌抑制劑，大體上要比由結(jié)合分析預(yù)測的數(shù)據(jù)強10倍，IC50分別為5.5nM(IL-6分泌)和1.7nM(IL-8分泌)。這些數(shù)據(jù)指出，并不象其它被測定的化合物那樣，奧洛派他定抑制細胞因子分泌的能力，可以歸因于比H1-受體結(jié)合親和力更多的一些方面。表1組胺H1拮抗劑人結(jié)膜上皮細胞中IL-6和IL-8分泌的抑制作用以及H1受體結(jié)合親和力H1拮抗劑 IL-6 IL-8H1結(jié)合IC 50(nM) IC 50(nM) Ki(nM)依美斷汀a2.5 4.0 1.22*奧洛派他定b 5.5 1.7 36.0**左卡巴斯汀c 25.1 11.952.6*安他心d 1014 652 38.4*抗感明e 4826 121633.9*a 1H-苯并咪唑，1-(2-乙氧基乙基)-2-(六氫-4-甲基-1H-1，4-二氮雜卓-1-基)，(E)-2-丁烯二酸酯(1∶2).
b Z-11-(3-二甲氨基亞丙基)-6，11-二氫二苯并[b，e]噁庚英-2-乙酸.
c (-)-反-1-[順-4-氰基-4-(對-氟苯基)環(huán)己基]-3-甲基-4-苯基異-3-哌啶甲酸單鹽酸鹽.
d 4，5-二氫-N-苯基-N-(苯甲基)-1H-咪唑-2-甲胺.
e N，N-二甲基-γ-苯基-2-吡啶-丙胺.
*Sharif et al.，J.Ocul.Pharmacol.，10653-664(1994).
**Yanni et al.，Ann.Allergy Asthma Immunol.，79541-545(1997).
權(quán)利要求
1.治療或預(yù)防包括細胞因子從人眼細胞釋放的眼部新血管生成和非過敏性眼部炎癥的方法，包括對眼部給予包括治療有效量的11-(3-二甲氨基亞丙基)-6，11-二氫二苯并[b，e]噁庚英-2-乙酸或其藥用鹽的組合物。
2.權(quán)利要求1的方法，其中組合物是局部給藥的溶液，而且11-(3-二甲氨基亞丙基)-6，11-二氫二苯并[b，e]噁庚英-2-乙酸的量大約為0.0001％(w/v)至大約5％(w/v)。
3.權(quán)利要求2的方法，其中11-(3-二甲氨基亞丙基)-6，11-二氫二苯并[b，e]噁庚英-2-乙酸的量大約為0.0001％(w/v)至大約0.001％(w/v)。
4.權(quán)利要求3的方法，其中11-(3-二甲氨基亞丙基)-6，11-二氫二苯并[b，e]噁庚英-2-乙酸的量是大約0.0005％(w/v)。
5.權(quán)利要求1的方法，其中11-(3-二甲氨基亞丙基)-6，11-二氫二苯并[b，e]噁庚英-2-乙酸是(Z)-11-(3-二甲氨基亞丙基)-6，11-二氫二苯并[b，e]噁庚英-2-乙酸，實質(zhì)上不含(E)-11-(3-二甲氨基亞丙基)-6，11-二氫二苯并[b，e]噁庚英-2-乙酸。
6.權(quán)利要求5的方法，其中的組合物是局部服用的溶液，而且(Z)-11-(3-二甲氨基亞丙基)-6，11-二氫二苯并[b，e]噁庚英-2-乙酸的量是大約0.0001％(w/v)至大約5％(w/v)。
7.權(quán)利要求6的方法，其中(Z)-11-(3-二甲氨基亞丙基)-6，11-二氫二苯并[b，e]噁庚英-2-乙酸的量是大約0.0001％(w/v)至大約0.001％(w/v)。
8.權(quán)利要求7的方法，其中(Z)-11-(3-二甲氨基亞丙基)-6，11-二氫二苯并[b，e]噁庚英-2-乙酸的量是0.0005％(w/v)。
9.權(quán)利要求1的方法，其中11-(3-二甲氨基亞丙基)-6，11-二氫二苯并[b，e]噁庚英-2-乙酸是(E)-11-(3-二甲氨基亞丙基)-6，11-二氫二苯并[b，e]噁庚英-2-乙酸，實質(zhì)上不含(Z)-11-(3-二甲氨基亞丙基)-6，11-二氫二苯并[b，e]噁庚英-2-乙酸。
10.權(quán)利要求9的方法，其中組合物是一種局部給藥的組合物，而且(E)-11-(3-二甲氨基亞丙基)-6，11-二氫二苯并[b，e]噁庚英-2-乙酸的量是大約0.0001％(w/v)至大約5％(w/v)。
11.權(quán)利要求10的方法，其中(E)-11-(3-二甲氨基亞丙基)-6，11-二氫二苯并[b，e]噁庚英-2-乙酸的量是大約0.0001％(w/v)至大約0.001％(w/v)。
12.權(quán)利要求11的的方法，其中(E)-11-(3-二甲氨基亞丙基)-6，11-二氫二苯并[b，e]噁庚英-2-乙酸的量是大約0.0005％(w/v)。
13.權(quán)利要求1的方法，其中非過敏性眼部炎癥選自干眼、角膜炎、瞼炎、眼色素層炎、以及和感染有關(guān)的炎癥。
14.權(quán)利要求1的方法，其中眼部新血管生成和非過敏性眼部炎癥包括人結(jié)膜上皮細胞的細胞因子釋放。
全文摘要
含11－(3－二甲氨基亞丙基)－6,11－二氫二苯并[b,e]噁庚英－2－乙酸或其藥用鹽作活性成分的眼用制劑用于抑制細胞因子(如IL－6和IL－8)從人眼細胞中釋放。該制劑用于治療或預(yù)防眼部新血管生成和非過敏性炎性癥狀如干眼,角膜炎,瞼炎,眼炎素層類和與感染有關(guān)的炎癥。
文檔編號A61P27/02GK1275078SQ99801501
公開日2000年11月29日 申請日期1999年6月15日 優(yōu)先權(quán)日1998年7月14日
發(fā)明者J·M·彥尼, D·A·加馬徹, L·K·維莫 申請人:阿爾康實驗室公司